nyt Af Kirsten Fink og Ole Terney

Transkript

1 Nr. 223 Februar 2015 iff nyt IndustriFarmaceutForeningen (IFF) er en interesseorganisation for den farmaceutiske industri, hvor medlemmerne kan holde det faglige og sociale netværk ved lige. Drug-Device ERFRA gruppemøde 23. februar 2015 Helt ny type antibiotikum isoleret fra jordbakterie, der ikke kan dyrkes i laboratoriet Ny QA ERFA-gruppe Den 26. februar 2015 Bestyrelsesmøde i IFF Den 11. marts 2015 Champagnesmagning Den 19. marts 2015 Kun 1% af jordbakterier kan dyrkes i laboratoriet, men nyt udstyr muliggør dyrkning af op til 50% af bakterierne i jordmiljøet og isolering af mange nye og nyttige produkter. Af Kirsten Fink og Ole Terney For første gang i næsten 30 år er der fundet en ny type antibiotikum med kun lille risiko for at fremkalde resistens i bakterier. Dette har vakt stor begejstring, da vi i høj grad mangler nye antibiotika i kampen mod resistente bakterier, ikke mindst multiresistente bakterier. Det er et internationalt forskerhold fra USA, Tyskland og England, som står bag fundet af det nye antibiotikum, som de har kaldt teixobactin (1). Teixobactin kan blandt andet dræbe multiresistente bakterier såsom MRSAbakterier (methicilin resistent Streptococcus aureus) (1). Teixobactin er et meget interessant antibiotikum til behandling af mennesker, men der går lang tid (antagelig 5-6 år), før der foreligger et lægemiddel (2). GMP Updates Med Karen Ginsbury 15. April 2015 Aseptic / Terminally Sterilized Production State of the Art Risk Management Med Karen Ginsbury den 13. og 14. April 2015

2 IndustriFarmaceutForeningen Fruebjergvej 3, Postboks 87 DK-2100 København Ø Tlf: Mail: Web: Bestyrelsen Formand: Tina Kjøller, Næstformand: Gitte Hassan, Kasserer: Schiønning Brønnum Bruun, Bestyrelsesmedlemmer: Per Grønlund, Christina Guldberg, Suppleanter: Susanne Devantié Hansen, Styregrupperne MIKROBIOLOGI Ditte Hougaard, Tina Albæk Lorentsen, Nina Pringler, Lars Henrichsen, QUALITY MANAGEMENT (QM) Brian S. Jensen, Grethe Elmholdt, Conni Hornuff, Schiønning Brønnum Bruun, Johan Nielsen, SENIORGRUPPEN Jørgen Jensen, , Günther Fedders, IFF-nyt Bestyrelsen er ansvarshavende redaktion. Indlæg sendes til sekretariatet. Artikler i bladet udtrykker ikke nødvendigvis foreningens mening. DEADLINE 9. marts april 2015 Mange kendte antibiotika stammer fra jordbakterier dyrket i laboratoriet Jordbakterier producerer helt naturligt antibiotika som en del af deres eget forsvarssystem. Jordbakterier er derfor blevet undersøgt for deres evne til at producere antibiotika. Det store problem har været, at kun meget få jordbakterier kan dyrkes i laboratoriet, da man ikke kender deres vækstkrav og vækstmiljø. Man kan normalt kun dyrke omkring 1% af bakterierne i en jordprøve (1), så der ligger en stor værdi i at kunne håndtere ikkenormalt dyrkbare bakterier og udnytte de produkter, som de producerer. Jordbakterier kan dyrkes isoleret i en speciel chip i deres eget miljø Amerikanske forskere satte sig for at løse det problem, at kun meget få bakterier kan dyrkes i laboratoriet (3). Forskerne havde fundet ud af at dyrke bakterier i et diffusionskammer, som de anbragte i jorden i bakteriernes nærmiljø. Denne opstilling gav bakterierne de vækstfaktorer og det vækstmiljø, de havde brug for. Men forskerne nåede så blot frem til en blanding af bakterier, som de ikke kunne isolere fra hinanden og dyrke videre på i laboratoriet. Forskerne udviklede nu et apparat med flere hundrede små diffusionskamre til parallel dyrkning af enkelte bakteriekloner i det miljø, hvor de bliver fundet. De kaldte dette apparat for en ichip (isolerings-chip), og med denne ichip kan der nu dyrkes enkeltkolonier af bakterier fra jordprøver i stort format (3). Identifikation af teixobactin Det internationale forskerhold anvendte ichip en til isolering af bakterier i en jordprøve (1). En jordprøve blev fortyndet så mange gange, at der teoretisk set kun er én bakterie i et