ONLINE Benzodiazepines II Ordreinformation 04780248 190 ONLINE Benzodiazepines II (200 tests) System-ID 07 6912 6 03304671 190 Preciset Plus I CAL 1-6 (6 5 ml) 03304680 190 Preciset Plus II CAL 1-6 (6 5 ml) 03304698 190 C.f.a.s. Qualitative Plus (6 5 ml) 04590856 190 C.f.a.s. Qualitative Plus Clinical (3 5 ml) 03312968 190 04500873 190 03312976 190 03312950 190 Control Set II (til 100 -analysen) PreciPos Set II (2 10 ml) PreciNeg Set II (2 10 ml) Control Set Clinical (til 100 -analysen) PreciPos Clinical (2 10 ml) PreciNeg Clinical (2 10 ml) Control Set III (til 200 -analysen) PreciPos Set III (2 10 ml) PreciNeg Set III (2 10 ml) Control Set I (til 300 -analysen) PreciPos Set I (2 10 ml) PreciNeg Set I (2 10 ml) Analyseinstrumenter, hvor cobas c pack kan anvendes COBAS INTEGRA 400 plus COBAS INTEGRA 800 Dansk Systeminformation Test BZ1S2, test ID 0 206 til semikvantitativ analyse, 100 Test BZ2S2, test ID 0 208 til semikvantitativ analyse, 200 Test BZ3S2, test ID 0 210 til semikvantitativ analyse, 300 Test BZ1Q2, test ID 0 207 til kvalitativ analyse, 100 Test BZ2Q2, test ID 0 209 til kvalitativ analyse, 200 Test BZ3Q2, test ID 0 211 til kvalitativ analyse, 300 Test BZQ1C, test ID 0 412 til kvalitativ analyse, 100, ved brug af C.f.a.s. Qualitative Plus Clinical Anvendelse Benzodiazepines II () er en in vitro-diagnostisk test til semikvantitativ og kvalitativ påvisning af benzodiazepiner i human urin ved cutoffkoncentrationer på 100, 200 og 300 ved kalibrering med på COBAS INTEGRA systemer. Semikvantitative analyseresultater gør det muligt for laboratorierne at anvende analysen som en del af et kvalitetskontrolprogram. Semikvantitative analyser er beregnet til bestemmelse af en egnet fortynding af prøver til konfirmation ved hjælp af en konfirmatorisk metode som f.eks. gaskromatografi/massespektrometri (GC/MS) eller væskekromatografi kombineret med tandem massespektrometri (LC/MS/MS). Benzodiazepines II giver kun et foreløbigt analyseresultat. Der skal anvendes en mere specifik alternativ kemisk metode for at få et konfirmeret analyseresultat. GC/MS eller LC/MS/MS er de foretrukne konfirmatoriske metoder. 1,2 Kliniske betragtninger og professionelle vurderinger skal anvendes ved alle analyseresultater for misbrugsstoffer, især når der er tale om foreløbigt positive resultater. Resumé Benzodiazepiner er en gruppe af alsidige og hyppigt ordinerede CNSdepressive lægemidler med anxiolytisk, sedativ, søvndyssende, muskelafslappende og antiepileptisk effekt. 1,2,3,4,5 Benzodiazepinderivaternes absorptionsrater, distribution, metabolisme og udskillelsesrater varierer signifikant. De kvantitative forskelle i effekt, farmakodynamisk spektrum og farmakokinetiske egenskaber har ført til forskelllige terapeutiske applikationer. Kortvarigt virkende benzodiazepiner adskiller sig klinisk fra langvarigt virkende benzodiazepiner med hensyn til effekt, bivirkninger, seponering og afhængighedspotentiale. 3,6,7 Den omfattende og virkningsfulde terapeutiske anvendelse af benzodiazepiner i de seneste årtier har utilsigtet ført til misbrug. Overdoser af benzodiazepin er hyppigt forbundet med samtidig administration af stoffer af andre grupper. 8,9 Akut eller kronisk alkoholindtagelse samtidig med administration af benzodiazepiner kan forårsage forskellige signifikante toksikologiske interaktioner. Den egentlige effekt kan påvirkes af interne, eksterne og farmakokinetiske faktorer. Misbrug kan omfatte både relativt lave doser samt høje doser af benzodiazepiner. Derfor kræver påvisning af misbrugsstof/metabolit i urin, at der vælges en cutoff, som opfylder kravene i testprogrammet for stoffer. Efter indtagelse bliver benzodiazepinerne i den 1,4 substituerede gruppe (inklusive triazolobenzodiazepinderivativerne) absorberet, metaboliseret og udskilt i urinen i forskellige tempi i form af forskellige strukturelt beslægtede metabolitter. Variationen af metabolitter afspejler de enkelte stoffers forskellige fysiokemiske egenskaber og metaboliske aktiveringsveje. Af generelle metaboliske ligheder kan nævnes fjernelse af substituenter fra β- ringen i de 1,4 substituerede benzodiazepiner, α hydroxylering af triazolobenzodiazepinerne, demethylering, hydroxylering af kulstoffet i position 3 i β-ringen og konjugering af de hydroxylerede metabolitter efterfulgt af udskillelse i urinen, primært som glucuronider. 