AIA-PACK B12 NØDVENDIGE, MEN IKKE MEDFØLGENDE MATERIALER ANVENDELSESOMRÅDE RESUME OG FORKLARING PRINCIPPET FOR ANALYSEN MEDFØLGENDE MATERIALE

Transkript

1 EU rev. B Bemærk: Denne brugsvejledning overholder IVD-direktivet 98/79/EF og er beregnet til at bruges af kunder, der opererer i et EU-medlemsland ANVENDELSESOMRÅDE AIA-PACK B12 AIA-PACK B12 er udelukkende beregnet til kvantitativ måling af vitamin B12 (B12) i humant serum ved in vitro-diagnosticering på Tosoh AIA System-analysatorer. RESUME OG FORKLARING Vitamin B12 (cyanocobalamin), der syntetiseres udelukkende ved hjælp af mikroorganismer og findes i næsten alt animalsk væv, er vigtigt for metaboliseringen af fedtsyrer, intermediær metabolisering af folinsyre og biosyntese af DNA og RNA. Efter ingestion og begyndende proteinnedbrydning danner vitamin B12 komplekser med de gastriske glykoproteinbærere, endogen termolabil faktor (IF) og R-faktorer. Under nedbrydningen bindes B12-IF-komplekset af receptorer i slimhinden i den terminale ileum. Komplekset dissocieres, efterhånden som vitamin B12 via kapillærerne optages i den portale cirkulation for oplagring i leveren. Bundet til transportproteinet, transcobalamin II, frigives vitamin B 12 af hepatocytter, efterhånden som de fysiologiske behov opstår. B12-vitaminmangel kan opstå som følge af flere faktorer, herunder utilstrækkeligt kostindtag og dårlig optagelse. Dårlig optagelse, den mest almindelige grund til B12-mangel associeres med autoimmune sygdomme (perniciøs anæmi), gastriske sygdomme og skader på eller fravær af den terminale ileum. Forhøjede niveauer af vitamin B12 skyldes normalt indtagelse af vitamintilskud. Forhøjede niveauer af B12, der fortsætter, efter at indtagelsen af vitamintilskud er ophørt, kan indicere skader på lever eller myelopoliferative sygdomme. B12-mangel kan forårsage alvorlige skader, progressive, og hvis ubehandlede, ofte irreversible neurologiske forstyrrelser og makrocytær eller megaloblastær anæmi. Fordi megaloblastære anæmier, der morfologisk ikke kan skelnes fra hinanden, kan forårsages af mangel på enten vitamin B12 eller folinsyre, er der vigtigt at bestemme serumniveauerne for begge for at diagnosticere tilstanden korrekt og behandle anæmien effektivt (1-6). PRINCIPPET FOR ANALYSEN AIA-PACK B12 er en sammenlignende enzymimmunanalyse, der efter prøvebehandling udføres helt i AIA-PACK testkopperne. Reagenser til prøveforbehandling (der indeholder kaliumcyanid, natriumhydroxid og dithiothreitol) frigiver vitamin B12 fra serumbindende proteiner i prøven og omdanner cyanocobalamin til en stabil, målelig variation af B12. Vitamin B12, der er til stede i den forbehandlede prøve, konkurrerer med enzymmærket vitamin B12 om et begrænset antal bindepunkter på en fluorescein-mærket porcin endogen termolabil faktor, som så binder til anti-fitc (fluorescein-isothiocyanat) antistof, der er immobiliseret på magnetiske kugler. De magnetiske kugler vaskes for at fjerne eventuelt ubundet enzymmærket vitamin B12 og inkuberes derefter med et fluorogent substrat, 4-methylumbelliferylfosfat (4MUP). Mængden af enzymmærket vitamin B12, der er bundet til kuglerne, er omvendt proportional med koncentrationen af vitamin B12 i prøven. Der konstrueres en standardkurve, og ukendte vitamin B12-koncentrationer beregnes ved hjælp af denne kurve. MEDFØLGENDE MATERIALE Katalog nr AIA-PACK B12 10 bakker x 20 testkopper 1-12 Testkopper af plastik indeholdende tolv frysetørrede magnetiske kugler belagt med anti-fitc musemonoklonalt antistof og fluorescein-mærket porcin endogen