SALMONELLA ANTISERA SAMMENLIGNING AF PRODUCERET AF STATENS SERUM INSTITUT, DENKA SEIKEN, DIFCO, SIFIN OG BIORAD. 24 juli 1984.

Transkript

1 SAMMENLIGNINGAF SALMONELLAANTISERA PRODUCERETAFSTATENSSERUMINSTITUT,DENKASEIKEN, DIFCO,SIFINOGBIORAD Salmonellaantiserafradefemproducenter. Fravenstre:Difco,DenkaSeiken,Sifin,BioradogStatensSerumInstitut TagetafSusanneDaaePlumLind,20maj2009,StatensSerumInstitut Skrevetaf SusanneDaaePlumLind 24juli1984 Bachelorprojekt Bioanalytikeruddannelsen,ProfessionshøjskolenMetropol,København Periode 14april2009 9juni2009 Kliniskvejleder KirstenOlsson,StatensSerumInstitut,København Udd.inst.vejleder MinnaFyhnLykkeLladó,BioanalytikeruddannelsenKøbenhavn

2 Resumé SerotypningafSalmonellaerenvigtigtingforbestemmelsenafetudbrud.Serotypning brugesogsåilaboratoriertilatfåetoverblikoverhvilkesalmonellabakterierdereri omløb.tilserotypningafsalmonellaanvendesantisera.derermangeforskellige producenterafantiserapåmarkedet,ogdereraldrigførlavetendirektesammenligningaf dem.idetteprojektsammenlignesfemafdemestsolgteproducenter;statensserum Institut(SSI),Biorad,Sifin,DifcoogDenkaSeiken. Detiantisera,derermedtagetidetteprojekt,brugesofteilaboratorierne,dadeanvendes tiltypningafdemestforekomnesalmonellaserotyperhosmennesker.derermedtaget sekso antiseraogfireh antisera,mendeterdogikkealleproducenter,derfremstiller samtligeantisera.forsøgeterstilletopsåbådeantiseraernessensitivitetogspecificitet blevtestet.resultaterblevvurderetudfratotyperafreaktioner:normalreaktioner,som blevforventetatværepositive,ogkrydsreaktioner,somburdeværenegative.metodenvar objektglasagglutination.reaktionerblevbedømtudfraengradueringsskala,somerbygget opefterdeenkelteproducentersvejledninger. SSIopnåedeensamletsensitivitetpå99%,hvilketblevforsøgetshøjeste.Sifin95,6%, Difcofik94,4%,DenkaSeiken91,25%,mensBioradfikensensitivitetpå90%. Specificitetenafdefemfabrikaterfaldtudsåledes;SSIogDenkaSeikenfik100%,Sifin 98,7%,Biorad95,8%ogDifco64,9%. AntiserafraStatensSerumInstitutopnåededehøjesteværdierforbådesensitivitetog specificitet,ogblevderfortestensbedste.deterdogvigtigtatunderstregeatdetteresultat ervejledende,dadetkunerbaseretpåresultateraftiantisera. SAMMENLIGNINGAFSALMONELLAANTISERA AFSUSANNEDAAEPLUMLIND 2

3 Forord Dettebachelorprojekterudarbejdetsomafslutningpåbioanalytikeruddannelsen. Projektethenvendersigtilvejledere,medstuderende,bioanalytikereogandremed interesseforsalmonellaantisera. DetpraktiskearbejdeiforbindelsenmedforsøgeterlavetpåStatensSerumInstitut, København,mensendelafforarbejdetogplanlægningafforsøgeterlavetpåSSI Diagnostika,StatensSerumInstitut,Hillerød. JegvilgernehavelovattakkepersonaletpåSSIDiagnostika,specieltHeleneMarie RøschmannogMargitKroghJeppesen,fordereshjælpsomhedogPernilleOlsen,som muliggjordedetteprojekt.yderligereviljeggernesigetaktilpersonaletpå Tarmbakteriologiskafdeling,StatensSerumInstitutKøbenhavnforlånafapparaturog deresgoderåd,samttilbioanalytikerunderviserkirstenolssonogminnafyhnlykke Lladó,cand.scient.,derbeggeharfungeretsomvejlederepådetteprojekt,forderesråd, vejledningogkonstruktivekritik.tilsidstviljeggernesigetaktilminsamarbejdspartner MaleneNuñezfordemangehyggeligetimerilaboratorietogfordetgodesamarbejde. Dato SusanneDaaePlumLind SAMMENLIGNINGAFSALMONELLAANTISERA AFSUSANNEDAAEPLUMLIND 3

