100 (20 5) tests 71110 Passiv partikelagglutinationstest til konstatering af antistoffer mod HIV-1 og/eller HIV-2 i humant serum eller plasma IVD Producentens kvalitetskontrol Alle producerede og kommercialiserede reagenser er underlagt et komplet kvalitetssystem lige fra modtagelsen af råmaterialet til den endelige kommercialisering af produktet. Hvert parti sendes til kvalitetskontrol og frigives kun til markedet, hvis det opfylder de fastsatte godkendelseskriterier. Dokumentationen i forbindelse med produktion og kontrol af hvert parti opbevares i virksomheden. 127
INDHOLDSFORTEGNELSE 1. FORMÅL 2. ANALYSEPRINCIP 3. INDHOLDET AF SFD HIV 1/2 PA-KITTET 4. NØDVENDIGT MATERIALE, DER IKKE MEDFØLGER 5. FORHOLDSREGLER 6. SUNDHEDS- OG SIKKERHEDSMÆSSIGE FORHOLDSREGLER 7. REKONSTITUERING AF REAGENSER 8. HOLDBARHED OPBEVARING 9. FORBEREDELSE AF PRØVER 10. ANALYSEPROCEDURE 11. VALIDERING OG FORTOLKNING AF RESULTATER 12. ABSORPTIONSPROCEDURE 13. YDEEVNE 14. TESTENS BEGRÆNSNINGER 15. LITTERATURLISTE 128
1. FORMÅL SFD HIV 1/2 PA er beregnet til konstatering af antistoffer mod HIV-1 og/eller HIV-2 og som en hjælp i diagnosticeringen af HIV-1- og/eller HIV-2-infektion. Testen er ideel til screening af bloddonorer og personer i højrisikogrupperne. Testen kan udføres på plasma- eller serumprøver. 2. ANALYSEPRINCIP SFD HIV 1/2 PA er en "in vitro" diagnosticeringstest til konstatering af antistoffer mod HIV-1 og/eller HIV-2, som er fremstillet ved hjælp af gelatinepartikel, belagt med rekombinante HIV-1-antigener (HIV-1/gp 41 og HIV-1/p 24) og HIV-2-antigen (HIV-2/gp 36). Testen SFD HIV 1/2 PA (partikelagglutination) er baseret på et princip, der går ud fra, at belagte partikler bliver agglutineret af de tilstedeværende antistoffer mod HIV-1 og/eller HIV-2 i humant serum eller plasma. 3. INDHOLDET AF SFD HIV 1/2 PA-KITTET Alle reagenser i kittet er beregnet til in vitro diagnosticering. Kittet indeholder tilstrækkelige mængder reagens til at udføre 100 kvalitative test. Hvert kit indeholder følgende reagenser og tilbehør: Maks. antal analyser screening 100 (20 5) Rekonstitueringsopløsning (Væske) (A) 10 ml 1 flaske Prøvefortynder (Væske) (B) 20 ml 1 flaske Reagenser antigen belagte partikler (Frysetørrede) (C) 0,6 ml* 5 flasker Kontrolpartikler (Frysetørrede) (D) 1,0 ml* 5 flasker Positiv Kontrol- (Væske) (E) 0,5 ml 1 flaske * Efter rekonstituering (for at rekonstituer med den angivne mængde = * af A-opløsning) Tilbehør: Pipetter: 2 stk. ( µl) A. Rekonstitueringsopløsning (væske) Til rekonstituering af de belagte partikler og kontrolpartikler. Denne reagens indeholder 0,1 % (w/v) natriumazid som konserveringsmiddel. B. Prøvefortynder (væske) Til fortynding af testmateriale. Denne reagens indeholder 0,1 % (w/v) natriumazid som konserveringsmiddel. 129
C. Belagte partikler (frysetørrede) Frysetørredegelatinpartikler, der er belagt med rekombinante HIV-1-antigener (gp 41 og p 24) og HIV-2-antigen (gp 36), der rekonstitueres ved at tilsætte den foreskrevne mængde rekonstitueringsopløsning (som vist på tabellen ovenfor). Den rekonstituerede reagens indeholder 1 % gelatinepartikler, der er belagt med rekombinant HIV-1/2-antigener og 0,1 % (w/v) natriumazid som konserveringsmiddel. D. Kontrolpartikler (frysetørrede) Rekonstitueres ved at tilsætte den foreskrevne mængde rekonstituerinsopløsning (som vist på tabellen ovenfor). Rekonstituerede partikler indeholder 1 % gelatinepartikler, der er belagt med E. coli-ekstrakt og 0,1 % natriumazid som konserveringsmiddel). E. Positiv