termolabil faktor og 50 µl vitamin B12 konjugeret til bovin basisk phosphatase med natriumazid som konserveringsmiddel. NØDVENDIGE, MEN IKKE MEDFØLGENDE MATERIALER De følgende materialer er nødvendige for at kunne udføre vitamin B12-analyser ved hjælp af AIA-PACK B12 (kat. nr ) på Tosoh AIA-systemanalysatorer. Følgende leveres separat fra Tosoh. Materialer Katalog nr. AIA Nex IA eller AIA AIA Nex IA eller AIA-21 LA AIA-1800 ST AIA-1800 LA AIA-2000 ST AIA-2000 LA AIA-600 II AIA-600 II BCR AIA AIA-PACK SUBSTRATE SET II AIA-PACK SUBSTRATE REAGENT II/AIA-PACK SUBSTRATE RECONSTITUENT II AIA-PACK B12 CALIBRATOR SET AIA-PACK B12 CALIBRATOR (1) 0 pg/ml AIA-PACK B12 CALIBRATOR (2) 90 pg/ml (ca.) AIA-PACK B12 CALIBRATOR (3) 250 pg/ml (ca.) AIA-PACK B12 CALIBRATOR (4) 500 pg/ml (ca.) AIA-PACK B12 CALIBRATOR (5) 1,000 pg/ml (ca.) AIA-PACK B12 CALIBRATOR (6) pg/ml (ca.) AIA-PACK B12 SAMPLE DILUTING SOLUTION AIA-PACK B12 PRETREATMENT SET AIA-PACK B12 PRETREATMENT-1 AIA-PACK B12 PRETREATMENT-2 AIA-PACK B12 PRETREATMENT-3 AIA-PACK WASH CONCENTRATE AIA-PACK DILUENT CONCENTRATE AIA-PACK DETECTOR STANDARDIZATION TEST CUP PRØVEKOPPER AIA-PACK SAMPLE TREATMENT CUP Yderligere krav kun til AIA Nex IA/AIA-21: PIPETTESPIDSER PÅSATTE PIPETTESPIDSER Yderligere krav til AIA-600 II, AIA-900, AIA-1800 og AIA-2000: PIPETTESPIDSER SPIDSSTATIV PÅSATTE PIPETTESPIDSER Der må kun anvendes materialer fra Tosoh. Materialer og reagenser fra andre producenter må ikke anvendes i stedet, da analysens præstationer er karakteriseret udelukkende ved materialer fra Tosoh. ADVARSLER OG FORHOLDSREGLER 1. AIA-PACK B12 er udelukkende beregnet til in vitro-diagnosticering. 2-12

2 2. Undersøg emballagen og aluminiumpakkens ydre for tegn på skader før brug. Hvis der er nogen synlige skader, skal du kontakte din lokale TOSOH-sælger. 3. Testkopper fra forskellige partier eller forskellige analyser må ikke blandes på en bakke. 4. AIA-PACK B12 indeholder natriumazid, der kan reagere med bly- eller kobberrør og danne potentielt eksplosive metalazider. Når sådanne reagenser hældes bort, skal der altid skylles efter med store mængder vand for at undgå azidansamling. 5. Der er ikke anvendt humant serum i tilberedningen af dette produkt, men da der vil blive anvendt humane prøver, og andre kvalitetstestprodukter i laboratoriet kan være fremstillet med brug af humant serum, skal alle standardlaboratoriesikkerhedsprocedurer for håndtering af prøver og kontrolmaterialer overholdes. 6. Må ikke anvendes efter udløbsdatoen. 7. AIA-PACK B12 PRETREATMENT SET anvendt sammen med AIA-PACK B12-analysen indeholder kaliumcyanid og natriumhydroxid. Undgå kontakt med øjne, hud eller beklædning. Vask hænderne grundigt efter håndtering. 8. For at opnå en sikker bortskaffelse af affald anbefales det, at alle laboratorier overholder etablerede laboratorieprocedurer og lokale, regionale og statslige regler. Spørg en lokal ekspert om, hvordan materialet i forbehandlingssættet skal kasseres. 9. Efter åbning skal flasken med prøvefortyndingsopløsningen opbevares tæt forseglet med en ren gummihætte. Forsegling med beskidt materiale kan medføre en forringelse af reagensen. 10. Den resterende prøvefortyndingsopløsning må efter anvendelse ikke blandes med en anden flaske, men skal kasseres for at undgå kontaminering. 