Pak Lx Assay (analyse)

BRUGSANVISNING Pak Lx Assay (analyse) REF PLX IVD Forsigtig! Se medfølgende dokumenter. Lysfølsomt (Beskyttes mod direkte lys) MATCHIT! Trombocytantistofsoftware v1.0.1 ( REF 888622) MATCHIT! Trombocytantistofsoftware Brugervejledning ( REF LC1371) MATCHIT! Trombocytantistofsoftware Hurtig referenceguide ( REF LC1374) INDHOLDSFORTEGNELSE TILSIGTET ANVENDELSE... 2 RESUMÉ OG FORKLARING... 2 PROCEDUREPRINCIP... 2 REAGENSER... 2 FORSIGTIGHEDSFORANSTALTNINGER... 3 FORSIGTIG... 3 INSTRUMENTERING... 3 PRØVEINDSAMLING OG OPBEVARING... 3 PROCEDURE... 4 KVALITETSKONTROL... 6 TOLKNING AF RESULTATER... 7 BEGRÆNSNINGER... 7 FEJLFINDING... 8 SPECIFIKKE YDEEVNEKARAKTERISTIKA... 8 REFERENCER... 10 Mærkelicens brugsbegrænsning: Ved åbning af emballagen, der indeholder dette kit (som inkluderer fluorescensmærkede mikrosfæreperler, der er autoriseret af Luminex Corporation), eller brug af dette kit på en hvilken som helst måde samtykker og indvilliger du i at være bundet af følgende vilkår og betingelser. Du indvilliger endvidere i at følgende vilkår og betingelser udgør en retsgyldig og bindende kontrakt, som kan håndhæves over for dig. Hvis du ikke indvilliger i alle vilkårene og betingelser, der er anført nedenfor, skal du straks returnere dette kit mod fuld tilbagebetaling før brug af dette på nogen som helst måde. Du, kunden, erhverver retten til i overensstemmelse med Luminex Corporation's patentrettigheder, hvis der er nogen, udelukkende at bruge dette kit eller en hvilken som helst del af dette kit, inklusive uden begrænsning mikrosfæreperlerne, der er indeholdt heri, sammen med Luminex Corporation's laserbaserede fluorescensanalytiske testinstrumentering, der er markedsført under navnet Luminex-instrument Pak Lx Assay (analyse) 1 303285.IFUDA REV E

TILSIGTET ANVENDELSE Pak Lx-analysen er et kvalitativt immunoassay til anvendelse på Luminex-instrumentet. Pak Lx-analysen er designet til at detektere og differentiere mellem IgG-antistoffer mod HPA-1, HPA-2, HPA-3, HPA-4, HPA-5, GPIV og klasse I-HLA i humant serum. RESUMÉ OG FORKLARING Trombocytter udtrykker mange forskellige polymorfe proteiner. De polymorfiske Selvom ændringerne i proteinerne som følge af graviditet eller transfusion ikke påvirker proteinfunktionen, måske bliver de mål for antistoffer. Tilstedeværelse af antistoffer, der bindes til trombocytglycoproteiner, er forbundet med livstruende blødningsforstyrrelser, såsom en refraktær tilstand over for trombocyttransfusioner (PR), posttransfusionspurpura (PTP) og føtal og neonatal alloimmuntrombocytopeni (FNAITP) 1-13. Glycoproteinerne (GP), hvorimod der dannes antistoffer, inkluderer GPIIb/IIIa, GPIb/IX og GPIa/IIa, glycoprotein GPIV og klasse I- HLA (humane leukocytantigener). Epitoperne, der findes på glycoproteinerne GPIIb/IIIa, GPIb/IX og GPIa/IIa, er blevet karakteriseret i HPA (humane trombocytantigen)-systemer med hver to alleler (allelerne a og b ). HPA-1, HPA-3 og HPA-4 er alle placeret på GPIIb/IIIa. HPA-2 er placeret på GPIb/IX, og HPA-5 er placeret på GPIa/IIa 14-16. Epitoperne på GPIV forekommer kun som isoantigener. Med andre ord finder der kun udvikling af antistoffer mod GPIV sted hos personer, som ikke har GPIV-ekspression eller har betydeligt reducerede niveauer heraf, men har været eksponeret for GPIV 17. Klasse I-HLA kodes af talrige alleler, der udtrykker et stort antal forskellige epitoper. Langt de fleste af de antistoffer, der dannes som reaktion på graviditet eller transfusion, vil være reaktive med de stærkt polymorfe klasse I-HLA 18. PROCEDUREPRINCIP Pak Lx-perlerne rekonstitueres og inkuberes med serumprøve ved stuetemperatur. Perlerne vaskes herefter til fjernelse af ubundet antistof. Hvorefter der tilsættes et antihuman-igg-antistof konjugeret til phycoerythrin (PE). Efter yderligere inkubation ved stuetemperatur fortyndes reaktionsblandingen og analyseres på Luminex-instrumentet. Signalintensiteten fra hver perle sammenlignes med signalintensiteten for tre negative kontrolperler, der er inkluderet i perlepræparatet, til bestemmelse af, om perlerne er positive eller negative for bundet antistof. REAGENSER Maksimale antal tests pr. kit: PLX: 16 tests pr. kit Alle reagenser skal opbevares som anført på etiketten. REF PLXB PLBD CCX CDX 403620 Lyofiliseret perleblanding: En blanding af perler, hvorpå HPA-, GPIV