BILAG 1: Standardkontrol i Human angiogenesis/growth Factor Magnetic Bead Panel 1
|
|
- Ida Kjærgaard
- 8 år siden
- Visninger:
Transkript
1 BILAG 1: Standardkontrol i Human angiogenesis/growth Factor Magnetic Bead Panel 1 I kittet indgår én standardkontrol (standard 7), som fortyndes i 7 koncentrationer. Nedenstående figur, viser koncentrationen for hver vækstfaktorer ved standard 1-7.
2 BILAG 2: Protokol for MyStromalCellTrial Formål: Isolation og opformering af mesenkymale stromale celler fra fedtvæv i en sådan kvalitet, at cellerne kan gives tilbage til patienten. Gyldighedsområde: Isolering og opformering af celler fra fedtvæv med henblik på tilbageførsel i patient efter differentiering af cellerne i retning af endothel. Isolering og opformering finder sted i Klinisk Immunologisk afdelings vævscenter, afsnit 2033.Er der tale om en placebopatient opformeres celler i afsnit 9302 efter laboratorieprotokol: Placeboceller; Isolering og dyrkning af fedtvævsderiverede stromale celler. Generelt: Det har vist sig, at der i fedtvæv findes stamceller (fedtvævsderiverede stromale celler, ADSC), der tilsyneladende er identiske med mesenkymale stromale celler (MSC) fra knoglemarv. Udbyttet af stamceller fra fedtvæv er op til 500 gange større end udbyttet fra knoglemarv. Fedtvæv kan fås i relativt store mængder vha. en fedtsugning udført af en plastik-kirurg. De fedtvævsderiverede stromale celler synes at kunne stimuleres til at differentiere i de samme retninger som MSCer fra knoglemarv. I lokalanæstesi aspireres 150 ml fedtvæv fra abdomen med 4-6 stk. 60 ml sprøjter. Dette finder sted på afsnit 3004 på Rigshospitalet og foregår efter afdelingens procedurebeskrivelse. Fedtvævsaspiratet overføres til en kolbe. Der dannes 2 faser: en væskefase og en fedtvævsfase. De to faser tilsammen kaldes for fedtvævsapirat. Volumen af det totale fedtvævsaspirat samt fedtvævsfasen noteres på gældende version af bilag, dokumentnr Patientidentifikation. Samtidig dokumenterer lægen og sygeplejersken, der har forestået udtagningen af fedtvævsaspiratet, overensstemmelse mellem patientens navn og CPR-nr. og navn og CPR-nr. på etiketten, som er påklistret kolben. Derudover anføres der både dato og klokkeslæt for udtagningen. Personalet på Kardiologisk Stamcellelaboratorium (5-9640) modtager kolben med fedt aspirat sammen med det udfyldte bilag, dokumentnr Patientidentifikation. Fedtvævet består af modne adipocytter og en mononukleær cellefraktion, som kan isoleres fra fedtvæv vha. collagenasebaseret enzymatisk nedbrydning og differentialcentrifugering. Den mononukleære cellefraktion isoleres fra de umodne og modne adipocytter gennem et filtreringstrin. Collagenasen er calciumafhængig, og skal derfor opløses i en buffer indeholdende 2 mm Ca2+. Collagenasen nedbryder bindevævet, hvorved stamcellerne frigives fra vævet. Da collagenasen først er aktiv ved 37 C, foregår collagenasebehandlingen ved 37 C. For at opnå den bedste nedbrydning af vævet, kræves en enzymatisk aktivitet på 0,3 PZ-U/ml. Dvs. arbejdsopløsningen, som fortyndes 1+1, skal have en aktivitet på 0,6 PZ-U/ml. Den molekylærbiologiske forskning har påvist, at der eksisterer adskillige familier af angiogenetiske faktorer, der har betydning for dannelsen af nye blodkar. Her har specielt vascular endothelial growth factor (VEGF) vist sig at være meget vigtig for differentiering af stamceller i retning af endothel. Derfor stimuleres ADSC en uge med VEGF, før cellerne gives tilbage til patienten. Samtidig med udtagelse af fedtvæv udtages blodprøver til smittescreening. Blodprøverne sendes til Blodbanken 2034, Rigshospitalet til undersøgelse for HBV, HCV, HIV og syfilis. På tilbagegivelsesdagen tages fra patienten 2 blodprøver; henholdsvis et Heparin / EDTA glas ( grønt / lilla ) og et serumglas ( rødt ). Blodprøver hentes af personalet fra Kardiologisk stamcellelaboratorium på Kardiologisk Laboratorium 2012 rum 3, hvorefter det grønne/lilla glas afleveres i Vævscenteret, Blodbanken 2033, hvor det bruges til fremstilling af en eventuel placebosprøjte. Det røde glas afleveres på afsnit 9302, hvor det behandles efter protokol Håndtering af rød blodprøve til cytokinanalyser.
3 Materialer: DMEM Low glucose 1 g/l med glutamin og 25 mm HEPES (PAA, Cat.No E15-808) Penicillin-streptomycin (1000 units/ml peniclllin G sodium, g/ml streptomycin sulfate) (GIBCO, Cat. No ) Føtal Bovin Serum, Pharma Grade Gamma Irradiated AUS Origin (PAA, Cat.No A15-512) Collagenase NB 6 GMP Grade (cat. no , SERVA electrophoresis GmbH, Heidelberg, Germany) o Fortyndes til arbejdsopløsning 0,6 PZ U/ml, med HBSS. Phosphate-buffered saline uden magnesium og kalcium (PBS) (Gibco, ) Serres sugesystem 50 ml Falcon-rør Celleskraber (TPP, vwr, cat. No ) miniinkubator (Labnet, In Vitro) 100.m filter (Steriflip, cat. no SCNY00100, Millipore) Nucleocounter NC-100 (Chemometec, Allerød Denmark) PBS (Gibco ca. no ) T 75 kulturflasker CO 2 inkubator Tryple Select (Gibco, cat. no ) Fremstilling af standarddyrkningsmedie (DMEM, 10 % FBS og 1 % pen-strep): 500 ml DMEM Low glucose 1 g/l med glutamin og 25 mm HEPES (PAA, Cat.No E15-808) tilsættes 5 ml penicillin-streptomycin (1000 units/ml peniclllin G sodium, g/ml streptomycin sulfate) (GIBCO, Cat. No ) og 50 ml Føtal Bovin Serum, Pharma Grade Gamma Irradiated AUS Origin (PAA, Cat.No A15-512). Fremstilling af stimuleringsmedie (DMEM, 1% Pen-strep, 2% FBS og 50 ng/ml rhvegf): l DMEM med 1 % pen-strep tilsættes 2 ml FBS Pharma Grade Gamma Irradiated AUS Origin (PAA cat.no. A15-512) og 50 µl 100 µg/ml rhvegf i PBS + 0,1 % HA. Fremstilles inden brug. Evt. rest kasseres. Isolering og dyrkning af mononucleære celler fra fedtvæv: Fremgangsmåde: 1. Overensstemmelse mellem navn og CPR-nr. på den modtagne fedtaspirat og navn og CPR nr. på medfølgende patientidentifikations bilag kontrolleres og dokumenteres. 2. Fedtvævsaspirat danner to faser: væskefase og fedtvævsfase. Volumen af det totale fedtvævsaspirat og fedtvævsfasen alene noteres. 3. Tilsæt PBS ca. 1+1 til plastikkolben og ryst kolben grundigt. Vent et par minutter indtil fedtvævet adskiller sig fra væsken, og flyder ovenpå. Sug væsken fra med glas pasteurpipette forbundet til Serres sugesystem. 4. Fedtvævet vaskes med PBS 2-4 gange indtil fedtvævet ikke er blodtilblandet 5. Fedtvævet overføres til 50 ml Falcon-rør og centrifugeres i 5 min ved 300 g, stuetemperatur (21 ºC), acc. 9, bremse Efter centrifugering vil fedtvævet flyde ovenpå væskefasen. Med en celleskraber overføres 25 ml fedtvæv til et passende antal 50 ml Falcon-rør. 7. Beregn og fremstil collagenasearbejdsopløsning. Tilsæt collagenasearbejdsopløsningen til fedtvævet 1+1 (25 ml fedtvæv + 25 ml collagenasearbejdsopløsning). 8. Inkubér ved 37 C i ca. 45 min i miniinkubator under rotering 9. Del det enzymatisk nedbrudte væv i 50 ml Falcon-rør (25 ml per rør). Neutraliser collagenasen ved at tilsætte dyrkningsmedie 1+1 (25 ml nedbrudt væv + 25 ml dyrkningsmedie). 10. Filtrér gennem et 100.m filter. 11. Centrifugér i 10 min ved 1200 g og stuetemperatur (21 ºC), acc. 9, bremse Hæld supernatanten fra (fedtcellerne fjernes herved, idet disse flyder ovenpå det vandige medie).
