P-AMYL PreciControl ClinChem Multi 2 (20 x 5 ml) Kode PreciControl ClinChem Multi 2 (4 x 5 ml, i USA) Kode 392

Transkript

1 Ordreinformation Indikerer det eller de analyseinstrument(er), hvor kittet/kittene kan anvendes Pancreatic α amylase liquid ([1] 6 x 66 ml, [2] 6 x 16 ml) Roche/Hitachi MODULAR P Pancreatic α amylase liquid ([1] 12 x 22 ml, [2] 6 x 10 ml) Roche/Hitachi Calibrator f.a.s. (12 x 3 ml) Kode Calibrator f.a.s. (12 x 3 ml, i USA) Kode Precinorm U (20 x 5 ml) Kode Precinorm U (4 x 5 ml) Kode Precinorm U plus (10 x 3 ml) Kode Precinorm U plus (10 x 3 ml, i USA) Kode Precipath U (20 x 5 ml) Kode Precipath U (4 x 5 ml) Kode Precipath U plus (10 x 3 ml) Kode Precipath U plus (10 x 3 ml, i USA) Kode PreciControl ClinChem Multi 1 (20 x 5 ml) Kode PreciControl ClinChem Multi 1 (4 x 5 ml) Kode PreciControl ClinChem Multi 1 (4 x 5 ml, i USA) Kode PreciControl ClinChem Multi 2 (20 x 5 ml) Kode PreciControl ClinChem Multi 2 (4 x 5 ml) Kode PreciControl ClinChem Multi 2 (4 x 5 ml, i USA) Kode 392 Nogle instrumenter og nogle kits kan muligvis ikke fås i alle lande. Kontakt Deres lokale Roche Diagnostics repræsentant for yderligere systemapplikationer. Dansk Systeminformation Til Roche/Hitachi MODULAR P analyseinstrumenter: ACN 571 Anvendelse Enzymatisk in vitro analyse til kvantitativ bestemmelse af pancreasα amylase i humant serum, plasma og urin på Roche automatiserede klinisk-kemiske analyseinstrumenter. Resumé 1,2,3,4,5,6,7,8,9,10 α amylaser (1,4 α D glucanohydrolaser, EC ) katalyserer den hydrolytiske nedbrydning af polymere kulhydrater så som amylose, amylopectin og glykogen ved at spalte 1,4 α glukosidbindinger. Ved polysakkarider og oligosakkarider hydrolyseres flere glukosidbindinger samtidigt. Maltotriose, den mindste af disse enheder, omdannes meget langsomt til maltose og glukose. Der skelnes mellem to typer α amylase, pancreas- (P type) og spytkirtel-αamylase (S type). Mens P typen næsten udelukkende kan henføres til pancreas og derfor er organspecifik, kan S typen have forskellig oprindelse. Foruden spytkirtlerne findes den også i tårer, sved, human mælk, fostervand, lunger, testes og epitelet i æggelederen. På grund af de få specifikke kliniske symptomer på sygdomme i pancreas, er enzymatiske bestemmelser af stor vigtighed i pancreasdiagnostikken. Her er bestemmelse af pancreasspecifik α amylase i stedet for total α amylase en fordel. Bestemmelse af pancreas-α amylase er velegnet til diagnosticering og monitorering af akut pancreatitis og akutte anfald i forbindelse med kronisk pancreatitis. Med hensyn til klinisk sensitivitet og specificitet kan den diagnostiske værdi af pancreas-α amylase sammenlignes med lipase, som generelt betragtes som et pancreas-specifikt enzym. Sensitiviteten af pancreas-α amylase er 38 % højere end total α amylase ved diagnosticering af akut pancreatitis, hvis tre gange den øvre normale grænse og dette anvendes generelt anvendes som kriterium. Der er beskrevet en række metoder til bestemmelse af pancreas-α amylase: radioog enzymimmunoassays samt delvis hæmning af spytkirtel α amylase med en inhibitor fra hvedekim og beregning af pancreas-α amylase ud fra den resterende aktivitet og den totale amylaseaktivitet. Den her beskrevne kinetiske metode er baseret på hæmning af human spytkirtel-α amylase med to forskellige monoklonale antistoffer og den veldokumenterede spaltning af 4,6 ethyliden (G 7 ) 1,4 nitrofenyl (G 1 ) α,d maltoheptaosid (Ethylidene Protected Substrate = EPS) af pancreas-α amylase og den efterfølgende hydrolyse af alle nedbrydningsprodukterne til p nitrofenol ved hjælp af α glukosidase (100 % frigivelse af chromofor). Resultaterne med denne metode stemmer overens med HPLC. Analyseprincip (forenklet) 10,11 Enzymatisk kolorimetrisk analyse Prøve og tilsætning af R1 Tilsætning af R2 og start af reaktion: pancreasα amylase 5 ethyliden G 7 PNP + 5 H 2 O 2 ethyliden G G 2 PNP + 2 ethyliden G G 3 PNP + ethyliden G 3 + G 4 PNP I det første inkubationstrin hæmmes human spytkirtel-α amylase med to forskellige monoklonale antistoffer (uden at påvirke pancreas-α amylase). I det andet reaktionstrin spaltes definerede oligosakkarider så som 4,6 ethyliden (G 7 )-p nitrofenyl (G 1 ) α,d maltoheptaosid (ethyliden G 7 PNP) under pancreas-α amylases katalytiske indvirkning. De herved dannede G 2 PNP-, G 3 PNP- og G 4 PNP-fragmenter hydrolyseres fuldstændigt til p nitrofenol og glukose af α glukosidase. 2 G 2 PNP + 2 G 3 PNP + G 4 PNP + 14 H 2 O (PNP = p nitrofenol; G = glukose) α glucosidase 5 PNP + 14 G Farveintensiteten af det dannede p nitrofenol er direkte proportional med pancreas-α amylaseaktiviteten og måles fotometrisk. Reagenser - arbejdsopløsninger R1 R2 HEPES a buffer: 52.4 mmol/l, ph 7 (37 C); natriumklorid: 87 mmol/l; magnesiumklorid: 12.6 mmol/l; calciumklorid: mmol/l; α glukosidase (mikroorganismer): 4 ku/l; monoklonale antistoffer (mus): 97 mg/l; konserveringsmidler HEPES a buffer: 52.4 mmol/l, ph 7 (37 C); 4,6 ethyliden G 7 PNP: 22 mmol/l; konserveringsmidler; stabilisator a) HEPES = 2 [4 (2 hydroxyethyl) 1 piperazinyl] ethansulfonsyre 1 / 5

2 Forholdsregler og advarsler Til in vitro-diagnostisk brug. Udvis de normale forholdsregler, der kræves ved håndtering af alle laboratoriereagenser. Bortskaffelse af alt affaldsmateriale skal ske i overensstemmelse med lokale retningslinjer. Sikkerhedsdatablad kan rekvireres. Reagenshåndtering R1: Klar til brug R2: Klar til brug Opbevaring og holdbarhed Uåbnede kitkomponenter: Indtil udløbsdatoen ved 2 8 C R1: 4 uger åbnet og kølet på instrumentet R2: 4 uger åbnet og kølet på instrumentet Prøvetagning og -forberedelse 10,12 Serum/plasma Benyt kun egnede prøvetagningsrør til prøvetagning og -forberedelse. Kun de nedennævnte prøvematerialer er testet og fundet acceptable. Serum Plasma: Li, Na, NH 4+ heparin eller EDTA-plasma. (EDTA-plasmaværdier er 5 10 % lavere end serumværdier.) Holdbarhed: 13 7 dage ved C 1 måned ved 2 8 C De angivne prøvetyper blev testet med et udvalg af prøvetagningsrør, som var kommercielt tilgængelige på testtidspunktet, dvs. at ikke alle tilgængelige rør fra alle producenter blev testet. Prøvetagningssystemer fra forskellige producenter kan indeholde forskellige materialer, som kan påvirke testresultaterne i visse tilfælde. Hvis prøver analyseres i primærrør (prøvetagningssystemer), skal instruktionerne fra producenten af disse rør følges. Urin Opsamles uden additiver. Holdbarhed: 14 2 dage ved C 10 dage ved 2 8 C Pancreas-α amylase er ustabil i sur urin. Analysér omgående, eller justér ph til basisk niveau (ca. ph 7) før opbevaring. 