QIAsymphony SP Protokolside Cellfree500_V3_DSP protokol Generel information Til in vitro-diagnostisk brug. Kit Prøvemateriale Protokolnavn QIAsymphony DSP Virus/Pathogen Midi-kit Plasma, serum og CSF Cellfree500_V3_DSP Standard analysekontrolsæt ACS_ Cellfree500_V3_DSP_default_IC Redigerbart Elueringsvolumen: 60 μl, 85 μl, 110 μl Påkrævet software-version Version 3.5 Sample (Prøve) -skuffe Prøvetype Prøvevolumen Plasma, serum og CSF Afhænger af den anvendte type prøverør; for yderligere oplysninger, se www.qiagen.com/goto/dsphandbooks Primære prøverør Se www.qiagen.com/goto/dsphandbooks for yderligere oplysninger Sekundære prøverør Se www.qiagen.com/goto/dsphandbooks for yderligere oplysninger Indsatser Andet Afhænger af den anvendte type prøverør; for yderligere oplysninger, se www.qiagen.com/goto/dsphandbooks Bærer RNA buffer AVE-blanding påkrævet; anvendelse af intern kontrol er valgfri Sample & Assay Technologies
Reagents and Consumables (Reagenser og forbrugsartikler) -skuffen Position A1 og/eller A2 Position B1 Spids-rackholder 1 17 Spids-rackholder 1 17 Enhedsboks-holder 1 4 Enhedsboks-holder 1 4 Reagensbeholder (RC) Ikke aktuelt Engangsfilterspidser, 200 μl Engangsfilterspidser, 1500 μl Enhedsbokse indeholdende prøveklargøringsbeholdere Enhedsbokse indeholdende 8-stavs-dæksler Waste (Affal) -skuffe Enhedsboks-holder 1 4 Affaldssæk-holder Holder til flaske med flydende affald Tomme enhedsbokse Affaldssæk Flaske med flydende affald Eluate (Eluat) -skuffe Eluerings-rack (vi anbefaler at anvende rende 1, køleposition) Se www.qiagen.com/goto/dsphandbooks for yderligere oplysninger QIAsymphony SP Protokolside: Cellfree500_V3_DSP side 2 af 6
Påkrævede plastmaterialer Et batch, 24 To batches, Tre batches, Fire batches, prøver* 48 prøver* 72 prøver* 96 prøver* Engangsfilterspids er, 200 μl Engangsfilterspids er, 1500 μl Prøveklargøringsb eholdere 32 56 80 104 109 198 297 386 21 42 63 84 8-stavs-dæksler 3 6 9 12 * Brug af mere end en intern kontrol per batch og udførelse af mere end en indholdsscanning kræver ekstra engangsfilterspidser. Brug af mindre end 24 prøver per batch sænker antallet af nødvendige engangsfilterspidser per kørsel. Der er 32 filterspidser/spids-rack. Antallet af påkrævede filterspidser omfatter filterspidser til 1 indholds-scanning per reagensbeholder. Der er 28 prøveklargøringsbeholdere/enhedsboks. Der er 12 8-stavsdæksler/enhedsboks. Bemærk: Det angivne antal filterspidser kan afvige fra de tal, der vises på berøringsskærmen, afhængigt af indstillingerne, for eksempel antallet af interne kontroller, der anvendes per batch. Valgt elueringsvolumen Valgt elueringsvolumen (μl)* Start-elueringsvolumen (μl) 60 90 85 115 110 140 * Det elueringsvolumen, der er valgt på berøringsskærmen. Dette er det mindste tilgængelige eluatvoluen i det sidste elueringsrør. Startvolumen for påkrævet elueringsopløsning til sikring af, at det faktiske eluatvolumen er det samme som det valgte volumen. QIAsymphony SP Protokolside: Cellfree500_V3_DSP side 3 af 6
Klargøring af intern kontrol bærer-rna (CARRIER) Buffer AVE (AVE) -blanding Volumen stamopløsni ng bærer- Valgt RNA Volumen Volumen elueringsvolumen (CARRIER) intern buffer AVE Slutvolumen (μl) (μl) kontrol (μl)* (AVE) (μl) per prøve (μl) 60 5 9 106 120 85 5 11,5 103,5 120 110 5 14 101 120 * Beregningen af mængden af intern kontrol er baseret på start-elueringsvolumener. Ekstra tom-volumen afhænger af den anvendte type prøverør; se www.qiagen.com/goto/dsphandbooks for yderligere oplysninger. Bemærk: De værdier, der er vist i tabellen, er til klargøring af intern kontrol bærer RNA (CARRIER) blanding til en senere analyse, der kræver 0,1 μl intern kontrol/μl eluat. Rør indeholdende intern kontrol-bærer-rna (CARRIER) Buffer AVE (AVE) -blandinger placeres i en rørholder. Rørholderen med de(n) interne kontrol-bærer-rna (CARRIER) Buffer AVE (AVE)- blanding(er) skal placeres i plads A i prøveskuffen. Afhængig af antallet af prøver, der skal behandles, anbefaler vi at anvende 2 ml-rør (Sarstedt, katalognr. 72.693 eller 72.694) eller 14 ml 17 x 100 mm rør af polystyren med rund bund (Becton Dickinson, katalognr. 352051) til fortynding af den interne kontrol, som beskrevet i tabellen på side 5. Det er muligt at dele volumen i 2 eller flere rør. QIAsymphony SP Protokolside: Cellfree500_V3_DSP side 4 af 6