1,2,3,4,5 Den enzymatiske hydrolyse af glucuroniderede benzodiazepiner kan øge deres til benzodiazepin-immunoassays. 10,11,12,13,14 Analyseprincip Kinetisk interaktion af mikropartikler i en opløsning (KIMS) 11,15 målt ved ændringer i lystransmissionen. I en prøve uden misbrugsstoffer binder de frie antistoffer sig til misbrugsstof-mikropartikel-konjugater, hvilket fører til dannelse af partikelaggregater. I en urinprøve med det pågældende misbrugsstof konkurrerer misbrugsstoffet med det partikelbundne misbrugsstofderivat om de frie antistoffer. Antistoffer, som er bundet til det stof, der findes i prøven, er ikke længere til rådighed til dannelse af partikelaggregater, hvorfor den efterfølgende dannelse af partikelkompleks hæmmes. I en prøve uden misbrugsstoffer fortsætter aggregatreaktionen, og absorbansen øges. Ved en prøve med misbrugsstoffer reduceres stigningen i absorbans derimod i forhold til koncentrationen af misbrugsstof i prøven. Indholdet af misbrugsstof i en prøve sammenholdes med den værdi, der er fundet for en kendt cutoff-koncentration af misbrugsstof. Tilstedeværelsen af β glucuronidase forstærker Benzodiazepines IIanalysens til nogle glucuroniderede metabolitter. Reagenser - arbejdsopløsninger R1 SR Mikropartikelreagens Konjugerede benzodiazepinderivatmikropartikler i buffer og 0.09 natriumazid Antistofreagens Benzodiazepin polyklonalt antistof (får) i buffer med β glucuronidase, bovint serumalbumin (BSA) og 0.09 natriumazid. 1 / 9
ONLINE Benzodiazepines II R1 er i position B, og SR er i position C. Forholdsregler og advarsler Vær opmærksom på alle advarsler og forholdsregler i kapitel 1, Indledning, i denne metodemanual. Reagenshåndtering COBAS INTEGRA 400 plus analyseinstrument Før nye (ikke gennembrudte) cobas c packs placeres på instrumentet, mixes de i 1 minut på kassettemixeren. Alle cobas c packs i brug skal ligeledes blandes på denne én gang om ugen. COBAS INTEGRA 800 analyseinstrument Klar til brug. Reagenset blandes automatisk i 1 minut, efter at cobas c pack er gennembrudt, og i et halvt minut under daglig opstart (Begin of Day (BOD)). Opbevaring og holdbarhed Holdbarhed ved 2 8 C: COBAS INTEGRA 400 plus analyseinstrument I brug på instrumentet ved 10 15 C COBAS INTEGRA 800 analyseinstrument I brug på instrumentet ved 8 C Se udløbsdatoen på etiketten på cobas c pack 12 uger 12 uger Reagenserne må ikke fryses. Reagenser, som har været frosne, skal kasseres. Prøvetagning og -forberedelse Kun de nedennævnte prøvematerialer er testet og fundet acceptable. Urin: Opsaml urinprøver i rene glas- eller plastbeholdere. Friske urinprøver kræver ikke speciel håndtering eller forbehandling, men de afpipetterede prøver bør dog ikke indeholde større mængder bundfald. Prøver bør ligge inden for det normale fysiologiske ph-område på 5 8. Additiver eller konserveringsmidler er ikke nødvendige. Det anbefales at opbevare urinprøver ved 2 8 C og analysere dem inden for 5 dage efter opsamling. 16 Centrifugér meget uklare prøver før analysering. Forfalskning eller fortynding af prøven kan give fejlagtige resultater. Ved mistanke om forfalskning skal der tages en ny prøve. Kontrol af prøvers validitet er nødvendig for prøver taget i henhold til Mandatory Guidelines for Federal Workplace Drug Testing Programs. 