kontrol (væske) Forberedelse af væske, der indeholder monoklonale HIV-1- og HIV-2-antistoffer fra mus. Kontrollen giver en antistoftiter på 1:128 (± 1 fortynding) ved den endelige fortynding, når den testes ifølge analyseproceduren for positive kontroller (se Tabel 2). Denne reagens indeholder 0,1 % (w/v) natriumazid som konserveringsmiddel. De to pipetter ( µl), som følger med kittet, er direkte designet til at fordele de rekonstituerede, belagte partikler eller kontrolpartikler. Alle reagenser indeholder normalt kaninserum. 4. NØDVENDIGT MATERIALE, DER IKKE MEDFØLGER Destilleret vand Natriumhypoklorit og natriumbikarbonat Engangshandsker Mikrotiterplader, hvor brøndene har rund bund (U-formede FASTEC-type). Mikropipetter med spidser, der kan fordele µl ved fordeling og fortynding af prøver. Volumetriske pipetter, der kan fordele 1,0 ml og 5,0 ml til rekonstituering af partiklerne. Bakkemixer (valgfri): Automatisk vibratorryster (ikke en roterende mixer) til at blande indholdet grundigt. 130
Bakkeaflæser (valgfri): Til aflæsning Beholder til farligt biologisk affald NB: Der må kun anvendes U-formede mikrotiterplader (f.eks. Fujirebio FASTEC-plader) til denne analyse. Brugen af fleksible plader anbefales ikke, eftersom overfladen ikke er glat og kan forstyrre restens resultater. Genbrug af mikrotiterplader anbefales ikke. Hvis genbrug af mikrotiterplader ønskes, er det imidlertid vigtigt at være særligt omhyggelig med rengøringen af mikrotiterpladen, før den genbruges, ellers kan reaktionen blive forstyrret. Sørg for at fjerne alle rester af desinficerende midler eller rengøringsmidler. 5. FORHOLDSREGLER Resultaternes pålidelighed afhænger af en korrekt overholdelse af følgende regler for god laboratoriepraksis: Undgå at anvende forældede reagenser. Bland ikke reagenser fra forskellige partier i samme testkørsel. Vent 30 minutter, før reagenserne tages i brug, så de kan stabilisere sig ved stuetemperatur (15-30 C). Rekonstituer reagenserne omhyggeligt for at undgå kontamination. Benyt engangsmateriale, eller hvis dette ikke er muligt, udstyr af glas, som er vasket grundigt og skyllet med destilleret vand. Brug en ny pipettespids til hver prøve. Kontroller, at pipetterne er præcise og nøjagtige, og at de instrumenter, der anvendes, fungerer korrekt. Analyseproceduren må ikke ændres. 6. SUNDHEDS- OG SIKKERHEDSMÆSSIGE FORHOLDSREGLER Alle reagenserne i kittet er beregnet til "in vitro"- diagnosticering. Benyt engangshandsker, når reagenserne og prøverne håndteres, og vask hænderne grundigt efter håndteringen. Undgå at pipettere med munden. 131
Da der ikke er kendskab til en testmetode, der med garanti kan sikre, at HIV, Hepatitis B eller C vira eller andre smitstoffer ikke forekommer, skal disse patientprøver betragtes som potentielt smitsomme og håndteres varsomt. Alt udstyr, der har været i direkte kontakt med prøver, skal betragtes som kontaminerede produkter og behandles i overensstemmelse hermed. Undgå at spilde prøver eller opløsninger, der indeholder prøvemateriale. K o n t a m i n e r e d e o v e r fl a d e r s k a l r e n g ø r e s m e d natriumhypoklorit i en opløsning på 10 %. Hvis den kontaminerende væske er en syre, skal de kontaminerede overflader først neutraliseres med natriumbikarbonat, derefter renses med natriumhypoklorit og tørres med sugende papir. Det materiale, der anvendes til rengøringen, skal kasseres og placeres i en beholder til biologisk farligt affald. Prøver, reagenser af humant kildemateriale samt kontaminerede materialer