11. Kontaminering med serum, støv, metal eller mikroorganismer kan medføre en forringelse af den rekonstituerede substratopløsning. Opbevares i rene omgivelser og holdes væk fra direkte sollys og ultraviolet lys. 12. TOSOH anbefaler, at der anvendes en ny pose testkopper ved kalibrering. OPBEVARING OG STABILITET Alle uåbnede materialer forbliver stabile indtil den udløbsdato, der er anført på etiketten, hvis de opbevares ved den angivne temperatur. Materialer Katalog nr. 2-8 C: AIA-PACK B AIA-PACK B12 CALIBRATOR SET AIA-PACK B12 SAMPLE DILUTING SOLUTION AIA-PACK B12 PRETREATMENT SET AIA-PACK SUBSTRATE SET II AIA-PACK WASH CONCENTRATE AIA-PACK DILUENT CONCENTRATE C: AIA-PACK DETECTOR STANDARDIZATION TEST CUP AIA-PACK SAMPLE TREATMENT CUP Efter åbning af aluminiumsposen kan AIA-PACK B12-testkopperne efterlades på TOSOH AIA-systemets analysatorer (18-25 C) i maksimalt 10 dage (10 x 24 timer). Når testkopperne opbevares natten over ved 2-8 C, kan de anvendes i op til 30 dage (30 cyklusser på 8 timer on-board og 16 timer i køleskabet). Når først aluminiumsposen er åbnet, skal testkopperne anvendes inden for 30 dage. - AIA-PACK B12 CALIBRATOR SET skal opbevares tæt forseglede og nedkølede ved 2-8 C. Efter åbning eller rekonstituering anbefales det, at kalibratorerne anvendes inden for 1 dag Efter åbning kan AIA-PACK B12 SAMPLE DILUTING SOLUTION efterlades på TOSOH AIA-systemanalysatorer (18-25 C) i maksimalt 1 døgn (24 timer). Når prøvefortyndingsopløsningen opbevares natten over ved 2-8 C, kan den anvendes i op til 3 dage (3 cyklusser på 8 timer on-board og 16 timer i køleskabet). Prøvefortyndingsopløsningen bør ikke bruges mere end 90 dage efter åbningen, heller ikke selvom den er forseglet og opbevares i køleskabet. - AIA-PACK B12 PRETREATMENT-2 skal opbevares tæt forseglede og nedkølede ved 2-8 C. Efter åbning anbefales det, at forbehandling-2 anvendes inden for 35 dage. Efter åbning kan AIA-PACK B12 PRETREATMENT-3 efterlades på TOSOH AIA-systemets analysatorer (18-25 C) i maksimalt 1 dag (24 timer). Når forbehandling-3 opbevares natten over ved 2-8 C, kan den anvendes i op til 3 dage (3 cyklusser på 8 timer on-board og 16 timer i køleskabet). Efter rekonstituering med forbehandling-2 kan AIA-PACK B12 PRETREATMENT-1 efterlades på TOSOH AIA-systemets analysatorer (18-25 C) i maksimalt 1 dag (24 timer). - Rekonstitueret substratopløsning forbliver stabil i 3 dage ved C eller 30 dage ved 2-8º C. - Brugsdiluentopløsning og vaskeopløsning forbliver stabile i 30 dage ved 18-25º C. - Reagenser må ikke anvendes, hvis de er uklare eller misfarvede. INDSAMLING OG HÅNDTERING AF PRØVER Der skal bruges serum til analysen. DER MÅ IKKE ANVENDES EDTA, citratplasma eller hepariniseret plasma. Der er ikke behov for særlig forberedelse af patienten. Der tages en venøs blodprøve aseptisk uden additiver. Opbevares ved C, indtil den størkner (normalt minutter) og centrifugeres derefter for at få den serumprøve, der skal anvendes til analysen. Utilstrækkelig centrifugering eller tilstedeværelse af fibrin eller partikelholdigt materiale i prøven kan føre til et fejlagtigt resultat. Prøver, der indeholder inhibitorer for basisk phosphatase, kan forårsage fejlagtige resultater. Undersøg alle prøver for luftbobler og skumdannelse. Fjern alle luftbobler inden analysen. Prøverne kan opbevares ved 2-8º C i indtil 7 dage inden analyse. Hvis analysen ikke kan udføres inden for 7 dage, kan prøven opbevares i frossen tilstand ved 20º C eller derunder i op til 60 dage. Gentagne nedfrysninger/optøninger af prøverne bør undgås. Uklare serumprøver eller prøver, der indeholder partikelformet stof, skal centrifugeres inden testen. Forud for analysen skal de frosne prøver langsomt tøs op til C og blandes forsigtigt. Alle prøver skal forbehandles. De forbehandlede prøver skal analyseres inden for 1 time efter forbehandlingsproceduren. Der skal anvendes et prøvevolumen på 200 µl til forbehandlingen. 