ScanGel COOMBS Anti-IgG,-C 3 d 86431 48 Kort 86432 1080 Kort

ScanGel COOMBS Anti-IgG,-C 3 d 86431 48 Kort 86432 1080 Kort GEL, DER ER FREMSTILLET AF ET POLYSPECIFIKT ANTI-HUMANT GLOBULIN (POLYKLONALE OG MONOKLONALE MURINFRAKTIONER) Irregulær Ab-screening, forligelighed, direkte antiglobulintest, fænotypebestemmelse IVD Alle de af Bio-Rad producerede og markedsførte produkter gennemgår fra modtagelse af råmateriale til markedsføring af slutproduktet i et komplet kvalitetssikringssystem. Hvert batch af slutproduktet gennemgår kvalitetskontrol og markedsføres kun, hvis det opfylder de fastsatte kvalitetskriterier. Dokumentation vedrørende produktion og kontrol af hvert batch opbevares af producenten. 71

I - BRUG AF OG PRINCIPPET FOR TESTEN Dette kort er udelukkende beregnet til professionel in vitro-diagnostisk anvendelse. Testen kombinerer principperne for agglutination og gelfiltrering og er designet til screening og identifikation af irregulære erythrocytbundne antistoffer, forligelighedstest, direkte antiglobulintest (Direkte Coombs) og fænotypebestemmelse. Reaktionen opnås og aflæses efter centrifugering af specialdesignede mikrorør, der indeholder gel, imprægneret med antiglobulinreagens (AHG). Erythrocytsuspensionen fordeles i de enkelte brønde i mikrorørene (plus eventuelt serum og plasma). Mikrorørene inkuberes eller centrifugeres direkte afhængig af hvilken testmetode, der anvendes. Ikke- agglutinerede røde blodlegemer samles i bunden af mikrorøret, mens agglutinater forbliver i den øverste del af gelen, afhængigt af agglutinatets størrelse. Deres position i gelen er udtryk for reaktionens intensitet. - + ++ +++ ++++ Gelens evne til at adskille røde blodlegemer fra serum eller plasma overflødiggør vaskeproceduren, som er obligatorisk i traditionelle metoder. II - BESKRIVELSE AF REAGENSERNE Mikrorørene på ScanGel COOMBS Anti-IgG,-C3d-kortet indeholder en gel, der er imprægneret med polyspecifikt antihuman globulin (AHG). Anti-IgG-fraktionen er fremstillet af sera fra hyperimmuniserede geder. Anti-komplementfraktionen er fremstillet af en blanding af sera fra hyperimmuniserede geder og et specifikt murint, monoklonalt anti-c3d-antistof, som er produceret af klonen 053A714. Disse reagenser indeholder natriumazid (< 0,1%) som konserveringsmiddel. Produktkoden og antallet af kort pr. kasse fremgår af etiketten på kassen. III - OPBEVARING - HOLDBARHED Udløbsdatoen og opbevaringsbetingelserne fremgår af kassen. Opbevar kortene ved stuetemperatur (+15 C til +25 C). Kortene opbevares vertikalt og beskyttet for varmepåvikning i et rum med en relativt konstant temperatur og luftfugtighed. IV - ADVARSLER OG FORHOLDSREGLER Resultaternes pålidelighed afhænger af en korrekt implementering af følgende regler for god laboratoriepraksis : Brug ikke reagenserne efter den udløbsdato, der er angivet på etiketten. 72

