Frederik Banch Clausen Cand. Scient. Biologi, ph.d.

Frederik Banch Clausen Cand. Scient. Biologi, ph.d.

FØTAL RHD TYPNING ERFARINGER FRA DANMARK Frederik Banch Clausen frederik.banch.clausen@regionh.dk Biolog, ph.d. Blodgenetisk Laboratorium Klinisk Immunologisk Afdeling, Rigshospitalet, København SEMINAR OM NASJONAL INNFØRING AV PRENATAL RHD-TYPNING OG RhD-PROFYLAKSE Oslo, 5. april, 2016

BUDSKABER Vi er meget tilfredse i Danmark med det nationale RhD program. Implementeringen har været god. Den antenatale RHD screening som guide til targeteret anvendelse af profylakse har vist sig at være fantastisk robust Prænatal RhD typning af fostret er hermed en stor succes i Danmark.

HISTORIK 1969 Postnatal profylakse indføres i Danmark 2004 Diskussion om revidering af Rh-profylaksen 1 2004-2009 Udvikling af noninvasive analyser 2,3 2004-2009 Arbejdsgruppe ser på muligheden for antenatal profylakse kombineret med antenatal RhD typning 2009 Nye rekommendationer fra Sundhedsstyrelsen 4 2010 Indførsel af antenatal RHD screening og antenatal profylakse 2010-2014 Evalueringer af national performance efter 6 måneder og efter 2 år 5,6 2014 Stop af postnatal RhD typning på navlesnorsblod; postnatal profylakse gives nu baseret på resultatet fra den antenatale RHD screening 1. Larsen et al. Forebyggelse af Rhesusimmunisering. Ugeskr Lægre 2004;166:3073 8. 2. Clausen et al. Prenat Diagn 2005; 25: 1040-4. 3. Clausen et al. Fetal Diagn Ther 2011; 29: 155-63. 4. Fagredaktion, Brot C, Poulsen A. Anbefalinger for Svangreomsorgen, Sundhedsstyrelsen, 2009. 5. Clausen et al. Transfusion 2012; 52: 752-8. 6. Clausen et al. Prenat Diagn 2014; 34: 1000-5.

IMPLEMENTERING Arbejdet udspringer fra arbejdsgruppe fra Sundhedsstyrelsen Læger fra Klinisk Immunologi og Obstetrik, samt jordmødre og praktiserende læger Involvering af parter vha. møder, foredrag, artikler, og breve Laboratoriearbejde Analyseudvikling, indkøb af udstyr, assay validering National arbejdsgruppe i Klinisk Immunologi Foredragsturné i Blodbankerne IT / oprettelse af koder og samspil af systemer

OPSÆTNING Test sites Der er 5 test sites i Danmark 1 test site for hver af de 5 regioner i DK

Graviditet Start Uge 10 Alle: Blodtype Antistof screen Uge 25 RhD neg gravid: Antistof screen Antenatal RHD screening Uge 29 Foster RHD pos: Antenatalt anti-d Uge 35 Fødsel Foster RHD pos : Postnatal Anti-D

Hver region i Danmark udfører føtal RHD typning Klinisk og teknisk opsætning af føtal RHD typning 1. Blodprøve i uge 25 taget hos praktiserende læge 2. Plasma separation 3. DNA Ekstraktion 4. DNA Amplifikation via PCR 5. Resultater Rapporteres via Lims 6. Resultater er tilgængelige for praktiserende læger og jordmødre DNA target 7. Hvis fostret er RHD positivt, så giver jordmoderen antenatal anti-d i uge 29

Cellefrit foster-dna Ca. 80 kopier / ml i uge 25 Clausen FB, Jakobsen TR, Rieneck K, Krog GR, et al. (2013) Pre-Analytical Conditions in Non- Invasive Prenatal Testing of Cell-Free Fetal RHD. PLoS ONE 8(10): e76990.

P for positive detection Analytisk sensitivitet 1.0 Copenhagen setup, 95% LoD 0.8 95% LoD = 3x/nφ 0.6 0.4 0.2 0.0 0 5 10 15 20 25 30 Fetal DNA copies per ml plasma x/n = Criterion for positive x = number of positive PCR reactions n = number of total PCR reactions φ = Plasma-equivalent per PCR (ml) = template vol. x plasma vol. / elution vol. Clausen FB, Urhammer E, Rieneck K, Krog GR, Nielsen LK, Dziegiel MH. How to evaluate PCR assays for the detection of low-level DNA. APMIS 2015; 123(9): 731-9.