4 Indholdsfortegnelse Resumé... 2 Forord Introduktion Problemformulering Begrebsdefinitioner Teori Salmonellasp O antigener H antigener Metodevalg Materialerogmetode Materialer Metode Resultater Normalreaktioner Krydsreaktioner Diskussion Resultaterne Diagnostisksensitivitetogreaktionernesgraduering Diagnostiskspecificitetoggradueringer Andresundersøgelserogresultater Forsøgsopsætningen Aflæsningsproblematikoggraduering Mono /polyklonaltantiserum betydningforsensitivitetogspecificitet? Andresundersøgelser Andreforhold Priser Håndtering Vejledning/indlægsseddel Levering Konklusion Perspektivering Litteraturliste...28 Bilag1:Listeoverbakteriestammer...30 Bilag2:Resultatskemaer...32 Bilag3:Beregninger...37 Bilag4:PrislisteoverSalmonellaantisera...38 SAMMENLIGNINGAFSALMONELLAANTISERA AFSUSANNEDAAEPLUMLIND 4

5 1.0.0Introduktion Iapril2008opdagedeDanmarkdet,somskullebliveetafdestørstesygdomsudbrudi nyeretid.udbruddetvarogerstadigforårsagetafsalmonellatyphimuriumfagtypeu292. Ienopgørelselavetd.21april2009erantalletafsygenåetoppå1305tilfælde [13]. Epidemienerdoglangsomtvedataftage.Mankendertildagsdatostadigikkeden nøjagtigesmittekilde,ogienartikelfrapolitikkenfrad.27januar2009sigerkimvandrup SigsgaardfraFødevarestyrelsenat: Viserendnuikkeatudbruddetheltforsvinder,menvi frygterlidt,atdetfaderud,førvifinderkildentilsmitten. [15] Dererfleremåderatopdageometudbruderpåvej.Henvendelserfrasygeellerfra udlandet,ellermankanopdagedetilaboratorietved,atflereprøverhardensamme serotype.deterdogikkenokatprøverneharsammeserotype,derforsendesdevideretil eks.fagtypning,mluatypningellerpfgetypning.mendetervedserotypningen,mankan fådenførstemistankeomatenepidemierpåvej. StatensSerumInstitut(SSI)erenafdestørsteleverandørerafantiseratilSalmonella serotypning.destørstekonkurrentertilderesprodukterdenkaseiken,bioradogdifco, somallelaveretprodukttilsvarendetilssis,samtsifin,derbådeproducerermonoklonale ogpolyklonaleantiseratilserotypebestemmelseafsalmonellasp. [10] Grundentilatdetteprojekterinteressanter,atderikkeidesenesteårerlavetendirekte sammenligningafsalmonellaantisera.i1970 erneblevderlavetnogleundersøgelseri USA,hvorblandtandetDifcosdaværendeproduktblevtestet.Inyeretidhardetkunværet muligtatfinderesultaterfraetforsøg,hvordenkaseikensproduktblevtestetimod antiserafremstillethosmicrobialdiseaseslaboratory,californiadepartmentofpublic Health [17].Dererdogaldrigførlavetensammenligningafdeførendeproducenteraf Salmonellaantisera. IdetteprojektvilderblivesammenlignetSalmonellaantiserafrade5firmaer.Vivillægge vægtpådiagnostisksensitivitetenogspecificitetenafprodukternesamtstyrkenaf reaktionerne.desudenvurderesandreparametresomøkonomioghåndteringafsera. Medhensyntiløkonomienvildetværeprispr.test,dervurderes,ogmedhensyntil SAMMENLIGNINGAFSALMONELLAANTISERA AFSUSANNEDAAEPLUMLIND 5