4 13. Resuspendér pellet i 5 ml dyrkningsmedie per rør og saml cellerne i et 50 ml Falcon-rør. Skyl herefter rørene med passende antal ml dyrkningsmedie, så der er 50 ml i alt. 14. Centrifugér i 10 min ved 1200 g, stue temperatur (21 ºC), acc. 9, bremse Hæld supernatanten fra og resuspender cellepellet i et kendt volumen dyrkningsmedie. 16. Udfør celletælling på Nucleocounter (se bilag) 17. De mononuklære celler udsås i en tæthed på 4,5 x 10 6 celler i 15 ml dyrkningsmedie pr. T75 dyrkningsflaske og inkuberes ved 37 C og 5% CO Efter 3-4 dage suges alt medie fra, for at fjerne ikke-adhærende celler. Cellerne vaskes med ml PBS. PBS suges fra (serres sugesystem) og hver T 75 flaske tilsættes ml dyrkningsmedie. 19. Mediet skiftes hver 3-4 dag, indtil cellerne har opnået en konfluens på 80%. 1. Passage Fremgangsmåde: 1. Når cellekolonierne er blevet 80 % konfluente, vaskes cellerne a. Sug flaskerne tomme for medie (Serres sugesystem). b. Tilsæt 10 ml PBS pr. T75 flaske. c. Flaskerne vippes et par gange d. Sug flaskerne tomme for PBS 2. Cellerne høstes ved inkubation i 5 10 min ved 37 ºC med 3 ml Tryple Select pr. T 75 flaske. 3. Når cellerne har løsnet sig (vurderes ved mikroskopi), tilsættes 7 ml dyrkningsmedie for at neutralisere/inaktivere Tryple Select. 4. Med en 10 ml stangpipette overføres cellerne til 50 ml centrifugerør. 5. Rørene centrifugeres 5 min, ved 300g, stuetemp, acc.9, bremse Supernatanten hældes fra og opsamles i 50 ml centrifugerør eller T75 flasker. 7. Cellerne resuspenderes i et kendt volumen (afhænger af pellets størrelse) dyrkningsmedie. 8. Celletælling: Cellerne tælles på Nucleocounter (se protokol for Nucleocounter). 9. Antallet af levende celler anvendes til beregning. Der udsås 1, ADSC i pr. T 25 dyrkningsflasker med 15 ml medium i hver. 10. Mediet skiftes efterfølgende hver 3-4 dag, til cellerne har opnået en konfluens på 80%. 2. Passage Fremgangsmåde: 1. Når cellekolonierne er blevet 80% konfluente, vaskes cellerne a. Sug flaskerne tomme for medie (Serres sugesystem). b. Tilsæt 150 ml PBS per T1000 flaske (90ml per T600 flaske). Til T75 flaskerne tilsættes 10 ml PBS. c. Flaskerne vippes et par gange d. Sug flaskerne tomme for PBS 2. Cellerne høstes ved inkubation i 5 10 min ved 37 oc med 50 ml Tryple Select per T1000 (30 ml per T600 flaske). De 4 T75 flasker tilsættes 3 ml hver. 3. Når cellerne har løsnet sig (vurderet ved mikroskopi), tilsættes 100ml dyrkningsmedie per T1000 (60ml per T600 flaske) og 7 ml per T75 flaske for at neutralisere/ inaktivere Tryple Select. 4. Med en stangpipette overføres cellerne til 50 ml centrifugerør. 5. Rørene centrifugeres 5 min, ved 300g, stuetemp, acc.9, bremse Supernatanten hældes fra og opsamles i 50 ml centrifugerør eller T75 flasker. Husk at afspritte mundingen på rørene med en spritserviet, inden supernantanten hældes fra. 7. Cellerne resuspenderes i et kendt volumen (afhænger af pellets størrelse) dyrkningsmedium. 8. Celletælling: Cellerne tælles på Nucleocounte 9. Der udsås 3,5 105 ADSC i 4 T75 dyrkningsflasker med 15 ml medium i hver. Resten af cellerne sås ud i T1000/T600 flasker (en eventuel rest sættes i supplerende T75 flasker). Der sås ud med en tæthed på 4,7 106 celler og 250 ml medium per T1000 flaske (2,8 106 celler og 150 ml medium per T600 flaske). Husk at stille T1000/T600 flasker på højkant inden de lægges ned i inkubatoren, så mediet fordeles jævnt på alle lag. Derefter placeres de i inkubatoren med mundingen indad. Initialer og dato for passering af celler samt fremstilling af medie anføres på Bilag Mediet skiftes efterfølgende hver 3-4 dag. Initialer og dato for medieskift samt fremstilling af medie
5 anføres på bilag Hvis der er mindre end 5 stk. T1000 flasker (8 stk. T600) fortsættes til passage 3. I passage 3 påbegyndes VEGF stimulering ved 80% konfluens uagtet antal. 12. Når cellerne i de 4 stk T75 flasker er 80% konfluente startes stimuleringen med VEGF. Der udtages samtidig prøver til undersøgelse for bakterier, svampe og mykoplasma DNA som beskrevet i afsnittet Udtagning af prøver til undersøgelse for bakterier, svampe og mykoplasma DNA. De stimuleres i en uge, hvorefter cellerne høstes som beskrevet i afsnittet afsnittet Høst af celler. Stimulering med VEGF Fremgangsmåde: 1. Når cellerne i de 4 T75 flasker er 80% konfluente påbegyndes 1 uges stimulering med VEGF. 2. Fra én af de 4 T75 flasker høstes supernatant over i et 50ml centrifugerør. Røret mærkes supernatant, patient nr. samt hvor mange ml der er taget fra til dyrkning og T75 flasken mærkes supernatant. Røret sættes til side og håndteres efterfølgende som beskrevet for supernatanter i protokol Celletælling, høst af supernatant og flowcytometri. 3. De resterende flasker suges helt tomme for dyrkningsmedie (Serres sugesystem). 4. Hver T1000 flaske tilsættes 200 ml stimuleringsmedie (T600 tilsættes 120 ml). T75 flaskerne tilsættes 15ml stimuleringsmedie. Initialer og dato for medieskift samt oplysninger om mediefremstilling anføres på bilag Efter 2-3 dage skiftes stimuleringsmediet i T1000 flasker ved at fjerne 175ml konditioneret stimuleringsmedie (fra T600 fjernes 100ml) (Serres sugesystem) og derefter tilsætte 175 ml/100 ml frisk-fremstillet stimuleringsmedie. T75 flaskerne skiftes med 14 ml stimuleringsmedie. Initialer og dato for medieskift samt fremstilling af medie anføres på bilag Efter yderligere 2 3 dage skiftes stimuleringsmediet i T1000 flasker ved at fjerne 175ml konditioneret stimuleringsmedie (fra T600 fjernes 100ml) (Serres sugesystem) og derefter tilsætte 175 ml/100 ml frisk-fremstillet stimuleringsmedie. T75 flaskerne skiftes med 14 ml stimuleringsmedie. Initialer og dato for medieskift samt fremstilling af medie anføres på bilag 4 7. Når cellerne er stimuleret i en uge høstes de som beskrevet i afsnit Høst af celler.
6 BILAG 3: Protokol for nedfrysning af mesenkymale stromale celler Materialer: Serres sugesystem PBS (Gibco ) Tryple Select (Gibco ca. no ) DMEM Low glucose 1 g/l med glutamin og 25 mm HEPES (PAA, Cat.No E15-808) Penicillin-streptomycin (1000 units/ml peniclllin G sodium, g/ml streptomycin sulfate) (GIBCO, Cat. No ) Føtal Bovin Serum, Pharma Grade Gamma Irradiated AUS Origin (PAA, Cat.No A15-512) Fremstilling af standarddyrkningsmedie (DMEM, 10 % FBS og 1 % pen-strep): 500 ml DMEM tilsættes 50 ml FBS og 5 ml pen-strep Frysemedie (FBS, 5 % DMSO): Der fremstilles 1 ml frysemedie pr. 1 x 106 celler, svarende til 950 µl FBS og 50 µl DMSO. Eksempel: Der skal fryses 5 x 106 celler. Der fremstilles til et cryorør mere end der skal bruges, altså 6 ml frysemedie: 5,7 ml FBS tilsættes 300 µl DMSO Høst og nedfrysning af MSC: 1. Når MSC er klar til nedfrysning (~ 80 % konfluente) vaskes cellerne: a. Sug flaskerne tomme for medie (Serres sugesystem). b. Tilsæt 10 ml PBS pr. T 75 flaske. c. Flaskerne vippes et par gange. d. Sug flaskerne tomme for PBS. 2. Cellerne høstes ved inkubation i 5-10 min. ved 37 C med 3 ml Tryple pr. T75 flaske. 3. Når cellerne har løsnet sig (vurderes ved mikroskopi) tilsættes 7 ml standarddyrkningsmedie med en 10 ml stangpipette for at neutralisere/inaktivere den enzymatiske reaktion (Tryple). 4. Skyl bunden af T75 flasken, og overfør cellerne til et 10 ml centrifugerør (1 rør pr. flaske). 5. Rørerne centrifugeres 5 min. Ved 300 g, acc. 9, bremse 5 (program 1). 6. Supernatanten hældes fra og opsamles i 50 ml centrifugerør eller T75 flaske. 7. Cellerne resuspenderes i et kendt volumen (afhængig af pellets størrelse) dyrkningsmedie. 8. Cellerne tælles på NucleoCounter. Antallet af levende celler anvendes til beregning af hvor mange cryorør cellerne skal nedfryses i. Der skal være ca. 1 x 10 6 MSC p.r rør i 1 ml frysemedie. 9. En passende mængde frysemedie fremstilles svarende til antallet af cryorør plus et ekstra 10. Cellerne centrifugeres igen i 5 min. Ved 300 g, acc. 9, bremse 5 (program 1). Imens mærkes 1,8 ml cryorør med donor, passage, antal celler, dato samt initialer. 11. Supernatanten hældes fra og opsamles i 50 ml centrifugerør eller T75 flaske. 12. Cellepellet resuspenderes i den beregnede mængde frysemedie og fordeles i mærkede cryorør med 1 ml i hver. Herefter henstår cellerne ved stuetemperatur i 10 (maksimalt 15 min). 13. Cryorørerne anbringes derpå i en nedfrysningsboks med isopropanol ( Mr. Frosty ), som placeres i -80 C fryser i et døgn. 14. Efter minimum 24 timer ved -80 C, overflyttes cryorørene til beholder med flydende nitrogen. 15. Det noteres i mappen Oversigt over celler i N2, hvor cellerne er placeret.