100 µl af den forbehandlede prøve bruges til analysen. PROCEDURE Du kan finde flere oplysninger findes i brugermanualen til TOSOH AIA-systemet. I. Forberedelse af reagenser A. Substratopløsning Alle reagenser skal være 18º-25º C, inden substratet forberedes. Tilsættes hele indholdet af AIA-PACK SUBSTRATE RECONSTITUENT II (100 ml) til AIA-PACK SUBSTRATE REAGENT II (frysetørret) og blandes grundigt for at opløse det faste materiale. B. Vaskeopløsning Kom hele indholdet af AIA-PACK WASH CONCENTRATE (100 ml) i ca. 2,0 l vand af CAP Class I eller det kliniske laboratoriereagensvand (tidligere NCCLS Type I), som defineret i retningslinjen CLSI GP40-A4-AMD, bland godt, og afpas den endelige mængde til 2,5 l. 4-12

3 C. Diluentopløsning Kom hele indholdet af AIA-PACK DILUENT CONCENTRATE (100 ml) i ca. 4,0 l vand af CAP Class I eller det kliniske laboratoriereagensvand (tidligere NCCLS Type I), som defineret i retningslinjen CLSI GP40-A4-AMD, bland godt, og afpas den endelige mængde til 5,0 l. D. Forbehandlingsreagens Alle reagenser til forbehandling skal have en temperatur på C. Rekonstituer ved hjælp af en målepipette den frysetørrede AIA-PACK B12 PRETREATMENT-1 præcist til en volumen på 5 ml med AIA-PACK B12 PRETREATMENT-2. Lad det frysetørrede materiale blive helt opløst. AIA-PACK B12 PRETREATMENT-3 leveres klar til brug. II. Forbehandlingsprocedure Alle prøver (humant serum, kontrolmaterialer og kalibratorer) skal forbehandles, inden de analyseres på Tosoh AIA-systemanalysatorerne. På AIA Nex IA / AIA-21, AIA-600 II, AIA-900, AIA-1800 og AIA-2000 udføres forbehandlingen automatisk ved hjælp af de parametre, der er defineret i testfilen. Hvis der ønskes manuel forbehandling følges anvisningerne for den manuelle forbehandlingsprocedure. Forbehandlede prøver skal analyseres inden for 1 time efter forbehandlingsproceduren. III. Kalibreringsprocedure A. Kalibreringskurve Kalibratorerne til brug med AIA-PACK B12 blev sammenlignet med WHO IS 03/178. Den gennemsnitlige genvinding for denne IS 03/178 over analyseintervallet er 104%. Kalibreringskurven for AIA-PACK B12 forbliver stabil i op til 90 dage. Kalibreringsstabiliteten overvåges ved udførelse af kvalitetskontrollen og er afhængig af korrekt behandling af reagensen og Tosoh AIA-systemets vedligeholdelse i henhold til producentens instruktioner. Det kan være nødvendigt at foretage en omkalibrering oftere, hvis prøverne er uden for det fastsatte område for denne analyse, eller hvis der udføres visse serviceprocedurer (som f.eks. temperaturjustering, ændringer af prøvetagningsanordningen, vedligeholdelse af vaskesonden eller justering eller udskiftning af detektorpæren). Hvis partinummeret for AIA-PACK B12 PRETREATMENT SET ændres, skal der udføres omkalibrering. Yderligere oplysninger om betjening af instrumentet findes i manualen til TOSOH AIA-systemet Prøvens kalibreringskurve fra AIA-1800 følger og viser den algoritme, der bruges til at udregne resultaterne. Automatisk forbehandlingsprocedure 1. Bring reagenser og prøver, der skal forbehandles, op på C. 2. Rekonstituer ved hjælp af en målepipette den frysetørrede AIA-PACK B12 PRETREATMENT-1 præcist til en volumen på 5 ml med AIA-PACK B12 PRETREATMENT-2. Lad det frysetørrede materiale blive helt opløst. 3. Placer den rekonstituerede AIA-PACK B12 PRETREATMENT-1 og AIA-PACK B12 PRETREATMENT-3 i de anviste positioner på reagenskassetten som defineret under REAGENT REGISTRATION. 