17 Vigtigt: Prøvefortyndinger bør kun anvendes som estimering til GC/MS eller LC/MS/MS og er ikke beregnet til patientværdier. Hvis der anvendes fortyndingsprocedurer, skal de valideres. Leverede materialer Se venligst afsnittet "Reagenser - arbejdsopløsninger" m.h.t. reagenser. Analyse Hvis analysen skal udføres optimalt, skal anvisningerne for det aktuelle analyseinstrument følges. Se venligst den aktuelle brugermanual for instrumentspecifikke analyseinstruktioner. Applikationer til urin COBAS INTEGRA 400 plus testdefinitioner Semikvantitativ Kvalitativ Målemetode Absorbans Absorbans Abs. beregningsmetode Endpoint Endpoint Reaktionsmetode R1-S-SR R1-S-SR Reaktionsretning Stigende Stigende Reaktionsstart SR SR Bølgelængde A 552 nm 552 nm Måleområde med postdilution BZ1S2 0-1000 0-5500 BZ1Q2, BZQ1C BZ2S2 0-1000 0-2750 BZ2Q2 BZ3S2 0-3000 0-5750 BZ3Q2 BZ1S2, BZ2S2 BZ3S2 0-10000 0-30000 Postdilution factor 10 anbefales* Nej Calc. first/last 34/62 34/62 Enhed *Ved estimering af koncentrationen til brug ved GC/MS- eller LC/MS/MS-analyse. Afpipetteringsparametre BZ1S2, BZ2S2, BZ1Q2, BZ2Q2, BZQ1C Diluent (H 2 O) R1 45 µl 0 µl Prøve 7 µl 10 µl SR 100 µl 0 µl Totalvolumen 162 µl BZ3S2, BZ3Q2 Diluent (H 2 O) R1 45 µl 0 µl Prøve 2.5 µl 10 µl SR 100 µl 0 µl Totalvolumen 157.5 µl COBAS INTEGRA 800 testdefinitioner Semikvantitativ Kvalitativ Målemetode Absorbans Absorbans Abs. beregningsmetode Endpoint Endpoint Reaktionsmetode R1-S-SR R1-S-SR Reaktionsretning Stigende Stigende Reaktionsstart SR SR Bølgelængde A 552 nm 552 nm Måleområde med postdilution BZ1S2, BZ2S2 BZ1S2 0-1000 0-5500 BZ1Q2, BZQ1C BZ2S2 0-1000 0-2750 BZ2Q2 BZ3S2 0-3000 0-5750 BZ3Q2 BZ3S2 0-10000 0-30000 Postdilution factor 10 anbefales* Nej Calc. first/last 45/95 45/95 Enhed *Ved estimering af koncentrationen til brug ved GC/MS- eller LC/MS/MS-analyse. Afpipetteringsparametre BZ1S2, BZ2S2, BZ1Q2, BZ2Q2,BZQ1C Diluent (H 2 O) R1 45 µl 0 µl Prøve 7 µl 10 µl SR 100 µl 0 µl Totalvolumen 162 µl BZ3S2, BZ3Q2 Diluent (H 2 O) R1 45 µl 0 µl Prøve 2.5 µl 10 µl SR 100 µl 0 µl Totalvolumen 157.5 µl Kalibrering Kalibratorer Semikvantitative applikationer 2 / 9
ONLINE Benzodiazepines II Kalibreringsmetode BZ1S2, 0-206; BZ2S2, 0-208 BZ3S2, 0 210 Preciset Plus II kalibratorer, CAL1-6 0, 50, 100, 200, 400, 1000 (100 og 200 cutoff, S8, system ID 07 6796 4) Preciset Plus I kalibratorer, CAL1-6 0, 150, 300, 600, 1000, 3000 (300 cutoff, S2, system ID 07 6764 6) Kvalitative applikationer BZ1Q2, 0-207 Preciset Plus II kalibratorer, CAL 1 0 eller deioniseret vand og Preciset Plus II kalibratorer, CAL 3 100 (100 cutoff, Q3, system ID 07 6770 0) Til kvalitative applikationer tildeles cutoff på 100 en værdi på 1000. BZ2Q2, 0-209 Preciset Plus II kalibratorer, CAL 1 0 eller deioniseret vand og Preciset Plus II kalibratorer, CAL 4 200 (200 cutoff, Q4, system ID 07 6794 8) Til kvalitative applikationer tildeles cutoff på 200 en værdi på 1000. BZ3Q2, 0-211 Preciset Plus I kalibratorer, CAL 1 0 eller deioniseret vand og C.f.a.s. Qualitative Plus 300 (300 cutoff, Q1, system ID 07 6744 1) BZQ1C, 0-412 Kalibreringsbestemmelse Kalibreringsinterval Til kvalitative applikationer tildeles cutoff på 300 en værdi på 1000. Preciset Plus I eller II kalibratorer, CAL 1 0 eller deioniseret vand og C.f.a.s. Qualitative Plus Clinical 100 (100 cutoff, Q5, system ID 07 6880 4) Til kvalitative applikationer tildeles cutoff på 100 en værdi på 1000. Semikvantitative applikationer Logit/Log 4 Kvalitative applikationer Lineær regression Dobbeltbestemmelse anbefales COBAS INTEGRA 400 plus analyseinstrument: Hvert lot eller hver 28. dag, eller som krævet ifølge kvalitetskontrolprocedurerne COBAS INTEGRA 800 analyseinstrument: Hvert lot eller hver 28. dag, eller som krævet ifølge kvalitetskontrolprocedurerne Der fremstilles en kalibreringskurve ved hjælp af kalibratorerne. Kalibratorerne skal anbringes med den højeste koncentration først og den laveste sidst på CAL/QC-racket. Denne kurve gemmes i hukommelsen i COBAS INTEGRA systemerne og kan kaldes frem igen på et