7 BILAG 4: Protokol for optøning og udsåning af mesenkymale stromale celler Materialer: DMEM, Low Glucose (1g/l) w/ L-Glutamine w/ 25 Mm HEPES (PAA, cat. no. E15-808) FBS: Fetal Bovin Serum, Pharma Grade (PAA, cat. no. A15-512) Pen-strep: Penicillin ( U/ml) Streptomycin ( µg/ml) (Gibco, cat. no ) T 75 kulturflasker CO 2 inkubator Serror sugesystem Fremstilling af standarddyrkningsmedie (DMEM, 10 % FBS og 1 % pen-strep): 500 ml DMEM tilsættes 50 ml FBS og 5 ml pen-strep Metode: 1. Tilsæt 15 ml dyrkningsmedie til et passende antal T75 flasker, afhængig af hvor mange celler der skal optøs. 2. Anbring T75 flaskerne i CO2-inkubatoren for at opvarme dyrkningsmediet til 37 C. 3. I mappen Oversigt over celler i N2 lokaliseres de celler, som ønskes optøet. Husk at strege de cryorør, som fjernes fra beholderen ud i loggen. 4. Iført blå termohandsker og beskyttelsesskærm, tages låget af beholderen med flydende nitrogen. 5. Løft det relevante rack ind til midten af beholderen og derefter op. Lad nitrogenen løbe fra æskerne inden racket løftes helt op og stilles på gulvet. 6. Tag de relevante prøver ud af æsken og opbevar dem i blå fryseboks med låg, indtil optønings-proceduren påbegyndes. Rack sættes tilbage i beholderen med flydende nitrogen, og låget lægges på. 7. Cellerne optøs ved at holde cryorøret neddyppet i 37 C varmt vand (vandbad) indtil ca. 95 % af cellerne er optøet. Der må max. optøs 7-10 ampuller ad gangen. 8. Cellerne overføres til T 75 flasken med 15 ml 37 C varmt standarddyrkningsmedie, ved først at tilsætte ca. 500 µl medie til cellerne, bland forsigtigt, og overfør derefter cellesuspensionen til flasken. 9. Skyl cryorøret en enkelt gang med medie for at få alle cellerne med. 10. Placer T 75 flasken med de optøede celler i CO2-inkubatoren natten over. 11. Dagen efter optøning, afsuges (Serres sugesystem) alt mediet for at fjerne DMSO fra frysemediet og hver T 75 flaske tilsættes ml frisk standarddyrkningsmedie. 12. Mediet skiftes efterfølgende hver 3-4 dag ved at fjerne ml dyrkningsmedie og derefter tilsættes ml frisk dyrkningsmedie.
8 BILAG 5: Protokol for anvendelse af NucleoCounter-100 fra Chemometec Materialer: Nucleocounter NC-100 (Chemometec, Allerød Denmark) NucleoCassette ( ) Reagens A, Lyseringsbuffer ( ) Reagens B, Stabiliseringsbuffer ( ) Celletælling: 1. Den totale volumen af cellesuspension noteres (V). 2. Udtag ca. 100 µl celler fra cellesuspensionen og kom det i eppendorfrøret. Non-viabel cellekoncentration: a) Udtag en prøve af cellesuspension ved at stikke spidsen af NucleoCassetten helt ned i bunden af eppendorfrøret. b) Tryk stemplet på NucleoCassetten i bund, hvorved prøven suges op i kassetten. c) Indsæt kassetten i NC-100. d) Tryk på RUN. e) Koncentrationen af non-viable celler vil vise sig i displayet og angives i antal celler/ml. f) Værdien noteres ned (Cnv). g) Eventuel fortyndingsfaktor (F) noteres ligeledes ned. Total cellekoncentration: a) Mix 100 µl cellesuspension med 100 µl Reagens A. b) Cellerne blandes godt med pipette ved at resuspendere min. 5 gange for at sikre at alle celler lyseres. c) Tilsæt 100 µl Reagens B. d) Cellerne blandes godt med pipette ved at resuspendere min. 5 gange. e) Udtag en prøve af den lyserede cellesuspension ved at stikke spidsen af NucleoCassetten helt ned i bunden af eppendorfrøret. f) Tryk stemplet på NucleoCassetten i bund, hvorved prøven suges op i kassetten. g) Indsæt kassetten i NC-100. h) Tryk på RUN. i) Koncentrationen af de totale celler vil vise sig i displayet og angives i antal celler/ml. j) Værdien noteres ned (Ct). k) Fortyndingsfaktoren noteres ligeledes ned (F) Fortyndingsfaktoren vil altid være min. 3 pga. fortynding med lyserings- og stabiliseringsbuffer. Beregning: V: volumen Ct: total cellekoncentration Cnv: koncentration af non-viable celler F: fortyndingsfaktor Total antal celler = Antal døde celler = Ct F V Cnv F V Antal levende celler = ((Ct 3) Cnv) F V) ~ total antal celler antal døde celler Viabilitet % = Antal levende celler / Total antal celler 100
9 BILAG 6: Nedfrysning af supernatant Mailkorrespondance med Nili Naftali, PhD stud. Supernatant i dette projekt, nedfryses på tilsvarende måde, som beskrevet i nedenstående mail.
10 BILAG 7: Protokol for fremstilling og opsætning af 96 mikrotiterplade til Luminex 200 TM Ved Millipore MILLIPLEX Human Angiogenesis / Growth Factor Magnetic Bead Panel 1 Fremstilling af reagenser Alle medier og reagenser skal have stuetemperatur (20-25 o C) når proceduren påbegyndes. Antibody-Immobilized Beads Ved anvendelse af individuelle beads, vortex hvert rør indeholdende antistof-beads i 1 minut før brug. 1. Tilsæt 150 µl af hvert antistof-bead i flasken markeret Mixing Bottle. 2. Tilsæt Assay Buffer til et totalvolumen af 3,0 ml. 3. Vortex blandingen grundigt. Kvalitetskontroller 1. Tilsæt 250 µl deioniseret vand til kvalitetskontrol 1 og kvalitetskontrol Bland indholdet ved at vende hver reagensflaske adskillige gange og vortex til blandingen er opløst. 3. Lad reagensflaskerne stå i 5-10 minutter og overfør dernæst kontrollerne til to eppendorf rør, mærket med hhv. kvalitetskontrol 1 og 2, samt dags dato. Vaskebuffer 1. Ryst flasken med 10X Wash Buffer, for at opløse indholdet af salt. 2. Fortynd 60 ml 10X Wash Buffer (to flasker) med 540 ml deioniseret vand i en passende beholder. Serum Matrix Dette trin er kun nødvendigt ved analyse af serum eller plasma prøver. 1. Tilsæt 1,0 ml deioniseret vand til flasken indeholdende Serum Matrix og bland grundigt. Lad blandingen stå i 10 minutter. 2. Tilsæt dernæst 2,0 ml Assay Buffer til flasken med Serum Matrix og bland grundigt. Holdbarhed: 1 måned ved -20 o C. Human Angiogenesis/Growth Factor Panel 1 Standard Tilsæt 250 µl deioniseret vand til flasken med Human Angiogenesis/Growth Factor Panel 1 Standard. Vend flasken for at blande indholdet og vortex i 10 sekunder. Lad blandingen stå i 5-10 minutter og overfør dernæst blandingen til et eppendorf rør mærket med standard 7. Mærk 6 eppendorf rør med standard 1, standard 2, standard 3, standard 4, standard 5 og standard 6. Tilsæt 200 µl Assay buffer til hvert eppendorf rør. Overfør 100 µl fra standard 7 til standard 6 og resuspender. Overfør 100 µl fra standard 6 til standard 5 og resuspender. Fortsæt proceduren rækken ud (se figur, næste side). Mærk et eppendorf rør med standard baggrund og tilsæt Assay Buffer. Holdbarhed: Standard 7 kan opbevares 1 måned ved -20 o C.