givent kammer. Apparatet blev dækket med semi-permeable membraner på hver side, så der kunne ske en diffusion gennem apparatet. Herefter blev ichip en sat ned i den jord, som jordprøven stammede fra. Gennem de semi-permeable membraner kunne næringsstoffer og vækstfaktorer fra bakteriernes nærmiljø diffundere gennem apparatet og understøtte væksten af bakterier, der ellers ikke har kunnet dyrkes i laboratoriet. På denne måde kunne forskerne dyrke omkring 50% af mikroorganismerne i jorden mod som sagt kun 1% i petriskåle i laboratoriet (1). Den sorte muld kan være en guldgrube til at finde nye, for mennesket nyttige stoffer. Når der først er dannet en samling af bakterier ud fra den første bakterie i et kammer, vil en væsentlig del af de hidtil ikke-dyrkbare bakterier kunne dyrkes i laboratoriet (1). Ekstrakter fra bakterier, der blev opnået med ichip-metoden, blev screenet for antimikrobiel aktivitet på plader med et toplag af Streptococcus aureus (1). Her udviste et ekstrakt fra en ny art af β-proteobakterier god aktivitet. Genomet fra denne bakterie blev analyseret og ud fra 16S rdna og computerbaserede (in silico) DNA/DNA hybridiseringer, viste det sig, at bakterien tilhørte en ny slægt, der har relation til Aquabacteria (1). Det er ikke kendt, at denne gruppe af Gramnegative bakterier producerer antibiotika. Isolering af aktiv forbindelse fra den nye bakterie En delvis oprenset fraktion af et ekstrakt fra den nye bakterie indeholdt en forbindelse med molekylvægten 1242 Da bestemt ved massespektrometri (1). Denne forbindelse fandtes ikke i tilgængelige databaser. Forbindelsen blev isoleret og beskrevet vha NMR. Forbindelsen er et depsipeptid, som indeholder enduracididin, methylphenylalanin og fire D-aminosyrer (1). Et depsipeptid er et peptid, hvori en eller flere amidgrupper er erstattet med den tilsvarende estergruppe, dvs det er et molekyle, der har både peptidbindinger og esterbindinger i nærheden af hinanden i det samme, lille aminosyreholdige molekyle. Alle naturligt forekommende aminosyrer i proteiner er normalt L-aminosyrer. Så det er meget usædvanligt, at der er D-aminosyrer i teixobactin. Teixobactins virkemåde Teixobactin har udmærket aktivitet mod Gram-positive patogene mikroorganismer herunder også lægemiddelresistente stammer, såsom Streptococcus aureus, forskellige enterokokker, Mycobacterium turberculosis, Clostridium difficile m.fl.. 2

3 Forskerne udviklede nu et apparat med flere hundrede små diffusionskamre til parallel dyrkning af enkelte bakteriekloner i det miljø, hvor de bliver fundet. Aktivitetsstyrken af teixobactin lå for mange bakterier under 1 μg/ml, selv for enterokokker og M. tuberculosis, som er vanskelige at behandle (1). Aktiviteten måles i MIC-værdier, der er den mindste koncentration, som er i stand til at hæmme væksten af en bakterie. Teixobactin er meget aktiv mod Clostridium difficile og Bacillus anthrasis med MIC-værdier på 0,005 henholdsvis 0,020 μg/ml (1). Teixobactin har ingen virkning på væksten af Gram-negative bakterier, der ikke har en cellevæg, men teixobactin har god aktivitet mod en E. coli stamme asmb1, som er defekt i dens ydre membran (1). Bakterier bliver ikke resistente mod teixobactin Problemet med mange antibiotika er, at nogle af bakterierne udvikler resistens og overlever i tilstedeværelse af sådanne antibiotika. Den internationale forskergruppe prøvede at frembringe resistens mod teixobactin ved at dyrke Streptococcus aureus eller Mycobacterium tuberculosis på et medium indeholdende 4xMIC teixobactin. Ved dyrkning i 27 dage blev der stadig ikke set resistente mutanter. Dette tyder som regel på, at stoffet har en uspecifik virkningsmåde med ledsagende toxicitet (1). Der fandtes ingen toxicitet ved test af to mammale cellelinier ved 100 μg/ ml (hvilket var den højeste dosis, der blev testet) (1). 3

