nyt Malariaparasitten udøver sin styring af værtscellen gennem et PTEXkompleks i den vakuolemembran, der adskiller parasitten fra værtscellen.

Transkript

1 Nr. 219 September 2014 iff nyt IndustriFarmaceutForeningen (IFF) er en interesseorganisation for den farmaceutiske industri, hvor medlemmerne kan holde det faglige og sociale netværk ved lige. Novo Nordisk recall af insulinpenne Den 18. september holder Karsten Lollike et foredrag om Novo Nordisks tilbagekaldelse af insulinpenne. Læs side 5 Good Distribution Practice with Karen Ginsbury The 21. of October K a r e n G i n s b u r y i s having a course about: Q u a l i t y S y s t e m s for Pharmaceutical D i s t r i b u t o r s, Wholesalers, Importers and Exporters and Pharma Companies. Læs side 6 Malariaparasitter er afhængig af at snylte på røde blodlegemer Malariaparasitten udøver sin styring af værtscellen gennem et PTEXkompleks i den vakuolemembran, der adskiller parasitten fra værtscellen. Af Kirsten Fink og Ole Terney Malaria er stadig på top 3-listen over de mest infektiøse sygdomme i verden. En WHO-rapport fra 2013 estimerer, at omkring 3,4 milliarder mennesker har risiko for at få malaria næsten halvdelen af verdens befolkning (6). Der skete store fremskridt i forebyggelse af malaria ved indføring af insekticidbehandlede net for at holde myg ude (6). Værdien af sådanne tiltag falder imidlertid hurtigt, da malariaparasitterne udvikler resistens overfor insekticiderne, og det nødvendiggør, at der hele tiden udvikles nye bekæmpelsesmidler (6). Malariaforskning har derfor i flere år været rettet mod at finde svage punkter i malariaparasittens livsforløb og dermed fortsættes næste side... GMP with Karen Ginsbury The 22. of October and again on the 23. of October Karen Ginsbury is having a course about: GMP Update. This course will meet your requirement for annual GMP training. Læs side 7

2 2 IndustriFarmaceutForeningen Fruebjergvej 3, Postboks 87 DK-2100 København Ø Tlf: Mail: Web: Bestyrelsen Formand: Tina Kjøller, Næstformand: Schiønning Brønnum Bruun, Kasserer: Jacob Ekstrøm, Bestyrelsesmedlemmer: Gitte Hassan, Per Grønlund, Suppleanter: Susanne Devantié Hansen, com Christina Guldberg, Styregrupperne MIKROBIOLOGI Ditte Hougaard, Tina Albæk Lorentsen, Nina Pringler, Lars Henrichsen, QUALITY MANAGEMENT (QM) Brian S. Jensen, Grethe Elmholdt, Conni Hornuff, Schiønning Brønnum Bruun, Johan Nielsen, SENIORGRUPPEN Jørgen Jensen, , Günther Fedders, IFF-nyt Bestyrelsen er ansvarshavende redaktion. Indlæg sendes til sekretariatet. Artikler i bladet udtrykker ikke nødvendigvis foreningens mening. DEADLINE 13. oktober november 2014 interferere med parasittens snyltetilværelse i værtscellerne de røde blodlegemer. Malaria er en infektionssygdom, som skyldes en gruppe malariaparasitter af slægten Plasmodium, hvoraf Plasmodium falciparum er den farligste for mennesker. Plasmodium-parasitterne er encellede organismer, der kan leve som parasitter i bl.a. mennesket og i en bestemt stikmyg ved navn Anopheles. Når et menneske bliver inficeret med malariaparasitter, opformeres parasitterne i leveren og spreder sig til de røde blodlegemer. Her gemmer malariaparasitten sig for kroppens naturlige immunforsvar og kan derved blive livstruende for mennesket. I det røde blodlegeme opholder malariaparasitterne sig i en speciel vakuole (lomme) adskilt fra cytosolen af det inficerede røde blodlegeme af parasittens egen cellemembran samt en speciel parasitvakuolemembran. De røde blodlegemer er et godt valg for malariaparasitten, da parasitten har brug for hæmoglobin ved udvikling gennem de forskellige livsstadier. De røde blodlegemer er små og kan let briste og ved infektion med malariaparasitten bliver de inficerede røde blodlegemer sendt til tilintetgørelse i milten (6). Så når malariaparasitten flytter ind i et rødt blodlegeme, må den i gang med at ændre værtscellen, så det røde blodlegeme bliver et godt og sikkert sted at være for malariaparasitten (6). Som