11 Opsætning af 96 brøndplade Alle medier og reagenser skal have stuetemperatur (20-25 o C) når proceduren påbegyndes. Antibody-Immobilized Beads er lys sensitive og skal beskyttes mod lys. Alle reagenser skal opbevares i eppendorf rør (ikke glas!!) Design plade opsætning, hvor i der skal indgå dobbeltbestemmelse af standarder, kontroller samt prøver. Hvis pladen ikke bliver analyseret umiddelbart efter opdrypning af reagenser, kan pladen opbevares i op til 24 timer ved 2-8 o C. Pladen skal tildækkes med plast og folie. Før analyse af pladen, blandes reagenserne ved at anbringe pladen på en plate shaker i 10 minutter. Vær opmærksom på at den senere analyse, kan føre til nedsat sensitivitet af cytokiner og vækstfaktorer. Plate shakeren skal indstilles til rpm, for at sikre maksimum opblanding af reagenserne. Udførsel 1. Tilsæt 200 µl Assay Buffer til hver brønd i pladen. Tildæk pladen med plast og placer den på en plate shaker i 10 minutter ved stuetemperatur. 2. Fjern Assay Buffer fra brøndene ved at vende pladen over et absorberende papir. Bank forsigtigt pladen mod underlaget for at fjerne rester af Assay Buffer. 3. Tilsæt 25 µl af baggrunds- og standard prøverne, samt kontrollerne i hver sin brønd. Assay Buffer anvendes som baggrundsprøve (0 pg/ml standard). 4. Tilsæt 25 µl Assay Buffer til de brønde, hvori prøverne skal tilsættes. 5. Tilsæt 25 µl Matrix Solution til brøndene med baggrundsprøve, standarder og kontroller. Ved analyse af serum eller plasma anvendes Serum Matrix, som medfølger i kittet. Ved analyse af vævskulturer eller supernatant anvendes dyrkningsmedie i stedet for Serum Matrix. 6. Tilsæt 25 µl prøvemateriale til de respektive brønde. Ved analyse af serum eller plasma, fortyndes prøven med Assay Buffer i koncentrationen 1:2. 7. Vortex Mixing Bottle og tilsæt 25 µl til alle brønde. 8. Tildæk pladen med plast og anbring den på en plate shaker. For at beskytte antistof beads mod lys tildækkes pladen yderligere med folie. Inkuber pladen natten over (16-20 timer) ved 2-8 o C. 9. Vask pladen 3 gange ved at følge instruktionen Vask af 96 brøndplade. Se nedenstående. 10. Tilsæt 25 µl Detection Antibodies til alle brønde. 11. Tildæk pladen med plast og anbring den på en plate shaker. Tildæk yderligere med folie og inkuber i 1 time ved stuetemperatur. 12. FJERN IKKE indholdet i brøndene. Tilsæt 25 µl Streptavidin-Phycoerythin til alle brønde. 13. Tildæk pladen med plast og anbring den på en plate shaker. Tildæk yderligere med folie og inkuber i 30 minutter ved stuetemperatur. 14. Vask pladen 3 gange ved at følge instruktionen Vask af 96 brøndplade. Se på næste side. 15. Tilsæt 100 µl Sheat Fluid til alle brønde. Anbring pladen på en plate shaker i 5 minutter. 16. Kør pladen på Luminex 200. Følg protokol Luminex 200 TM.
12 Vask af 96 brøndplade Anbring pladen på en håndholdt magnet og låst pladen fast ved at skubbe metalhæfterne ind mod hinanden. Lad pladen sidde i 60 sekunder, for at de magnetiske beads kan nå at sætte sig. Vend herefter pladen over et absorberende papir for at fjerne indholdet. Tag pladen af magneten og tilsæt 200 µl Wash Buffer i alle brønde. Herefter anbringes pladen på plate shaker i 30 sekunder. Sæt pladen tilbage på den håndholdte magnet og lad den sidde i 60 sekunder. Vend pladen igen over et absorberende papir for at fjerne indholdet og gentag vaske proceduren. 96 brøndplade plan QC-1 Etc Control. A 0 pg/ml Standard 4 Standard (Background) B 0 pg/ml Standard 4 Standard (Background) C Standard 1 Standard 5 QC-1 Control QC-2 Control D E F G H Standard 1 Standard 5 Standard 2 Standard 6 Standard 2 Standard 6 Standard 3 Standard 7 Standard 3 Standard 7 QC-2 Control Sample 1 Sample 1 Sample 2 Sample 2
13 BILAG 8: Software manual til xponent Luminex 200 TM Opstart af Luminex Tjek om der er tilstrækkelig Sheat Fluid og stram kapselen på flasken. 2. Tjek om flasken med Waste Fluid skal tømmes inden opstart. 3. Opstart Luminex apparatet ved at tænde for to knapper bag på selve apparatet, og én knap bag på den tilhørende primer station. 4. Tænd for computeren og åben programmet Luminex xponent. For at logge ind, tryk blot Log In uden at skrive noget i User ID feltet. Laseren på Luminex apparatet skal varme op inden brug. Det sker automatisk ved opstart af apparatet og tager ca. 20 minutter. Kalibrering og daglig vedligeholdelse 1. På startsiden (Home) vælges System initialization. 2. Under reagenser, vælg lot nr på det anvendte calibration kit og performance verification kit. En oversigt over maintenancepladen viser i hvilke brønde de anvendte reagenser skal afdryppes i. 3. Vortex reagenserne i 30 sekunder og dryp 5 dråber af hver reagens i de anviste brønde på maintenancepladen. 4. Tilsæt ethanol og destilliseret vand i de anviste brønde på maintenancepladen. 5. Klik på Eject på skærmen og sæt maintenancepladen på pladeholderen, klik på Retract. 6. Klik på Run En dialog boks vil fortælle når kørslen er Completet. Ved en eventuel fejlmelding, start med at prime apparaturet ved at klikke på Maintence i topfanen. Under Commands klik på ikonet Prime. Klik på RUN. Når kørslen er færdig, kør en ny maintenanceplade ved at gentage punkt 1-6. Husk at vortex reagenserne i 30 sekunder. Analyse af mikrotiterplade 1. På startsiden (Home) markeres den protokol, du vil anvende i din analyse. 2. Klik herefter på Click to create a new batch using the highlighted protocol below. 3. Skriv dags dato (dd/mm/åååå) efterfulgt af dine initialer under Batch name og klik herefter Next. 4. Klik på Apply Std/Ctrl Kit og vælg STD protokollen tilsvarende den protokol du anvender i din analyse. 5. Klik Next. 6. Aftegn din pladeopsætning på skærmen. Dette gøres ved at markere de ønskede brønde og dernæst vælge brøndenes indhold ved at klikke på nedenstående ikoner. Da man ikke kan vælge Control i pladeopsætningen markeres kvalitets kontrol 1 og 2 som Unknown. Husk at slette den forgående pladeopsætning hvis denne fremgår anderledes. 7. Klik på Eject, sæt mikrotiterpladen på pladeholderen og klik Retract. 8. Klik Run Batch for at starte analysen. Nedlukning af Luminex På startsiden (Home) vælges Shutdown. 2. Tilsæt deioniseret vand og 10 % klor i de anviste brønde på maintenancepladen. 3. Klik på Eject, sæt maintenancepladen på pladeholderen og klik Retract. 4. Klik Run. 5. Efter programmet er færdig, fjernes pladen fra pladeholderen. 6. Klik Log ud, efterfulgt af Exit. 7. Luk ned for computeren samt sluk for apperatet og vaske station. Importering Protokollerne vil enten medfølge i det pågældende analysekit eller på producentens hjemmeside. Kopier protokollerne over på et USB stik, for at overfører den til Luminex xponent.
14 Importering af protokol 1. Åben Protocols i topfanen og vælg Protocols i venste sidefane. 2. Klik på Import. 3. Find den ønskede fil og klik Open. 4. Den importerede protokol vil nu ligge i listen over installerede protokoller. Valg af cytokiner i en protokol 1. Åben Protocols i topfanen og vælg Protocols i venstre sidefane. 2. Markerer den protokol der skal redigeres og klik på Edit. 3. I Version feltet, nummeres den nye version. 4. Klik på Next. 5. Vælg hvilke cytokiner/vækstfaktorer, der skal indgå i analysen. 6. Klik på Next. 7. Under Plate Layout opsættes en standard pladeopsætning. I pladeopsætningen skal baggrundsprøve, standardkontroller, kvalitetskontroller og prøver indgå. 8. Klik Save. Importering af STD protokol 1. Åben Protocols i topfanen og vælg Stds & Ctrls i venstre sidefane. 2. Klik på Import. 3. Find den ønskede fil og klik Open. 4. Den importerede protokol vil nu ligge i listen over installerede protokoller. Tilføj Stds/Ctrl til protokollen 1. Åben Protocols i topfanen og vælg Stds & Ctrl i venstre sidefane. 2. Marker den protokol, som du ønsker at tilføje et Stds/Ctrl lot til. 3. Klik på Create New Std/Ctrl Lots og vælg en protokol fra listen, klik dernæst OK. 4. Klik på Apply Std/Ctrl Kit, marker den ønskede protokol og klik OK. 5. Klik Save. Tilføj CAl eller VER kit (Bead lot information) Det er nødvendig at tilføje informationer om xmap kalibrations og verifikations bead lot, før systemet kan kalibreres. Disse informationer findes på den medfølgende cd i kittet. 1. På startsiden (Home) vælges System initialization. 2. Klik Import Kit. 3. Find informationsfilen til xmap kalibrations eller verifikations kit og klik Open. 4. Den importerede protokol vil nu ligge i listen over installerede kits og lots. Importer CAL eller VER kit 1. Åben Maintenance i topfanen og vælg Lot Management i venstre sidefane. 2. Klik på Import kit. 3. Find det ønskede kit og klik på Open. 4. Kittet vil nu findes i listen over installeret. Resultat Overførsel af resultater til excel ark 1. Åben Results i topfanen og vælg Saved Batches i venstre sidefane. 2. Markerer den ønskede analyse kørsel og klik på Exp Results. 3. Vælg hvor resultaterne skal gemmes.