senere tidspunkt. Sporbarhed: Denne metode er standardiseret over for en primær referencemetode (GC/MS). Kvalitetskontrol Kvalitetskontrol 100 cutoff Control Set II PreciPos Set II (2P, system-id 07 6771 9) PreciNeg Set II (2N, system-id 07 6772 7) eller Control Set Clinical PreciPos Clinical (CP, system-id 07 6879 0) PreciNeg Clinical (CN, system-id 07 6878 2) 200 cutoff Control Set III 300 cutoff Control Set I Kontrolrækkefølge Kontrol efter kalibrering PreciPos Set III (3P, system-id 07 6773 5) PreciNeg Set III (3N, system-id 07 6774 3) PreciPos Set I (1P, system-id 07 6753 0) PreciNeg Set I (1N, system-id 07 6754 9) Brugerdefineret Anbefales Anvend det kontrolmateriale, der er angivet i afsnittet Ordreinformation, til kvalitetskontrol. Derudover kan andre egnede kontrolmaterialer anvendes. koncentrationerne i Control Set I, II, III og Clinical er verificeret med GC/MS. Kontrolintervallerne og -grænserne bør tilpasses det enkelte laboratoriums individuelle krav. De opnåede værdier skal ligge inden for de definerede grænser. Hvert laboratorium bør etablere egne korrektionsprocedurer, som skal anvendes, hvis en værdi falder uden for de definerede grænser. Følg de gældende offentlige regulativer og lokale retningslinjer for kvalitetskontrol. COBAS INTEGRA systemerne rapporterer resultater med følgende testmarkeringer: Semikvantitativ resultatrapportering BZ1S2 (100 cutoff) Ingen markering Negativ < 100 <TEST RNG Negativ < 0 >TEST RNG Positiv > 1000 POS 100 Positiv 100 De ovennævnte værdier er baseret på en cutoff-værdi på 100. BZ2S2 (200 cutoff) Ingen markering Negativ < 200 <TEST RNG Negativ < 0 3 / 9
ONLINE Benzodiazepines II >TEST RNG Positiv > 1000 POS 200 Positiv 200 De ovennævnte værdier er baseret på en cutoff-værdi på 200. BZ3S2 (300 cutoff) Ingen markering Negativ < 300 <TEST RNG Negativ < 0 >TEST RNG Positiv > 3000 POS 300 Positiv 300 De ovennævnte værdier er baseret på en cutoff-værdi på 300. Kvalitativ resultatrapportering BZ1Q2, BZQ1C (100 ng/ml cutoff) Ingen markering Negativ < 1000 <TEST RNG Negativ < 0 >TEST RNG Positiv > 5500 POS 1000 Positiv 1000 De ovennævnte værdier er baseret på tildeling af en værdi på 1000 til cutoff-værdien på 100. BZ2Q2 (200 cutoff) Ingen markering Negativ < 1000 <TEST RNG Negativ < 0 >TEST RNG Positiv > 2750 POS 1000 Positiv 1000 De ovennævnte værdier er baseret på tildeling af en værdi på 1000 til cutoff-værdien på 200. BZ3Q2 (300 cutoff) Ingen markering Negativ < 1000 <TEST RNG Negativ < 0 >TEST RNG Positiv > 5750 POS 1000 Positiv 1000 De ovennævnte værdier er baseret på tildeling af en værdi på 1000 til cutoff-værdien på 300. Semikvantitativ resultatrapportering Semikvantificeringen af foreløbigt positive resultater bør kun anvendes af laboratorierne til at bestemme en egnet fortynding af prøver til konfirmation ved hjælp af en konfirmatorisk metode som f.eks. GC/MS eller LC/MS/MS. Laboratoriet kan også fastsætte kvalitetskontrolprocedurer og vurdere kontrolfunktionen. Bemærk: Ved brug af post-dilution-funktionen (1:10 fortynding) for at sikre, at prøven ikke fortyndes for meget, skal resultatet for fortyndingen være mindst halvdelen af cutoff-værdien for analyten gange 10. Hvis resultatet for fortyndingen ligger under halvdelen af cutoff-værdien gange 10, skal prøven analyseres igen i en mindre fortynding. En fortynding med et resultat tæt på cutoff for analyten giver den mest nøjagtige værdi. For at beregne koncentrationen af den foreløbigt positive prøve skal resultatet multipliceres med fortyndingsfaktoren. Fortyndinger bør kun anvendes som en estimering ved GC/MS eller LC/MS/MS. Begrænsninger - interferens Se afsnittet "Testspecifikke performance-data" i dette dokument vedrørende oplysninger om substanser, der er testet med denne analyse. Andre stoffer og/eller faktorer kan muligvis interferere med testen og give fejlagtige resultater (f.eks. tekniske eller proceduremæssige