og produkter skal kasseres efter desinficering: - enten ved nedsænkning i natriumhypoklorit med en slutkoncentration på 10% natriumhypoklorit (1 del natriumhypoklorit til 10 dele kontamineret væske eller vand) i 30 minutter - eller ved autoklavering ved 121 C i mindst to timer. Autoklavering er den bedste metode til at deaktivere HIV og HBV. ADVARSEL: UNDGÅ AT PLACERE OPLØSNINGER, DER INDEHOLDER NATRIUMHYPOKLORIT, I AUTOKLAVEN. Husk at neutralisere og/eller autoklavere affaldsopløsninger fra afvaskningen eller enhver anden væske, der indeholder biologisk prøvemateriale, før de hældes i afløbet. Materialesikkerhedsdataarket udleveres ved henvendelse. Kemikalier s k a l håndteres og kasseres ifølge god laboratoriepraksis. N o g l e r e a g e n s e r i n d e h o l d e r n a t r i u m a z i d s o m konserveringsmiddel. Natriumazid kan danne kobber- og blyazider i laboratoriets rørledninger. Disse azider er eksplosive. Undgå dannelse af azider ved at skylle rørene med rigelige mængder vand, hvis opløsninger med azidindhold hældes i afløbet efter deaktivering. 132
7. REKONSTITUERING AF REAGENSER Bemærk! Lad reagenserne stabilisere sig ved stuetemperatur (15-30 C), før de anvendes. a) Brugsklare reagenser: Reagens A : Rekonstitueringsopløsning Reagens B : Prøvefortynder Reagens E : Positiv Kontrol b) Reagenser, der skal rekonstitueres: Reagens C : Belagte partikler S å d a n r e k o n s t i t u e r e s m e d f ø l g e n d e m æ n g d e rekonstitueringsopløsning (Reagens A): - 0,6 ml til kittet med 100 test Reagens D : Kontrolpartikler S å d a n r e k o n s t i t u e r e s m e d f ø l g e n d e m æ n g d e rekonstitueringsopløsning (Reagens A): - 1 ml til kittet med 100 test N B : O P L Ø S N I N G E N A F B E L A G T E P A R T I K L E R O G KONTROLPARTIKLER SKAL HOMOGENISERES VED AT RYSTE OG VENDE BLANDINGEN FORSIGTIGT LIGE FØR FORDELINGEN. 8. HOLDBARHED OPBEVARING Opbevar kittet ved 2-10 C. Efter åbning kan reagenserne i kittet opbevares ved 2-10 C, indtil udløbsdatoen på pakken, med mindre andet er angivet: R(C) og R(D): De frysetørrede reagenser, som findes i kittet, skal helst anvendes den samme dag som de rekonstitueres. De er imidlertid holdbare i 14 dage efter rekonstitueringen, hvis de opbevares korrekt (2-10 C) og ifølge de testprocedurer, der er beskrevet på indlægssedlen. 9. FORBEREDELSE AF PRØVER Tag en blodprøve i overensstemmelse med gældende praksis. Testen skal udføres på ufortyndede serum- eller plasmaprøver (der er indsamlet sammen med antikoagulerende stoffer som f.eks. EDTA, heparin eller citratbaserede antikoagulanter). Udskil serummet eller plasmaet fra koaglet eller de røde blodlegemer, så snart det er muligt, for at undgå hæmolyse. Udbredt hæmolyse kan påvirke testresultatet. Prøver med aggregater skal renses ved centrifugering forud for testen. 133
Opslæmmede fibrinpartikler eller aggregater kan give fejlagtigt positive resultater. Prøvematerialet kan opbevares ved 2-8 C, hvis screeningen udføres inden for syv dage, eller det kan dybfryses ved -20 C. Undgå gentagen nedfrysning og optøning. Hvis prøverne skal sendes, skal de pakkes ifølge de gældende bestemmelser angående transport af ætiologiske stoffer. Deaktivering af serumprøver kan udføres ved hjælp af standardinaktivering: opbevaring ved 56ºC i 30 minutter. UNDGÅ AT ANVENDE KONTAMINEREDE, HYPERLIPÆMISKE ELLER HYPERHÆMOLYSEREDE SERUM- ELLER PLASMAPRØVER. Bemærk! Der er ikke observeret interferens for koncentration af bilirubin op til 21,5 mg/dl, af hæmoglobin op til 560 mg/dl og for chylomikronturbiditet op til 2300. 