15 BILAG 9: Data brugt til fastlæggelse af standardkurver Resultater fra præstudie af standardkurver for VEGF-A. Oversigt over resultaterne af VEGF-A, anvendt til at fastlægge standardkurver for henholdsvis DMEM tilsat 2 % FCS, DMEM tilsat 10 % FCS samt DMEM uden FCS. Alle enheder er i pg/ml. Standarder DMEM + 2 % FCS Std 1 13,50 Forventet DMEM +10 % FCS DMEM koncentration af standarder Std er ikke blevet målt 14,91 13,70 Std 2 39,24 39,58 35,84 41,20 Std 3 125,74 124,76 132,99 123,50 Std 4 377,23 392,31 359,68 370,40 Std , , , ,10 Std , , , ,30 Std , , , ,00
16 Alle enheder er i pg/ml BILAG 10: Kvalitetskontrol 1 og 2 (Q1 og Q2) Q1: Kvalitetskontrol Lav ANG-2 G-CSF FGF-1 HGF FGF-2 VEGF-A QC1 258,69 415,78 377,91 692,37 388,12 440,73 QC1 252,45 297,27 304,53 717,72 339,56 331,04 QC1 246,79 288,28 279,50 567,45 308,73 256,10 QC1 390,19 267,70 376,27 697,30 321,35 301,25 QC1 337,70 375,98 402,00 883,96 435,32 495,72 QC1 254,61 474,80 571, ,06 485,28 458,09 QC1 207,13 429,06 511,12 758,19 365,71 411,88 Acceptinterval Extra Pladen Q2: Kvalitetskontrol - Høj ANG-2 G-CSF FGF-1 HGF FGF-2 VEGF-A QC2 1538, , , , , ,36 QC2 1257, , , , , ,10 QC2 1053, , , , , ,34 QC2 1370, , , , , ,03 QC2 2112, , , , , ,79 QC2 1789, , , , , ,78 QC2 936, , , , , ,29 Acceptinterval Extra Pladen Ekstrapladen: Inkluderer 48 og 72 timer efter serum seponering af medie, samt analysering af 10% FCS uden celler.
In vitro studie af fedtvævsderiverende mesenkymale stromale cellers parakrine aktivitet.
In vitro studie af fedtvævsderiverende mesenkymale stromale cellers parakrine aktivitet. Bacheloropgave Udarbejdet af Tina Toppevad Skov 141087 Professionshøjskole Metropol Bioanalytikeruddannelsen Projektperiode:
Læs mereDette er en kladde til et genoptryk af Eksperimentel Genteknologi fra 1991. Ideer, rettelser og forslag modtages gerne. Kh Claudia.
Transformation af E.coli K 12 Version 3. marts 2009 (C) Claudia Girnth-Diamba og Bjørn Fahnøe Dette er en kladde til et genoptryk af Eksperimentel Genteknologi fra 1991. Ideer, rettelser og forslag modtages
Læs mereTissue_LC_200_V7_DSP og Tissue_HC_200_V7_DSP
August 2015 QIAsymphony SPprotokolark Tissue_LC_200_V7_DSP og Tissue_HC_200_V7_DSP Dette dokument er Tissue_LC_200_V7_DSP og Tissue_HC_200_V7_DSP QIAsymphony SPprotokolark, R2, til kitversion 1. QIAsymphony
Læs mereScanGel ReverScan A1, B 86790 2 x 5 ml ReverScan A1, A2, B, O 86795 4 x 5 ml
ScanGel ReverScan A1, B 86790 2 x 5 ml ReverScan A1, A2, B, O 86795 4 x 5 ml HUMANE TESTERYTHROCYTER TIL ABO-SERUMKONTROL IVD Alle de af Bio-Rad producerede og markedsførte produkter gennemgår fra modtagelse
Læs mereFind enzymer til miljøvenligt vaskepulver
Find enzymer til miljøvenligt vaskepulver Enzymer, der er aktive under kolde forhold, har adskillige bioteknologiske anvendelsesmuligheder. Nye smarte og bæredygtige produkter kan nemlig blive udviklet
Læs mereØvelse med tarmkræftceller i kultur.
Øvelse med tarmkræftceller i kultur. Baggrund Hver 3. dansker bliver ramt af kræft, inden de er blevet 75 år. Tyktarmskræft er den 3. hyppigste kræftform hos både mænd og kvinder, hvor henholdsvis 7.3
Læs mereFORSØG ØL verdens første svar på anvendt
FORSØG ØL verdens første svar på anvendt bioteknologi Biotech Academy BioCentrum-DTU Søltofts Plads DTU - Bygning 221 2800 Kgs. Lyngby www.biotechacademy.dk bioteket@biocentrum.dtu.dk INDHOLDSFORTEGNELSE
Læs mereScanGel Monoclonal ABO/RH1/K 86495 48 kort 86485 288 kort
ScanGel Monoclonal ABO/RH1/K 86495 48 kort 86485 288 kort GELER INDEHOLDENDE MONOKLONALE REAGENSER AF MURIN ELLER HUMAN OPRINDELSE ABO1, ABO2, RH1, KEL1 Ag BESTEMMELSE IVD Alle de af Bio-Rad producerede
Læs mereKonkurrence mellem to bakteriearter
1 Biologi-forsøg: Populationsbiologi/evolution Konkurrence mellem to bakteriearter Forsøget undersøger, hvordan en ydre miljøfaktor (temperatur) påvirker konkurrencen mellem to forskellige arter. I dette
Læs mereKemiøvelse 3 C3.1. Na-ISE. Øvelsens pædagogiske rammer
Kemiøvelse 3 C3.1 Na-ISE Øvelsens pædagogiske rammer Sammenhæng Denne øvelse er tilpasset kemiundervisningen på modul 7 ved bioanalytikeruddannelsen. Kemiundervisningen i dette modul indeholder blandt
Læs mereUndersøgelse af forskellige probiotiske stammer
Undersøgelse af forskellige probiotiske stammer Formål Formålet med denne øvelse er: 1. At undersøge om varer med probiotika indeholder et tilstrækkeligt antal probiotiske bakterier, dvs. om antallet svarer
Læs mereSOP for håndtering af blod og knoglemarv ved hæmatologisk sygdom Regionernes Bio- og GenomBank
SOP for håndtering af blod og knoglemarv ved hæmatologisk sygdom Regionernes Bio- og GenomBank Baggrund Denne Standard Operating Procedure (SOP) omhandler indsamling af perifert blod (PB) og knoglemarvsaspirat
Læs mereVejledning til Photofiltre nr. 117 Side 1
Side 1 I denne vejledning skal vi bruge 7 billeder som skal sættes ned i størrelse. Bagefter sættes de sammen 3 i den ene rækker og 4 i den anden. Til sidst sættes de 2 rækker sammen så det er som en collage.
Læs mereDatacard SR200 & SR300 Card Printers. Brugermanual
Datacard SR200 & SR300 Card Printers Brugermanual Januar 2015 Brug af printeren SR200 & SR300 Forbrugsstoffer Ilægning af kort Isætning af farvebånd Isætning af retransfer film Tænde for printeren Kontrol
Læs mereKvalitetssikring af stamceller på Rigshospitalet
Kvalitetssikring af stamceller på Rigshospitalet Annette Ekblond, cand.scient ph.d (humanbiolog) Laboratorieleder Kardiologisk Stamcellelaboratorium Kardiologisk Stamcellecenter Hjertecenteret Rigshospitalet
Læs mereProduktion af biodiesel fra rapsolie ved en enzymatisk reaktion
Produktion af biodiesel fra rapsolie ved en enzymatisk reaktion produceres fra rapsolie som består af 95% triglycerider (TG), samt diglycerider (DG), monoglycerider (MG) og frie fedtsyrer (FA). Under reaktionen
Læs mereRegnskovens hemmeligheder
Center for Undervisningsmidler, afdeling København Regnskovens hemmeligheder Øvelsesvejledning Formål Et gen for et kræfthelbredende protein er blevet fundet i nogle mystiske blade i regnskoven. Forskere
Læs mereBiotechnology Explorer
Biotechnology Explorer Oprensning af genomisk DNA fra plantemateriale Manual Katalog nr. 166-5005EDU explorer.bio-rad.com Oversat og bearbejdet af Birgit Sandermann Justesen, Nærum Gymnasium, februar 2009
Læs mereAppendix 1: Udregning af mængde cellesuspention til udsåning. Faktor mellem total antal celler og antal celler der ønskes udsås:
Appendix Appendix 1: Udregning af mængde cellesuspention til udsåning Fortyndingsfaktor: Efter trypsinering og centrifugering af celler fra cellestokken, opblandes cellerne i 1 ml medie. For at lave en
Læs mereSpm. 1.: Hvis den totale koncentration af monomer betegnes med CT hvad er så sammenhængen mellem CT, [D] og [M]?