4 Teixobactins virkningsmekanisme Virkningsmåden af teixobactin blev herefter søgt belyst ved at måle virkningen på den hastighed, hvormed mærkede forbindelser blev inkorporeret i de vigtigste biosyntetiske veje i Streptococcus aureus. Teixobactin havde en kraftig hæmning af syntesen af peptidoglycan, men stort set ingen virkning på incorporering af mærkede forbindelser i DNA, RNA eller protein (1). Dette resultat tyder på, at teixobactin er en peptidoglycansyntesehæmmer (1). Peptidoglycan er en polymer, der består af sukkerstoffer og aminosyrer, der danner et lag uden om de Grampositive bakteriers plasmamembran. Vancomycin er et andet antibiotikum, hvor der stort set ikke opstår resistens imod. Det er påvist, at vancomycin binder til lipid II, som er et forstadie til peptidoglycan. Det var derfor interessant at undersøge, om teixobactin virker på samme måde. Streptococcus aureus blev derfor behandlet med teixobactin (1-5x MIC). MIC for Streptococcus aureus er Teixobactin anses for at være mere robust mod mutationer i bindingsstedet på bakterier, da det ikke bindes til proteiner, hvis gener er mere muterbare end gener for fedtsyrer, der er en essentiel del af cellevæggen. 0,25 μg/ml. Behandling med stigende mængder teixobactin førte til ophobning af det opløselige cellevægsforstadium undecaprenyl-n-acetylmuraminsyrepentapeptid (1). Det samme forstadie som ved behandling med vancomycin. Der er således sket en blokering af et af trinnene i peptidoglycanbiosyntesen. Det blev påvist, at teixobactin interagerer med peptidoglycanforstadiet og ikke med aktiviteten af et af enzymerne i biosyntesen (1). Hvor specifik er bindingen mellem teixobactin og peptidoglycanforstadiet? Bindingen mellem peptidoglycanforstadiet og teixobactin blev undersøgt ved at inkubere teixobactin med forskellige oprensede peptoglycanforstadier i forskellige mængdeforhold mellem de to komponenter. De dannede komplekser blev ekstraheret og analyseret ved tyndtlagskromatografi. Herved viste det sig, at lipid I og lipid II var helt indesluttet 4

5 i et stabilt kompleks med teixobactin, hvor lipidkomponenten ikke kunne ekstraheres, hvis der var 2 gange overskud af teixobactin (1). Det viste sig også, at teixobactin var aktiv mod vancomycinresistente enterokokker med modificeret lipid II. Teixobactin medvirkede også til, at der blev frigjort flere autolysiner, som forstærker teixobactins virkning (1). Forskerne påviste, at bindingen mellem teixobactin og cellevæggen bygger på interaktion mellem pyrophosphatenheden og den første sukkerenhed bundet til lipidbæreren (1). Det viste sig, at naturen af den første sukkerenhed ikke var vigtig, og dette kan forklare, hvorfor teixobactin er aktiv mod M. tuberculosis, hvor teixobactin højst sandsynlig binder til decaprenylkoblet lipidforstadier af peptidoglycan og arabinogalactan (1). Teixobactin kan let angribe polyprenylkoblede cellevægforstadier, såsom lipid II, på ydersiden af Grampositive bakterier og disse forstadier kan siges at være bakteriers achilleshæl for antibiotikaangreb. Angrebspunktet for teixobactin, pyrophosphat-sukker-enheden i disse forstadier, er stærkt konserveret blandt de fleste bakterier (1). Terapeutisk potentiale Teixobactin er stabilt og bevarer aktiviteten i serum. Toxiciteten er lav (1). Mus, der fik en intervenøs injektion af en enkelt dosis af 20 mg teixobactin pr kg opretholdt en koncentration over MIC i 4 timer (1). Effekten af teixobactin blev afprøvet i en musemodel for sepsis (bakterieinfektion). Musene blev inficeret intraperitonalt med MRSA i en dosis, som fører til at 90% dør uden behandling En time senere blev teixobactin indført i.v. i en enkelt dosis på fra 1 til 20 mg/kg. Alle behandlede mus overlevede. PD50-værdien blev også bestemt (det er den dosis, hvor halvdelen af musene overlever). PD50-værdien blev bestemt til 0,2 mg/kg (til sammenligning er PD50-værdien for vancomycin 2,75 mg/ kg (1). Vancomycin er det antibiotikum, der hyppigst anvendes mod infektioner med Streptococcus aureus. Teixobactin var også virkningsfuldt mod mus