1. prøve på 5. semester S5 - hold 33, 34 og 35. Mandag til tirsdag d november 2009 kl

Transkript

1 Skriftlig tværfaglig mappe-eksamen 1. prøve på 5. semester S5 - hold 33, 34 og 35 Mandag til tirsdag d november 2009 kl Væsentligste hjælpemidler: Mappen, Dansk Laboratoriemedicin, Databog i fysik og kemi og lommeregner. Sættet indeholder i alt 7 nummererede sider inklusiv forsiden. Kontrollér venligst med det samme om alle sider er der. Alle sider i eksamensbesvarelsen skal forsynes med navn, studienummer og hold nr. Opgavebesvarelserne angives med tydelig opgavenummer. Aflevering: Besvarelsen inklusive bilag afleveres samlet i plastlomme i skolens reception. NAVN: HOLD: DATABOG UDGAVE: 1

2 Case En patient med kronisk obstruktiv lungebetændelse henvender sig til sin praktiserende læge, fordi han i et par uger har haft influenzalignende symptomer med en del hoste og let feber. Lægen tager en blodprøve, der analyseres for mængden af CRP (C-reaktivt protein). Anamnesen og patientens CRP-værdier siger lægen, at der højst sandsynligt er tale om en viralt betinget lungebetændelse. Lægen indsender derfor en prøve (i form af et ekspektorat) fra patienten til SSI. Opgaver Opgave 1: Forklar hvordan CRP-værdien kan bruges til at adskille virale infektioner fra bakterielle infektioner. Opgave 2: Diskuter hvordan en lungebetændelse påvirker respirationen? Opgave 3: Beskriv hvorledes kroppen registrerer disse respirationsproblemer, samt hvordan ventilationen forsøger at kompensere for dem. Hvilke muskler bruges i den forbindelse? Opgave 4: Hos patienter med respirationsproblemer analyseres altid for blodgasser. Hvilke gasser er der tale om, og hvordan måles de? Hvilke præanalytiske forhold skal man være opmærksom på i forbindelse med en blodprøve til måling af blodgasser? Opgave 5: Beskriv/skitsér den principielle opbygning af en CO 2 -sensor og sammenlign den med kroppens måde at monitorere syre-/basebalancen. Hvilken kemisk ligevægt er helt central i begge systemer? Opgave 6: I en blodprøve fra patienten (T=25⁰C) måles ph til 7,30 og *HCO 3 ] til 26 mm. Beregn pco 2. Opgave 7: Hvilken syre-/base-ubalance har patienten formodentligt? Begrund. Hvilke muligheder har patienten for at kompensere for denne ubalance? Opgave 8: I forbindelse med en syre/baseubalance som denne, ses der ofte en øget plasmakoncentration af en bestemt ion. Hvilken ion er der tale om (her tænkes ikke på H ), og hvorfor ses stigningen? 2

3 Opgave 9: Overvej hvilke andre biokemiske og/eller fysiologiske analyser, som kan anvendes i forbindelse med en patient, der er henvist med åndedrætsbesvær. Ved mistanke om akut lungeemboli eller for at foretage en udredning af uforklarlig dyspnø kan der foretages en perfusionsscintigrafi. Hertil anvendes 99m Tc-mærkede albuminpartikler, der injiceres i patienten og opfanges i lungens kapillærsystem, fordelingen af de mærkede albuminpartikler i lungerne monitoreres ved hjælp af et gammakamera. Opgave 10: Beskriv gammakameraets opbygning, enten via skrift eller tegning. Opgave 11: Ved tidspunktet for injektionen er aktiviteten af 99m Tc-albuminpartikerne 175 MBq. På fremstillingstidspunktet var de radioaktivt mærkede albuminpartiklers aktivitet 192,6 MBq. Hvor lang tid er der gået fra fremstillingstidspunktet til tidspunktet for injektionen? Opgave 12: Hvad kan bioanalytikeren gøre for at beskytte sig mod gammastråling? Opgave 13: Ved injektionen af de 99m TC-mærkede albuminpartikler optager patientens lunge hele den injicerede mængde radioaktivitet, så alt radioaktivt materiale kumuleres i lungen, og henfalder der. Beregn den dosisækvivalent, som leveren modtager ved denne undersøgelse, brug evt. bilag 1. Opgave 14: I patienten henfalder 99m Tc til 99 Tc, der også er en radioaktiv isotop, diskuter kort hvorfor denne kan betragtes som uden betydning for patientens strålingsdosis. Ekspektoratet lægen sendte ind til SSI bliver undersøgt for tilstedeværelsen af influenza A og B, respiratorisk syncytial virus (RSV) A og B og metapneumovirus (alle i SSI s luftvejsvirus, pakke A). Undersøgelsen foregår som en multiplex real-time RT-PCR test på RNA oprenset fra prøvematerialet. Opgave 15: Hvorfor oprenses der RNA fra prøvematerialet og ikke DNA? Opgave 16: Forklar hvorfor RNA skal omdannes til DNA ved RT (reverse transcriptase) reaktionen. Opgave 17: Det dannede DNA bruges til en PCR analyse. Hvilke andre reagenser, end prøve DNA, skal der bruges til en PCR reaktion, og hvilken funktion har de enkelte reagenser? 3