og HLA-klasse I glycoproteiner er blevet immobiliseret sammen med fire kontrolperler. Perlerne er lyofiliseret i en phosphatbaseret buffer, der indeholder bovin serumalbumin og 0,02 % methylisothiazolon og 0,02 % bromnitrodioxan som konserveringsmidler. LYSFØLSOM. Beskyttes mod direkte lys over længere tid (3 timer eller mindre). Opbevares ved 2 til 8 C i mørke i kittets æske. 405160 Perlefortynder: En phosphatbaseret buffer, der indeholder NaCl, Tween-20, ProClin 300, bovin serumalbumin og museserum. Opbevares ved 2 til 8 C. 405159 Konjugatkoncentrat: Gede-antihuman-IgG konjugeret til phycoerythrin leveret i en phosphatbaseret opbevaringsbuffer, der indeholder NaCl, Tween-20, < 0,1 % natriumazid og bovin serumalbumin. LYSFØLSOMT. Beskyttes mod direkte lys over længere tid (2 timer eller mindre). Opbevares ved 2 til 8 C i mørke. Fortyndes 1:10 i konjugatfortynder før anvendelse. 403586 Konjugatfortynder: En phosphatbaseret buffer, der indeholder NaCl, Tween-20, 0,1 % natriumazid, bovin serumalbumin og museserum. Opbevares ved 2 til 8 C. LMWB 405314 Vaskebuffer: En phosphatbaseret buffer, der indeholder NaCl, Tween-20, 0,1 % natriumazid og bovin serumalbumin. Opbevares ved 2 til 8 C. PCX 403595 Positivt kontrolserum: Dette serum eller denne serumblanding er opnået fra henholdsvis en eller flere personer, med kendte antistoffer overfor HPA-1a, med eller uden antistoffer overfor klasse I HLA.. Opbevares ved 2 til 8 C. Indeholder 0,1 % natriumazid. Pak Lx Assay (analyse) 2 303285.IFUDA REV E

NCX 403592 Negativt kontrolserum: Dette serum eller denne serumblanding er opnået fra henholdsvis en eller flere personer uden kendte antistoffer mod HPA-, GPIV og HLA-klasse I. Opbevares ved 2 til 8 C. Indeholder 0,1 % natriumazid. FORSIGTIGHEDSFORANSTALTNINGER Til in vitro-diagnostisk brug. Brug ikke reagenser, der er uklare eller kontaminerede. Brug ikke reagenser efter deres udløbsdato. Bortskaf ubrugt/fortyndet positiv og negativ kontrol og konjugat efter brug. Reagenser, der er indeholdt i kittet, er ikke beregnet til anvendelse sammen med et andet testsystem. Anvendelse af andre bestanddele end dem, der leveres i dette kit, kan føre til modstridende eller fejlagtige resultater. Følg ved fremstilling af fortyndinger pipetteproducentens instruktioner for passende doserings- og skylleteknikker. VÆR OMHYGGELIG med at undgå at kontaminere konjugatfortynderen eller antihuman-igg-reagenserne. Utilsigtet kontaminering af disse reagenser med humant serum vil resultere i neutralisering af antihuman-igg og efterfølgende resultere i testfejl. Vær under pipettering til filterpladen omhyggelig med, at perlerne ikke klæber til siden i mikropladebrøndene, der pipetteres, idet man samtidig skal passe på ikke at røre membranen med spidsen. Hvis pipettespidsen berører membranen, kan dette medføre punktering af membranen og efterfølgende fejl ved assayet. Vær under inkubationstrinnene omhyggelig med at sikre, at perlerne ikke sprøjter op på og klæber til brøndenes sider. De positive og negative kontroller skal inkluderes ved hver test som en hjælp til at fastlægge eventuel forekomst af tekniske fejl eller reagensfejl. Vær omhyggelig med at kontrollere vakuumstyrken. Et kraftigt vakuum kan forårsage, at perlerne klæber til membranen, hvilket kan medføre et fejlagtigt perletællingstal. FORSIGTIG Alt humant serum, der anvendes i de positive og negative kontroller til dette produkt, er blevet testet og fundet negative for antistof mod HIV, HCV og HBsAg ved hjælp af FDA-godkendte metoder. Ingen testmetode kan imidlertid give fuldstændig sikkerhed for, at der ikke er HIV, hepatitis C-virus, hepatitis B-virus eller andre smitstoffer til stede. Disse materialer skal derfor håndteres som potentielt infektiøse. Nogle reagenser indeholder som konserveringsmiddel natriumazid, der kan reagere med sanitetsinstallationer af bly og kobber og danne eksplosive metalazider. Brug store mængder vand, hvis materialerne hældes i en vask. Bortskaf alle materialer efter brug i henhold til lokale bestemmelser. INSTRUMENTERING Luminex-instrumentet, der kører Luminex IS 2.3- eller xponent 3.1-softwaren, skal anvendes til udførelse af Pak Lx-analysen. Luminex-instrumentsystemet er baseret på principperne for flowcytometri og omfatter Luminex-analysatoren, Luminex XY pladehåndteringsplatformen og Luminex SD -sheath-væskeoverføringssystemet, software og PC. Luminex-systemet er en kombination af tre kerne-xmap-teknologier. Den første er mikrosfærer, som er en familie af 100 fluorescensfarvede, 5,6 µm polystyrenmikrosfærer, der fungerer som både identificeringsmiddel og fast overflade til opbygning af analysen. Den anden er et flowcytometribaseret instrument, Luminex-analysatoren, der integrerer nøgledetektionskomponenter, som f.eks. lasere, optik, fluidik og højhastigheds-digitale signalprocessorer. Den tredje komponent er softwaren, der er udformet til protokolbaseret dataregistrering. Oplysninger om egenskaberne ved softwaren og installation, instrumentbetjening, vedligeholdelse og sikkerhed findes i undervisningsmanualen til Luminex IS. Brugeren skal kontakte Luminex Corporation for specifik service i relation til Luminexinstrumentsystemet. Analysefilerne, der skal bruges til Pak Lx-analysen, findes på Immucor websted til download for brugeren. Brugeren skal kontakte Immucor GTI Diagnostics i tilfælde af eventuelle produktrelaterede spørgsmål til Pak Lx-analysen. PRØVEINDSAMLING OG OPBEVARING Indsaml blod uden antikoagulant ved brug af aseptisk teknik. Forarbejd blodet, mens det stadig er frisk, for at minimere risikoen for at få falsk positive eller falsk negative reaktioner som følge af ukorrekt opbevaring eller kontaminering af prøven. Kun serum er egnet til denne analyse. Serum skal separeres fra de røde blodlegemer ved opbevaring eller under transport. Prøver, der indeholder partikelformet materiale, skal klares ved hjælp af centrifugering før testning. Pak Lx Assay (analyse) 3 303285.IFUDA REV E

Serumprøver, der ikke kan testes umiddelbart, skal opbevares ved 2 til 8 C i ikke mere end 48 timer eller nedfrosset. Prøver, der fryses ved eller under -20 C, forbliver i en god tilstand i op til 2 år. Undgå afrimningsfri frysere. Undgå gentagen frysning og optøning af serumprøverne. PROCEDURE Medfølgende materialer: (Se afsnittet REAGENSER for flere specifikke oplysninger) Hætteglas kan indeholde mere reagens end anført på etiketterne. Sørg for at afmåle reagenset med passende udstyr ved fremstilling af fortyndinger. 1. 3 x lyofiliseret perleblanding 2. 1 x 850 l perlediluent 3. 1 x 120 µl konjugatkoncentrat 4. 1 x 1,2 ml konjugatdiluent 5. 1 x 50 ml vaskebuffer 6. 1 x 80 µl positivt kontrolserum 7. 1 x 80 µl negativt kontrolserum Yderligere nødvendige materialer: (som anført eller tilsvarende) 1. 5 µl til 50 µl justerbare pipetter med passende pipettespidser 2. 250 µl multikanalpipette med tilsvarende spidser og bufferkar 3. 1,5 ml mikrocentrifugerør til konjugatfortyndinger 4. Reagensglas 5. Timer 6. Markeringspen 7. Pladeforseglere 8. Luminex-sheath-væske REF 628005 (1X); REF 628025 (20X) 9. Luminex-kalibrerings- og kontrolperler REF 628006 (CAL1); REF 628007 (CAL2); REF 628008 (CON1); REF 628009 (CON2) 10. Destilleret vand 11. Rotator eller vortex med pladeadaptor 12. Millipore Multiscreen-filterplader REF 888633 Millipore MSBVN1210/MSBVN1250/MABVN1210/MABVN1250 13. Multiscreen-vakuummanifold REF 888315 Millipore MAVM0960R; Qoagem 19504; Pall 5017 14. Mikrocentrifuge 15. Partispecifik Luminex-registreringsskabelon fil; Kan findes på websiden IDT file for brug ved IS 2.3 LXT file for brug ved xponent 3.1 16. Lot specific Electronic Data Sheet (EDS) file; Kan findes på websiden 17. Luminex-instrument med IS 2.3- eller xponent 3.1-software 18. PFS Pladelayoutarket 19. PACD Trombocytantistof-software CD MATCHIT!-trombocytantistof -software v1.0.1 MATCHIT!-trombocytantistof -software Brugervejledning; Kan også findes på websiden MATCHIT!-trombocytantistof -software Hurtig referenceguide; Kan også findes på websiden Testprocedure 1. Download den partispecifikke Luminex-registreringsskabelon (IDT/LXT-fil) fra webstedet (www.immucor.com) og gem den på den computer, der er tilkoblet Luminex-instrumentet. Notér, hvor den gemte fil er placeret. Denne fil vil blive importeret i Luminexinstrumentet i et senere trin. 2. Lad alle reagenser, bortset fra konjugatkoncentratet og konjugatfortynderen, antage stuetemperatur (21 til 24 C) før brug. 3. Rekonstituér den lyofiliserede perleblanding som anført i tabel 1 nedenfor. Det antal hætteglas, der er vist i tabel 1, indeholder tilstrækkeligt volumen til at køre én positiv og én negativ kontrol sammen med det antal af prøver, der er anført i kolonne 1. Pak Lx Assay (analyse) 4 303285.IFUDA REV E