10. ANALYSEPROCEDURE Indledende bemærkninger: 1. Prøvemateriale, der er fundet positive med den kvalitative SFD HIV 1/2 PA-test skal testes igen i en dobbelttest. Hvis en eller begge gentagne test er positive eller ubestemmelige, skal prøverne testes igen ved hjælp af den semikvantitive procedure. 2. Når den semikvantitative procedure udføres, er det ikke usædvanligt at se prøver med titre et godt stykke over brønd # 12. Yderligere fortynding af disse prøver kan være nødvendig, før fordeling af dem på mikrotiterpladen, med henblik på de endelige bestemmelser i den semikvantitative test. 3. Det anbefales at udføre en reagenskontroltest for kvalitative og semikvantitative test (som vist i tabel 1). 134
Tabel 1 Brug af reagenskontroltest Brønd n 1 2 Prøverfortynder (µl) Kontrolpartikler (µl) Belagte partikler (µl) Bland ved hjælp af bakkemixer (automatisk vibratorryster), tildæk pladen, og inkuber i 2 timer Fortolkning Kvalitativ analysemetode (Tabel 2) a. Brug en mikropipette til at placere 75µl (3 dråber á µl) prøverfortynder i brønd # 1 på mikrotiterpladen og µl (1 dråbe á µl) i hver af brøndene # 2 og # 3. b. Brug en mikropipette til at tilføje µl serum/plasma prøvemateriale i brønd # 1. Bland indholdet af brønd # 1 ved at fylde og tømme mikropipetten 5 eller 6 gange. Brug en mikropipette til at overføre µl af den fortyndede opløsning fra brønd # 1 til brønd # 2. Bland indholdet af brønd # 2 som beskrevet ovenfor, og overfør µl i brønd # 3. Benyt samme procedure, bland indholdet af brønd # 3, og kasser µl af den opløsning, der findes i pipetten efter blandingen. c. Brug en af de pipetter, der findes i kittet, til at placere µl (1 dråbe) rekonstituerede kontrolpartikler i brønd #2. Brug den anden pipette til at placere µl (1 dråbe) rekonstituerede, belagte partikler i brønd # 3. d. Bland indholdet af brøndene grundigt ved hjælp af en bakkemixer (automatisk vibratorryster). Hvis ingen mixer haves, bankes hårdt 5 6 gange på alle pladens fire hjørner med fingeren. Tildæk pladen, og placer den på en stabil flade. Lad den stå ved stuetemperatur (15-30 C) i 2 timer, før aflæsning. 135
Tabel 2 Kvalitativ testprocedure Brønd N 1 2 3 Prøvefortynder (µl) 75 Prøvemateriale (µl) Prøvefortynder 1:4 1:8 1:16 Kontrolpartikler (µl) Belagte partikler (µl) Endelig fortynding 1:16 1:32 Bland ved hjælp af en bakke mixer (automatisk vibratorryster), tildæk pladen, og inkuber i 2 timer. Fortolkning Kasser Semikvalitativ analysemetode (Tabel 3) Det anbefales, at prøvemateriale, der viser gentagne positive reaktioner i den kvantitative analyse, bliver testet igen i den semikvantitative analyse for at opnå en nøjagtig fortolkning. a. Brug en mikropipette til at placere 75 µl (3 dråber á µl) prøvefortynder i brønd # 1 på en mikrotiterplade og µl (1 dråbe á µl) i brøndene # 2 - # 12. b. Brug en mikropipette til at tilføje µl serum/plasma prøvemateriale i brønd # 1. Bland indholdet af brønd # 1 ved at fylde og tømme mikropipetten 5 eller 6 gange. Brug derefter mikropipetten til at overføre µl af den fortyndede opløsning fra brønd # 1 til brønd # 2, og bland indholdet som beskrevet ovenfor. Hvis en dobbeltfortynding skal udføres, gentages proceduren for blanding og overførsel for resten af brøndene, fra brønd # 3 til brønd #12, som vist i Tabel 3. Med henblik på at sikre nøjagtigheden skal den positive kontrol køres parallelt med de prøver, der bliver testet, og resultatet for den positive kontrol skal være 1:128, plus eller minus en enkelt fortynding. c. Brug en af de pipetter, der findes i kittet, til at placere µl (1 dråbe) rekonstituerede kontrolpartikler i brønd # 2. Brug den anden pipette til at placere µl (1 dråbe) belagte partikler i hver brønd med start fra brønd # 3 og frem til brønd # 12. 136