et led i denne ændring af værtscellen eksporterer malariaparasitten i hundredvis af proteiner ud i værtcellens cytosol. Disse proteiner skal sikre parasittens optagelse af næring fra blodplasma, så vigtige aminosyrer og vitaminer kan komme ind til parasitten. Desuden har nogle af eksportproteinerne til opgave at lette det inficerede røde blodlegemes vedhæftning til endotelceller i blodkarrene, så de parasitholdige røde blodlegemer ikke føres til milten til tilintetgørelse. Malariaparasittens eksportproteiner har i det hele taget til opgave at ændre miljøet i det røde blodlegeme til fordel for parasitten. Denne livsnødvendige eksport af parasitproteiner ud i værtscellens cytosol sker gennem et såkaldt PTEX-kompleks, som danner en kanal i den vakuolemembran, der adskiller parasitten fra værtscellens cytosol. Nu har to forskergrupper fra henholdsvis Australien og USA uafhængigt og i store detaljer påvist, hvordan transporten af parasitproteiner over vakuolemembranen til cytosolen af det røde blodlegeme foregår (1,2,3). Forskergruppen fra Burnet Institute, Melbourne i Australien arbejdede med malariaparasitter, der fremkalder malaria i mus, Plasmodium berghei (1). Derimod arbejdede den amerikanske forskergruppe med malariaparasitten, Plasmodium falciparum, i kultur (2). Det lykkedes begge grupper at påvise, at PTEXkomplekset er helt essentiel for transport af livsvigtige parasitproteiner fra parasitten til det røde blodlegemes cytosol (1,2). Allerede i 2009 blev det foreslået, at malariaparasitten benytter sig af en proteineksportkanal De Koning og andre kollegaer fra den australske forskergruppe foreslog allerede i 2009, at malariaparasitten udnytter et parasitproteinkompleks, som de kaldte PTEX (Plasmodium translocon of exported proteins), til at sende parasitproteiner over parasitvakuolemembranen til cytosolen af det røde legeme (4). Studier af interaktioner mellem proteiner viste, at PTEX består af fem proteiner, hvoraf ét af disse proteiner, EXP2 (exportprotein 2), danner en pore, som parasitproteinerne kan komme igennem, når de er foldet ud. Udfoldningen af proteinerne sker ved hjælp af folde ud/ folde op -proteinet HSP101, som er en del af PTEX-komplekset, ved en energikrævende proces (4). Det menes, at proteiner skal eksporteres til værtscellens cytosol under parasittens infektion og formering, hvilket svarer til produktion af proteiner ud fra ca. 5% af de aktive gener i parasitten (4). Det er nu lykkedes forskere at afklare detaljerne i denne proteintransport gennem PTEX og påvise, at denne transport er altafgørende for, at malariaparasitten kan opformere sig i det røde blodlegeme (1,2). PTEX s betydning blev afklaret ved at undersøge effekten af forskellige defekter i PTEX-komplekset Den australske forskergruppe anvendte røde blodlegemer inficeret med Plasmodium berghei, der er en malariaparasit, som ofte

3 Det er nu lykkedes forskere at afklare detaljerne i denne proteintransport gennem PTEX og påvise, at denne transport er altafgørende for, at malariaparasitten kan opformere sig i det røde blodlegeme. anvendes som malariamodel i mus. De P. berghei-inficerede røde blodlegemer blev injiceret intraperitonalt i mus (1). I dette miljø blev PTEX-kompleksets betydning undersøgt. PTEX består af følgende fem proteiner: EXP2, PTEX150, PTEX88, HSP101 og TRX2 (4). Det var kendt, at PTEX88 og TRX2 har vigtige funktioner, da defekter i disse to proteiner i væsentlig grad nedsatte væksten af malariaparasitten, men det var de tre andre proteiner EXP2, PTEX150 og HSP101, der havde helt centrale roller under infektion af de røde blodlegemer (5). Det lykkedes nu den australske forskergruppe at fremkalde ændringer i de vigtige proteiner HSP101 og PTEX150 på en sådan måde, at forskerne kan tænde og slukke for aflæsningen af de gener, der koder for HSP101 og PTEX150 (1). Der blev dannet såkaldte knockdown mutanter. Gen-aflæsning blev betinget af, om der var anhydrotetracyclin tilstede eller