Tabel 1 Antal prøver Hætteglas med lyofiliseret perleblanding 1-4 1 5-10 2 11-16 3 a. Tilsæt 275 l perlefortynder til hvert hætteglas med lyofiliserede perler. Lad de rekonstituerede hætteglas stå ved stuetemperatur i mindst 5 minutter. b. Undlad at blande eller vortexbehandle de lyofiliserede perler med perle-diluenten endnu. Rekonstituerede hætteglas kan opbevares ved 2-8 C i mørke i op til 15 dage. FORSIGTIG: HÆLD IKKE INDHOLD I HÆTTEGLAS, DER ER REKONSTITUERET PÅ FORSKELLIGE DAGE, SAMMEN. FORSIGTIG: UNDLAD AT VORTEXBEHANDLE PERLERNE PÅ NOGET TIDSPUNKT I LØBET AF ANALYSEN FOR AT UNDGÅ SKUMDANNELSE. 4. Klargør prøver ved hjælp af vortexbehandling. Centrifugér ved > 10.000 x g i mindst 60 sekunder til separering af eventuelt uopløseligt materiale før brug. 5. Registrér prøveoplysningerne på pladelayoutarket. Pladelayoutarket er tilgængeligt til download på webstedet (www.immucor.com). 6. Dæk de brønde på filterpladen, der ikke skal benyttes, med en pladeforsegler. 7. Tilsæt 250 µl vaskebuffer til de udpegede brønde. a. Lad vaskebufferen stå i brøndene i mindst 3 minutter. b. Fjern vaskebufferen ved hjælp af forsigtig aspiration ved brug af vakuummanifolden. (Se producentens anbefalinger med hensyn til korrekt brug.) 8. Bland de rekonstituerede perler ved hjælp af pipettering ud og ind ca. 15 til 20 gange, idet man skal være omhyggelig med at undgå skumdannelse. 9. Tilsæt 40 µl rekonstituerede perler til hver testbrønd på filterpladen. Sørg for, at de rekonstituerede perler blandes under perletilsætning til filterpladen. Pipettér ud og ind 2-3 gange efter tilsætning til hver 2-3 brønde. FORSIGTIG: Det er vigtigt, at perlerne holdes resuspenderede, for at sikre en ensartet tilsætning af perler til brøndene. Uden lejlighedsvis opblanding af perlerne vil det medføre, at de fældes ud mod hætteglassets bund. Dette vil forårsage en differentiel fordeling af perlerne i brøndene, hvilket kan have en negativ effekt på kørselstider og analyseresultaterne. 10. Tilsæt 10 µl patientserum eller kontrolserum ifølge pladelayoutarket. 11. Sæt ubrugte portioner af kontrolsera og perler tilbage til opbevaring ved 2 til 8 C i mørke til fremtidig brug. 12. Dæk pladen med en pladeforsegler. 13. Inkubér i 60 minutter ved stuetemperatur (21 til 24 C) i mørke på en roterende platform (ca. 200 rotationer pr. minut) eller en vortexblander med en pladeadaptor, der er indstillet på en hastighed, der vil muliggøre korrekt opblanding af prøverne uden skumdannelse. a. Lad under denne inkubation konjugatkoncentratet og konjugatfortynderen antage stuetemperatur (21 til 24 C). b. Opvarm og klargør Luminex-instrumentet under denne inkubation. c. Sæt analysen op på Luminex-instrumentet ved brug af den partispecifikke IDT/LXT-fil (registreringsskabelon), der er downloadet fra webstedet (www.immucor.com). Der henvises til Luminex-softwaremanualen vedrørende oplysninger om tilføjelse/import af en skabelonfil i softwaren. NOTE: Når en bruger den Automated Batch Setup funktionen, henviser til MATCHIT! Platelet Antibody software brugermanuel som kan findes på Platelet Antibody Software Installation CD og på websiden (www.immucor.com). Pak Lx Assay (analyse) 5 303285.IFUDA REV E

FORSIGTIG: Manglende brug af den korrekte IDT/LXT-fil vil resultere i indsamling af data, der er ude af sekvens, og vil medføre ukorrekt eller ufuldstændig registrering af analysedata fra Luminex-instrumentet. 14. Klargør fortyndet konjugatkoncentrat ved at blande volumenerne af konjugatkoncentrat (CCX) med konjugatfortynder (CDX) som anført i tabel 2 nedenfor. Det antal af hætteglas, der er vist i tabel 2, indeholder tilstrækkeligt volumen til at køre én positiv og én negativ kontrol sammen med det antal af prøver, der er anført i kolonne 1. a. Dæk det fortyndede konjugat med folie eller opbevar det i mørke ved stuetemperatur indtil anvendelse. b. Stil ubrugte portioner af konjugatkoncentrat og konjugatfortynder tilbage til opbevaring ved 2 til 8 C i mørke til fremtidig brug. Tabel 2 Antal prøver Volumen af CCX (µl) Volumen af CDX (µl) 1 20,0 180,0 2 25,0 225,0 3 30,0 270,0 4 35,0 315,0 5 40,0 360,0 6 45,0 405,0 7 50,0 450,0 8 55,0 495,0 9 60,0 540,0 10 65,0 585,0 11 70,0 630,0 12 75,0 675,0 13 80,0 720,0 14 85,0 765,0 15 90,0 810,0 16 95,0 855,0 15. Fjern efter 60 minutters inkubation pladeforsegleren og tilsæt 200 µl vaskebuffer til hver brønd. Fjern vaskebufferen ved hjælp af forsigtig aspiration ved brug af vakuummanifolden. FORSIGTIG: Brug af for kraftig vakuumstyrke vil medføre, at perler klæber til membranen, og kan resultere i prøvefejl. Påfør det mindste vakuumtryk, der nødvendigt til aspiration af prøver. See manufactures instruktioner til specifikke brug af filterpladen og vakuum manifold. 