Brug ikke kort, hvor der er tegn på udtørring, bobler eller en beskadiget eller delvist fjernet forseglingsstrimmel. Det er vigtigt at udvise forsigtighed for at undgå kontaminering mellem mikrorørene især under afpipetteringerne. Brug en ny pipette til hver prøve, hvert reagens eller erythrocytsuspension. Kontrollér, at pipetterne og andet udstyr fungerer korrekt, og kontrollér også deres nøjagtighed. Brug handsker og sikkerhedsbriller under håndtering af reagenser og prøver. Pipettér aldrig direkte med munden. Undgå stænk. I tilfælde af stænk, skal der rengøres med 12% hypoklorit i en 1:10 -opløsning og tørres efter med absorberende papir. Det materiale, der anvendes til rengøringen, skal kasseres og placeres i beholderen til kontamineret affald. Forbrugsartikler og andre produkter, der har været i kontakt med prøver eller reagenser, som indeholder materiale af human oprindelse, må først kasseres efter dekontaminering. Datablade vedr. sikkerhed udleveres på forespørgsel. V - UDTAGNING OG BEHANDLING AF PRØVER Foretag en aseptisk blodprøvetagning i et rør med eller uden antikoagulans (EDTA, CPD). Til den direkte antiglobulintest (Direct Coombs) anbefales det at bruge antikoagulans (EDTA). Udfør testen snarest muligt efter prøvetagningen. Prøver, der ikke kan analyseres straks, skal opbevares ved +2 C +8 C og skal testes inden for 48 timer. Til den direkte antiglobulintest (Direct Coombs) bør prøver, som er taget uden antikoalugans, ikke benyttes til test efter nedkøling. Der må under ingen omstændigheder kunne ses hæmolyse. Undgå at opvarme prøvematerialet. VI - METODE Leveret udstyr ScanGel COOMBS Anti-IgG,-C3d-kort Nødvendigt udstyr, der ikke er leveret med ScanLiss : Erytrocytsuspensionsreagens 86441 ScanLiss 100 ml 86442 ScanLiss 500 ml IH QC : Kintrol af blodgruppeserologi 86745 IH QC 4 x 6 ml Centrifuge : ScanGel Centrifuge Varmeskab : ScanGel Incubator Automatiske eller semiautomatiske pipetter Pipettespidser 73

Engangsrør Beholder til affald, der er forbundet med biologisk risiko Hypoklorit Gummihandsker Sugende papir. Sikkerhedsbriller 1. Screening og identifikation af irregulære erythrocytbundne antistoffer Kontroller Det anbefales at udføre en autokontrol (plasma eller serum og røde blodlegemer fra patienten), sideløbende med hver enkelt test. En positiv kontrolopløsning (kendt serum, der indeholder mindst et antistof, som kan påvises med Coombs-teknikken) og en negativ kontrolopløsning (kendt serum, der ikke indeholder nogen antistoffer), IH QC : Kintrol af blodgruppeserologi. Nødvendigt udstyr, der ikke er leveret med EryScan, ScanCell, ScanPanel : Brugsklar erythrocytsuspensionsreagens til screening og identifikation af irregulære erythrocytbundne antistoffer (indirekte antiglobulintest) 86597 EryScan 2 x 10 ml 86595 ScanCell 3 x 10 ml 86593 ScanPanel 10 x 3 ml Fremgangsmåde Følg fremgangsmåden nøje. Alle reagenser skal have stuetemperatur, før de bruges. Adskil serum eller plasma fra de røde blodlegemer i den prøve, der skal testes, ved hjælp af centrifugering. Når blodet er tappet uden antikoagulans, skal prøven centrifugeres endnu en gang ved 1500 g i 10 minutter. a) Klargør en erythrocytsuspension, hvis disse ikke findes brugsklare Autokontrol : Overfør 1 ml ScanLiss til et mærket engangsrør. Tilsæt 10 µl røde blodlegemer (autokontrol). Bland. 74

b) Metode 1. Mærk hvert kort eller del af kortet (afhængig af antal erythrocytsuspensionsreagenser, der anvendes til prøven) med prøvens navn eller nummer. Mærk erythrocytsuspensionen, som skal overføres til hvert mikrorør. Fjern hele aluminiumsstrimmelen fra kortet. Bland erythrocytsuspensionen igen før anvendelse. 2. Overfør 50 µl af hver ScanCell-, ScanPanel- eller erythocytsuspension, der er klargjort ifølge afsnit 1- a) i brøndene i de relevante mikrorør. 3. Tilsæt straks 25 µl plasma eller serum i de respektive brønde på mikrorørene. Intervallet mellem tilførsel af erythrocytter og plasma eller serum må under ingen omstændighed overstige 10 minutter. 4. Inkuber ved 37 C i 15 minutter i en ScanGel Incubator. 5. Centrifuger i 10 minutter i ScanGel Centrifuge. 6. Aflæs reaktionerne. 2. Forligelighedstest Kontroller En positiv kontrolopløsning (kendt serum, der indeholder mindst et antistof, som kan påvises med indirekte antiglobulin teknik) og en negativ kontrolopløsning (kendt serum, der ikke indeholder antistoffer), IH QC : Kintrol af blodgruppeserologi. Fremgangsmåde Følg fremgangsmåden nøje. Alle reagenser skal have stuetemperatur, før anvendelse. Adskil serum eller plasma fra de røde blodlegemer i prøverne ved centrifugering. Når blodet er tappet uden antikoagulans, skal prøven centrifugeres igen ved 1.500 g i 10 minutter. a) Fremstil donorerythrocytsuspension(er) For hver donor : Overfør 1 ml ScanLiss i et mærket engangsrør. Tilsæt 10 µl erythrocytkoncentrat (donorerythrocyter). Bland. Erytrocytsuspensionen er klar til brug. 75

