Kvalitetssikring af stamceller på Rigshospitalet Annette Ekblond, cand.scient ph.d (humanbiolog) Laboratorieleder Kardiologisk Stamcellelaboratorium Kardiologisk Stamcellecenter Hjertecenteret Rigshospitalet
Kardiologisk Stamcellecenter Vision; udvikle regenerativ behandling vha stamceller Kliniske forsøg Produktion, QA, QC Regulatory Affairs Præklinisk udvikling
Kardiologisk Stamcellelaboratorium In vitro laboratorium: Translationel forskning Cellebiologiske virkningsmekanismer Metodeudvikling Produktionsfacilitet: Produktion af stamceller til kliniske forsøg Vævscenter 39 godkendelse til fremstilling af IMP In vitro/in vivo Klinisk relevant
Adulte multipotente stamceller Mesenkymale stromale celler (MSC) Fedtceller MSC Knogleceller Nerveceller Hjertemuskelceller Endotelceller Bruskceller
Klinisk virkningsmekanisme: parakrin aktivitet = regeneration / ASC
Kilder til mesenkymale stromale celler
Kvalitetssikring af stamceller Lovgrundlag på Rigshospitalet Kvalitet omsat til praksis Faciliteter GMP-fremstilling Kvalitetssikring/kontrol Specifikationer Udvikling; Kvalitet I nær fremtid
Lovgrundlag Definition af ATMP; - Genterapiprodukt - Somatisk celleprodukt - Tissue engineered product - kombinationer heraf Incentives CAT 2007-2012
Guidelines - Kvalitetsstyring, herunder kvalitetssikring, kvalitetskontrol - Krav til personale - Krav til lokaler og udstyr - Dokumentation, instruktioner, afvigelseshåndtering, CAPA og god dokumentations praksis - Kvalificering og validering (proceskontrol, vedligeholdelse, ændringskontrol) - Kvalitetskontrol - Selvinspektion/audit af leverandører, kontrakttagere
Guidelines
Lovgrundlag Donation Udtagning af væv Testning (virus-screening)
Lovgrundlag.concern the qualitative and quantitative composition and the tests to be carried out on medicines Microbiological control of cellular products (2.6.27) Sterility (2.6.1) Products with risk of TSE (1483), Viral safety (5.1.7) TSE note for guidance (5.2.8) Bovin serum (2262)
Lovgrundlag Vævslov Vævscentertilladelse Lægemiddellov Virksomhedstilladelse til fremstilling og indførsel af lægemidler og mellemprodukter til human brug (i henhold til 39)
Guidelines
Kvalitetssikring af stamceller Lovgrundlag på Rigshospitalet Kvalitet omsat til praksis Faciliteter GMP-fremstilling Kvalitetssikring/kontrol Specifikationer Udvikling; Kvalitet I nær fremtid
Faciliteter Klasse B Sterilitet Klasse D Klasse C
Faciliteter - adgang
Kvalitetssikring af stamceller Lovgrundlag på Rigshospitalet Kvalitet omsat til praksis Faciliteter GMP-fremstilling Kvalitetssikring/kontrol Specifikationer Udvikling; Kvalitet I nær fremtid
GMP fremstilling - forebyggelse af infektion Sterilitet
GMP fremstilling Sterilitet
GMP fremstilling Sterilitet
GMP fremstilling
Kvalitetssikring af stamceller Lovgrundlag på Rigshospitalet Kvalitet omsat til praksis Faciliteter GMP-fremstilling Kvalitetssikring/kontrol Specifikationer Udvikling; Kvalitet I nær fremtid
Kvalitetssikring SOPer Dokumentstyring Afvigelsesrapportering Specifikationer til kritisk materiale Hygiejnemonitorering Validering/kalibrering
Kvalitetskontrol; sterilitet Donorer Donorudvælgelse Serologi (spørgeskema/lægelig vurdering) (virus screening; HIV. Hepatitis, syfilis))
Kvalitetskontrol; sterilitet Bakterier/svampe (in house) Endotoksin (SSI) Mycoplasma (SSI)
Kvalitetskontrol; sterilitet Sterilitet (bakterier/svampe) (in house) Validering af metode Ph.Eur; Microbiological control of cellular products (2.6.27) SSI Validering..
Kvalitetskontrol; karakterisering af celler
Kvalitetskontrol; karakterisering af celler
Kvalitetskontrol; genomisk stabilitet Kromosomlaboratoriet, RH
Kvalitetssikring af stamceller Lovgrundlag på Rigshospitalet Kvalitet omsat til praksis Faciliteter GMP-fremstilling Kvalitetskontrol Specifikationer Udvikling; Kvalitet I nær fremtid
Specifikationer ATMP er defineret I henhold til aktuelle fremstillingsmetode
Specifikationer Analysemetode Accept kriterier Antal celler Nucleocounter (PI labelling) 90-110 millioner celler ASC viability Nucleocounter (PI labelling) Over 80 % Donor serologi Virus screening af donorer Negative for anti-hiv1,2 (antibody + Ag) Negative for anti-hcv Negative for HBsAg Negative for anti-hbc Negative for syphilis Sterilitet Bakterier/svampe: BacTec og BacT/Alert detektion (aerob og anaerob) plus dyrkning/artsbestemmelse ved positive prøver Bacteriel endotoxin Mycoplasma: pcr Negative/Negative < 70 EU/ml Negative Fænotype (IFATS and ISCT ) Flow cytometry Mikroskopi CD90 > 80% CD105 > 80% CD73 > 80% CD14 < 3% CD19 < 3% CD 45 <3% HLA-DR <3% Morfologi
Kvalitetssikring af stamceller Lovgrundlag på Rigshospitalet Kvalitet omsat til praksis Faciliteter GMP-fremstilling Kvalitetskontrol Specifikationer Udvikling; Kvalitet I nær fremtid
Udvikling; Implementering af ny teknologi. Opformering I bioreaktorer Kvalitetskontrol Opformering med nye dyrkningsmedier Opbevaring/ stabilitet
Udvikling; automatisering = standardisering og reproducerbarhed Manuel opformering i flasker Automatiseret opformering i bioreaktorer 75 cm 2 1000 cm 2 600 cm 2 21.000 cm 2 1 bioreaktor = 280 T75 flaskser eller 21 T1000 flasker
Udvikling; ekspansion uden animalske proteiner = reproducerbarhed og sikkerhed Vækstsupplementer: Føtal bovin serum (FBS) Human blodpladelysat (HPL) HPL FBS
Udvikling; Komparabilitet. : SVF ASC P0 : ASC P0 ASC P1
Udvikling; Komparabilitet
Udvikling; kvalitetskontrol ATMP Mikrobiologi Biologisk karakterisering (fænotype) Biologisk renhed (heterogen cellepopulation, sub-populationer, biomarkører?) Biologisk funktion/ potency (hvordan virker det?, hvilke funktionelle assays?) Stabilitet
Udvikling; kvalitetskontrol;- potency - Afhængig af claim. Parakrin aktivitet? Pro-angionetisk aktivitet? Immunosuppression?
Udvikling; kvalitetskontrol ATMP Bravery et al. Cytotherepy 2013
- dem der laver det hele Tak for opmærksomheden