16. Tilsæt 250 µl vaskebuffer til hver brønd, aspirér. Gentag yderligere to gange. FORSIGTIG: Manglende tilstrækkelig vask kan reducere konjugatets evne til at detektere IgG, der er bundet til sensibiliserede perler. 17. Tilsæt 50 µl fortyndet konjugat til hver brønd. Dæk med pladeforsegler. Inkubér i 30 minutter ved stuetemperatur (21 til 24 C) i mørke på en roterende platform (ca. 200 rotationer pr. minut) eller en vortexblander med en pladeadaptor, der er indstillet på en hastighed, der vil muliggøre korrekt opblanding af prøverne uden skumdannelse. Gem ikke det fortyndede konjugat til fremtidig brug. 18. Fjern pladeforsegleren. Tilsæt 150 µl vaskebuffer til hver brønd, der indeholder prøven. Stil den ubrugte portion af vaskebuffer tilbage til opbevaring ved 2 til 8 C til fremtidig brug. 19. Opsaml straks data med Luminex-instrumentet ved brug af producentens anbefalinger instruktioner. BEMÆRK: Der skal registreres mindst 60 hændelser pr. perleområde. KVALITETSKONTROL De positive og negative kontrolsera fungerer som eksterne analysekontroller, og skal inkluderes i hver testkørsel. Det positive kontrolserum forberedes fra tilgængelige serumdonorer, og ændres muligvis med hvert lot af Pak Lx. Det positive kontrolserum bør give et positivt resultat for de antistoffer, der rapporteres på kvalitetskontrolcertifikatet. Det negative kontrolserum bør give et negativt resultat for enhver perle af HPA, gpiv eller HLA klasse I. Hvis disse krav ikke opfyldes, skal de berørte prøver betragtes som ugyldige. Testsystemet indeholder en kvalitetskontrol af Pak Lx-analysen ved hjælp af inkludering af fire kontrolperler, (én positiv kontrolperle og tre negative kontrolperler). Den positive kontrolperle er belagt med humant IgG og bør give MFI-værdier på > 10.000 med det de Pak Lx Assay (analyse) 6 303285.IFUDA REV E

negative kontrolsera. Hvis der opnås MFI-værdier på < 10.000 med det negative kontrolserum, betyder det muligvis, at analysen er utilstrækkeligt vasket eller konjugatet kompromitteret. Prøverne kan vise en vidtspændende reaktivitet med den positive kontrolperle, men bør give en MFI-værdi på > 3500. Hvis disse krav ikke opfyldes, skal de berørte prøver betragtes som ugyldige. Tolkningen af prøvedata er baseret på indsamling af et minimumsantal af hver perle under en analyse. Hvis der opnås for få perlehændelser for en prøve, registreres en Bead Failure (Perlefejl), og alle antistofresultater for den berørte prøve skal betragtes som ugyldige. Der henvises til fejlfindingsafsnittet om disse anvisninger for yderligere oplysninger. TOLKNING AF RESULTATER Tolkning ved hjælp af software: MATCHIT! Trombocytantistof-software v1.0.1 er nødvendigt til tolkning af resultaterne. Til analysen skal bruges en partispecifik EDS-fil. En sådan er tilgængelig til download fra webstedet (www.immucor.com). Bestemmelse af individuel perlereaktivitet: Til bestemmelse af, om en antigenspecifik perle er positiv eller negativ, divideres MFI for den antigenspecifikke perle med MFI for hver negativ kontrolperle (CON1, CON2, CON3) til opnåelse af tre forhold for hver antigenspecifikke perle. Bemærk: Hvis MFI for en CON-perle er mindre end minimumgrænseværdien (MC), anvendes MC til beregningen. Fra de tre beregnede forhold trækkes et forudbestemt forhold, baggrundsjusteringsfaktoren (BAF), fra hver antigenspecifikke perle/con-kombination til opnåelse af tre justerede forhold. En positiv værdi for to eller flere af de tre justerede forhold indikerer en positiv perlereaktion. En negativ værdi for to eller flere af de tre justerede forhold indikerer en negativ perlereaktion. Tolkning af resultater: Der henvises til MATCHIT!-softwarerapporten for resultaterne. Tabellen nedenfor viser de mulige resultater, der kan opnås ved test af en hvilken som helst specifik prøve. Antigen GPIV HLA-klasse I Muligt resultat Pos Pos Neg Neg HPA-1, -3, -4 (GPIIb-IIIa) Reaktiv Neg HPA-2 (GPIb-IX) Pos Neg Ubestemmelig HPA-5 (GPIa-IIa) Pos Neg Ubestemmelig Resultater for HLA-klasse I, GPIV, HPA-2 og HPA-5 rapporteres direkte med MATCHIT!