fejl). Et foreløbigt positivt resultat med denne analyse indikerer tilstedeværelse af benzodiazepiner og/eller metabolitter heraf i urinen. Det afspejler ikke graden af intoksikation. Til diagnostiske formål skal resultaterne altid sammenholdes med patientens anamnese, kliniske undersøgelser og andre resultater. Interfererende stoffer blev tilsat til urin indeholdende i en mængde på -25 og +25 af cutoff-et i den nedenfor angivne koncentration. Prøverne blev analyseret på et COBAS INTEGRA 800 analyseinstrument, og følgende resultater blev fundet: Samme forsøg blev udført kvalitativt for hver cutoff. Alle negative og foreløbigt positive prøver blev genfundet korrekt ved tilstedeværelse af den interferende substans. Semikvantitativ () Forbindelse konc. Neg. Acetone 1 Askorbinsyre 1.5 Konjugeret bilirubin Kreatinin 0.25 mg/ml 5 mg/ml Ethanol 1 Glukose Hæmoglobin Humant serumalbumin Oxalsyre Natriumklorid 20 mg/ml 1 mg/ml 5 mg/ml 2 mg/ml 0.5 M Carbamid 6 100 cutoff 77 74 71 78 77 79 76 84 75 80 77 Pos. 134 125 113 130 130 130 134 137 122 135 132 200 cutoff Neg. 150 149 139 149 143 147 151 154 138 152 148 Pos. 251 250 226 249 250 251 250 262 226 251 250 300 cutoff Neg. 228 226 216 231 227 227 229 230 205 231 227 Pos. 393 386 375 383 379 383 387 395 349 376 387 I en anden protokol testede man prøver indeholdende i kontroler (± 25 af cutoff) med specifikke gravitationer i området fra 1.006 til 1.034. Som med de andre interferencer var der ingen kontrol cross-over ved nogen af de 3 cutoffs ved de specifikke gravitationser. NØDVENDIG HANDLING Speciel vaskeprogrammering: Brugen af specielle vasketrin er obligatorisk, når visse testkombinationer udføres på COBAS INTEGRA analyseinstrumenter. For yderligere vejledning og for den seneste version af listen over ekstra vaskecykler henvises til metodebladet til CLEAN. Hvor det er nødvendigt, skal speciel programmering til vask/forhindring af carry-over udføres, før der rapporteres resultater med denne test. Testspecifikke performance-data Repræsentative performance-data på COBAS INTEGRA analyseinstrumenter angives nedenfor. ne kan variere fra laboratorium til laboratorium. Præcision En opløsning blev tilsat til 4 prøver fra en pool af human urin for at få lave, høje og omtrentlige positive og negative kontrolkoncentrationer af stoffet. Disse prøver blev testet kvalitativt og semikvantitativt for præcision. I henhold til en CLSI (EP5 A2) 4 / 9
ONLINE Benzodiazepines II præcisionsprotokol blev prøverne testet 2 gange pr. kørsel, 2 kørsler pr. dag i 21 dage, total n = 84. Der blev opnået nedenstående resultater på et COBAS INTEGRA 800 analyseinstrument. Kvalitativ - 100 cutoff Prøvekoncentration Antal bestemmelser # neg. / # pos. Nordiazepam 0 84 84 neg. / 0 pos. Nordiazepam 54 84 84 neg. / 0 pos. Nordiazepam 77 84 84 neg. / 0 pos. Nordiazepam 123 84 0 neg. / 84 pos. Nordiazepam 189 84 0 neg. / 84 pos. Kvalitativ - 200 cutoff Prøvekoncentration Antal bestemmelser # neg. / # pos. Nordiazepam 0 84 84 neg. / 0 pos. Nordiazepam 112 84 84 neg. / 0 pos. Nordiazepam 145 84 84 neg. / 0 pos. Nordiazepam 240 84 0 neg. / 84 pos. Nordiazepam 420 84 0 neg. / 84 pos. Kvalitativ - 300 cutoff Prøvekoncentration Antal bestemmelser # neg. / # pos. Nordiazepam 0 84 84 neg. / 0 pos. Nordiazepam 161 84 84 neg. / 0 pos. Nordiazepam 236 84 84 neg. / 0 pos. Nordiazepam 375 84 0 neg. / 84 pos. Nordiazepam 608 84 0 neg. / 84 pos. Semikvantitativ - 100 cutoff Prøvekonc. # neg. / # pos. Repetérbarhed Intermediær præcision Nordiazepam 54 84 / 0 2.2 4.0 3.4 6.4 Nordiazepam 77 84 / 0 2.1 2.7 3.1 4.1 Nordiazepam 123 0 / 84 1.9 1.5 3.4 2.8 Nordiazepam 189 0 / 84 2.1 1.1 4.1 2.2 Semikvantitativ - 200 cutoff Prøvekonc. # neg. / # pos. Repetérbarhed Intermediær præcision Nordiazepam 112 84 / 0 1.8 1.6 3.2 2.8 Nordiazepam 145 84 / 0 2.0 1.4 3.6 2.5 Nordiazepam 240 0 / 84 2.0 0.8 4.8 2.0 Nordiazepam 420 0 / 84 2.9 0.7 5.7 1.4 Semikvantitativ - 300 cutoff Prøvekonc. # neg. / # pos. Repetérbarhed Intermediær præcision Nordiazepam 161 84 / 0 3.7 2.3 7.2 4.5 Nordiazepam 236 84 / 0 3.8 1.6 6.8 2.9 Nordiazepam 375 0 / 84 3.7 1.0 6.8 1.8 Nordiazepam 608 0 / 84 3.8 0.6 10.4 1.7 Akkuratesse 103 urinprøver fra et klinisk laboratorium, hvor de blev screenet negative for et panel af misbrugsstoffer, blev analyseret for benzodiazepiner på et COBAS INTEGRA 800 analyseinstrument. Alle 103 kliniske prøver var negative ved en cutoff på 100, 200 og 300. 