inficeret med Streptococcus pneumoniae, hvor der blev opnået en 106 ganges reduktion (6 log10- reduktion ) af koloniformende enheder af bakterier i lungerne (1). Risiko for resistens Teixobactin anses for at være mere robust mod mutationer i bindingsstedet på bakterier, da det ikke bindes til proteiner, hvis gener er mere muterbare end gener for fedtsyrer, der er en essentiel del af cellevæggen (2). Resistensudvikling er ikke sandsynlig, men det kan ikke udelukkes, at der kan ske en horizontal overførsel af en resistensmekanisme fra en jordbakterie, f.eks. i form af et antibiotikamodificerende enzym. Der findes enzymer, som angriber hyppigt fundne antibiotika, såsom β-lactamer eller aminoglycosider, men sådanne enzymer kendes ikke for det sjældne vancomycin (1). Teixobactin er endnu sjældnere end vancomycin, så risikoen for resistens er meget lille. Det tog f.eks. 30 år fra at vancomycin blev taget i brug i klinikken til at der forekom resistens (1). Kommercielle undersøgelser Lederen af den gruppe, der opdagede teixobactin, Kim Lewis, har været medstifter af NovoBiotic Pharmaceutical i Cambridge, MA, USA (4). Firmaet bruger ichip-metoden til at identificere andre potentielle antibiotikaforbindelser og prøver at finde en mere opløselig version af teixobactin (2). Kilder (1) Ling, L.L., m.fl. (2015), Nature, publiceret online 7. januar, A new antibiotic killed pathogens without detectable resistance, doi: /nature14098 (2) Wikipedia, print 8. Januar, 2015, Teixobactin (3) Nichols, D., m.fl. (2010), Applied and Environmental Microbiology, 76(8), , Use of ichip for high-throughput in situ cultivation of uncultivable microbial species, doi: /aem (4) Azvolinsky, A. (2015), The Scientist, 7. Januar, New antibiotic from soil bacteria Farmaceutisk efteruddannelse Februar GMP for indkøbere Marts Pharmacovigilance - en introduktion Procesvalidering Kvalificering af produktionsudstyr EU-GMP regler - krav og fortolkninger. Afsluttende eksamen Statistisk stikprøvekontrol QP er - Qualified Person GMP-opdatering, udfordringer og dilemmaer April Kontrol af råvarer GDP-regler - krav og fortolkninger. Afsluttende eksamen Maj Lægemiddelformulering - en introduktion Validering af analysemetoder Statistisk kvalitetskontrol 20. GMP for ledere 21. Kosttilskud, Naturlægemidler, Kosmetik og Medicinsk udstyr 28. Urenheder og nedbrydningsprodukter i råvarer og lægemidler Læs mere om de enkelte kurser på vores kursusdatabase på -industri.dk Tilmelding på til Inge Fabech, if@pharmakon.dk, 4820 Er du interesseret i yderligere oplysninger, kan du kontakte uddannelseschef, cand. pharm. Ulla Kvottrup, uk@pharmakon.dk, Kurserne afholdes på Pharmakon Milnersvej Hillerød 5

6 Ny QA ERFA gruppe i IFF Har du lyst til at udveksle erfaringer og kunne dele evt. problemstillinger med andre, eller har du brug for sparring og har lyst til at interagere med andre, der arbejder med eller for kvalitet, så meld til QA ERFA gruppen, som starter torsdag d kl i Symbion. På det første møde vil vi præsentere os kort for hinanden og diskutere hvad møderne skal bruges til, hvilke interesser vi skal fokusere på og hvilke aktiviteter, der skal i kalenderen. Hvis du ikke kan deltage den første gang, er du velkommen til at sende en mail om dine forventninger samt ønsker til ERFA gruppen. Jeg ser frem til at se så mange som muligt. På gensyn fra Lone Cleveland Andersen, GxP-Pharma Support AS. (LCA@gxp-pharmasupport.dk) Champagnesmagning Få et indblik i hvor forskelligt champagne kan smage. Få samtidig grundig indføring af alle hemmelighederne ved fremstillingen mm. Kan champagne bruges til mad? Hvad gør boblerne? Hvad gør området specielt? Få lejlighed til at få besvaret disse og andre spørgsmål når Champagnesjælen kommer og fortæller. Champagnesjælen er et ægte garageforetagende drevet af interessen for champagne. Champagne er det eneste franske vindistrikt, hvor det gennem reklame er lykkedes at overbevise verden om at god