13 Centrifugér prøver indeholdende udfældninger før udførelse af analysen. Leverede materialer Se venligst afsnittet "Reagenser - arbejdsopløsninger" m.h.t. reagenser. Nødvendige (men ikke inkluderede) materialer Se afsnittet Ordreinformation 0.9 % NaCl Almindeligt laboratorieudstyr Analyse Hvis analysen skal udføres optimalt, skal anvisningerne for det aktuelle analyseinstrument følges. Se venligst den aktuelle brugermanual for instrumentspecifikke analyseinstruktioner. Performance af applikationer, der ikke er valideret af Roche, kan ikke garanteres og må defineres af brugeren. Kalibrering Sporbarhed: Denne metode er standardiseret over for Roche-reagenset med kalibrerede pipetter sammen med et manuelt fotometer for at få absolutte værdier og den substrat-specifikke absorptionskoefficient, ε. S1: 0.9 % NaCl S2: C.f.a.s. (Calibrator for automated systems) Kalibreringshyppighed 2 punktskalibrering anbefales: efter skift af reagenslot som krævet ifølge kvalitetskontrolprocedurerne Kvalitetskontrol Anvend det kontrolmateriale, der er angivet i afsnittet "Ordreinformation", til kvalitetskontrol. Derudover kan andre egnede kontrolmaterialer anvendes. Kontrolintervallerne og -grænserne bør tilpasses det enkelte laboratoriums individuelle krav. De opnåede værdier skal ligge inden for de definerede grænser. Hvert laboratorium bør etablere egne korrektionsprocedurer, som skal anvendes, hvis en værdi falder uden for de definerede grænser. Følg de gældende offentlige regulativer og lokale retningslinjer for kvalitetskontrol. Beregning Instrumentet udregner automatisk analytaktiviteten i den enkelte prøve. Omregningsfaktorer: U/l x = µkat/l µkat/l x 60.0 = U/l Begrænsninger - interferens 12,15 Restaktiviteten af spytkirtel-α amylase er ca. 3 %. I sjældne tilfælde kan meget høje aktiviteter af spytkirtel-α amylase medføre, at der måles forhøjede værdier for pancreas-α amylase. En lille ændring i den gule farve på opløsning 2 påvirker ikke analysen. Brug ikke mundpipette, og sørg for, at reagenset ikke kommer i kontakt med huden. (Spyt og sved indeholder α amylase!) Kriterium: Genfinding inden for ± 10 % af initial værdi. Icterus: 16 Ingen signifikant interferens op til et I-indeks på 60 for konjugeret bilirubin (bilirubinkoncentration (konjugeret) på ca µmol/l eller 60 mg/dl). b Hæmolyse: 16 Ingen signifikant interferens op til et H-indeks på 500 (hæmoglobinkoncentration på ca. 310 µmol/l eller 500 mg/dl). b Lipæmi (Intralipid): 16 Ingen signifikant interferens op til et L-indeks på b Der er ringe korrelation mellem L-indekset (relaterer til turbiditet) og triglyceridkoncentrationen. Roche/Hitachi MODULAR P analyseinstrumenter: I sjældne tilfælde kan prøver med en kombination af øget turbiditet (L indeks) og høj amylaseaktivitet forårsage et Limt0-, Limt1-, Limt2- eller ABS?-flag. Meget turbide og meget lipæmiske prøver kan give alarm på grund af absorbans (Abs.). Antikoagulerende midler: Der er konstateret interferens med citrat og fluorid. Glukose: Ingen interferens fra glukose op til 111 mmol/l (2000 mg/dl). b Der er fundet ca. 10 % lavere genfinding ved glukosekoncentrationer på 250 mmol/l (4500 mg/dl). Askorbinsyre: Ingen interferens fra askorbinsyre op til 5.68 mmol/l (100 mg/dl). b Der er fundet ca. 10 % lavere genfinding ved askorbinsyrekoncentrationer på 50 mmol/l (800 mg/dl). Icodextrin baserede lægemidler kan føre til reducerede amylaseværdier. 31 almindeligt anvendte lægemidler blev testet in vitro. Der blev ikke fundet interferens med analysen. c b) Målt ved p α amylaseniveauer op til 2.0 µkat/l (120 U/l). c) Målt ved p α amylaseniveauer op til 0.67 µkat/l (40 U/l). I meget sjældne tilfælde kan gammopati, især type IgM (Waldenströms makroglobulinæmi), give unøjagtige resultater. 