National performance 97,3% af de RhD negative kvinder med RhD negative fostre undgik unødig profylakse Clausen et al. Routine noninvasive prenatal screening for fetal RHD in plasma of RhD-negative pregnant women-2 years of screening experience from Denmark. Prenat Diagn 2014; 34: 1000-5.

Udfald af prænatal føtal RHD typning Mater Serologisk / Genetisk Foster Føtal RHD Typning Serologisk Genetisk Resultat Konklusion RhD neg / RHD neg RhD neg / RHD neg RhD pos / RHD pos neg pos TRUE NEGATIVE TRUE POSITIVE 99 % RhD pos / RHD pos neg FALSE NEGATIVE 1/9000 RhD neg / RHD pos* RhD neg / RHD neg pos pos TRUE/FALSE POS FALSE POSITIVE RhD neg / RHD pos* RhD neg / RHD neg RhD pos / RHD pos RhD neg / RHD pos* meget pos meget pos meget pos INCONCLUSIVE INCONCLUSIVE INCONCLUSIVE 1 % * RHD variant

DISKREPANSER I DANMARK Falsk-negative resultater (n=11): Ringe DNA-udbytte: 6 Håndteringsfejl: 3 Ukendt årsag: 2 Plus 2 FN grundet for tidlig indsendelse af prøven, i uge 8 og 9 Falsk-positive resultater (n=41): Kontamination eller prøveforbytning: 14 RHD varianter: 11 Håndteringsfejl: 9 Ukendt årsag: 7 Inkonklusive resultater (n=274): Low signal (Above limit of total DNA) Maternal weak D type Maternal variant D type RHD-CE-D hybrids RHDΨ d(c)ce s DVI

Number of samples OVERBLIK OVER HELE PROCESSEN Step 1-3 1. Blodprøve til analyse (Praktiserende læge) 2. Antenatal RHD typning (Laboratorium) 3. Anti-D administration (Jordmødre) Compliance study 1 90% 100% 86% Compliance study 2 84% 100% 93% 350 300 250 200 150 100 50 0 Capital Region 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12131415161718192021222324 Months of 2010+2011 Compliance study 1 From Region H (capital region) of Denmark, 3-6 months after program launch, n=239 (Damkjær et al. Vox Sang 2012; 103: 145-9) Compliance study 2 From Region N (region north) of Denmark, 6-18 months after program launch, n=690 (Clausen et al. Prenat Diagn 2014; 34: 1000-5)

Compliance Kilde: Sundhedsplejersken.dk/Huskern/ Frederik Banch Clausen RhD Seminar, Oslo

N u m b e r o f D Im m u n iz a tio n s Klinisk effekt af antenatal profylakse 4 0 D Im m u n iz a tio n s 3 0 2 0 1 0 0 2 0 0 9 2 0 1 0 2 0 1 1 2 0 1 2 2 0 1 3 2 0 1 4 2 0 1 5 Y e a r NB! Præliminære data! Antal D-immuniserede kvinder, som undersøges af vores laboratorium på Rigshospitalet, København

BUDSKABER Vi er meget tilfredse i Danmark med det nationale RhD program Implementeringen har været god Den antenatale RHD screening har vist sig at være fantastisk robust >97% af de RhD neg gravide med RhD neg fostre undgår unødig profylakse Prænatal RhD typning af fostret er hermed en stor succes i Danmark

TAK FOR OPMÆRKSOMHEDEN! OG HELD OG LYKKE NORGE! TAK TIL KOLLEGERNE: Morten Hanefeld Dziegiel, overlæge 1,2 Klaus Rieneck, læge 1 Grethe Risum Krog, MBLSc 1 Leif Kofoed Nielsen, biokemiker 1,3 Ann Tabor, professor 2,4 Morten Hedegaard, klinikchef 4 Finn Stener Jørgensen, klinikchef 5 Tanja Roien Jakobsen, læge 5 Merete Damkjær, læge Klinisk Immunologisk Afdeling, Rigshospitalet Den nationale gruppe for antenatal RHD typning i Danmark 1 Klinisk Immunologisk Afdeling, Rigshospitalet, København 2 Københavns Universitet 3 Metropolskolen, København 4 Obstetrisk og Gynækologisk Afdeling, Rigshospitalet, København 5 Obstetrisk og Gynækologisk Afdeling, Hvidovre Hospital