-softwaren Eventuelle ubestemmelige resultater for HPA-2 og HPA-5 skal gentages ved brug af Pak Lx-analysen eller ved brug af en alternativ metode. Til bestemmelse af HPA-1-, -3- og -4-reaktivitet benyttes følgende tabel: HPA coated perler Mønster for perlereaktivitet** HPA 1a-3a-4a Pos Neg Pos Neg Pos Neg HPA 1a-3b-4a Pos Neg Neg Pos Pos Neg HPA 1b-3a-4a Neg Pos Pos Neg Pos Neg HPA 1b-3b-4a Neg Pos Neg Pos Pos Neg HPA 1ab-3ab-4a Pos* Pos* Pos* Pos* Pos* Neg HPA - 1a-3ab-4b Pos Neg Pos* Pos* Neg* Pos Tolkning af resultater Antistoffer mod HPA-1 Antistoffer mod HPA-3 Antistoffer mod HPA-4 detekteret detekteret detekteret Dette mønster kan skjule HPA-4b HPA-4b ikke HPA-4b HPA-4b HPA-1a, -1b, HPA-1a, tilstedeværelsen af et antistof, der maskeret -3a, -3b -1b, -3a, -3b er reaktivt med: ikke maskeret * Heterozygotiske perler kan være positive eller negative afhængig af titeren af antistoffet i prøven eller baggrundsniveauet på de negative kontrolperler. **Et mønster der ikke repræsenteret i tabellen ovenfor, bør betragtes som et ubesternt resultat og kan skyldes til stedeværelsen af auto-antistofter. Dette kan også omfatte reaktivitet til polimorfik varianter som ikke er identificent i analysen. BEGRÆNSNINGER Dette produkt er ikke beregnet til detektion af antistoffer af IgA- eller IgM-klassen af immunoglobulin. Resultaterne af denne analyse bør ikke anvendes som det eneste grundlag for en klinisk beslutning. En positiv test indikerer kun tilstedeværelse af antistoffer, der er specifikke for HLA-klasse I, GPIV eller HPA-1, HPA-2, HPA-3, HPA-4 og HPA-5, og er ikke beregnet til diagnosticering af en klinisk tilstand. 19-21 Pak Lx Assay (analyse) 7 303285.IFUDA REV E

HPA-systemerne forekommer ved forskellige frekvenser i forskellige populationer. HPA-systemerne med høje frekvenser anses for at være offentlige, mens HPA-systemerne med lave frekvenser anses for at være private. Pak Lx-analysen anvender glycoproteiner, der stammer fra donorer, der kun er blevet typebestemt for de offentlige HPA-systemer: HPA-1, -2, -3, -4 og - 5. Tre af disse offentlige HPA-systemer (HPA-1, -3, -4) vises på det samme glycoprotein, GPIIb/IIIa. 1,5,11,14 Serumprøver kan indeholde antistoffer mod et eller flere af disse offentlige HPA-systemer, og tilstedeværelse af antistoffer mod ét HPA-system kan skjule tilstedeværelsen af antistoffer mod andre systemer. For eksempel kan tilstedeværelsen af et antistof med høj titer, der er reaktivt med én HPA-4-epitop, skjule tilstedeværelsen af antistoffer med lavere titre, der er reaktive med én af HPA-1-epitoperne. Se afsnittet med disse instruktioner kaldet Tolkning af resultater for yderligere oplysninger. Pak Lx-analysen anvender glycoproteiner, som stammer fra donorer, der ikke er blevet typebestemt for private HPA-systemer: Serumprøver kan indeholde antistoffer mod ét eller flere af disse private HPA-systemer. Tilstedeværelsen af disse antistoffer mod private epitoper kan simulere reaktivitetsmønstre, som ville indikere tilstedeværelse af et antistof, der er reaktivt med en almen HPA-epitop, og/eller forårsage ubestemmelige resultater. Nogle antistoffer med lav titer og lav aviditet, herunder antistoffer mod HLA-klasse I-antigener med lav incidens, detekteres muligvis ikke med dette produkt. Denne analyse er ikke blevet valideret til anvendelse til detektion af autoantistoffer. FEJLFINDING PROBLEM MULIG ÅRSAG LØSNING Positivt kontrolserum viser yderligere antistofreaktivitet, der ikke er angivet på kvalitetskontrolcertifikatet Negativt kontrolserum viser antistofreaktivitet MFI-værdien på den positive kontrolperle (probe 77) er for det negative kontrolserum < 10.000 MFI-værdien på den positive kontrolperle (probe 77) er for testprøver < 3.500 MFI-værdier på antigenperler er ca. 30 MFI, mens positive kontrolperlers MFI er > 10.000 Perlefejl (utilstrækkeligt antal perlehændelser) (< 60 indsamlede hændelser) Ikke-tolkelige resultater Positiv kontrol kontimineret med en anden prøve Dårlig vask Kontaminerede reagenser Dårlig vask Lysbleget konjugat Dårlig vask Lysbleget konjugat Dårlig vask Prøve ikke tilsat Brugeren skal anvende passende laboratorieteknik, herunder korrekte