17 Patienter med makroamylase kan have forhøjede p amylaseresultater. Denne forhøjelse skyldes ikke manglende hæmning af spytkirtel-amylase i serum-immunkomplekset. Den skyldes en koncentration af p amylase, der er højere end normalt, da immunkomplekset ikke udskilles i nyrernes glomeruli. Denne forhøjede p amylase er ikke et diagnostisk tegn på pancreatitis. Måling af forhøjet p amylase i urin bekræfter imidlertid diagnosen pancreatitis, pancreastraume eller pancreaskarcinom, eftersom den frigivne amylase ikke er fuldstændigt bundet af immunkomplekset og derfor udskilles i nyrernes glomeruli. 18 Til diagnostiske formål skal resultaterne altid sammenholdes med patientens anamnese, kliniske undersøgelser og andre resultater. NØDVENDIG HANDLING Speciel vaskeprogrammering: Brugen af specielle vasketrin er obligatorisk, når visse testkombinationer udføres på Roche/Hitachi analyseinstrumenter. Se den seneste version af listen over tests med risiko 2 / 5

3 for carry over samt brugermanualen for yderligere vejledning. Brugere i USA henvises til oversigten "Special Wash Programming" (findes på usdiagnostics.roche.com) og brugermanualen for specielle vaskeinstruktioner. Hvor det er nødvendigt, skal speciel programmering til vask/forhindring af carry over udføres, før der rapporteres resultater med denne test. Grænser og områder Måleområde µkat/l ( U/l) Reanalysér prøver med højere aktiviteter via reanalyseringsfunktionen. På instrumenter uden reanalyseringsfunktion fortyndes prøverne manuelt med 0.9 % NaCl eller destilleret/deioniseret vand (f.eks ). Multiplicér resultatet med fortyndingsfaktoren (f.eks. 5). Beregnede udvidede måleområder med reanalysering: Roche/Hitachi MODULAR P analyseinstrumenter Serum/plasma: Reanalysér prøver med højere aktiviteter via reanalyseringsfunktionen. Prøverne fortyndes 1:3.5 ved hjælp af reanalyseringsfunktionen. Resultater fra prøver fortyndet ved hjælp af reanalyseringsfunktionen multipliceres automatisk med en faktor 3.5. Urin: Reanalysér prøver med højere aktiviteter via reanalyseringsfunktionen. Prøverne fortyndes 1:11 ved hjælp af reanalyseringsfunktionen. Resultater fra prøver fortyndet ved hjælp af reanalyseringsfunktionen multipliceres automatisk med en faktor 11. Måleområdets nedre grænse Testens nedre detektionsgrænse Detektionsgrænse 3 U/l (0.05 µkat/l) Den nedre detektionsgrænse repræsenterer det lavest målbare niveau, som kan skelnes fra nul. Den beregnes som den værdi, der ligger 3 standardafvigelser over den laveste standard (standard SD, repetérbarhed, n = 21). Referenceintervaller 10 Serum/plasma Mænd/kvinder µkat/l U/l Spontanurin Pancreas-α amylase/ kreatininratio Mænd Kvinder Mænd Kvinder µkat/l µkat/l µkat/g µkat/g U/l U/l U/g U/g Pancreas-α amylase/kreatininratio For at tillade variationer i pancreas-α amylaseaktiviteten i urin anbefales det at bestemme pancreas-α amylase/kreatininratio. Bestem pancreasα amylaseaktiviteten og kreatininkoncentrationen i spontanurin. Ratio [µkat/mmol eller U/g] = pancreas-α amylase [µkat/l eller U/l] kreatinin [mmol/l eller g/l] Amylase/kreatinin-clearance ratio (ACCR) 13 ACCR beregnes ud fra amylaseaktiviteten og kreatininkoncentrationen. Både serum- og urinprøverne skal tages/opsamles samtidig. ACCR [%] = Urinamylase [U/l] x serumkreatinin [mg/l] Serumamylase [U/l] x urinkreatinin [mg/l] x 100 ACCR er lig med ca. 2 5 % Hvert laboratorium bør undersøge muligheden for at overføre referenceintervallerne til