DNA-smeltetemperaturbestemmelse KemiF2-2008 DNA-smeltetemperaturbestemmelse Introduktion Oligonucleotider er ofte benyttet til at holde nanopartikler sammen med hinanden. Den ene enkeltstreng er kovalent
Læs mereKvantitativ bestemmelse af glukose
Kvantitativ bestemmelse af glukose Baggrund: Det viser sig at en del af de sukkerarter, vi indtager med vores mad, er, hvad man i fagsproget kalder reducerende sukkerarter. Disse vil i en stærk basisk
Læs mereBestemmelse af koffein i cola
Bestemmelse af koffein i cola 1,3,7-trimethylxanthine Koffein i læskedrikke Læs følgende links, hvor der blandt andet står nogle informationer om koffein og regler for hvor meget koffein, der må være i
Læs mereOversigtsvejledning til
Oversigtsvejledning til MATCH IT! antistofsoftware Til anvendelse med IMMUCOR LIFECODES antistofanalyser Til in vitro-diagnostisk brug 1 LC1456DA.1 (09/15) Denne manual er fremstillet til anvendelse med
Læs mereAnvendelse af Enzymer i Fødevarer
SRP-øvelse ved Det Natur- og Biovidenskabelige Fakultet, Københavns Universitet Anvendelse af Enzymer i Fødevarer Øvelsesvejledning 2013 Henriette Erichsen, Anni Bygvrå Hougaard, Karsten Olsen og Jeanette
Læs mereAnalyse af benzoxazinoider i brød
Analyse af benzoxazinoider i brød Øvelsesvejledning til kemi-delen af øvelsen. Af Stine Krogh Steffensen, Institut for Agroøkologi, AU Eleven har forberedt før øvelsen: 1. Eleven har udfyldt skemaet herunder
Læs mereBiogas. Biogasforsøg. Page 1/12
Biogas by Page 1/12 Indholdsfortegnelse Indledning... 3 Hvad er biogas?... 3 Biogas er en form for vedvarende energi... 3 Forsøg med biogas:... 7 Materialer... 8 Forsøget trin for trin... 10 Spørgsmål:...
Læs mereBrugermanual til Assignment Hand In
Brugermanual til Assignment Hand In Indhold: Undervisere:... 2 Hvor finder jeg Assignment hand in?... 2 Opret en opgave... 3 Slet en opgave... 4 Rediger en opgave... 4 Hvor finder jeg de afleverede filer?...
Læs mereDansk version. Introduktion. Windows Vista og XP-installation. LW056V2 Sweex Wireless LAN Cardbus Adapter 54 Mbps
LW056V2 Sweex Wireless LAN Cardbus Adapter 54 Mbps Introduktion Udsæt ikke Sweex Wireless LAN Cardbus Adapter 54 Mbps for ekstreme temperaturer. Anbring ikke enheden i direkte sollys eller tæt ved varmekilder.
Læs mereMycXtra Fungal DNA ekstraktionssæt
Til in-vitro-diagnostisk brug: MycXtra Tilsigtet anvendelse MycXtra Fungal DNA ekstraktionssæt REF 080-005 MycXtra Fungal DNA ekstraktionssættet er beregnet til isolering rensning af fungal DNA tilstedeværende
Læs mereSundhedsstyrelsen anbefaler, at børn bliver ammet eller får modermælkserstatning, indtil de er 1 år. Fra børnene er 1 år, må de få letmælk.
September 2015. Sundhedsstyrelsen anbefaler, at børn bliver ammet eller får modermælkserstatning, indtil de er 1 år. Fra børnene er 1 år, må de få letmælk. Modermælkserstatning fremstilling og opbevaring:
Læs mereNewtons afkølingslov
Newtons afkølingslov miniprojekt i emnet differentialligninger Teoretisk del Vi skal studere, hvordan temperaturen i en kop kaffe aftager med tiden. Lad T ( t ) betegne temperaturen i kaffen til tiden
Læs mereHvis du altid vil starte med fuldskærm, klik på start.htm i stedet for index.htm
BETJENINGSVEJLEDNING Når du er på start siden (index.htm), vælg altid fuld skærm. Herved får du bedre plads til at se på tegningerne. Du kan også klikke på F11 på tastaturet. Hvis du altid vil starte med
Læs mereTitel: OPLØSELIGHEDEN AF KOBBER(II)SULFAT. Litteratur: Klasse: Dato: Ark 1 af. Helge Mygind, Kemi 2000 A-niveau 1, s. 290-292 8/9-2008/OV
Fag: KEMI Journal nr. Titel: OPLØSELIGHEDEN AF KOBBER(II)SULFAT Navn: Litteratur: Klasse: Dato: Ark 1 af Helge Mygind, Kemi 2000 A-niveau 1, s. 290-292 8/9-2008/OV Formålet er at bestemme opløseligheden
Læs mereStofskiftets afhængighed af temperatur og aktivitet hos vekselvarme dyr
Stofskiftets afhængighed af temperatur og aktivitet hos vekselvarme dyr Besøget retter sig primært til elever med biologi på B eller A niveau Program for besøget Hvis besøget foretages af en hel klasse,
Læs mereDansk Kvikguide Version 1.0HCT
Version 1.0HCT HaemoMedtec ApS Granlyvej 4 6920 Videbæk Tlf. 53 50 15 16 Fax 31 73 29 21 info@haemomedtec.dk www.haemomedtec.dk HSC, marts 2014 Indhold Tænd Lactate Scout+ Side 5 Sluk Lactate Scout+ Side
Læs mereVejledning til Blackboards portfolio værktøj
Vejledning til Blackboards portfolio værktøj Brug denne vejledning, når du skal udarbejde din undervisningsportfolio i Blackboards portfolio værktøj. Ved at følge alle trinene nedenfor får du udarbejdet
Læs mereAlle emner er illustreret med tegninger og korte tekster, som du kan redigere ud fra forholdene på din bedrift.
SOP-Kalve SOP-Kalve beskriver pasningen af kalve lige fra kælvning. Blandt emnerne er Mælk fra råmælksbanken Opvarmning og tildeling af råmælk Overgang til fast føde via sødmælk og fastfoder Sygdomstegn
Læs mereVelkommen til ABC Analyzer! Grundkursusmanual 2 vil introducere dig til ABC Analyzers mere avancerede funktioner, bl.a.:
Velkommen til ABC Analyzer! Grundkursusmanual 2 vil introducere dig til ABC Analyzers mere avancerede funktioner, bl.a.: Kategoriseringer uden ABC-kategorier Krydstabel (trebenede) Beregnede og avancerede
Læs mereSOP #1, HÅNDTERING AF BLOD
Introduktion Følgende standard operating procedure (SOP) beskriver arbejdsgangen i forbindelse med indsamling og håndteringen af blod til opbevaring i (DRB). Blod tappes fra reumatologiske patienter én
Læs mereLectio. Overgang til Lectio Eksamensmodul. MaCom A/S Vesterbrogade 48, 1. 1620 København V Telefon: 33 79 79 00
Lectio Overgang til Lectio Eksamensmodul 1992-2008 MaCom A/S MaCom A/S Vesterbrogade 48, 1. 1620 København V Telefon: 33 79 79 00 Telefax: 33 79 79 84 E-mail: mail@macom.dk Internet: www.macom.dk Forord
Læs mereLeucosep rør LTK.615 INDLÆGSSEDDEL. Til diagnostisk anvendelse in vitro PI-LT.615-DK-V3
Leucosep rør LTK.615 INDLÆGSSEDDEL Til diagnostisk anvendelse in vitro PI-LT.615-DK-V3 Vejledende information Tilsigtet anvendelse Leucosep rørene er beregnet til anvendelse i forbindelse med indsamling
Læs mereSDU Assignment - undervisere
SDU Assignment - undervisere SDU Assignment giver mulighed for såvel anonym, som ikke anonym opgaveaflevering. Der kan afleveres flere filer på en gang. De studerende får en kvittering for afleveringen
Læs mereVandafstrømning på vejen
Øvelse V Version 1.5 Vandafstrømning på vejen Formål: At bremse vandet der hvor det rammer. Samt at styre hastigheden af vandet, og undersøge hvilke muligheder der er for at forsinke vandet, så mindst
Læs mereGasgrill - Model Midi Brugermanual
1. udgave: 12. marts 2010 2010 Gasgrill - Model Midi Brugermanual Vigtigt: Læs disse instruktioner nøje for at få kendskab til gasgrillen inden brug. Gem denne manual til fremtidig brug. 1 Stykliste Tjek
Læs mereNIMAND A/S SINCE 1987
Control Master MII 700 spiritus & øl kontrol- & doserings system Bruger- & programmerings manual Thistedvej 62 9400 Nørresundby Denmark A/S 233.079 E-mail: Nimand@Nimand.com Aflæsning af spiritus salg
Læs mereRefWorks Workshop Medicinsk Bibliotek Aalborg Universitetshospital. Oprettelse af konto/log in... 2. RefWorks-databasen... 2
RefWorks vejledning Indhold Oprettelse af konto/log in... 2 RefWorks-databasen... 2 Import af referencer... 2 Pubmed... 3 Embase/Psycinfo/Medline (Ovid)... 4 Cinahl... 5 RefGrab-it... 6 Organisering af
Læs mereFYSISKE MÅLINGER PÅ MÆLK
FYSISKE MÅLINGER PÅ MÆLK Fysiske målinger på mælk - Hvordan måler man, om koen er syg? 1 Introduktion til forsøget Yverbetændelse, også kaldet mastitis, er en ofte forekommende produktionssygdom hos malkekøer
Læs mereBrugervejledning til diverse i OS X
Brugervejledning til diverse i OS X Gert Søndergaard 19. august 2003 Indholdsfortegnelse Indholdsfortegnelse...2 Introduktion til Mac OS X...3 Flere brugere på samme maskine...3 Dock - den gamle kvikstart...4
Læs mereSkrivebordet Windows 10
Få adgang til Stifinder, Indstillinger og andre apps, du bruger ofte, i venstre side af menuen Start. Hvis du vil se alle dine apps og programmer, skal du vælge Alle apps. Vises der en pil til højre for
Læs mereIHCTablet Manual. For IHCTablet version 1.0 019D903222_01 2012 Scneider Electric A/S Danmark
IHCTablet Manual For IHCTablet version 1.0 019D903222_01 2012 Scneider Electric A/S Danmark Opsætning af Controller. Administrator og IP opsætning. Åben Administrator via f.eks. Internet Explorer I adresse
Læs mereB ProbeTec ET Chlamydia trachomatis Amplified DNA Assay
B ProbeTec ET Chlamydia trachomatis Amplified DNA Assay TILSIGTET BRUG BD ProbeTec ET Chlamydia trachomatis (CT) amplificeret DNA-analyse anvender, når det testes med BD ProbeTec ET systemet, Strand Displacement
Læs mereForsøgsprotokol til larveforsøg: Tilsætning af 3 dage gamle larver til gødning inficeret med patogene bakterier
Forsøgsprotokol til larveforsøg: Tilsætning af 3 dage gamle larver til gødning inficeret med patogene bakterier Formål: at undersøge udviklingen i mængden af tilsatte patogene bakterier til hønsegødning.