ej. Mutantparasitterne voksede dårligt i nærværelse af anhydrotetracyclin, men normalt, hvis dette stof ikke var tilstede. Forskerne kunne så at sige tænde og slukke for væksten af parasitterne (1). Forskerne kunne også direkte påvise, at eksporten af kendte parasitproteiner blev blokeret ved tilstedeværelse af anhydrotetracyclin. Dette blev påvist ved hjælp af en immunfluorescensmetode med specifikke antistoffer mod forskellige malariaeksportproteiner. Knockdown mutation i HSP101 førte til meget nedsat eksport af eksportproteinerne, og det førte til stor reduktion i væksten af malariaparasitten (1). PTEX er stort set den eneste vej parasitten bruger til at eksportere de flere hundreder af forskellige proteiner til værtscellen (1). fortsættes næste side... 3

4 Karakteristik af eksporterede parasitproteiner Hos Plasmodium falciparum indeholder de fleste eksporterede proteiner en sekvens på fem aminosyrerester, kaldet PEXELmotivet, nær proteinernes aminoterminale ende (3). Enzymet plasmepsin V spalter proteinerne i dette motiv i en proces, der fører til modning af det protein, der skal transporteres til cytosolen i værtscellen (3). En anden gruppe af eksportproteiner indeholder ikke dette PEXEL-motiv (3). Når forskerne lukkede ned for dannelse af 85 af de eksporterede parasitproteiner, viste det sig, at 25% af de eksporterede proteiner var essentielle for parasittens overlevelse i blodstadiet (4). For overhovedet at få gang i proteineksporten fra malariaparasitten til værtscellen, skal proteinerne være tilgængelig for eksport. Dette sker i parasittens endoplasmatiske reticulum ved hjælp af en hydrofob N-terminal signalsekvens (4). Dette signal sørger for, at proteinerne bliver transporteret over parasittens plasmamembran, men ikke over parasitvakuolemembranen (4). Den videre eksport kræver i langt de fleste tilfælde PTEX-komplekset (4). PTEX-komponenten HSP101 er direkte involveret i proteineksporten Den amerikanske gruppe frembragte en stamme af Plasmodium falciparum, som ved overkrydsning havde fået et destabiliserende molekylmærke DDD på proteinet HSP101, så forskerne kunne styre HSP101-proteinets aktivitet (2). Det destabiliserende mærke blev anbragt i den carboxyterminale ende af HSP101. Med et lille molekyle, trimethoprim (TMP), kunne forskerne nu styre, om HSP101 var virksom i proteineksport eller ej. Når TMP blev fjernet fra parasitkulturen, skete der en total blokering af væksten af parasitten, og malariaparasitten akkumulerede i de sene stadier af parasittens udvikling (2). Hvis TMP blev tilsat igen inden for 48 timer kom parasitten igen i vækst (2). Den destabiliserende effekt af DDD skyldes interferens med HSP101-proteinets chaperone-funktion ved udfoldning og genfoldning af de proteiner, der skal eksporteres (2). En udfoldning er Når TMP blev fjernet fra parasitkulturen, skete der en total blokering af væksten af parasitten, og malariaparasitten akkumulerede i de sene stadier af parasittens udvikling. nødvendig for at proteinerne kan komme gennem PTEX-kanalen. Ude i værtcellens cytosol skal proteinerne igen foldes op til deres funktionelle strukturform af HSP101- proteinet. En blokering af eksporten af parasitproteiner ramte alle typer af eksportproteiner, herunder proteiner med eller uden PEXEL-motivet (2). Malariaparasittens absolutte behov for PTEX kan udnyttes ved udformning af lægemidler En blokering af funktionen af PTEX synes i et hug at kunne forhindre hundreder af parasitproteiner i at fungere korrekt i værtscellen og føre til, at parasitten dør hurtigt. En behandling, hvor malariaparasitten dør, kan ikke føre til resistens. Resistens kan kun opstå, hvis en aktiv parasit kan mutere i nærværelse af et bekæmpelsesmiddel, og hvis der med tiden opstår en mutant, der kan overvinde effekten af bekæmpelsesmidlet. Afsløringen af den fælles transportkanal for mange livsvigtige parasitproteiner giver et lovende muligheder for at fremstille lægemidler, der interfererer med funktionen af