55 prøver fra et klinisk laboratorium, hvor de blev screenet foreløbigt positive med et kommercielt tilgængeligt enzymimmunoassay og efterfølgende konfirmeret med væskekromatografi i kombination med tandem massespektrometri (LC/MS/MS), blev analyseret med Benzodiazepines II-analysen. 100 af disse prøver var positive ved en cutoff på 100, 200 og 300. Derudover blev 7 prøver fortyndet til en benzodiazepinkoncentration på ca. 75 100 af cutoff-koncentrationen for hver cutoff, og 7 prøver blev fortyndet til en benzodiazepinkoncentration på ca. 100 125 af cutoffkoncentrationen for hver cutoff. Data fra ovennævnte studier, som lå i området omkring cutoff, blev sammenholdt med data fra de fortyndede positive urinprøver. Følgende resultater blev opnået med Benzodiazepines II-analysen på et COBAS INTEGRA 800 analyseinstrument sammenlignet med LC/MS/MS-værdierne: Benzodiazepines II klinisk korrelation (cutoff = 100 ) COBAS INTEGRA 800 analyseinstrument Negative prøver LC/MS/MS-værdier () Nær cutoff 75 124-126 623-1874 + 0 0 7 55 103 7 0 0 Benzodiazepines II klinisk korrelation (cutoff = 200 ) COBAS INTEGRA 800 analyseinstrument Negative prøver LC/MS/MS-værdier () Nær cutoff 148-150 248-253 623-1874 + 0 0 7 55 103 7 0 0 Benzodiazepines II klinisk korrelation (cutoff = 300 ) COBAS INTEGRA 800 analyseinstrument Negative prøver LC/MS/MS-værdier () Nær cutoff 223-226 366-382 623-1874 + 0 0 7 55 103 7 0 0 Analytisk specificitet Specificiteten af COBAS INTEGRA Benzodiazepines II-analysen til forskellige benzodiazepiner og benzodiazepinmetabolitter blev bestemt ved at fremstille hæmningskurver for hver af de nævnte forbindelser og bestemme den omtrentlige koncentration af hver forbindelse, der svarer til analysereaktiviteten af cutoff på 100, 200 og 300 for analysen. 5 / 9
ONLINE Benzodiazepines II Forbindelse a) konc. i 100 Deschloroetizolam 76 132 Flubromazepam 79 127 3-OH-flubromazepam 120 83 Pyrazolam 81 123 Clonazolam 86 116 Diclazepam 100 100 Flubromazolam 101 99 Etizolam 121 82 Meclonazepam 160 63 Nifoxipam 184 54 Bentazepam 190 53 Estazolam 92 109 Phenazepam 98 102 Bromazepam 107 93 Alprazolam 108 93 α-hydroxyalprazolam 104 96 4-hydroxyalprazolam 129 78 Nitrazepam 114 88 7-aminonitrazepam 84 120 7-acetamidonitrazepam 26180 0.38 Delorazepam 121 83 Demoxepam 122 82 Clorazepat 123 81 Triazolam 123 81 α-hydroxytriazolam 138 73 Oxazepam 128 78 Oxazepamglucuronid 244 41 Flunitrazepam 136 74 Desmethylflunitrazepam 115 87 7-aminoflunitrazepam 124 80 Brotiazolam 138 72 Clobazam 139 72 Lormetazepam 141 71 Diazepam 142 71 Nordiazepam 96 105 Temazepam 143 70 Temazepamglucuronid 393 25 Prazepam 152 66 Clonazepam 155 65 7-aminoclonazepam 130 77 Pinazepam 159 63 Flurazepam 159 63 Desalkylflurazepam 104 96 Hydroxyethylflurazepam 123 81 Didesethylflurazepam 138 73 Forbindelse a) konc. i 100 Lorazepam 169 59 Lorazepamglucuronid 289 35 Chlordiazepoxid 174 58 Desmethylchlordiazepoxid 146 68 Norchlordiazepoxid 163 62 Halazepam 176 57 Midazolam 181 55 α-hydroxymidazolam 117 85 Desmethylmedazepam 225 45 Nimetazepam 1099 9 Oxaprozin 2773 4 Zolpidem 125000 0.08 a) Indrykkede forbindelser er metabolitter af det foranstående stof Forbindelse b) konc. i 200 Pyrazolam 171 117 Deschloroetizolam 172 116 Flubromazepam 177 113 3-OH-flubromazepam 274 73 Clonazolam 188 106 Diclazepam 215 93 Flubromazolam 210 95 Etizolam 239 84 Meclonazepam 467 43 Nifoxipam 543 37 Bentazepam 508 39 Estazolam 199 100 Phenazepam 219 91 Alprazolam 231 86 α-hydroxyalprazolam 228 88 4-hydroxyalprazolam 299 67 Bromazepam 239 84 Delorazepam 254 79 Triazolam 266 75 α-hydroxytriazolam 276 72 Clorazepat 271 74 Diazepam 284 70 Nordiazepam 209 96 Oxazepam 290 69 Oxazepamglucuronid 593 34 Brotiazolam 290 69 Nitrazepam 305 66 7-aminonitrazepam 186 107 6 / 9