4. Anbring det passende antal prøvekopper/primærrør, AIA-PACK SAMPLE TREATMENT CUPs og AIA-PACK B12-testkopper på instrumentet. Manuel forbehandlingsprocedure 1. Indstil alle forbehandlingsparametrene i testfilen for manuel forbehandling. (For AIA-600 II skal alle forbehandlingsparametrene, SMPL, VOL1, VOL2 og CODE, sættes til nul. For AIA-900 skal PRE. CODE sættes til nul. For AIA Nex IA / AIA-21, AIA-1800 og AIA-2000 skal forbehandlingen sættes til nul). 2. Bring reagenser og prøver, der skal forbehandles, op på C. 3. Rekonstituer ved hjælp af en målepipette den frysetørrede AIA-PACK B12 PRETREATMENT-1 præcist til en volumen på 5 ml med AIA-PACK B12 PRETREATMENT-2. Lad det frysetørrede materiale blive helt opløst. 4. Kom 200 µl af prøven (serum, kontrolmateriale, kalibrator) i et glas eller et polypropylenrør. 5. Tilsæt 100 µl af den rekonstituerede AIA-PACK B12 PRETREATMENT-1 i hvert rør og bland det godt med en vortex-blander. 6. Inkuber de behandlede prøver i 15 minutter ved C. 7. Tilsæt 100 µl AIA-PACK B12 PRETREATMENT-3 til hver behandlet prøve. Bland godt med en vortex-blander. 8. Prøverne skal analyseres inden for 1 time, efter at AIA-PACK B12 PRETREATMENT-3 er blevet tilføjet. B. Kalibreringsprocedure 1. Yderligere oplysninger om proceduren findes i den relevante manual til Tosoh AIA-systemet. 2. Bekræft, at kalibratorens lotnummer og koncentrationer er blevet registreret korrekt i analysatorens software. 3. AIA-PACK B12 CALIBRATOR SET er frysetørret. Alle niveauer skal rekonstitueres med 1,0 ml vand af CAP Class I eller det kliniske laboratoriereagensvand (tidligere NCCLS Type I), som defineret i retningslinjen CLSI GP40-A4-AMD. 4. TOSOH anbefaler, at alle kalibratorer køres i triplikat. 5. Kontroller, at rekonstitueret AIA-PACK B12 PRETREATMENT-1 og AIA-PACK B12 PRETREATMENT-3 er blevet anbragt på reagentkassetten som angivet under REAGENT REGISTRATION. Se yderligere anvisninger om REAGENT REGISTRATION i brugermanualen til Tosoh AIA-systemet. C. Godkendelseskriterier for kalibrering 1. Eftersom der er et omvendt forhold imellem koncentration og rate, skal raten reduceres, efterhånden som koncentrationen øges. 2. Gentagelsesværdierne skal ligge inden for et område på 10 %

4 D. Gennemgang og godkendelse af kalibrering 1. Kalibreringskurven gennemgås omhyggeligt ved hjælp af ovenstående kriterier. 2. Rediger kalibreringen, om nødvendigt, og godkend derefter kalibreringen. Yderligere oplysninger om kalibrering findes i manualen til Tosoh AIA-systemet IV. Procedure for kvalitetskontrol A. Kontrolmaterialer på markedet Der skal benyttes almindeligt tilgængelige kontrolmaterialer mindst én gang om dagen. Det anbefales, at der anvendes mindst to niveauer af kontroller, normal og anormal. Laboratoriepolitikken for denne specielle analyse foreskriver følgende: Kontrolmateriale: Hyppighed: Kontrolmaterialets lotnummer, acceptable grænser og de korrigerende tiltag, der skal udføres, hvis kontrolmaterialerne ikke opfylder laboratoriets kriterier, findes i et separat dokument om kvalitetskontrol, der udarbejdes af laboratoriet. B. Procedure for kvalitetskontrol 1. Analyser prøverne til kvalitetskontrol som anvist i den relevante manual til din analysator. Endvidere findes yderligere oplysninger om definition og redigering af filerne i manualen til Tosoh AIA-systemet. 