d. Bland indholdet af brøndene grundigt ved hjælp af en bakkemixer (automatisk vibratorryster). Hvis ingen mixer haves, bankes hårdt 5 6 gange på pladens fire hjørner med fingeren. Tildæk pladen, og placer den på en stabil flade. Lad den stå ved stuetemperatur (15-30 C) i 2 timer, før aflæsning. Tabel 3 Semikvantitativ analyse Brønd N 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 Prøvefortynder (µl) Prøvemateriale eller positiv kontrol (µl) 75 Prøvefortynder 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128 1:6 1:512 1:1024 1:2048 1:4096 1:8192 Kontrolpartikler (µl) belagte partikler (µl) Endelig fortynding 1:16 1:32 1:64 1:128 1:6 1:512 1:1024 1:2048 1:4096 1:8192 1:16384 Fortsæt prøvefortyndingen for brøndene 2 12 Bland ved hjælp af bakkemixeren (automatisk vibratorryster), tildæk pladen, og inkuber i 2 timer. Fortolkning Kasser 11. VALIDERING OG FORTOLKNING AF RESULTATER Validering af test: a. For semikvantitative og kvalitative skal det bekræftes, at reaktionen for alle prøver og kontrolpartikler (endelig fortynding på 1:16) er negativ (-). b. V e d r e a g e n s k o n t r o l t e s t e n m å b l a n d i n g e n a f prøvefortynder, både med rekonstituerede, belagte partikler og kontrolpartikler, ikke give nogen reaktion (-) i nogen testkørsel (reagenskontrol). c. For den semikvantitative test skal det bekræftes, at titeren for den positive kontrol er 1:128 (± 1 fortynding) ved den endelige fortynding ifølge de testprocedurer, der er beskrevet i Tabel 3. 137
Aflæsning og fortolkning af agglutinationer: Agglutinationer kan fortolkes visuelt eller ved at placere mikrotiterpladen forsigtigt på en valgfri bakkeviser med indirekte belysning og sammenligne agglutinationsmønstrene med reagenskontrollens mønstre. Se kriterierne i Tabel 4 for at fortolke resultaterne. Tabel 4 Aflæsning og fortolkning af agglutinationer Indstilling af partikelmønstre Aflæsning Fortolkning Partiklerne er koncentreret i en rund form i midten af brønden. Der er en blød, rund yderkant. (-) Negativ Partiklerne er koncentreret i en kompakt ring med en blød, rund yderkant. (+) 138 Ubestemmelig (se bemærkning nedenfor) Partiklerne danner en stor ring med en ujævn, varieret yderkant. Der forekommer perifer (+) agglutination. Positiv Tydeligt agglutinerede partikler dækker (++) brøndens bund helt. Bemærk! Prøver, der viser ubestemmelige resultater (±), skal testes igen ifølge testprocedurerne i Tabel 3 (semikvantitativ analysemetode). Gentagelse af ubestemmelige (±) eller reaktive resultater skal bekræftes ved hjælp af andre metoder for at sikre en nøjagtig fortolkning. Se "14. TESTENS BEGRÆNSNINGER" nedenfor for at få ydeligere oplysninger. Kriterier for fortolkning: En prøve, der viser en negativ reaktion for kontrolpartiklerne (endelig fortynding på 1:16), men viser agglutination for den belagte partikler (endelig prøvefortynding på 1:32 eller mere), betragtes som en positiv reaktion på HIV. Prøver, der viser en positiv reaktion for kontrolpartiklerne og en negativ reaktion for de belagte partikler, bliver betragtet som en negativ reaktion på HIV. Arbejdsarket der medfølger separat skal bruges til at behandle resultaterne. Kontakt venligst leverandøren af denne test for at få arbejdsarket.