ONLINE Benzodiazepines II Forbindelse b) konc. i 200 7-acetamidonitrazepam 87903 0.23 Demoxepam 316 63 Lormetazepam 318 63 Flunitrazepam 320 62 Desmethylflunitrazepam 281 71 7-aminoflunitrazepam 293 68 Clobazam 324 62 Flurazepam 330 61 Desalkylflurazepam 238 84 Hydroxyethylflurazepam 260 77 Didesethylflurazepam 306 65 Midazolam 347 58 α-hydroxymidazolam 255 78 Temazepam 350 57 Temazepamglucuronid 894 22 Halazepam 355 56 Clonazepam 367 55 7-aminoclonazepam 303 66 Pinazepam 393 51 Lorazepam 398 50 Lorazepamglucuronid 695 29 Chlordiazepoxid 475 42 Desmethylchlordiazepoxid 393 51 Norchlordiazepoxid 446 45 Prazepam 532 38 Desmethylmedazepam 628 32 Nimetazepam 2431 8 Oxaprozin 10595 2 Zolpidem 250000 0.08 b) Indrykkede forbindelser er metabolitter af det foranstående stof Forbindelse c) konc. i 300 Deschloroetizolam 228 132 Flubromazepam 246 122 3-OH-flubromazepam 386 78 Clonazolam 259 116 Pyrazolam 273 110 Diclazepam 298 101 Flubromazolam 304 99 Etizolam 362 83 Meclonazepam 509 59 Nifoxipam 601 50 Bentazepam 614 49 Forbindelse c) konc. i 300 Estazolam 306 98 Bromazepam 325 92 Phenazepam 325 92 Alprazolam 354 85 α-hydroxyalprazolam 343 87 4-hydroxyalprazolam 394 76 Demoxepam 378 79 Delorazepam 382 79 Nitrazepam 386 78 7-aminonitrazepam 269 111 7-acetamidonitrazepam 72581 0.41 Triazolam 392 77 α-hydroxytriazolam 405 74 Clorazepat 404 74 Oxazepam 405 74 Oxazepamglucuronid 719 42 Diazepam 405 74 Nordiazepam 304 99 Lormetazepam 429 70 Clobazam 441 68 Flunitrazepam 450 67 Desmethylflunitrazepam 372 81 7-aminoflunitrazepam 408 74 Brotiazolam 450 67 Temazepam 469 64 Temazepamglucuronid 1186 25 Flurazepam 494 61 Desalkylflurazepam 344 87 Hydroxyethylflurazepam 389 77 Didesethylflurazepam 456 66 Clonazepam 508 59 7-aminoclonazepam 390 77 Pinazepam 554 54 Halazepam 562 53 Chlordiazepoxid 563 53 Desmethylchlordiazepoxid 494 61 Norchlordiazepoxid 535 56 Midazolam 577 52 α-hydroxymidazolam 405 74 Lorazepam 587 51 Lorazepamglucuronid 874 34 Prazepam 635 47 Desmethylmedazepam 713 42 Nimetazepam 3435 9 Oxaprozin 8911 3 7 / 9
ONLINE Benzodiazepines II Forbindelse c) konc. i 300 Zolpidem 200000 0.15 c) Indrykkede forbindelser er metabolitter af det foranstående stof Mange benzodiazepiner udskilles i urinen primært som det glucuroniderede konjugat. Glucuroniderede metabolitter kan have større eller mindre end udgangsstoffet. Tilstedeværelsen af β glucuronidase forstærker COBAS INTEGRA Benzodiazepines II-analysens til nogle glucuroniderede metabolitter. interferens Følgende forbindelser blev forberedt i afmålte mængder af en pool af normal human urin for at få en slutkoncentration på 100000. Ingen af disse forbindelser gav værdier, som var større end 0.06 for 100 og 200 cutoff og 0.09 for 300 cutoff. Acetaminophen Acetylsalicylsyre Amitriptylin Amobarbital d-amfetamin l-amfetamin Ampicillin Askorbinsyre Aspartam Atropin Benzocain Benzoylecgonin (kokainmetabolit) Benzphetamin Buspiron Butabarbital Koffein Calciumhypochlorit Cannabidiol Captopril Chloroquin Chlorpheniramin Chlorpromazin Kokain Codein Desipramin HCl Dextromethorphan Dextropropoxyphen Digoxin Diphenhydramin Diphenylhydantoin Doxepin Ecgonin Ecgoninmethylester Enalapril Imipramin Isoproterenol Ketamin Lidocain L MDA MDMA Melanin Meperidin Methadon d-methamfetamin l-methamfetamin Metakvalon Methylphenidat Methyprylon Morfinsulfat Naloxon Naltrexon Naproxen Niacinamid Nikotin Norethindron l-norpseudoephedrin Omeprazol Penicillin G Pentazocin Pentobarbital Phencyclidin Phenobarbital Phenothiazin