PTEX, og dermed bekæmper malariaparasitten. Kilder 1. Elsworth, B., M.fl. (2014), Nature, publiceret online 16. Juli, 2014, PTEX is an essential nexus for protein export in malaria parasites, doi: /nature Beck, J.R. m.fl. (2014), Nature, publiceret online 16. Juli, 2014, PTEX component HSP101 mediates export of diverse malaria effectors into host erythrocytes, doi: /nature Desai, S.A. og Miller, L.H. (2014), Nature, publiceret online 16. Juli, 2014, proteinexport pathway illuminated, doi: / nature De Koning-Ward, T.F., m.fl. (2009), Nature 459, , A newly discovered protein export machine in malaria parasites 5. Matz, J.M., m.fl. (2013), Mol. Biochem. Paracitol., 191, 44-52, Two putative protein export regulators promote Plasmodium blood stage development in vivo 6. Gilson, P. m.fl. (2014), The conversation, 4

5 Novo Nordisk recall af insulinpenne historien bag Den 18. september holder Karsten Lollike et foredrag om Novo Nordisks tilbagekaldelse af insulinpenne. I efteråret 2013 måtte Novo Nordisk tilbagekalde ca. 3 mio insulinpenne fra adskillige europæiske lande pga. en kvalitets defekt. Tilbagekaldelsessagen vil blive gennemgået som eksempel på en recall process, og diverse overvejelser i firmaet vil blive gennemgået. Det vil ligeledes blive gennemgået hvilke sikkerheds og forsikringsmæssige hensyn der kan være. Foredragsholder Karsten Lollike fra Novo Nordisk. C V P G l o b a l S a f e t y a n d Q P P V. Dato Foredraget finder sted den 18. september 2014 kl til kl i Symbion, Fruebjergvej 3, 2100 København Ø. Lokale M2. Der er morgenmad fra kl Det er gratis for medlemmer af IFF at deltage, men koster kr. 450 for ikkemedlemmer. Arrangør er IFFs bestyrelse. Tilmeldingsfrist er den 15. september Farmaceutisk efteruddannelse December Statistisk forsøgsplanlægning Farmaceutiske vandsystemer i teori og praksis Februar GMP for indkøbere Marts Pharmacovigilance - en introduktion Kvalificering af produktionsudstyr EU-GMP regler - krav og for- tolkninger. Afsluttende eksamen Statistisk stikprøvekontrol QP er - Qualified Person GMP-opdatering, udfordringer og dilemmaer Er du ikke IFF-medlem? Medlemskab af IFF giver dig en række fordele - f.eks. kan du deltage gratis i en masse faglige arrangementer. Hvis du ikke er IFF-medlem, vil du blive opkrævet en deltagerafgift. Meld dig ind i IFF for 975 kr. pr. medlemsår på Bliv skribent for IFF Er du god til at skrive og har du gode ideer til artikler med emner inden for f.eks biotek, medicinalindustrien, GXP, kvalitetssystemer eller måske ideer til historier om spændende virksomheder eller personer, så er dette sikkert noget for dig. Skriv til os på iff@iff.nu eller ring iff Problemer med kontakten? R e t d i n e d a t a o n l i n e! P å I F F s Medlemsliste kan du som IFF-medlem slå andre IFF-medlemmer op. Kryds de ønskede oplysninger af på Min side / Rediger Stamdata. Husk at logge dig på for at få adgang til disse medlemsfunktioner Læs mere om de enkelte kurser på vores kursusdatabase på -industri.dk Tilmelding på til Inge Fabech, if@pharmakon.dk, Er du interesseret i yderligere oplysninger, kan du kontakte uddannelseschef, cand. pharm. Ella Ulbak, eu@pharmakon.dk, Kurserne afholdes på Pharmakon Milnersvej Hillerød Bestyrelsesmøde i IFF Den 30. oktober Mere info følger i næste nummer af IFF og på 5

6 Good Distribution Practice with Karen Ginsbury The 21. of October Karen Ginsbury is having a course about: Quality S y s t e m s f o r P h a r m a c e u t i c a l Distributors, Wholesalers, Importers a n d E x p o r t e r s a n d P h a r m a Companies. Why were the GDP regulations issued twice in 2013 (March and November)? What is current Good Distribution Practice? Distribution of finished pharmaceuticals has become a global hot topic. Sadly both counterfeit and sub-standard drugs and drug substances / excipients are commonplace. This is often the result of intentional fraud and criminal activity but could also be caused by unintentional interference with