Tabel 5 Kriterier for fortolkning Kontrolpartikler Belagte partikler Bedømmelse - + Positiv - - Negativ + - Negativ + + Ubestemmelig Efter absorption ved hjælp af kontrolpartikler* - + Positiv - - Negativ * Nogle prøver kan kræve 2 absorptioner. 12. ABSORPTIONSPROCEDURE Hvis en prøve fremkalder agglutination (± eller positiv) for både kontrollen og de belagte partikler, skal den testes igen på følgende måde: a. Placer 0,35 ml rekonstituerede kontrolpartikler i et lille reagensglas. b. Tilsæt 50 µl prøvemateriale til reagensglasset, og bland de grundigt ved hjælp af en Vortex-mixer. Inkuber ved stuetemperatur (15-30 C) i mindst 20 minutter. c. Centrifuger i 5 minutter ved 2.000 rpm. Tag derefter 50 µl af supernatanten (absorberet prøvefortynding i forholdet 1:8), og placer den forsigtigt i brønd # 2 (se Tabel 3). d. Tilsæt µl prøvefortynder i brønd # 3 og alle andre brønde frem til brønd # 12. Overføre derefter µl af det absorberede prøvemateriale fra brønd # 2 til brønd # 3, og bland det grundigt ifølge den procedure, der er beskrevet for den semikvantitative analyse. Gentag proceduren for brønd # 3 og frem til brønd # 12 for at opnå en dobbeltfortynding (se Tabel 3). 13. YDEEVNE Sensitivitet Der blev udført sensitivitetsundersøgelser for SFD HIV1/2 139
PA-kittet på dokumenterede prøver fra patienter, der var inficeret med HIV. Konstateringen af bekræftede HIV-positive prøver blev evalueret ud fra: 486 HIV-1 gruppe M prøver med 134 serotypebestemte prøver (undertyperne A, B, C, D, E, F og G). Sensitiviteten var 100 % for disse prøver. 24 HIV-1 gruppe O prøver. Alle blev fundet positive. 173 HIV-2-prøver. Alle blev fundet positive. Den tidlige konstatering er evalueret ud fra: D e r b l e v t e s t e t S F T S ( F r e n c h s o c i e t y o f B l o o d Bank)-serokonvertering og kommercielle paneler (BBI, NABI). Resultaterne svarer næsten til resultaterne for en række EIA-test, som er anerkendt for at have den bedste antistofsensitivitet. SFTS-panel: 10 ud af 11 prøver på "per-serokonvertering" blev fundet positive med SFD HIV 1/2 PA-kittet. Der blev testet 31 kommercielle paneler med SFD HIV1/2 PA-kittet. Følgende tabel viser den første påviste prøve i hvert panel. Panel 1. påviste prøve Panel 1. påviste prøve Panel 1. påviste prøve BBI S 2 BBI AH 2 NABI 211 C BBI T 2 BBI AI 2 NABI 241 D BBI U 2 BBI AJ 7 NABI 1 F BBI W 10 BBI AK 6 NABI 261 D BBI X 6 BBI AL 6 NABI 271 C BBI Y 5 BBI AM 3 BBI Z 5 BBI AS 6 BBI AB 3 BBI AT 5 BBI AC 2 BBI AW 2 BBI AD 6 BBI AY 5 BBI AE 3 BBI BA 6 BBI AF 6 BBI BB 4 BBI AG 4 BBI BD 7 140