b) Metode 1. Mærk kortet eller den aktuelle del af kortet med modtagers navn eller nummer og med korresponderende donornumre. Fjern hele aluminiumsstrimmelen fra kortet. Bland erythrocytsuspension(erne) igen før anvendelse. 2. Overfør 50 µl af hver erythrocytsuspension i brøndene på de relevante mikrorør. 3. Tilsæt straks 25 µl af modtagers plasma eller serum i brøndene på de relevante mikrorør. Intervallet mellem overførslen af røde blodlegemer og plasma eller serum må under ingen omstændigheder overstige 10 minutter. 4. Inkuber ved 37 C i 15 minutter i en ScanGel Incubator. 5. Centrifuger i 10 minutter i ScanGel Centrifuge. 6. Aflæs reaktionerne. 3. Direkte antiglobulintest (Direkte Coombs) Kontroller Positiv kontrol (røde blodlegemer, der er sensibiliseret med et kendt IgG-antistof og/eller C3d-fraktionen af komplement) og en negativ kontrol (ikke-sensibiliserede røde blodlegemer). Fremgangsmåde Følg fremgangsmåden nøje. Alle reagenser skal have stuetemperatur, før anvendelse. Adskil serum eller plasma fra de røde blodlegemer i den prøve, der skal testes ved centrifugering. a) Fremstil en erythrocytsuspension For hver prøve : Overfør 1 ml ScanLiss i et mærket engangsrør. Tilsæt 10 µl koncentrat af røde blodlegemer fra prøven. Bland. Erytrocytsuspensionen er klar til brug. b) Metode 1. Sæt en etiket på kortet med prøvenavn eller -nummer. Fjern hele aluminiumsstrimmelen fra kortet. Bland erytrocytsuspensionen igen før anvendelse. 2. Overfør 50 µl af den erythrocytsuspension, der skal testes, i brøndene på de relevante mikrorør. 3. Centrifuger straks i 10 minutter i ScanGel Centrifuge. Intervallet mellem afslutningen af erythrocyttilsætning og starten af centrifugeringen må ikke overstige 10 minutter. 4. Aflæs reaktionerne. 76

4. Fænotypebestemmelse Kontroller Positive og negative kontroller : røde blodlegemer, kendt positive og kendt negative for antigenet, testes sammen med prøven, IH QC : Kintrol af blodgruppeserologi. Prøvekontrol (kun røde blodlegemer fra prøven). Nødvendigt udstyr, der ikke er leveret med Bio-Rad reagensen, som svarer til det undersøgte antigen. Fremgangsmåde Følg fremgangsmåden nøje. Alle reagenser skal have stuetemperatur, før anvendelse. Adskil plasma fra de røde blodlegemer i den prøve, der skal testes, ved centrifugering. a) Fremstil en erytrocytsuspension For hver prøve : Overfør 1 ml ScanLiss i et mærket engangsrør. Tilsæt 10 µl koncentrat af røde blodlegemer fra prøven. Bland. Erytrocytsuspensionen er klar til brug. b) Metode 1. For hver prøve mærkes et mikrorør med den relevante prøves navn eller nummer og identifikation af den anvendte serumtest og et mikrorør med prøvens navn eller nummer (kontrol). Fjern hele aluminiumsstrimmelen fra kortet. Bland erytrocytsuspensionen igen før anvendelse. 2. Overfør 50 µl af hver erythrocytsuspension i brøndene på de relevante mikrorør. 3. Tilsæt straks 25 µl testserum i brøndene på de relevante mikrorør (undtagen i mikrorør, der bliver brugt til kontrol). Intervallet mellem overførslen af røde blodlegemer og testserum må under ingen omstændigheder overstige 10 minutter. 4. Inkuber ved 37 C i 15 minutter i en ScanGel Incubator. 5. Centrifuger i 10 minutter i ScanGel Centrifuge. 6. Aflæs reaktionerne. VII - RESULTATER OG FORTOLKNING Agglutinater (på overfladen af eller fordelt i gelen) eller hæmolyse i mikrorøret angiver et positivt resultat. Koncentration af røde blodlegemer i bunden af mikrorøret og fravær af hæmolyse angiver et negativt resultat. Resultaterne valideres kun, hvis de positive og negative kontroller giver de forventede resultater. 77