6 håndteringenvildetværefaktorersomtidprtest,hvorlogiskopbygningenafvejledninger ogbrugsanvisningerer,samthvorbrugervenligedeforskelligetestser Problemformulering Hvilkenaffølgende5producenterafSalmonellaantisera:SSI,DenkaSeiken,Biorad,Sifin ogdifco,hardebedsteo ogh antisera,bedømtudfradiagnostisksensitivitetog specificitet,hvorreaktionerneervurderetudfraengradueringsskala? 1.2.0Begrebsdefinitioner Diagnostisksensitivitet målforantalafsandepositive. fundneantalpos.reaktioner/forventetantalpos.reaktioner. Diagnostiskspecificitet målforantalafsandenegative. fundneantalneg.reaktioner/forventetantalneg.reaktioner. Gradueringsskala agglutinationsgrad. Skalaen: skalabrugttilatbedømmedenenkeltereaktions +++ Stærkpositivreaktion,tydeligekornsesmeddet samme,klarbaggrund,100%agglutination (+++) Positivreaktion,tydeligekornsesindenfordet gældendetidsinterval,klarbaggrund,75% agglutination ++ Svagpositivreaktion,kornsesindenfortidsinterval, menmælketbaggrund,75%agglutination (++) Småkornsesiudkantenaftidsintervallet,mælket baggrund,50%agglutination + Småkornsesmedlupiudkantenaftidsintervallet, mælketbaggrund,25%agglutination (+) mælketblanding,kornanesmedlup,<25% agglutination Negativreaktion,igenagglutination!Reaktionermed++ellerderoveransesforpositive. SAMMENLIGNINGAFSALMONELLAANTISERA AFSUSANNEDAAEPLUMLIND 6

7 1.3.0Teori 1.3.1Salmonellasp. SlægtenSalmonellatilhørerfamilienEnterobacteriaceae,deralleergramnegativestave. Salmonellabakterienerfakultativanaerobogperitrikbevægelig.NogleSalmonellaarter (eks.salmonellatyphimurium)findesnaturligtitarmenhosfleredyr,menhvisdenbliver overførttilmenneskererdenpatogen.smittevejenkanværegennemkød,mælkogæg, menogsågrønsagerersetsomværendeensmittekilde. Blivermansmitteterinkubationstiden12 48timerindensymptomervisersigiformaf diarré,mavesmerter,feberogeventueltkvalmeogopkastninger.entypiskinfektionvarer fra2til7dage,menkanvarelængere. [5] DerfindestoarterafSalmonella;entericaogbongori,hvorentericaigenerinddeltiflere subspecies.underhversubspeciesfindesderflereforskelligeserotyper.detkorrekte navnforensalmonellaerderfor:[slægtsnavn][artsnavn]subsp.[subspecies]serotype [Serotype],menidagligtaleanvendermanoftestbare[Slægtsnavn][Serotype]. [3] EksempelviserdetkorrektenavnforSalmonellaTyphimurium,somdenkaldesidaglig tale,salmonellaentericasubsp.entericaserotypetyphimurium. SerotypenforenSalmonellabakteriebestemmesaf,hvilkeantigenerdenhar.Derfindes tretyperafantigener(o,h ogvi antigener) [2],mendennerapportomhandlerkunO og H antigenerogantiserarettetimoddisse O antigener Hosgramnegativebakteriereroverfladeantigenet,ellerO antigenet,placeretpå cellevæggen.denneeropbyggetafflerelag,ogdetyderstelagbeståraf lipopolysaccharider,ogsåkaldetlps.detersaccharid delenidettemolekyle,somudgør O antigenet. [3,5] 1.3.3H antigener DeterbakteriensflagellersomudtrykkerH antigenerne.enenkeltbakteriekanhaveoptil toforskelligeh antigener,somudtrykkespåforskelligetidspunkter.dettekaldes fasevariation.pågenometforsalmonellasp.findestogener,derkoderforproteinet flagellin,somflagellereropbyggetaf.dissetogenerkaldesflicogfljb.demindermegetom hinandenmenerikkeidentiskeogerplaceretlangfrahinandenpågenomet.deter SAMMENLIGNINGAFSALMONELLAANTISERA AFSUSANNEDAAEPLUMLIND 7