egne patientgrupper og om nødvendigt fastsætte egne referenceintervaller. Testspecifikke performance-data Repræsentative performance-data på instrumenterne angives nedenfor. Resultaterne kan variere fra laboratorium til laboratorium. Præcision Præcisionen blev fastsat ved hjælp af humane prøver og kontroller ifølge en intern protokol med repetérbarhed (n = 21) og intermediær præcision (3 afmålte mængder pr. kørsel, 1 kørsel pr. dag, 21 dage). Følgende resultater blev opnået: Prøve Repetérbarhed Middel SD CV U/l µkat/l U/l µkat/l % Humant serum I Humant serum II Precinorm U Prøve Intermediær præcision Middel SD CV U/l µkat/l U/l µkat/l % Humant serum I Humant serum II Precinorm U Metodesammenligning Serum/plasma A. En sammenligning af pancreas-α amylasebestemmelser med EPS metoden med værdier, der er omregnet til PNPværdier (x), gav følgende korrelation (U/l): y = 0.444x y = 0.445x τ = r = Antal målte prøver (humant serum): 129 Aktiviteten i prøverne lå mellem og 42.9 µkat/l (9 og 2574 U/l). B. Brugere i USA En sammenligning af pancreas-α amylasebestemmelser med EPS metoden med værdier, der ikke er omregnet til PNP-værdier (x), gav følgende korrelation (U/l): Urin y = 1.11x y = 1.08x τ = r = Antal målte prøver (humant serum): 51 Aktiviteten i prøverne lå mellem og 23.2 µkat/l (7.92 og 1392 U/l). A. En sammenligning af pancreas-α amylasebestemmelser med EPS metoden med værdier, der er omregnet til PNPværdier (x), gav følgende korrelation (U/l): y = 0.429x y = 0.427x τ = 0.98 r = Antal målte prøver (human urin): 222 Aktiviteten i prøverne lå mellem 2.04 og 21 µkat/l (122 og 1260 U/l). B. Brugere i USA En sammenligning af pancreas-α amylasebestemmelser med EPS metoden med værdier, der ikke er omregnet til PNP-værdier (x), gav følgende korrelation (U/l): 3 / 5

4 y = 1.18x y = 1.18x τ = r = Antal målte prøver (human urin): 51 Aktiviteten i prøverne lå mellem og 20 µkat/l (3.12 og 1200 U/l). Referencer 1 Greiling H, Gressner AM, eds. Lehrbuch der Klinischen Chemie und Pathobiochemie, 3rd ed. Stuttgart/New York: Schattauer Verlag Keller H, ed. Klinisch-chemische Labordiagnostik für die Praxis, 2nd ed. Stuttgart/New York: Georg Thieme Verlag 1991: Tietz NW, Burlina A, Gerhardt W, et al. Multicenter Evaluation of a Specific Pancreatic Isoamylase Assay Based on a Double Monoclonal Antibody Technique. Clin Chem 1988;34: Junge W, Troge B, Klein G, et al. Evaluation of a New Assay for Pancreatic Amylase: Performance Characteristics and Estimation of Reference Intervals. Clin Biochem 1989;22: Rizzotti P, Klein G. Evaluation of a specific immunoinhibition method for the determination of pancreatic α-amylase. Eur J Clin Chem Clin Biochem 1994;32: Jalali MT, Laing I, Gowenlock AH, et al. Specific radioimmunoassays for human pancreatic and salivary isoamylases. Clin Chim Acta 1985;150: Harmoinen A, Jokela H, Koivula T, et al. Evaluation of a new inhibitor test for isoamylase on Hitachi 705 analyzer. J Clin Chem Clin Biochem 1986;24: Gerber M, Wulff K. Fortschritte in der spezifischen Bestimmung der Pankreas-α-amylase. Laboratoriumsmedizin 1988;12: Kruse-Jarres JD, Hafkenscheid JCM, Hohenwallner W, et al. Evaluation of a New α-amylase Assay Using 4,6-Ethylidene- (G7)-1-4-nitrophenyl-(G1)-α-D-maltoheptaoside as Substrate. J Clin Chem Clin Biochem 1989;27: Junge W, Wortmann W, Wilke B, et al. Development and evaluation of assays for the determination of total and pancreatic amylase at 37 C according to the principle recommended by the IFCC. Clin Biochem 2001;34: Kurrle-Weittenhiller A, Hölzel W, Engel D, et al. Method for the determination of total and pancreatic α-amylase based on 100 % cleavage of the protected substrate ethylidiene-4-nitrophenylmaltoheptaoside. Clin Chem 1996;42(S6):S Young DS. Effects of Preclinical Variables on Clinical Laboratory Tests. AACC Press 1997, 2nd edition Tietz NW, ed. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed. Philadelphia PA: WB Saunders Company 1995; Hohenwallner W, Hägele EO, Scholer A, et al. Bestimmung von alpha- Amylase mit p-nitrophenylmaltoheptaosid als Substrat. Ber Öster Ges Klin Chem 1983;6: Gokal R, Moberly J, Lindholm B, et al. Metabolic and laboratory effects of icodextrin. Kidney Int 2002;62(81): Glick MR, Ryder KW, Jackson SA. Graphical Comparisons of Interferences in Clinical Chemistry Instrumentation. Clin Chem 1986;32: Bakker AJ, Mücke M. Gammopathy interference in clinical chemistry assays: mechanisms, detection and prevention. Clin Chem Lab Med 2007;45(9): Lott J. Inflammatory diseases of the pancreas. CRC critical reviews in clinical laboratory sciences 1982;17: Bablok W, Passing H, Bender R, et al. A general regression procedure for method transformation. Application of linear regression procedures for method comparison studies in clinical chemistry, Part III. J Clin Chem Clin Biochem 1988 Nov;26(11): Instrumentindstillinger Amerikanske brugere: Se applikationsarket og oversigten "Special Wash Programming" (findes på usdiagnostics.roche.com) for yderligere oplysninger. Brugere af Roche/Hitachi MODULAR analyseinstrumenter: Indlæs applikationsparametrene via barkodearket. Roche/Hitachi 902 analyseinstrument No. <Chemistry> 1 Test Name P AMY 2 Assay Code (Mthd) Rate A 3 Assay Code (2. Test) 0 4 Reaction Time 10 5 Assay Point Assay Point Assay Point Assay Point Wavelength (SUB) Wavelength (MAIN) Sample Volume R1 Volume R1 Pos R1 Bottle Size Small 15 R2 Volume 0 16 R2 Pos R2 Bottle Size Small 18 R3 Volume R3 Pos R3 Bottle Size Small 21 Calib. Type (Type) Linear 22 Calib. Type (Wght) 0 23 Calib. Conc Calib. Pos Calib. Conc Calib. Pos Calib. Conc Calib. Pos Calib. Conc Calib. Pos Calib. Conc Calib. Pos Calib. Conc Calib. Pos S1 ABS 0 36 K Factor K2 Factor K3 Factor K4 Factor K5 Factor A Factor 0 42 B Factor 0 4 / 5

5 43 C Factor 0 44 SD Limit Duplicate Limit Sens. Limit S1 Abs. Limit (L) S1 Abs. Limit (H) Abs. Limit Abs. Limit (D/I) Increase 51 Prozone Limit 0 52 Proz. Limit (Upp/Low) Lower 53 Prozone (Endpoint) Expect. Value (L) Expect. Value (H) Instr. Fact. (a) 1 57 Instr. Fact. (b) 0 58 Key setting Data indtastes af brugeren For yderligere oplysninger henvises til brugermanualen til det pågældende analyseapparat, de aktuelle applikationsark og metodeblade til alle nødvendige komponenter. I dette metodeblad anvendes altid punktum som skilletegn for at markere grænsen mellem hele tal og decimaler i et decimaltal. Skilletegn for tusinder anvendes ikke. Symboler Roche Diagnostics anvender nedenstående tegn og symboler ud over dem, der er angivet i ISO standarden. GTIN Indhold i pakning Reagens Kalibrator Mængde efter rekonstituering eller blanding Global Trade Item Number Væsentlige tilføjelser eller ændringer er vist ved en streg i margenen. 2014, Roche Diagnostics Roche Diagnostics GmbH, Sandhofer Strasse 116, D Mannheim Distribution i USA af: Roche Diagnostics, Indianpolis, IN US Customer Technical Support / 5