Specificitet Specificiteten for 5041 tilfældigt valgte bloddonorer var 99,74 %. 418 prøver var positive for andre markører (HTLV-1, HSV, VZV), eller der blev testet prøver fra gravide kvinder og patienter med rheumatoid arthritis. Kun en enkelt prøve var reaktiv. Specificiteten for denne befolkningsgruppe var således 99,76 %. Nøjagtighed Der blev udført nøjagtighedsanalyser i samme analyseserie for 3 HIV-1-positive prøver (P-1, 2, 3), som blev testet 5 gange i træk med 3 forskellige partier ifølge testprocedurerne. Alle resultater blev fundet inden for en enkelt brønds (en enkelt dobbeltfortynding) variation. Parti 1-930126 Parti 2-930408 Parti 3-930422 Prøve P-1 P-2 P-3 P-1 P-2 P-3 P-1 P-2 P-3 1 1 :1024 1 :6 1 :64 1 :2048 1 :512 1 :128 1 :1024 1 :6 1 :64 2 1 :1024 1 :6 1 :64 1 :2048 1 :512 1 :128 1 :1024 1 :6 1 :64 3 1 :1024 1 :6 1 :64 1 :2048 1 :512 1 :128 1 :1024 1 :128 1 :64 4 1 :1024 1 :6 1 :64 1 :2048 1 :512 1 :128 1 :1024 1 :6 1 :64 5 1 :1024 1 :6 1 :128 1 :2048 1 :512 1 :128 1 :1024 1 :6 1 :64 Gennems 1 :1024 1 :6 nit 1 :64 1 :2048 1 :512 1 :128 1 :1024 1 :6 1 :64 Variation +/- 0 fort +/- 0 fort +1 fort +/- 0 fort +/- 0 fort +/- 0 fort +/- 0 fort - 1 fort +/- 0 fort Der blev udført nøjagtighedsanalyser mellem analyseserier på 10 positive HIV-1- eller HIV-2-prøver, som blev testet af 3 forskellige personer ifølge testprocedurerne. Alle resultater blev fundet inden for en enkelt brønds (en enkelt dobbeltfortynding) variation. 141
A B C Måde Variation Prøve 1 1 :1024 1 :1024 1 :1024 1 :1024 +/- 0 fort Prøve 2 1 :6 1 :6 1 :6 1 :6 +/- 0 fort Prøve 3 1 :6 1 :6 1 :6 1 :6 +/- 0 fort Prøve 4 1 :64 1 :64 1 :32 1 :64-1 fort Prøve 5 1 :32 1 :32 1 :32 1 :32 +/- 0 fort Prøve 6 1 :2048 1 :2048 1 :2048 1 :2048 +/- 0 fort Prøve 7 1 :512 1 :512 1 :6 1 :512-1 fort Prøve 8 1 :512 1 :512 1 :512 1 :512 +/- 0 fort Prøve 9 1 :128 1 :128 1 :128 1 :128 +/- 0 fort Prøve 10 1 :128 1 :128 1 :128 1 :128 +/- 0 fort 14. TESTENS BEGRÆNSNINGER Dette kit er udelukkende designet med henblik på konstatering af HIV-relaterede antistoffer i serum- eller plasmaprøver. Testen kan imidlertid ikke påvise HIV direkte. Som følge heraf: Selvom testen er negativ hvilket angiver, at den testede prøve ikke indeholder antistoffer mod HIV kan muligheden for en HIV-infektion ikke udelukkes. Kliniske symptomer og andre oplysninger skal benyttes i den kliniske diagnosticering. Et positivt eller negativt testresultatet angiver ikke en konkluderende diagnose på en HIV-infektion, eller manglen på samme. En sammenlignende bedømmelse af patientens tilstand skal bestå af en omhyggelig analyse af patientens kliniske symptomer og fortolkningen af resultaterne af de tilgængelige test for sygdommen. Ved den kliniske diagnosticering skal prøver, der viser positive resultater med SFD HIV 1/2 PA-kittet, testes igen med forskellige tidsintervaller og og resultaterne skal sammenlignes. Når det er muligt, skal der udføres bekræftende test af alle prøver, der er positive, ved hjælp af den semikvantitative test. Vibrationer (f.eks. på grund af centrifugen) kan påvirke resultaternes kvalitet. Prozonefænomentet forekommer sjældent i tydeligt positive prøver, og det er ikke blevet observeret under 142