1. Screening og identifikation af irregulære erythrocytbundne antistoffer Et negativt resultat (ingen agglutination og ingen hæmolyse) i de enkelte mikrorør er udtryk for, at det testede serum eller plasma ikke indeholder antistoffer rettet mod de antigener, der findes på erythrocytsuspensionsreagenset og som kan påvises med den anvendte metode. Derimod indikerer et positivt resultat (agglutination og/eller hæmolyse) i mindst et af mikrorørene forekomst af et eller flere antistoffer i den prøve, der testes. Antistofferne skal derefter identificeres. En positiv reaktion i autokontrol -mikrorøret kan indikere tilstedeværelsen af autoantistof. Hvis, foruden den positive autokontrol, mindst et af erythrocytsuspensionsreagenserne agglutinerer, bør kombinationen af autoantistof og alloantistof tages i betragtming. Det er kun de antistoffer, der korresponderer med det antigen, som findes på erythrocytsuspensionsreagenset, der kan konstateres. Ved at sammenligne de negative og positive reaktioner observeret med hver enkelt panelerythrocytsuspension i prøveserum eller plasma med den masterliste, der følger med panelet er det muligt at karakterisere specificiteten af tilstedeværende antistoffer i prøveserum eller plasma. 2. Forligelighedstest Et positivt resultat (agglutination og/eller hæmolyse) viser at der er uforligelighed mellem modtagers serum eller plasma og donors røde blodlegemer. 3. Direkte antiglobulintest (Direct Coombs) Et negativt resultat indikerer, at der ikke findes IgG og komplement på prøvens røde blodlegemer. Et positivt resultat indikerer tilstedeværelse af IgG, komplement eller begge på prøvens røde blodlegemer. 4. Fænotypebestemmelse Se på indlægssedlen i pakken til den anvendte serumtest. Resultaterne er kun gyldige, hvis kontrollen er negativ. VIII - YDEEVNE 1. Screening og identifikation af irregulære erythrocytbundne antistoffer Den specifikke ydeevne blev evalueret på 2516 prøver (1782 patienter og 734 donorer) og viste en god balance mellem sensitivitet og specificitet. Hvert resultat er sammenlignet med de resultater, der er opnået med immunbinding- eller gelfiltreringsteknikker. Applikationen muliggør bestemmelse af human anti-rh1 (D)-koncentration svarende til 20 ng/ml. Specificiteten for en tilfældigt udvalgt patientpopulation var 99,8 %. Reproducerbarheden for programmet blev testet og viste god ydeevne i både interne og krydskontrollerede test. 78