Læs mereIndholdsfortegnelse resultat- & kritikprogrammet.
Indholdsfortegnelse resultat- & kritikprogrammet. Ringsekretærers indtastning af resultater og kritikker... 2 Kom i gang Opstart af programmet... 2 En anden bruger er i gang med ringen... 3 Dommer ændringer
Læs mereManual til overføring af fotografier fra kamera til harddisk.
Manual til overføring af fotografier fra kamera til harddisk. Det første man skal gøre sig klart er, hvor man som udgangspunkt vil lægge sine fotografier. Især når man er mange, der bruger den samme computer,
Læs mereGoogle Chrome side 1 af13
Google Chrome side 1 af13 Indholdsfortegnelse: Download Google Chrome... Side 2 Overblik... Side 3 Angiv startside... Side 7 Søg direkte i adresselinjen... Side 8 Bogmærker sider... Side 8 Bogmærkeadministratoren...
Læs mereTeleKit Brugervejledning
TeleKit Brugervejledning v.3 juni 2015 Du har nu modtaget et TeleKit Ud over det udstyr du kan se på billedet, indeholder Telekittet en brugervejledning. For at logge på Open Tele skal du bruge et brugernavn
Læs mereKom godt i gang med OneDrive
Kom godt i gang med OneDrive Office365 er en mulighed for lærere og elever at bruge en office-pakke på egne enheder - man kan downloade det til brug på pc - mac - tablets og smartphones, i alt op til 5
Læs mereGENERELT PATIENTADMINISTRATION
1.1 Log på - log af 1.2 Vælg Afdeling 1.3 Søgemuligheder 2.1 Patient administration GENERELT PATIENTADMINISTRATION PERSONALEADMINISTRATION 3.1 Opret nyt personalemedlem 3.2 Redigere personaleoplysninger
Læs mereOpdatering af brugermanual til instrumentet RAM195ADA
Opdatering af brugermanual til instrumentet ABX Pentra 60C+, Pentra 80, Pentra XL 80, Pentra 400, ABC Vet OKI B4350 Printer Vær opmærksom på ændringerne, der er beskrevet på de følgende sider. Overstreg
Læs mereFRA KAMERA TIL COMPUTER
FRA KAMERA TIL COMPUTER FRA CANON FS200 TIL LIQUID 6.0 (INDSKOLING) Anders Møller-Nielsen Center for Journalistik Syddansk Universitet Version: 22.04.10 AMN F10 Side 1 Før optagelserne kan redigeres, skal
Læs mereVi går derfor ud fra, at I ved, at DNA molekyler er meget lange molekyler
DNA-profil analyse Indledning DNA-profil analyser eller i daglig tale DNA-fingeraftryk er en metode, der bruges, når man skal finde ud af, hvem der er far et barn, hvis der altså er flere muligheder. Det
Læs mereComputer og print ved skriftlige prøver på Laursens Realskole
Forudsætninger for at anvende it til prøverne: 1. Ved nogle skriftlige prøver er det tilladt at bruge it-udstyr. It-udstyr betyder en computer + en smartphone og/eller en tablet. FLY-funktionen SKAL være
Læs mereBrugermanual. Brugsanvisning til LS kliniksystemet. almindelige sekretæropgaver. Sekretær
Total-Data Tlf.: 48 48 39 07 Elverdalen 21 4700 Næstved www.total-data.dk Brugermanual Sekretær Brugsanvisning til LS kliniksystemet almindelige sekretæropgaver Indholdsfortegnelse Indholdsfortegnelse...2
Læs mere[BESØGSSERVICE INSTITUT FOR MOLEKYLÆRBIOLOGI OG GENETIK, AU]
Enzymkinetik INTRODUKTION Enzymer er biologiske katalysatorer i alle levende organismer som er essentielle for liv. Selektivt og effektivt katalyserer enzymerne kemiske reaktioner som ellers ikke ville
Læs mereSÅDAN GØR DU, NÅR DU KOMMER HJEM
Du skal i gang med at måle CRP på apparatet Quik Read Go. Det er fødeafdelingen, der fortæller dig, hvor ofte du skal foretage CRP-måling og lave de øvrige undersøgelser, som du skal gennemføre på dig
Læs mereKØLESKAB MED ENKELT DØR MODEL NR.:K73
KØLESKAB MED ENKELT DØR MODEL NR.:K73 INDHOLDSFORTEGNELSE Generel beskrivelse ------------------------------------------------------------------------------------------ 1 Transport og håndtering ------------------------------------------------------------------------------------
Læs mereInformation til forældre. Modermælkserstatning. Om flaskeernæring til spædbørn
Information til forældre Modermælkserstatning Om flaskeernæring til spædbørn Kvalitet Døgnet Rundt Gynækologisk/obstetrisk afdeling At give mad på flaske Hvorfor flaske? At skulle give sit barn modermælkserstatning
Læs mereKemiøvelse 2 C2.1. Buffere. Øvelsens pædagogiske rammer
Kemiøvelse 2 C2.1 Buffere Øvelsens pædagogiske rammer Sammenhæng Denne øvelse er tilpasset kemiundervisningen på modul 3 ved bioanalytikeruddannelsen. Kemiundervisningen i dette modul indeholder blandt
Læs mereLaboratorieprotokol for manuel isolering af DNA fra 0,5 ml prøve
Laboratorieprotokol for manuel isolering af DNA fra 0,5 ml prøve Til isolering af genomisk DNA fra indsamlingssætserierne Oragene - og ORAcollect. Du kan finde flere sprog og protokoller på vores webside
Læs mereProduktinformation. Brugervejledning. Blodprøvetagning / aflæsning Opbevaring Sikkerhedshensyn Rengøring af stativer. Vedr.: VT+ESRV og RA+ESRV
Blodprøvetagning / aflæsning Opbevaring Sikkerhedshensyn Rengøring af stativer 1 Blodprøvetagning: Følg trin for trin vejledning på side 3 Ved brug af sommerfugle tages evt. andre rør eller dummy først
Læs mereUdgave 1.0 10 2013. Sprog: Dansk.
Der tages forbehold for produktændringer. Copyright: Welldana Innocare. Udgave 1.0 10 2013. Sprog: Dansk. Tillykke med Deres nye BioBidet. Denne manual skal gennemlæses grundigt og forstået forud for montage
Læs mereIndhold. Hvordan skaffes programmet. 1 af 13. AVG Antivirus
1 af 13 AVG Antivirus Indhold Indhold...1 Hvordan skaffes programmet...1 Sådan bruger du AVG...6 Control Center...6 Check for Updates....7 Test Center...8 Scan Computer...8 Scan Selected Areas...9 Test
Læs mereB ProbeTec ET Chlamydia trachomatis and Neisseria gonorrhoeae Amplified DNA Assays
B ProbeTec ET Chlamydia trachomatis and Neisseria gonorrhoeae Amplified DNA Assays TILSIGTET BRUG 3300754JAA(01) 2013-11 U 0344 Dansk BD ProbeTec ET Chlamydia trachomatis (CT) and Neisseria gonorrhoeae
Læs mereMælkesyrebakterier og holdbarhed
Mælkesyrebakterier og holdbarhed Navn: Forsøgsvejledning Mælkesyrebakterier og holdbarhed Formål med forsøget Formålet med denne øvelse er at undersøge mælkesyrebakteriers og probiotikas evne til at øge
Læs mereTema MitHelbred på din ipad
Tema MitHelbred på din ipad Sofus 18. oktober 2015 Side 1 Vejledning til Besøglægen.dk e-portal Første besøg Første gang du besøger e-portalen, skal du oprettes som bruger. Brugeroprettelsen sker ved at
Læs mereSTAMOPLYSNINGER FOR EKSTERNE
STAMOPLYSNINGER FOR EKSTERNE Denne side udfyldes af en økonomimedarbejder eller en sekretær og distribueres via en kontaktperson på KU. Kontaktperson på KU Sted Institut eller enhed på et fakultet Skriv
Læs mereGiv marv. og stamceller. Red et liv! Aarhus Universitetshospital
Giv marv og stamceller Red et liv! Aarhus Universitetshospital Knoglemarv eller stamceller? Tidligere kunne man kun få stamceller fra knoglemarven og derfor brugte man ordet knoglemarvstransplantation.