8 variationerpådetcentraleoghypervariableområdepådissegener,derbestemmerhvilke serotyper,derkommertiludtrykhosdenenkeltesalmonellabakterie. [7] 1.4.0Metodevalg Deantisera,dersammelignesidennerapport,erudvalgtpåbaggrundafdemest almindeligesalmonellainfektionerhosmenneskerieuropa.detimesthyppigesalmonella serotypervari :SalmonellaEnteritidis,SalmonellaTyphimurium,Salmonella Virchow,SalmonellaInfantis,SalmonellaNewport,SalmonellaDerby,SalmonellaSaintpaul ogsalmonellaheidelberg [12].Påbaggrundafdissebakteriersserotypesamthvormeget, dersælgesafdetenkelteantiserumhosssi,er10antiseraudvalgt;sekso antiseraogfire H antisera.merespecifikterdetiantisera: O:4 O:5 O:7 O:8 O:9 O:12 H:i H:m H:r H:2 UdvælgelsenafproducenterafantiseraerforetagetudfrahvormegetdesælgeriEuropa.I enrivmrapportfra2007findesetskemaoverlaboratorier,oghvemderkøbesantisera fra.defemmestsælgendeproducentervarsomfølger:ssi,sifin,biorad,prolabogdenka Seiken [10].DaProlabikkevillehandlemedSSI,blevdeerstattetmedDifco.Dennedelaf forsøgeterudarbejdetafpernilleolsen,ssidiagnostikaihillerød. Forsøgetblevinddeltitosammenhængendedele,ensensitivitetsdelogenspecificitetsdel. Sensitivitetenafdetenkeltantiserumbestemmesveddereaktioner,somforventesatvære positive,mensspecificitetfastsættesvedattesteforkrydsreaktioner,derforventesatvære negative. Hvilkestammer,deenkelteantiseraskulletestesmed,blevudvalgtvedhjælpafWHO s GuidelinesforthepreparationofSalmonellaantisera [8].Antalletafreaktionerblev begrænsetafprojektetstidsramme.detendtemed10normalreaktionerpr.antiseraog2 bakteriestammerpr.krydsreaktion.detkanmaksimaltblivetil185reaktionerpr. producent. Salmonellastammekollektionen,dererudvalgttilforsøget,eralletagetfraSSI DiagnostikasSalmonellakollektion.Stammerneerudvalgtefterderesantigen sammensætning.renhedenafdemerkontrolleretvedenfuldserotypningmedantiserafra SSI.Forsøgetsstammekollektionersammensat,sådetsamledeantalbakterierholdespået SAMMENLIGNINGAFSALMONELLAANTISERA AFSUSANNEDAAEPLUMLIND 8

9 minimum. Vivartopersoneromatudføreforsøget.Detkrævedeensretningslinjerfor,hvordan reaktionerskulleudføresogbedømmes.allereaktionererudførtsom objektglasagglutinationer.udfald,derikkeblevsomforventet,blevtestetigen.hvisen reaktiongavsammeresultattogangeitræk,blevdetaccepteret.hvisdetoreaktionergav forskelligeresultater,blevstammentestetentredjegang.slutresultatetafreaktionenblev dengraduering,derfremkomtogange.foratbedømmereaktionerneens,blevderlaveten gradueringsskala,somtagerhensyntilproducenternesvejledninger.gradueringsskalaen kansesunderbegrebsdefinitioner.vedtvivlomenreaktionsagglutinationsgradblevdette besluttetifællesskab Materialerogmetode 2.1.0Materialer Prøvemateriale Salmonellarenkulturer(sebilag1forlisteoverbakterienavne,nr.ogserotype) Polyklonaleantisera Biorad SSI O:4,5 Lotnr.:8G2041 O:7 Lotnr.:8K2033 O:8 Lotnr.:8C2026 O:9 Lotnr.:8K2032 H:i Lotnr.:7K2030 H:m Lotnr.:8A2027 H:r Lotnr.:7K2024 H:2 Lotnr.:8G2057 O:4 Lotnr.:876B S1 O:5 Lotnr.:782F H1 O:7 Lotnr.:634Q H1 O:8 Lotnr.:589D H5 O:9 Lotnr.:636H H1 O:12 Lotnr.:866B H4 H:i Lotnr.:726C S3 H:m Lotnr.:692I H3 SAMMENLIGNINGAFSALMONELLAANTISERA AFSUSANNEDAAEPLUMLIND 9