the supply chain. The pharmaceutical industry manufactures under the GMP regulations and with a robust quality system in place. The GDP regulations are intended to ensure continuity of that level of quality through distribution and supply of these products to the end user. This course is appropriate both for those in the pharmaceutical industry who transfer their finished products to a distributor as well as for importers and distributors themselves. Objective Provide a thorough review of the Good Distribution Practice regulations for persons involved in the pharmaceutical supply chain. This course will fulfill the GDP training requirements for personnel but will also provide a detailed explanation of the requirements as well as their translation into a quality system that ensures, monitors and continually improves their effectiveness. The course will also discuss the interface with the GMP regulations and how to integrate these requirements into your company s quality system Benefits Participants will come away from this course with an understanding of Good Distribution Practice, why and how they need to be implemented, and how to measure, control and improve the implementation. Content GDP requirements: EU directive, WHO Guideline and EU regulations Scope of the GDP regulations Relevant portions of the GMP regulations Quality Management System Quality Agreements with customers Personnel Requirements: training and qualification Premises and Equipment Documentation Repackaging / Re-labeling controls Quality Control Warehousing and temperature control Qualification and Validation of GDP activities, with a very brief look at computerized systems Picking goods / preparing orders, FiFo vs FeFo; controls and documentation Managing a controlled temperature vehicle fleet Contractors: cars / trucks; printers for packaging materials; maintenance, calibration and qualification of equipment The role of the pharmacist / QP in GDP Deviations and Change Control Returned Goods, Complaints and Product Recall Auditing of your company by customers and of your sub-contractors and vendors This course is suitable for Quality Assurance / Quality Control, logistics and operations personnel working in pharmaceutical distribution networks as well as Responsible Pharmacists, Computer / IT personnel who need to ensure that the ERP system is validatable to meet GDP requirements and anyone else involved in the pharmaceutical supply chain. QA / QC and logistics personnel working at pharmaceutical manufacturers who need to audit their distributors, ensure the integrity of their supply chain and prepare quality agreements with their distributors. Course Instructor This course will be presented Karen Ginsbury, CEO of PCI Pharmaceutical Consulting Israel Ltd. Karen has 27 years of experience in the pharmaceutical industry and has worked closely with wholesalers, distributors and importers on their GDP / GMP compliant quality systems. Karen has helped companies pass customer audits and upgrade their GDP quality systems. In this course she will bring you her experience and case studies to help understand the significance of the regulations as they relate to your day to day job function. Time and place The course will take place the 21. of October from in Symbion, Fruebjergvej 3, 2100 Copenhavn Ø. There will be breckfast from Participation costs DKK 950 for members of IFF. Non-members must pay DKK Arranged by the board of IFF. 6