2. Det enkelte laboratorium definerer, hvilket kontrolmateriale der skal køres med denne analyse. V. Behandling af prøverne A. Forberedelse Anbring prøverne korrekt på instrumentet i overensstemmelse med anvisningerne i manualen til analysatoren. Stregkodede primærrør samt testkopper kan køres på AIA Nex IA/AIA-21, AIA-600 II, AIA-900, AIA-1800 og AIA B. Analyseprocedure 1. Sørg for, at der er tilstrækkeligt med AIA-PACK B12-testkopper til det antal prøver, der skal køres. 2. Sæt patientprøverne i som anvist i manualen, og fortsæt med analysen. Bemærk: AIA Nex IA/AIA-21, AIA-600 II, AIA-900, AIA-1800 og AIA-2000 kræver AIA-PACK SAMPLE TREATMENT CUP. BEMÆRKNINGER OM PROCEDUREN 1. Frysetørret substrat skal være helt opløst. 2. Ligandanalyser udført af TOSOH AIA-systemanalysatorer kræver, at vand til laboratoriebrug udpeges af CAP som Class I eller af CLSI som det kliniske laboratoriereagensvand. Vand skal testes mindst én gang om måneden og skal være fri for partikelholdigt materiale herunder bakterier. Vandets ph-værdi skal desuden testes regelmæssigt. Yderligere oplysninger findes i CLSI-dokumentet GP40-A4-AMD, Preparation and Testing of Reagent Water in the Clinical Laboratory; Approved Guideline-Fourth Edition. 3. Hvis koncentrationen af vitamin B12 i en serumprøve er større end den øvre grænse for analyseområdet, pg/ml, skal prøven fortyndes med AIA-PACK B12 SAMPLE DILUTING SOLUTION og analyseres igen i overensstemmelse med analyseproceduren. Den anbefalede fortynding af prøver, der indeholder en større koncentration end pg/ml, er 1:10. Det anbefales at fortynde prøver således, at den fortyndede prøve viser mellem 250 og pg/ml. Fortyndingsfaktoren skal indtastes i softwaren. Oplysninger om fortynding af prøver findes i manualen til Tosoh AIA-systemet. 4. TOSOH AIA-systemanalysatorerne kan lagre to forskellige kalibreringskurver for hver analysand på samme tid. Derfor kan der anvendes op til to forskellige partier AIA-PACK B12-testkopper under samme kørsel. 5. Hvis analysespecifikationerne for denne test ikke er klar på systemsoftwaren, skal specifikationerne indtastes under testkode 018. BEREGNING AF RESULTATERNE Tosoh AIA-systemanalysatorerne udfører al håndtering af prøver og reagenser automatisk. Tosoh AIA-systemanalysatorerne læser den fluorescensrate, der fremkommer ved reaktionen, og konverterer automatisk raten til koncentration af vitamin B12 i pg/ml. For prøver, der kræver fortynding, vil AIA Nex IA/AIA-21, AIA-600 II, AIA-900, AIA-1800 og AIA-2000 automatisk udføre fortyndinger og udregne resultaterne, hvis fortyndingsfaktorerne angives i softwaren. Se yderligere oplysninger om betjening af instrumentet i den relevante brugermanual til TOSOH AIA-systemet. EVALUERING AF RESULTATERNE Kvalitetskontrol For at overvåge og evaluere præcisionen for den analytiske ydelse anbefales det, at almindeligt tilgængelige kontrolprøver analyseres i overensstemmelse med lokale bestemmelser. Minimumsanbefalingerne for hyppigheden af kørsel af internt kontrolmateriale er: Efter kalibrering køres tre niveauer af den interne kontrol for at godkende kalibreringskurven. De tre niveauer kontrol gentages, hvis prøverne er uden for det vedtagne område for denne analyse, eller hvis der udføres visse serviceprocedurer (f.eks. temperaturjustering, ændringer af prøvetagningsanordningen, vedligeholdelse af vaskesonden eller justering eller udskiftning af detektorpæren). Efter den daglige vedligeholdelse skal der køres mindst to niveauer af kontrollen for at kontrollere TOSOH AIA-systemanalysatorernes samlede virkning. Hvis en eller flere af kontrolprøvernes værdi(er) overstiger det acceptable område, vil det være nødvendigt at undersøge kalibreringskurvens validitet, inden der indberettes patientresultater. Standardlaboratorieprocedurer