Beregning af volumen af den interne kontrolblanding Rørtype Mikrorør 2 ml med hætte; mikrorør 2 ml, PP, MED KRAVE (Sarstedt, katalognr. 72.694) Mikrorør 2 ml med hætte; mikrorør 2 ml, PP, UDEN KRAVE (Sarstedt, katalognr. 72.693) Tube 14 ml, 17 x 100 mm af polystyren med rund bund (Becton Dickinson, katalognr. 352051) Navn på QlAsymphonyberøringsskærm SAR NR. 72.694 T2.0 ScrewSkirt SAR NR. 72.693 T2.0 Screw BD NR. 352051 FalconPP 17x100 Beregning af intern kontrol bærer-rna (CARRIER) Buffer AVE (AVE) -blandingsvolumen pr. rør (n x 120 μl) + 360 μl* (n x 120 μl) + 360 μl* (n x 120 μl) + 600 μl * Brug denne ligning til at beregne den påkrævede mængde intern kontrolblanding (n = antal prøver; 120 μl = mængden af intern kontrol bærer-rna (CARRIER) Buffer AVE (AVE) -blanding; 360 μl = porevolumen påkrævet pr. rør). For eksempel for 12 prøver (n = 12): (12 x 120 μl) + 360 μl = 1800 μl. Fyld ikke røret med mere end 1,9 ml (dvs. maksimalt 12 prøver pr. rør). Hvis der skal behandles mere end 12 prøver, skal der anvendes flere rør, og det skal sikres, at porevolumen tilsættes pr. rør. Brug denne ligning til at beregne den påkrævede mængde intern kontrol bærer-rna (CARRIER) Buffer AVE (AVE) -blanding (n = antallet af prøver; 120 μl = mængde af intern kontrol bærer RNA (CARRIER) Buffer AVE (AVE) -blanding; 600 μl = porevolumen påkrævet pr. rør). For eksempel for 96 prøver (n = 96): (96 x 120 μl) + 600 μl = 12 120 μl. Se www.qiagen.com/goto/dsphandbooks for påkrævede oplysninger. Klargøring af prøvemateriale Der skal altid anvendes en egnet laboratoriekittel, éngangshandsker og beskyttelsesbriller, når der arbejdes med kemikalier. Der findes mere information i de tilhørende sikkerhedsdatablade (material safety data sheets, MSDs), som kan fås hos den pågældende leverandør. Plasma-, serum- og CSF-prøver Oprensningsproceduren er optimeret til brug med plasma-, serum- eller CSF-prøver. Blodprøver behandlet med EDTA eller citrat som antikoagulant kan bruges til klargøring af plasma. Prøverne QIAsymphony SP Protokolside: Cellfree500_V3_DSP side 5 af 6
kan være enten friske eller frosne, forudsat at de ikke er frosset og optøet mere end én gang. Efter indsamling og centrifugering kan plasma, serum eller CSF opbevares ved 2 8 ºC i op til 6 timer. For længere opbevaring anbefaler vi at fryse alikvoter ved 20 ºC eller 80 ºC. Frosset plasma eller serum må ikke optøs mere end én gang. Gentagen frysning og optøning medfører denaturering og bundfældning af proteiner, hvilket medfører en potential reduktion af virale titre og derfor reduceret udnyttelse af virale nucleinsyrer. Hvis kryopræcipitater er synlige i prøverne, centrifugeres de ved 6800 x g i 3 minutter, supernatanterne overføres til friske rør uden at forstyrre pillerne, og oprensningsproceduren startes omgående. Centrifugering ved lave g-kræfter reducerer ikke virale titre. QIAGEN håndbøger kan rekvireres fra QIAGEN Technical Service eller den lokale QIAGENdistributør. Udvalgte håndbøger kan downloades fra www.qiagen.com/literature. Sikkerhedsdatablade (MSDS) for ethvert QIAGEN-produkt kan downloades fra www.qiagen.com/support/msds.aspx. Varemærker: QIAGEN, QIAsymphony (QIAGEN Group). 2010 QIAGEN. Alle rettigheder forbeholdes. www.qiagen.com France 01-60-920-930 The Netherlands 0800 0229592 Australia 1-800-243-800 Austria 0800/281010 Belgium 0800-79612 Canada 800-572-9613 China 021-51345678 Denmark 80-885945 Finland 0800-914416 Germany 02103-29-12000 Hong Kong 800 933 965 Ireland 1800 555 049 Italy 800 787980 Japan 03-5547-0811 Korea (South) 1544 7145 Luxembourg 8002 2076 Norway 800-18859 Singapore 65-67775366 Spain 91-630-7050 Sweden 020-790282 Switzerland 055-254-22-11 UK 01293-422-911 USA 800-426-8157 Sample & Assay Technologies