7 GMP with Karen Ginsbury The 22. of October and again on the 23. of October Karen Ginsbury is having a course about: GMP Update. This course will meet your requirement for annual GMP training. Objective Provide a rapid update of GMP related regulations and their ongoing updates. These regulations, guidances and even expectations are being updated at a pace which industry has never previously encountered. Taken in conjunction with the fact that industry is outsourcing more and more operations, how is it possible for the Contract Giver and the Contract Acceptor to remain up-to-date and on the same page? This course will provide some tips as to how to do just that. Benefits Participants will come away from this course with a list of sources for GMP updates and a rapid overview of the changes that have been recently implemented as well as those currently under consideration / comment. The course will also allow participants to understand the commenting process so that they can be proactive in ensuring regulations are not needlessly burdensome for industry. Content The course will address the following regulations and guidances in their current, recently revised, draft or concept paper formats: EU GMPs Part 1 chapters 1 9 especially: 1. Personnel Chapter 2: Effective Feb Premises and Equipment Chapter 3 3. Production Chapter 5 both under revision for shared vs dedicated facilities 4. Quality Control Chapter 6 Effective October 2014 EU Annexes especially planned revisions to: 1. Annex 1 - Sterile Products 2. Annex 15 Qualification and Validation 3. Annex 16 QP Certification 4. Annex 17 Parametric Release US GMPs: 21CFR parts 210, 211, part 11 and part 820 FDA guidances: 1. Quality system guidance vs ICH Q8, 9, Process validation guidance 3. Contract Manufacture work program EU GMP/GDP 2014 Workplan MHRA Compliance Report program and FDA on quality metrics WHO Guidances PIC/s Guidances USP, European Pharmacopoeia Pulling together the threads and staying updated This course is suitable for Anyone working in the pharmaceutical industry including Company General Managers, Managing Directors (GMPs and ICH Q10 focusing on management leadership) hospital pharmacists, QPs, Quality Assurance, Quality Control and other quality professionals, Operations Managers, production managers, Research and Development, persons working in technology transfer, personnel working in pharmaceutical Active substance and finished product manufacture as well as distributors, brokers, wholesale dealers and anyone involved in the manufacture of starting materials, Active Substances, finished pharmaceuticals or involved in the handling, processing or sale or administration of any of these. Persons involved in clinical trials and manufacture and administration of Investigational Medicinal Products will also find the course very useful. Course Instructor This course will be presented Karen Ginsbury, CEO of PCI Pharmaceutical Consulting Israel Ltd. Karen has 27 years experience in the pharmaceutical industry and has worked closely with: API and finished pharmaceutical manufacturers to set-up, maintain and improve their GMP compliant quality systems virtual companies and multi-nationals to develop flexible but compliant quality systems for the manufacture and control of IMPs outsourced operations setting up and implementing quality systems which meet the needs of the Contract Giver and Contract Acceptor wholesalers, distributors and importers on their GDP / GMP compliant quality systems. Karen has helped companies pass customer audits and upgrade their GDP quality systems. In this course she will bring you her experience and case studies to help understand how and at what pace the regulations are being updated and the significance and application of the regulations as they relate to your day to day job function. As a member of PDA s Regulatory Affairs and Quality Advisory Board, Karen Ginsbury is currently leading a task force presenting to EMA on lack of uniformity in the updating process of the GxPs. This course is an opportunity to learn from her unique perspective as to what is happening both in Europe and the USA as globalization affects industry s ability to stay updated. Time and place The course will take place the 22 and 23.. of October from in Symbion, Fruebjergvej 3, 2100 Copenhavn Ø. There will be breckfast from Participation costs DKK 950 for members of IFF. Non-members must pay DKK Arranged by the board of IFF. 7