portionsudtagningsmetoder, for at eliminere overførsel af prøver til tilgrænsende brønde. Gentag analysen Gentag analysen efter vaskeinstruktioner Brugeren skal anvende passende laboratorieteknik, herunder korrekte portionsudtagningsmetoder, for at eliminere overførsel af prøver til tilgrænsende brønde. Gentag analysen Gentag analysen efter vaskeinstruktioner Anvend nyt kit. Gentag analysen Gentag analysen efter vaskeinstruktioner Anvend nyt kit. Gentag analysen Lav ny test på prøven efter vaskeinstruktioner Lav ny test på prøven Perler ikke blandet godt eller Bland godt med pipette til fuldstændig resuspension af resuspenderet perlerne; Lav ny test på prøven Instrumentfejl ude af kalibrering Se Instrumentmanual; Gentag analysen Instrumentfejl - prøveflow Se Instrumentmanual; Gentag analysen blokeret Lysblegede perler Brug et nyt kit; Gentag analysen Vakuumtryk for kraftigt/perler Reducér vakuumstyrken; Lav ny test på prøven trængt mod membran Kontrollér, om partinummeret i IDT/LXT-filen, der er Brug af ukorrekt anvendt til registrering af data, svarer til Pak Lx-kittet, registreringsskabelon (IDT/LXT)- der er anvendt til testen. Hvis det er forkert, gentages fil. analysen, og data registreres ved brug af den korrekte IDT/LXT-fil. Brug af ukorrekt EDS (BAF)-fil til udførelse af analysen med MATCHIT! Trombocytantistofsoftware Kontrollér, om partinummeret i EDS-filen, der er anvendt til analyse af data, svarer til Pak Lx-kittet, der er anvendt til testen. Hvis det er forkert, gentages analysen ved brug af den korrekte EDS-fil. SPECIFIKKE YDEEVNEKARAKTERISTIKA Når Pak Lx-kits anvendes i overensstemmelse med den beskrevne procedure, afslører resultaterne tilstedeværelse eller fravær af IgG-antistoffer mod HPA, GPIV og HLA. Følgende tabeller viser co-positiviteten (følsomheden), co-negativiteten (specificiteten) og Pak Lx Assay (analyse) 8 303285.IFUDA REV E

overensstemmelse for de antal af prøver, som er testet for antistoffer, der er reaktive med hver HPA eller GPIV, sammenlignet med resultater opnået ved brug af monoklonalt antistof-immobilisering af trombocytantigener (MAIPA), eller antistoffer, der er reaktive med klasse I-HLA, sammenlignet med resultater opnået med LifeScreen Deluxe-analyse (LMX). Disse data er samlet fra to kliniske forsøg udført ved Sanquin Diagnostic Services (Amsterdam, Holland) og The BloodCenter of Wisconsin (Milwaukee, Wisconsin). MAIPA (HPA-1) (HPA-1) Positiv 52 2 54 Overensstemmelse: 99,4% 95%-konfidensinterval = 97,9 99,8 % Negativ 0 292 292 Co-positivitet: 100,0% 95%-konfidensinterval = 93,1 100,0 % Total 52 294 346 Co-negativitet: 99,3% 95%-konfidensinterval = 97,6 99,8 % MAIPA (HPA-2) (HPA-2) Positiv 8 0 8 Overensstemmelse: 99,7% 95%-konfidensinterval = 98,4 99,1 % Negativ 1 336 337 Co-positivitet: 88,9% 95%-konfidensinterval = 56,5 98,0 % Total 9 336 345 Co-negativitet: 100,0% 95%-konfidensinterval = 98,9 100,0 % MAIPA (HPA-3) (HPA-3) Positiv 4 0 4 Overensstemmelse: 99,4% 95%-konfidensinterval = 97,9 99,8 % Negativ 2 341 343 Co-positivitet: 66,7% 95%-konfidensinterval = 30,0-90,3 % Total 6 341 347 Co-negativitet: 100,0% 95%-konfidensinterval = 98,9 100,0 % MAIPA (HPA-4) (HPA-4) Positiv 4 0 4 Overensstemmelse: 100,0% 95%-konfidensinterval = 97,7 100,0 % Negativ 0 160 160 Co-positivitet: 100,0% 95%-konfidensinterval = 51,0 100,0 % Total 4 160 164 Co-negativitet: 100,0% 95%-konfidensinterval = 97,7 100,0 % (HPA-5) (GPIV) MAIPA (HPA-5) Positiv 29 1 30 Overensstemmelse: 99,1% 95%-konfidensinterval = 97,4 99,7 % Negativ 2 297 299 Co-positivitet: 93,5% 95%-konfidensinterval = 79,3-98,2 % Total 31 298 329 Co-negativitet: 99,7% 95%-konfidensinterval = 98,1-99,9 % MAIPA (GPIV) Positiv 5 0 5 Overensstemmelse: 99,4% 95%-konfidensinterval = 96,7 99,9 % Negativ 1 162 163 Co-positivitet: 83,3% 95%-konfidensinterval = 43,6-97,0 % Total 6 162 168 Co-negativitet: 100,0% 95%-konfidensinterval = 97,7-100,0 % (HLA Cl-I) LMX (HLA Cl-I) Positiv 67 1 68 Overensstemmelse: 97,7% 95%-konfidensinterval = 94,3 99,1 % Negativ 3 104 107 Co-positivitet: 95,7% 95%-konfidensinterval = 88,1-98,5 % Total 70 105 175 Co-negativitet: 99,0% 95%-konfidensinterval = 94,8-99,8 % Præcision Pak Lx-analysen viste 100 % overensstemmelse i rapporterede resultater for otte prøver ved dobbelttest med ét parti over 20 separate testhændelser af to operatører. De udvalgte prøver omfatter prøver med antistofter mod HPA-1a, -1b, -3a, -4a, -5b, GPIV og HLA klasse 1. Interfererende stoffer Pak Lx Assay (analyse) 9 303285.IFUDA REV E