10 H:r Lotnr.:738E S6 H:2 Lotnr.:700k H5 DenkaSeiken Difco Sifin O:4 Lotnr.: O:7 Lotnr.: O:8 Lotnr.: O:9 Lotnr.: H:i Lotnr.: H:m Lotnr.: H:r Lotnr.: H:2 Lotnr.: O:4 Lotnr.: O:5 Lotnr.: O:7 Lotnr.: O:8 Lotnr.: O:9 Lotnr.: H:i Lotnr.: H:m Lotnr.: H:r Lotnr.: H:2 Lotnr.: H:m Lotnr.: Monoklonaleantisera Sifin O:4 Lotnr.: O:5 Lotnr.: O:7 Lotnr.: O:8 Lotnr.: O:9 Lotnr.: H:i Lotnr.: H:r Lotnr.: H:2 Lotnr.: Dyrkningsmedier Agarplader,SSI Lotnr.: Schwörmagar,SSI Lotnr.: Andrereagenser FaseinversionsserafraSSI SAMMENLIGNINGAFSALMONELLAANTISERA AFSUSANNEDAAEPLUMLIND 10

11 - SG1 Lotnr.:836E H4 - SG2 Lotnr.:840H H6 - SG3 Lotnr.:844I H3 - SG5 Lotnr.:839C S5 - SG6 Lotnr.:835K H1 - H:r Lotnr.:669F H1 - H:z Lotnr.:671D S6 NaClaq0,85%,Biomérieux Lotnr.: Ionbyttetvand,NaCl0,9%,SSI Lotnr.: Ionbyttetvand,SSI Lotnr.: Metode Forarbejde SerotyperneafSalmonellabakteriernekontrolleresvedatfuldserotypedemmedantisera frastatensseruminstitut. Forarbejde dagenfør Allebakterierudsåspåplader.Bakterier,derskalbrugestilO antisera,udsåspå agarplader,mensbakterier,deranvendestilh antisera,udsåspåschwörmagarpladermed faseinversionssera(sebilag2forvalgaffaseinversionssera) [9].Schwörmagarplader fremstillesvedatsmelteschwörmagarietvandbad,hvorefterdetafkølestilcirka50 C.10 mlschwörmagarhældesderefteroverienpetriskål,hvoriderertodråber faseinversionssera(setabel1) [22]. Tabel1:Vejledningtilfremstillingafschwörmagarplader Engenerelvejledningtilfremstillingafschwörmagarplader.VejledningenerlavetudfraSSIsanbefalinger [22] Vejledningtilfremstillingafschwörmagarplader Schwörmagarsmeltesivandbad(100 C)ogafkølestilca. 50 Cietandetvandbad. 2dråberaffaseinversionsserummetkommesienlille petriskål(ca.diameter5cm). NB!Dettetrinspringesover,hvisstammenkunharetHantigen 10mlschwörmagarhældesipetriskålen,ogderblandes. Pladenskalståpåenvandretoverfladetilagarener stivnet. Eftertilsåningenskalpladerneståivarmeskabved36 Cnattenover. SAMMENLIGNINGAFSALMONELLAANTISERA AFSUSANNEDAAEPLUMLIND 11