2. Forligelighedstest Evalueringen af ydeevnen gav overensstemmende resultater med det reagens, der blev anvendt som reference. Hvert resultat er sammenlignet med de resultater, der er opnået med gelfiltreringsteknikker. Reproducerbarheden af testmetoden blev undersøgt og viste god ydeevne i både interne og krydskontrollerede test. 3. Direkte antiglobulintest (Direct Coombs) Evalueringen af ydeevnen blev udført på 147 prøver (prøver fra nyfødte og patienter med formodet autoimmun hæmolytisk anæmi) Hvert resultat er sammenlignet med de resultater, der er opnået med rør- eller gelfiltreringsteknikker. De opnåede resultater viste ingen uoverensstemmelser med den gelteknik, der blev anvendt sideløbende. Reproducerbarheden af testmetoden blev undersøgt og viste god ydeevne i både interne og krydskontrollerede test. 4. Fænotypebestemmelse Se på indlægssedlen i pakken til den anvendte serumtest. GRÆNSER Unormale resultater kan være forårsaget af : bakteriel eller kemisk kontaminering af serum, plasma, de røde blodlegemer eller udstyret. patientmedicinering eller sygdom, der fremkalder en krydsreaktion. anvendelse af et andet erythrocytsuspensionsmedie end det anbefalede. en erythrocytopløsning, der afviger fra det anbefalede. ufuldstændig resuspension af røde blodlegemer. hæmolyse af prøven eller testerytrocytter. tilstedeværelse af fibrin (kompakt cellekoncentrat i bunden af mikrorøret sammen med et fint, lyserødt bånd øverst i gelen, der opstår som følge af røde blodlegemer, der tilbageholdes af fibrinresterne). kontaminering fra mikrorør til mikrorør. anvendelse af andre procedurer end de ovenfor beskrevne. Under licens fra DiaMed SA, 1785 Cressier-sur-Morat, Schweiz 79

10 IX - LITERATURE 1. Löw B, Messeter L. Antiglobulin test in low-ionic strength salt solution for rapid antibody screening and cross-matching. Vox Sang. 1974; 26:53-61. 2. Kankura T, Kurashina S, Nakao M. A gel filtration technique for separation of erythrocytes from human blood. J Lab Clin Med 1974; 83:840-844. 3. Rouger Ph, Salmon Ch.: La pratique de l'agglutination des érythrocytes et du test de Coombs. Masson 1981. 4. ISBT/ICSH Working Party : International Reference Polyspecific AntiHuman Globulin Reagents. Engelfriet CP, Voak D. Vox Sang.1987; 53:241-247. 5. Engelfriet C.P., Overbeeke MAM, Voak D : the antiglobulin test (Coombs test) and the red cell ; In Cash, Progress in Transfusion Medecine. Churchill Livingstone. 1987; vol2:74-98. 6. Voak D.: Coordinated report of studies on monoclonal antibodies to complement. Rev. Fr. Transf. Immunhematolol. 1988;XXXI,367-376. 7. Voak D, Downie D.N. : Serological characterisation of monoclonal antibodies to complement components of C3 and C4. Rev. Fr. Transf. Immunohematol. 1988;XXXI,377-380. 8. Lapierre Y, Rigal D, Adam J et al : The gel test : a new way to detect red cell antigen-antibody reactions. Transfusion 1990;30:109-113. 9. Proceedings of the second international workshop and symposium on monoclonal antibodies against human red blood cells and related antigens. IgG/Complement. Lund. 1990;195-206. 10. Bromilov IM, Adams KE, Hope J, Eggington JA and Duguid JKM. Evaluation of the ID-gel test for antibody screening and identification. Transfusion Medecine 1991;1:159-161. 11. Salmon Ch, Cartron JP, Rouger Ph.: Les groupes sanguins chez l'homme. 2é ed. Masson 1991. 12. Pottier C, Quillet P, Baufine-Ducroq H.: Gel-test : Interpretation and value of a new technique for the detection of irregular antibodies. Ann Bio Clin 1992;50:679-685. 13. Deffune E, Le Pennec P.Y., Lascaux J.M., Rouger Ph.: Méthode d'étude des réactifs anti-complément : utilisation d'hématies sensibilisées congelées/décongelées. Rev. Fr. Transfu. Hémobiol. 1992;35:299-309. 14. Burin des Rosiers N, Nasr O.: Recherche des anticorps irréguliers érythrocytaires par la méthode du gel-test. Analyse de 35882 échantillons. Rev. Fr. Transfus. Hemobiol., 1993;36:391-399. 15. International Forum. What is the best technique for the detection of red cell alloantibodies. Vox Sang 1995;69:292-300. 16. Issitt P.D.: Applied blood group serology. 4th ed. Miami: Montgomery Scientific Publications, 1998.

Bio-Rad 3, bd Raymond Poincaré 92430 Marnes-la-Coquette - France Tél.: +33 1 47 95 60 00 06/2009 Fax.: +33 1 47 41 91 33 Code: 480006