Der blev udført forsøg med interfererende stoffer ved brug af CLSI EP07-A2-interferenstest inden for klinisk kemi; godkendte retningslinjer. Følgende stoffer viste ingen interferens i Pak Lx-analysen ved de angivne koncentrationer: Hæmoglobin Triglycerider Bilirubin 500 mg/dl 500 mg/dl 20 mg/dl REFERENCER 1. Mueller-Eckhardt C. Mueller-Eckhardt C, Kiefel V, Grubert A et al. 348 cases of suspected neonatal alloimmune thrombocytopenia. Lancet 1989;1:363-366. 2. Mueller-Eckhardt C. Platelet allo-and autoantigens and their clinical implications. In: Nance SJ eds. Transfusion Medicine in the 1990s, Arlington, Va., American Association of Blood Banks 1990; 63-93. 3. Brand A. Immunological aspects of blood transfusions. Transpl.Immunol. 2002;10:183-190. 4. McFarland JG. Detection and identification of platelet antibodies in clinical disorders. Transfus.Apher.Sci. 2003;28:297-305. 5. Davoren A, Curtis BR, Aster RH, McFarland JG. Human platelet antigen-specific alloantibodies implicated in 1162 cases of neonatal alloimmune thrombocytopenia. Transfusion 2004;44:1220-1225. 6. Rebulla P. A mini-review on platelet refractoriness. Haematologica 2005;90:247-253. 7. Kanhai HH, Porcelijn L, Engelfriet CP et al. Management of alloimmune thrombocytopenia. Vox Sang. 2007;93:370-385. 8. Stroncek DF, Rebulla P. Platelet transfusions. Lancet 2007;370:427-438. 9. Arnold DM, Smith JW, Kelton JG. Diagnosis and management of neonatal alloimmune thrombocytopenia. Transfus.Med.Rev. 2008;22:255-267. 10. Bussel JB, Primiani A. Fetal and neonatal alloimmune thrombocytopenia: progress and ongoing debates. Blood Rev. 2008;22:33-52. 11. Curtis BR, McFarland JG. Detection and identification of platelet antibodies and antigens in the clinical laboratory. Immunohematology. 2009;25:125-135. 12. Vassallo RR. Recognition and management of antibodies to human platelet antigens in platelet transfusion-refractory patients. Immunohematology. 2009;25:119-124. 13. Kaplan C, Ni H, Freedman J. Alloimmune Thrombocytopenia. In: Michelson A eds. Platelets 3rd Edition. Academic Press Elsevier. 2012; 46:953-970. 14. Rozman P. Platelet antigens. The role of human platelet alloantigens (HPA) in blood transfusion and transplantation. Transpl.Immunol. 2002;10:165-181. 15. Metcalfe P et al. Nomenclature of human platelet antigens. Vox Sang. 2003; 85:240. 16. Santoso S. Human platelet alloantigens. Transfus.Apher.Sci. 2003;28:227-236. 17. Saw CL, Szykoluk H, Curtis BR et al. Two cases of platelet transfusion refractoriness associated with anti-cd36. Transfusion 2010;50:2638-2642. 18. Klein J, Sato A. The HLA system. N Eng J Med. 2000; 343:702. 19. Wu GG, Kaplan C, Curtis BR, Pearson HA. Report on the 14th International Society of Blood Transfusion Platelet Immunology Workshop. Vox Sang. 2010;99:375-381. 20. Smith GA, Ranasinghe E, Ouwehand WH. The importance of using multiple techniques for detection of platelet antibodies. Vox Sang. 2007;93:306-308. 21. Metcalfe P. Ensuring quality in platelet immunology. Vox Sang. 2007;93:287-288. Immucor GTI Diagnostics, Inc. 20925 Crossroads Circle Waukesha, WI 53186 USA EC REP Immucor Medizinische Diagnostik GmbH Adam-Opel-Strasse 26A Rodermark 63322 Germany Kontaktoplysninger for USA og internationalt: Teknisk support: waukeshatechsupport@immucor.com www.immucor.com LUMINEX og xmap er varemærker, der tilhører Luminex Corporation. MATCHIT!, Pak Lx, Immucor og tilknyttede logoer er varemærker og/eller registrerede varemærker, der tilhører Immucor Incorporated og/eller dets datterselskaber i USA og/eller andre lande. 2012-2015 Immucor GTI Diagnostics, Inc. 303285.IFUDA Rev E 2015-05-29 Warning Advarsel Pak Lx Assay (analyse) 10 303285.IFUDA REV E

H317 P261 P272 P280 P302 + P352 P333 + P313 P501 Kan forårsage allergisk hudreaktion. Undgå indånding af pulver/røg/gas/tåge/damp/spray. Tilsmudset arbejdstøj bør ikke fjernes fra arbejdspladsen. Bær beskyttelseshandsker/beskyttelsestøj/øjenbeskyttelse/ansigtsbeskyttelse VED KONTAKT MED HUDEN: Vask med rigeligt sæbe og vand. Ved hudirritation eller udslet: Søg lægehjælp. Bortskaffelse af indholdet / beholderen i en godkendt affaldsmodtagelsesanlæg Pak Lx Assay (analyse) 11 303285.IFUDA REV E