skal følges som foreskrevet af det kontrolorgan, der har opsynet med laboratoriet. BEGRÆNSNINGER Til diagnostiske formål skal de resultater, der opnås ved denne analyse, anvendes sammen med andre data (f.eks. symptomer, resultater af andre prøver, klinisk vurdering, terapi etc.). Ved brug af AIA-PACK B12 er den højeste koncentration af vitamin B12, der kan måles i prøver uden fortynding, pg/ml, og den lavest målelige koncentration i prøver er 50 pg/ml (analysefølsomhed). Skønt den omtrentlige værdi for den højeste kalibrator er pg/ml, kan den nøjagtige koncentration afvige lidt. Analysespecifikationen ASSAY RANGE HIGH skal defineres som den øvre grænse for analyseområdet, pg/ml. Skønt hæmolyse har en ubetydelig indflydelse på analysen, kan hæmolyserede prøver være tegn på forkert behandling af prøven forud for analysen, og resultaterne bør fortolkes med forsigtighed. Lipæmia har en ubetydelig indflydelse på analysen undtagen i tilfælde af svær lipæmia, hvor der kan forekomme spatial interferens

5 Prøver fra patienter, der tager medicin og/eller er i medicinsk behandling, kan give vildledende resultater. Prøver fra patienter, der har fået en injektion med fluorescein, der anvendes i fluorescein fundus angiografi, kan vise falske forhøjede resultater. Hvis der er en stærk klinisk mistanke om subakut kombineret degeneration af strengen eller perniciøs anæmi, skal der foretages anti-intrinsiske faktorantistoftest og gentaget vitamin B12-analyse på et alternativt system (7). Prøver fra patienter, der har modtaget præparater med musemonoklonale antistoffer til diagnosticering eller terapi, kan indeholde humane antimuseantistoffer (HAMA). Sådanne prøver kan vise falske forhøjede værdier, når de testes for B12. Prøver fra patienter, der er i behandling med Asfotase Alfa (genetisk rekombination), kan vise falske forhøjede/reducerede resultater. For at få en fuld forståelse af denne procedures begrænsninger henvises der til afsnittene om INDSAMLING OG HÅNDTERING, ADVARSLER OG FORHOLDSREGLER, OPBEVARING OG STABILITET og BEMÆRKNINGER OM PROCEDUREN på denne indlægsseddel. FORVENTEDE VÆRDIER Hvert laboratorium skal fastsætte et referenceinterval, der er afpasset efter karakteristikaene i den gruppe, der skal undersøges. Som ved alle diagnosticeringsprocedurer skal de kliniske resultater fortolkes under hensyntagen til den ledsagende medicinske behandling, patienten modtager (8). I. Referenceområder Det interval, der er angivet her, blev fastlagt i serumprøver fra ca. 106 tilsyneladende raske personer i Europa. Referenceområde = pg/ml ( pmol/l) II. Konverteringsfaktorer Vitamin B12-koncentrationerne i denne applikation er udtrykt i enheden pg/ml. De opnåede værdier i pg/ml skal ganges med 0,738 ved konvertering til værdier i pmol/l. VIRKNINGSKARAKTERISTIKKER NØJAGTIGHED a. Regeneration: Tre serumprøver blev tilsat tre forskellige niveauer af vitamin B12 og analyseret før og efter tilsætningen. Prøve Indledende B12 Forventet Målt Procent Værdi tilsat værdi værdi Regeneration (pg/ml) (pg/ml) (pg/ml) (pg/ml) (%) Serum A , , ,0 Serum B , , ,1 Serum C , , , b. Fortynding: Tre serumprøver indeholdende høje koncentrationer af vitamin B12 blev seriemæssigt fortyndet med AIA-PACK B12 SAMPLE DILUTING SOLUTION og analyseret. Prøve Fortyndings- Forventet Målt Procent Faktor værdi værdi Regeneration (pg/ml) (pg/ml) (%) Serum A ingen 657 7,5/ ,3 5,0/ ,2 2,5/ ,5 Serum B ingen 955 7,5/ ,1 5,0/ ,9 2,5/ ,3 Serum C ingen ,5/ ,5 5,0/ ,6 2,5/ ,6 PRÆCISION a. Nøjagtigheden inden for kørslen blev