Læs mereGenerel procedure for Kejsbryg 20 Liter.
Generel procedure for Kejsbryg 20 Liter. Kejsbryg Setup: Mæskeudstyr: 2 stk. Coleman køle bokse af 5 gallon, monteret med 50 cm silikoneslange og en aftapningsventil på den udvendige side. Indvendig en
Læs mereSAFTPRESSER. Model Nr.: 1925 BETJENINGSVEJLEDNING
SAFTPRESSER Model Nr.: 1925 BETJENINGSVEJLEDNING VIGTIGE SIKKERHEDSANVISNINGER LÆS SIKKERHEDSANVISNINGERNE OMHYGGELIGT, OG GEM DEM TIL FREMTIDIG BRUG 1 Læs denne vejledning omhyggeligt, inden du bruger
Læs mereKom godt igang med Inventar registrering
Kom godt igang med Inventar registrering (InventoryDB) (Med stregkodesupport) programmet fra PetriSoft Introduktion... 1 Inventar registrering... 2 Værktøjsudleje... 3 Service database til reperationer
Læs mereASB E-mailsignatur. ASB E-mailsignatur. Vejledning til opsætning af e-mailsignatur IKT - Februar 2008
ASB E-mailsignatur I det følgende forklares, hvordan du opretter ASBs e-mailsignatur for medarbejdere. Det skal her noteres at e-mail signaturen ikke kan opsættes i webmail (webmail.asb.dk), men skal opsættes
Læs mereVEJLEDNING TIL PRINTUDLÆG
VEJLEDNING TIL PRINTUDLÆG Eksempler på print: Printplader er beregnet til at fastholde komponenter og skabe permanente forbindelser mellem dem. En printplade består af en plade af glasfiber, belagt med
Læs mereWii Software Modificering. Uber Guide
Wii Software Modificering Uber Guide Af Michael Bartholin (og Alice Raunsbæk) http://wii.m-r-a.dk Revision: 2.2 Side 1 af 13 Sidst opdateret: 01/03/2010 Indholdsfortegnelse Indholdsfortegnelse...2 Introduktion...3
Læs mereAtomic force mikroskopi på blodceller
1 Atomic force mikroskopi på blodceller Problemstilling: Problemstillingen eleven bliver sat overfor er: Hvad er atomic force mikroskopi, og hvordan kan det bruges til at studere blodceller på nanometerskala?
Læs mereTalrækker. Aktivitet Emne Klassetrin Side
VisiRegn ideer 3 Talrækker Inge B. Larsen ibl@dpu.dk INFA juli 2001 Indhold: Aktivitet Emne Klassetrin Side Vejledning til Talrækker 2-4 Elevaktiviteter til Talrækker 3.1 Talrækker (1) M-Æ 5-9 3.2 Hanoi-spillet
Læs mereGUIDE TIL OPRETTELSE AF ARTIKLER I JOOMLA - FRONTEND
GUIDE TIL OPRETTELSE AF ARTIKLER I JOOMLA - FRONTEND INDHOLDSFORTEGNELSE Login og ændring af adgangskode 2 Oprettelse/redigering af artikler 3 Indsæt billede i en artikel 7 Sæt et link i en artikel 13
Læs mereBrugsanvisning K2365W. Køleskab
Brugsanvisning K2365W Køleskab General beskrivelse af køleskabet 1. Top-panel 2. Køleskabshylde 3. Grøntsags-skuffe 4. Justerbare fødder 5. Termostatenhed 6. Øvre flaskeholder 7. Mellemste flaskeholder
Læs merePATENT 109646 Int. Cl. A 61 k 3/62 Kl. 30h 6
PATENT 109646 Int. Cl. A 61 k 3/62 Kl. 30h 6 Ansøgning nr. 26 43 /65 Indleveret den 25.ma j 19 65 Fremlagt den 18. d e c emb er 19 6 7 DANMARK DIREKTORATET FOR PATENT-OG VAREMÆRKEVÆSENET KØBENHAVN Patentbeskrivelsen
Læs mereIFC Egenskaber. Mohammad Hussain Parsianfar s102951 BYG DTU
Mohammad Hussain Parsianfar s102951 Indholdsfortegnelse 1 Introduktion... 3 1.1 Hvorfor er det interessant... 3 1.2 Formål... 4 2 Simplebim... 5 2.1 Præsentation af softwaren... 5 2.1.1 Brugergrænseflade...
Læs mereLISA 2 System til faringsovervågning
Indledning Du har netop anskaffet dig et unikt stykke værktøj til brug ved faringsovervågning. LISA 2 systemet er et interaktivt værktøj, som sikrer at medarbejdere i farestalden holder fokus på faringer
Læs mereKompost: Porøsitet Kompost: Vandholdende evne Kompost: Indhold af organisk stof Kompost: Bufferkapacitet
Kompost: Porøsitet Kompost: Vandholdende evne Kompost: Indhold af organisk stof Kompost: Bufferkapacitet af Page 1/20 Indholdsfortegnelse Hvilken indflydelse har kompost på jordens egenskaber?... 3 Indledning:...
Læs mereKortfattet vejledning FB 7100
Kortfattet vejledning FB 7100 10.2009 1 75503300 Beskrivelse af automatens komponenter Dør Display Kabinet Dørlås Koprum Betjeningspanel Kopholder Kandeplatform Friskbrygingrediensbeholder Instant ingrediensbeholder
Læs mereØvelser til større børn
som bedrer bevægelse, styrke, balance og stabilitet i fødderne. KONTAKT OG MERE VIDEN Har du spørgsmål, er du velkommen til at kontakte os. Kontakt Fysio- og Ergoterapi Tlf. 97 66 42 10 SÅDAN GØR DU ØVELSE
Læs mereHåndskanner & Skannerpen Tjekliste
Håndskanner & Skannerpen Tjekliste Skannerpen Gennemgået Øvelse Scan tekster med C Pen 1 Scan tekster med IRISPen 2 Håndskanner Gennemgået Øvelse Klargøring af din skanner 3 Sådan virker din håndskanner
Læs mereXerox. Øvelse med tekst og billeder Nattergalen
Xerox Øvelse med tekst og billeder Nattergalen 1. opsætning af dokument i InDesign: - Klik File > New. I dialogboksen udfyldes indstillingerne som vist herunder. Det er vigtigt, at tage stilling til størrelser
Læs mereVejledning til DigiTeach digitalt mikroskop
Vejledning til DigiTeach digitalt mikroskop 15.06.12 0768.15 AA Mikroskopets opbygning Objektiver Alle objektiverne er produceret i henhold til DINstandard. 40x og 60x objektiverne er med fjedrende front,
Læs mereGrafisk Tekniker Digitalprint. Print af testfiler og plakat
Grafisk Tekniker Digitalprint Print af testfiler og plakat I det følgende beskrives udskydningen (opsætningen) af filer i printerprogrammet Roland Versa Works til print på papir og banner. Her tages udgangspunkt
Læs mereDANSK Brugervejledning Side 4 SUOMI Käyttöohje Sivu 10 NORSK Bruksanvisning Side 16 SVENSKA Bruksanvisning Sidan 22
DANSK Brugervejledning Side 4 SUOMI Käyttöohje Sivu 10 NORSK Bruksanvisning Side 16 SVENSKA Bruksanvisning Sidan 22 3 FØRSTE GANGS BRUG Tilslut skabet til elforsyningen. På modeller med elektronik kan
Læs mereMANUAL AF FILIP WALLBERG & RUNE MICHELSEN
MANUAL AF FILIP WALLBERG & RUNE MICHELSEN NB! Denne manual er også fuldt ud anvendelig til arbejdet på radionyheder.dk og tvnyheder.dk, da disse sites er bygget op i nøjagtig samme system! Indhold Om
Læs mereBrugervejledning for Senge- og dørvagt PIR2003
DENNE BRUGERVEJLEDNING GÆLDER FRA SOFTWARE VERSION 3.X Brugervejledning for Senge- og dørvagt PIR2003 KNOP ELEKTRONIK A/S Fabriksvej 20=7600 Struer=Mail: knop@knop.dk=web: www.knop.dk=tlf.: 9784 0444=Fax.:
Læs mere