12 AlleantiserafraDifcoleveresfrysetørret,ogskalblandesmed3ml0,85%saltvand. AntiseraerneH:mogH:2fraSifinleveresogsåipulverformogskalblandesmed1mlsterilt ionbyttetvand. Generelagglutinationsprocedure Etobjektglaspudsesrentforstøvogfedtmedlinsepapir,oglæggespåetbordmedsort overflade.endråbe(ca.20 50µlafhængigtafproducent)antiserumafsættespåglasset. Meden10µløjepodenåltagesenlillesmulebakteriekulturfrafirestedetpåpladen,og afsættespåobjektglassetlidtoverantiserumdråben.vedo antiseratagesderfra agarplader,ogvedh antigenertagesderfrakantenafvækstenpåschwörmagarpladen. Antiseraogbakteriekulturblandessammentilenhomogenmælketblandingmeden øjepodenål.derskiftesøjepodenålmellemhvertantisera.glassetvippes(setabel2). Reaktioneniagttages,oggradenafagglutinationbedømmesudfragradueringsskalaen, somkansesunderbegrebsdefinitioner. [9,11,18,19,20,22] Tabel2:Vippe tiderforreaktionerne Oversigtoverdeenkelteproducenterstid,somobjektglassetskalvippes,førenagglutinationsreaktionkanaflæses. [11,18,19,20,21,22] Producent SSI Biorad Sifin Difco DenkaSeiken Vippe tid 10sek sek. max.20vip 60sek. 60sek. SpecielprocedureforDenkaSeiken Enmængdebakteriekultursvarendetilca.4tændstikshovederopløsesi0,5mlNaClaq 0,9%.Etobjektglaspudsesrent,ogendråbeantiseraafsættespådet.Ca.10µlaf bakterieopløsningenafsættesoveniantiserummetpåobjektglasset,ogglassetvippes(se tabel2).reaktioneniagttages,oggradenafagglutinationbedømmesefter gradueringsskalaen,somkanseunderbegrebsdefinitioner. [21] 3.0.0Resultater Allegradueredereaktionerernoteretitabellerpåbilag2.Påbaggrundafdisseresultater erværdierfordiagnostikssensitivitetogspecificitetberegnet.eksempelpåberegningkan sespåbilag3. SAMMENLIGNINGAFSALMONELLAANTISERA AFSUSANNEDAAEPLUMLIND 12

13 3.2.0Normalreaktioner AntiserafraStatensSerumInstitutopnåedeensamletdiagnostisksensitivitetpå99%(se tabel3).65udafdeialt100reaktionerfikgradueringen+++.deresterende35reaktioners gradueringerblevfordeltmed17(+++),17++og1 (setabel4). Bioradssamledediagnostiskesensitivitetblevberegnettil90%.Udafi80reaktioner opnåede72gradueringerstørreellerligmed++.enreaktionfikgradueringen(+),ogde sidstesyvreaktionerhavdeingenagglutination. DendiagnostiskesensitivitetforSifinendtepå95,6%.Firereaktionerblevbetragtetsom negativemedengradueringmindreend(++). Difcosdiagnostiskesensitivitetblev94,4%.85udaf90reaktionerblevpositive. 73udaf80reaktionertestetmedantiserafraDenkaSeikenfikenpositivgraduering.Det giverensamletdiagnostiksensitivitetpå91,25fordenkaseiken(setabel3). Tabel3:Beregnedeværdierfordiagnostisksensitivitet Tabellenviserdeberegnedeværdierfordiagnostiksensitivitetforde5producenter.Værdierneerberegnetudfraresultateraf normalreaktionerne.itilfældeafantiserummetikkeproducereserdettemarkeretmed.ilstårfor IkkeLeveret ogbetyder,at antiserummetproduceresmenikkekunneleveres. Serum SSI Biorad Sifin Difco DenkaS. O:4 100% 100% 100% 100% 100% O:5 100% 100% 100% O:7 100% 100% 100% 100% 100% O:8 100% 100% 90% 100% 90% O:9 100% 100% 100% 80% 70% O:12 100% IL AlleO 100% 100% 98% 96% 90% H:i 100% 100% 100% 100% 100% H:m 100% 90% 90% 90% 90% H:r 100% 100% 100% 100% 80% H:2 90% 30% 80% 80% 100% AlleH 97,5% 80% 92,5% 92,5% 92,5% Samlet 99% 90% 95,6% 94,4% 91,25% SAMMENLIGNINGAFSALMONELLAANTISERA AFSUSANNEDAAEPLUMLIND 13