bestemt ved hjælp af tre kontroller ved i alt 20 kørsler. Inden for hver kørsel blev der analyseret et sæt duplikater for hver kontrol. Gennemsnittet af hvert duplikat blev brugt til at opnå den samlede afvigelse fra standarden (SD), som derpå blev anvendt til udregning af varianskoefficienten (CV). Prøve Middelværdi Samlet SD CV (pg/ml) (pg/ml) (%) Serum A ,3 2,5 Serum B ,1 2,3 Serum C ,4 1,4 b. Den samlede præcision blev fastlagt ved en duplikatanalyse af tre kontroller ved 20 separate kørsler. Gennemsnittet af hver kørsel blev brugt til udregning af den samlede standardafvigelse (SD) og varianskoefficienten (CV). Prøve Middelværdi Samlet SD CV (pg/ml) (pg/ml) (%) Serum A ,1 4,9 Serum B ,0 3,5 Serum C ,1 3,3 KORRELATION Korrelationen mellem AIA-PACK B12 og en anden almindeligt tilgængelig analyse for vitamin B12 blev udført ved hjælp af 73 patientprøver. Hældningstal 0,953 y-skæringspunkt 81,4 Korrelationskoefficient 0,

6 Antal prøver 73 SPECIFICITET Følgende stoffer blev testet for krydsreaktivitet. Krydsreaktiviteten (%) er den procentdel af blandingen, der vil blive identificeret som vitamin B12. Hvis disse blandinger findes i prøven i samme koncentrationer som vitamin B12, vil det endelige resultat blive øget med disse procentdele. Blanding Koncentration Krydsreaktivitet (%) Cobinamid 200 ng/ml < 1.0 SENSITIVITET Den mindste sporbare koncentration (MDC) af vitamin B12 skønnes at være 50 pg/ml. MDC defineres som den koncentration af vitamin B12, som svarer til den fluorescensrate, der er to standardafvigelser fra den gennemsnitlige fluorescensrate på 5 gentagne påvisninger af AIA-PACK B12 CALIBRATOR (1). TOSOH EUROPE N.V. Transportstraat 4 B-3980 TESSENDERLO, BELGIEN Tlf.: +32 (0) Fax: +32 (0) TOSOH BIOSCIENCE, INC Shoreline Court, Suite 101 South San Francisco, CA 94080, USA Telefon: Nettovolumen (efter rekonstituering for frysetørret materiale) INTERFERENS Interferens defineres i denne undersøge som regeneration uden for 10 % af prøvens kendte koncentration, efter at de følgende stoffer er tilsat humane prøver. Hæmoglobin (op til 440 mg/dl), konjugeret bilirubin (op til 18 mg/dl) og frit bilirubin (op til 16 mg/dl) interfererer ikke med analysen. Lipæmia, som indiceret af tilsat triglycerid (op til mg/dl), interfererer ikke med analysen. Protein, som indiceret af tilsat albumin (op til 0,25 g/dl), interfererer ikke med analysen. Askorbinsyre (op til 20 mg/dl) interfererer ikke med analysen. HENVISNINGER 1) Burtis, C. A. and Ashwood, E. R., eds., Tietz Textbook of Clinical Chemistry 2nd Ed, W. B. Saunders, p (1994). 2) Grasbeck, R., Biochemistry and Clinical Chemistry of Vitamin B12 Transport and the Related Diseases, Clin. Biochem. 17:2, p (1984). 3) Scott, J. and Weir, D., Folate/vitamin B12 inter-relationships. Essays Biochem, 28, p (1994). 4) Thompson, W. G., et al, Evaluation of Current Criteria Used to Measure Vitamin B12 levels. Am. J. Med. 82:2, p (1987). 5) Davidsohn, I. and Henry, J. B., eds., Todd-Sanford, Clinical Diagnosis By Laboratory Methods 15th Edition, W. B. Saunders, p (1974). 6) Goodman, K. I., and Salt, W. B. II, Vitamin B12 Deficiency. Important New Concepts in Recognition. Postgrad. Med., 88:3, pp , (1990). 7) Hamilton, M. S., Blackmore, S. and Lee, A., Possible cause of false normal B-12 assays. BMJ, 333, p (2006). 8) Young, D., Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests. 3rd Edition, Washington, DC, American Association for Clinical Chemistry Press (1990). TOSOH CORPORATION 3-8-2, Shiba, Minato-ku TOKYO (JAPAN) Tlf.: +81 (0) Fax: +81 (0)