evalueringerne. Hvis andre mikrotiterplader bruges end U-formede mikrotiterplader, kan resultaternes kvalitet blive påvirket og endda forhindre agglutinationen. 143
15. LITTERATURLISTE BARRE-SINOUSSI F., CHERMANN J.C., REY F. et al. Isolation of a T. lymphotropic retrovirus from a patient at risk for acquired immunodeficiency syndrome (AIDS). Science, 1983, 220, 868-871 ALIZON M., SONIGO P., BARRE-SINOUSSI F. et al. Molecular cloning of lymphadenopathy associated virus. Nature, 1984, 312, 757-760 CLAVEL F., GUYADER M., GUETARD D. et al. Molecular cloning and polymorphism of the human immune deficiency virus type 2. Nature, 1986, 324, 691-695 McKEATING J.A., WILLEY R.L. Structure and function of the HIV envelope. AIDS, 1989, 3, S35-S41 ZAAUER H.L., EXEL-OEHLERS P.V., KRAAUEVELD T. et al. Early detection of antibodies to HIV1 by third-generation assays. Lancet, 1992, 340, 770-772
CONSTANTINE N.T., VAN DER GROEN G., BELSEY E.M. et al. S e n s i t i v i t y o f H I V a n t i b o d y a s s a y s d e t e r m i n e d b y seroconversion panels. AIDS, 1994, 8, 1715-1720 WASI C. et al. Evaluation of two screening tests for anti-hiv : ELISA versus particle agglutination. Virus Information Exchange Newsletter, 1988, 5, 92 Sng E.H. et al. Comparative evaluation of a particle agglutination test for human immunodeficiency virus antibody, Genitourin Med, 1988, 64, 266-269 OHYA K. et al. Screening of blood donors for antibody to human immunodeficiency virus type I by sensitive particle agglutination assay. Vox Sang, 1988, 55, 148-151 SEKIGUCHI S. et al. An automated screening test for antibodies to human immunodeficiency virus 1. Transfusion, 1988, 28, 581-585 YOSHIDA T. et al. Evaluation of passive particle agglutination test for antibody to human immunodeficiency virus. J Clin Microbiol, 1987,, 1433-1437 SPIELBERG F. et al. Field testing and comparative evaluation of rapid, visually read screening assays for antibody to human immunodeficiency virus. Lancet, 1989, i, Mar.18, 580-584 HEALY D.S. et al. Detection of anti-hiv immunoglobulin M by particle agglutination following acute HIV infection. AIDS 1989, 3, 301-304 HENDLER H. et al. Estudio comparativo de las technicas de aglutinacion de particulas (AP) enzimoinmunoenzay o (EIE) en la deteccion de anticuerpos anti-virus de immunodeficiencia humana tipo 1 (VIHA) en donantes de sangre. Revista Argentina de Transfusion, 1989, XV, 165-168.
FUJIREBIO Inc. FR Bldg., 62-5 Nihonbashi- Hamacho 2-chome, Chuo-ku, Tokyo 103-0007, Japan Tel. : +81 3 5695 9200 Fax : +81 3 5695 9230 EC REP Bio-Rad 3, Bd Raymond Poincaré 92430 MARNES LA COQUETTE FRANCE Tél : 33 1 47 95 60 00 Fax : 33 1 47 41 91 33 0123 code : MZ03T 05/2009