4 Opgave 18: Hvorfor kan PCR bruges til at undersøge for tilstedeværelse af vira? Opgave 19: For at undersøge for tilstedeværelse af RSV bruges ofte sekvensen for Polymerase. I figur 1 nedenunder er der et udsnit af denne sekvens. Beliggenheden af en mulig forward (sense) primer og reverse (antisense) primer er angivet med Fed skrifttype og understreget. Figur ggacaaaatg gatcccatta ttaatggaaa ttctgctaat gtgtatctaa ccgatagtta 8521 tttaaaaggt gttatttctt tctcagaatg taatgcttta ggaagttaca tattcaatgg 8581 tccttatctc aaaaatgatt ataccaactt aattagtaga caaaatccat taatagaaca 8641 cataaatcta aagaaactaa atataacaca gtccttaatg tctaagtatc ataaaggtga a) angiv sekvensen for forward primer: b) angiv sekvensen for reverse primer: c) hvor langt bliver PCR produktet (bp)?: Opgave 20: Diskuter hvorvidt PCR analysen kunne bruges til at påvise en overstået infektion med RSV? Opgave 21: RSV kan forårsage pneumonia, især hos børn under 5 år, men også hos svækkede voksne. Infektionen kan tillige medføre dyspnø. Nedenstående figur (figur 2) forestiller en RSV: Figur 2 a b c d Opgaven fortsættes 4

5 1) Hvordan betegnes: a) b) c) d) a) Og hvilken funktion har: b) c) 2) Giv et forslag til, hvorledes denne virus invaderer en værtscelle ud fra de egenskaber, som kan ses af skitsen. Til diagnostik af RSV kan, foruden real-time RT-PCR metode (SSI), anvendes en EIA-baseret hurtigmetode, som kan udføres hos den praktiserende læge. Opgave 22: a) Skitsér opbygningen af EIA-test-kittet med udgangspunkt i nedenstående tekst Principle of the test. Principle of the Test The IBL - AMERICA RSV IgA antibody test kit is based on the principle of the enzyme immunoassay (EIA). RSV antigen is bound on the surface of the microtiter strips. Diluted patient serum or ready-to-use standards are pipetted into the wells of the microtiter plate. A binding between the IgA antibodies of the serum and the immobilized RSV antigen takes place. After a one hour incubation at room temperature, the plate is rinsed with diluted wash solution, in order to remove unbound material. Then ready-to-use antihuman-iga peroxidase conjugate is added and incubated for 30 minutes. After a further washing step, the substrate (TMB) solution is pipetted and incubated for 20 minutes, inducing the development of a blue dye in the wells. The color development is terminated by the addition of a stop solution, which changes the color from blue to yellow. The resulting dye is measured spectrophotometrically at the wavelength of 450 nm. The concentration of the IgA antibodies is directly proportional to the intensity of the color. b) Vurder ud fra din egen skitse, om testen er: direkte/indirekte kompetitiv/non-kompetitiv homogen/heterogen 5

6 c) I EIA-testen inaktiveres enzymet med et stopreagens. Angiv med begrundelse, hvad stopreagenset kunne være. Opgave 23: a) Beskriv kort det generelle forløb af immunresponset ved en viral infektion. b) Giv derudover en vurdering af i hvilken del af sygdomsforløbet den omtalte EIA-test vil kunne benyttes? Opgave 24: I udredningsfasen sender den praktiserende læge en ekspektorat-prøve fra den RSV-inficerede patient til KMA (klinisk mikrobiologisk afdeling) for at få foretaget en resistensbestemmelse. Diskuter kort hvorfor resistensbestemmelsen er nytteløs. Producenten af EIA-kittet oplyser følgende specifikationer: Assay Characteristics RSV ELISA IgA Clinical Specificity 100 % Clinical Sensitivity 86 % Opgave 25: Forestil dig, at der er undersøgt i alt 1000 personer, hvoraf 600 vides at være positive for forekomst af IgA i serum. a) Med udgangspunkt i disse oplysninger samt de givne specifikationer ønskes en beregning af SP, SN, PV + og PV b) Hvad udtrykker PV + og PV? c) Giv en vurdering af om dette test-kit ville være bedst egnet til screeningsundersøgelse eller som konfirmatorisk test. 6

7 Bilag 1 7