14 Tabel4:Gradueringsoversigtfornormalreaktioner Tabellenviserantalletafnormalreaktioneriprocent,somharfåetdenpågældendegraduering.Hvisingenreaktionerfikden pågældendegradueringerdettemarkeretitabellenmeden. Anti SSI Biorad serum +++ (+++) ++ (++) + (+) +++ (+++) ++ (++) + (+) O:4 70% 30% 70% 30% O:5 90% 10% SeO:4(serumhedderO:4,5) O:7 100% 70% 30% O:8 70% 30% 100% O:9 90% 10% 70% 10% 20% O:12 100% Serumføresikke AlleO 86,7% 13,3% 77,5% 17,5% 5% H:i 100% 90% 10% H:m 40% 40% 20% 80% 10% 10% H:r 50% 40% 10% 100% H:2 40% 10% 40% 10% 30% 10% 60% AlleH 32,5% 22,5% 42,5% 2,5% 67,5% 5% 7,5% 2,5% 17,5% Samlet 65% 17% 17% 1% 72,5% 11,3% 6,2% 1,2% 8,8% Anti Sifin Difco serum +++ (+++) ++ (++) + (+) +++ (+++) ++ (++) + (+) O:4 100% 100% O:5 100% 100% O:7 100% 90% 10% O:8 90% 10% 60% 40% O:9 80% 20% 50% 20% 10% 10% 10% O:12 Serumføresikke Serumkunneikkeleveres AlleO 94% 4% 2% 80% 14% 2% 2% 2% H:i 90% 10% 100% H:m 30% 30% 30% 10% 70% 20% 10% H:r 100% 100% H:2 20% 40% 20% 20% 60% 20% 10% 10% AlleH 60% 17,5% 12,5% 2,5% 5% 82,5% 10% 2,5% 2,5% 2,5% Samlet 78,9% 11,1% 5,6% 1,1% 3,3% 81,1% 12,2% 1,1% 1,1% 2,2% 1,1% 1,1% Anti DenkaSeiken serum +++ (+++) ++ (++) + (+) O.4 100% O:5 Serumføresikke O:7 50% 40% 10% O:8 90% 10% O:9 50% 20% 20% 10% O:12 Serumføresikke AlleO 60% 22,5% 7,5% 2,5% 5% 2,5% H:i 80% 20% H:m 90% 10% H:r 40% 10% 30% 10% 10% H:2 30% 40% 30% AlleH 60% 12,5% 20% 2,5% 5% Samlet 60% 17,5% 13,8% 1,2% 2,5% 1,2% 3,8% SAMMENLIGNINGAFSALMONELLAANTISERA AFSUSANNEDAAEPLUMLIND 14

15 Tabel5:Gradueringsoversigtforkrydsreaktioner Tabellenviserantalletafkrydsreaktioneriprocent,somharfåetdenpågældendegraduering.Hvisingenreaktionerfikdenpågældende gradueringerdettemarkeretitabellenmeden. Anti SSI Biorad serum +++ (+++) ++ (++) + (+) +++ (+++) ++ (++) + (+) O:4 100% 100% O:5 100% SeO:4(serumhedderO:4,5) O:7 12,5% 87,5% 100% O:8 100% 100% O:9 100% 100% O:12 100% Serumføresikke AlleO 2,2% 97,8% 100% H:i 100% 100% H:m 100% 6,7% 13,3% 80% H:r 100% 100% H:2 14,3% 85,7% 100% AlleH 5,1% 94,9% 2,6% 5,1% 92,3% Samlet 3,5% 96,5% 1,4% 2,8% 95,8% Anti Sifin Difco serum +++ (+++) ++ (++) + (+) +++ (+++) ++ (++) + (+) O:4 100% 100% O:5 100% 100% O:7 100% 100% O:8 100% 100% O:9 100% 100% O:12 Serumføresikke Serumkunneikkeleveres AlleO 100% 100% H:i 100% 16,6% 16,6% 16,6% 16,6% 16,6% 16,6% H:m 6,7% 93,3% 20% 20% 26,7% 13,3% 6,7% 13,3% H:r 100% 50% 25% 25% H:2 100% 50% 14,3% 7,1% 7,1% 21,4% AlleH 100% 33,3% 17,9% 17,9% 7,7% 5,1% 2,6% 15,3% Samlet 98,7% 16,9% 9,1% 9,1% 3,9% 2,6% 1,3% 57,1% Anti DenkaSeiken serum +++ (+++) ++ (++) + (+) O.4 100% O:5 Serumføresikke O:7 100% O:8 100% O:9 100% O:12 Serumføresikke AlleO 100% H:i 100% H:m 100% H:r 100% H:2 7,1% 92,9% AlleH 2,6% 97,4% Samlet 1,1% 98,9% SAMMENLIGNINGAFSALMONELLAANTISERA AFSUSANNEDAAEPLUMLIND 15