Phenylbutazon d,l-fenylpropanolamin Procain Promethazin d-pseudoephedrin d-ephedrin l-ephedrin Epinephrin Erythromycin Østriol Fenoprofen Flumazenil Furosemid Gentisinsyre Glutethimid Guaiacolglycerolether Hydrochlorthiazid Hydroxyindoleddikesyre Hydroxyindolcarboxylsyre Ibuprofen Chinidin Kinin Secobarbital Sulindac Tetracyclin Δ 9 THC-9-carboxylsyre Tetrahydrozolin Thioridazin Tolmetin Trifluoperazin Trimipramin Tyramin Verapamil Zomepirac Eventuelle modifikationer af instrumentet beskrevet heri skal valideres af laboratoriet. Referencer 1 Karch SB, ed. Drug Abuse Handbook. Boca Raton, FL: CRC Press LLC 1998. 2 Salamone SJ, ed. Benzodiazepines and GHB: Detection and Pharmacology. Totowa, NJ: Humana Press 2001. 3 Hardman JG, Limbird LE, Gilman A, eds. Goodman and Gilman s The Pharmacological Basis of Therapeutics. 10th ed. New York, NY: McGraw Hill Pub Co. 2001. 4 Baselt RC. Disposition of Toxic Drugs and Chemicals in Man. 7th ed. Foster City, CA: Biomedical Publications 2004. 5 Laurijssens BE, Greenblatt DJ. Pharmacokinetic-pharmacodynamic relationships for benzodiazepines. Clin Pharmacokinet 1996;30:52-76. 6 Hallfors DD, Saxe L. The dependence potential of short half-life benzodiazepines: a meta-analysis. Am J Public Health 1993;83:1300-1304. 7 Chouinard G. Issues in the clinical use of benzodiazepines: potency, withdrawal, and rebound. J Clin Psychiatry 2004:65(5);7-12. 8 Abernethy DR, Greenblatt DJ, Ochs HR, et al. Benzodiazepine drugdrug interactions commonly occurring in clinical practice. Curr Med Res Opin 1984;8:80-93. 9 Tanaka E. Toxicological interactions between alcohol and benzodiazepines. J Toxicol Clin Toxicol 2002;40:69-75. 10 Dou C, Bournique JS, Zinda MK, et al. Comparison of the Rates of Hydrolysis of Lorazepam-Glucuronide, Oxazepam-Glucuronide and Temazepam-Glucuronide Catalyzed by E. Coli β-d-glucuronidase Using the OnLine Benzodiazepine Screening Immunoassay on the Roche/Hitachi 917 Analyzer. J of Forensic Science 2001;46(2):335-340. 11 Beck O, Lin Z, Brodin K, et al. The online screening technique for urinary benzodiazepines: comparison with EMIT, FPIA, and GC-MS. J Anal Toxicology 1997;21(7):554-557. 12 Salamone SJ, Honasoge S, Brenner C, et al. Flunitrazepam excretion patterns using the Abuscreen OnTrak and OnLine immunoassays: comparison with GC-MS. J Anal Toxicol 1997;21:341-345. 13 Klette KL, Wiegand RF, Horn CK, et al. Urine benzodiazepine screening using Roche Online KIMS immunoassay with betaglucuronidase hydrolysis and confirmation by gas chromatographymass spectrometry. J Anal Toxicol 2005;29:193-200. 14 Valentine JL, Middleton R, Sparks C. Identification of urinary benzodiazepines and their metabolites: comparison of automated HPLC and GC-MS after immunoassay screening of clinical specimens. J Anal Toxicol 1996;20(6):416-424. 8 / 9
ONLINE Benzodiazepines II 15 Armbruster DA, Schwarzhoff RH, Hubster EC, et al. Enzyme immunoassay, kinetic microparticle immunoassay, radioimmunoassay, and fluorescence polarization immunoassay compared for drugs-ofabuse screening. Clin Chem 1993;39:2137-2146. 16 Toxicology and Drug Testing in the Clinical Laboratory; Approved Guideline. 2nd ed. (C52-A2). Clinical and Laboratory Standards Institute 2007;27:33. 17 Mandatory Guidelines for Federal Workplace Drug Testing Programs. Fed Regist 2008 Nov 25;73:71858-71907. I dette metodeblad anvendes altid punktum som skilletegn for at markere grænsen mellem hele tal og decimaler i et decimaltal. Skilletegn for tusinder anvendes ikke. Symboler Roche Diagnostics anvender nedenstående tegn og symboler ud over dem, der er angivet i ISO 15223 1 standarden: GTIN Indhold i pakning Mængde efter rekonstituering eller blanding Global Trade Item Number Tilføjelser, sletninger eller ændringer er vist ved en streg i margenen. 2016, Roche Diagnostics Roche Diagnostics GmbH, Sandhofer Strasse 116, D-68305 Mannheim www.roche.com 9 / 9