kvalitet består i at vinen skal smage ens, år ud og år ind. Alle andre distrikter sætter en ære i, at man kan smage hvem der har dyrket vinen, hvor den er dyrket, af hvilken druesort og hvornår. Den skal udtrykke sit terroir. Det har heldigvist ændret sig de seneste år og mange af bønderne er begyndt at producerer champagne der udtrykker terroir. I champagnesjælen vil vi gerne bidrage til at øge kendskabet til hvor forskelligt champagne kan og skal være. samtidig vil vi også vise at man tilmed kan få champagnen til en meget mere rimelig pris, uden at gå på kompromis med kvaliteten tvært imod. Ønsker du at medbringe en gæst, så tilmeld dig to gange. Husk at skriv fakturerings adressen, hvis du selv skal betale Champagnesmagningen finder sted den 19. marts kl til i Symbion, Fruebjergvej 3, 2100 København Ø. Bestyrelsesmøde i IFF Den 11. marts 2015 er der bestyrelsesmøde i IFF Kl Mødet finder sted i Symbion Fruebjergvej 3, 2100 København Ø. Kun for medlemmer 6

7 Drug-Device ERFA gruppemøde Mødet finder sted den 23. februar kl i Symbion, Fruebjergvej 3, 2100 København Ø. Det er gratis at deltage og mødet er kun for medlemmer af IFF. Tilmeldingsfrist den 18. februar GMP Updates Course by Karen Ginsbury the 15th of April Note: This course will meet your requirement for annual GMP training. HOT HOT topics: Data Integrity is back in the limelight. Quality Culture to be measured during FDA insepctions does your management know! Objective: Provide a rapid update of GMP related regulations and their ongoing updates. These regulations, guidances and even expectations are being updated at a pace which industry has never previously encountered. Taken in conjunction with the fact that industry is outsourcing more and more operations, how is it possible for the Contract Giver and the Contract Acceptor to remain up-to-date and on the same page? This course will provide some tips as to how to do just that. The course takes place the 15th of April. from O clock in Symbion, Fruebjergvej 3, 2100 Copenhagen Ø, Conferenceroom K1. Sign up before 6th of April Aseptic / Terminally Sterilized Production State of the Art Risk Management Lecturer is Karen Ginsbury. The seminar takes place the 13th and the 14th of April. Give yourself a one day refresher training to come up to speed on recent developments in aseptic processing. Annex 1 of the EU GMPs is currently under revision. Aseptic processing is one of the riskier tasks routinely undertaken in the pharmaceutical industry. There are a large range of tools applied both for control and monitoring of these operations. Terminal sterilization is generally considered safer and even a candidate for parametric release. All of these points will be addressed in an interactive workshop using a risk based approach to analyzing, controlling and monitoring risks associated with these critical activities. The seminar takes place the 13th and the 14 th of April from O clock in Symbion, Conferenceroom K1. Breckfast is served from Participation costs DKK 950 for members of IFF. Non members are charged DKK Arranged by the board of IFF. Sign up before the 6th of April. Er du ikke IFF-medlem? iff Medlemskab af IFF giver dig en række fordele - f.eks. kan du deltage gratis i en masse faglige arrangementer. Hvis du ikke er IFF-medlem, vil du blive opkrævet en deltagerafgift. Meld dig ind i IFF for 975 kr. pr. medlemsår på Bliv skribent for IFF Er du god til at skrive og har du gode ideer til artikler med emner inden for f.eks biotek, medicinalindustrien, GXP, kvalitetssystemer eller måske ideer til historier om spændende virksomheder eller personer, så er dette sikkert noget for dig. Skriv til os på iff@iff.nu eller ring Problemer med kontakten? Ret dine data online! På IFF s Medlemsliste kan du som IFF-medlem slå andre IFF-medlemmer op. Kryds de ønskede oplysninger af på Min side / Rediger Stamdata Husk at logge dig på for at få adgang til disse medlemsfunktioner 7