16 3.3.0Krydsreaktioner BådeantiserafraSSIogDenkaSeikenfikendiagnostiskspecificitetpå100%(setabel6). SSIhavde82reaktionerudaf85medgradueringen.70udaf71reaktionertestetmed antiserafradenkaseikenfikligeledesgradueringen (setabel5). Bioradsdiagnostiskespecificitetblevberegnettil95,8%.Allereaktionerne,derblev betragtetsomnegative,fikgradueringen. DenberegnedespecificitetforSifinblev98,7%,hvilketsvarertil76udaf77negative reaktioner. ForDifcoblevdendiagnostiskespecificitet64,9%,hvilketsvarertil50negativereaktioner udafialt77reaktioner(setabel5). Tabel6:Beregnedeværdierfordiagnostiskspecificitet Tabellenviserdeberegnedeværdierfordiagnostikspecificitetforde5producenter.Værdierneerberegnetudfraresultaterneaf krydsreaktionerne.itilfældeafantiserummetikkeproducereserdettemarkeretmed.ilstårfor IkkeLeveret ogbetyder,at antiserummeteksisterermenikkekunneleveres. Serum SSI Biorad Sifin Difco DenkaS. O:4 100% 100% 100% 100% 100% O:5 100% 100% 100% O:7 100% 100% 100% 100% 100% O:8 100% 100% 100% 100% 100% O:9 100% 100% 100% 100% 100% O:12 100% IL AlleO 100% 100% 100% 100% 100% H:i 100% 100% 100% 50% 100% H:m 100% 80% 93,3% 33,3% 100% H:r 100% 100% 100% 0% 100% H:2 100% 100% 100% 28,6% 100% AlleH 100% 92,3% 97,4% 30,8% 100% Samlet 100% 95,8% 98,7% 64,9% 100% 4.0.0Diskussion 4.1.0Resultaterne 4.1.1Diagnostisksensitivitetogreaktionernesgraduering Diagnostisksensitivitetbrugestilatvurdereenmetodesevnetilatfindedesandepositive prøver.derforerdiagnostisksensitiveetudtrykfor,hvorgodenmetodeertilatfindefolk somharsygdommen.idetteprojektbrugessensitivitetsometudtrykfor,hvoroftede sandepositivebakteriestammerfindes. SAMMENLIGNINGAFSALMONELLAANTISERA AFSUSANNEDAAEPLUMLIND 16

17 O antisera BetragtermanudelukkendeO antiseraernesresultaterfordiagnostisksensitivitet,ser man,atallefemproducentersproduktervarfuldtsensitiveforreaktionernemedantisera O:4ogO:7(setabel3). ForantiserumO:4opnåedeSifin,DifcoogDenkaSeikentopgradueringenforalle reaktioner,mensssiogbioradhavdesyv+++ogtre(+++).udafdissetre(+++),vartoaf bakteriestammernedesamme. ForantiserumO:7fikkunSSIogSifin100%topgraduering.DifcoogBioradhavdeen fordelingmellemgradueringerne+++og(+++)påhenholdsvis9:1og7:3.denkaseiken fordelingafgradueringerneblevmed50%+++,40%(+++)og1++(setabel4). SSI,SifinogDifcovardeeneste,somproduceredeO:5,ogalleopnåede100%sensitivitet. AlletireaktionerforbådeSifinogDifcofikhøjestegraduering,mensSSIhavdeni+++og1 (+++). KunSSIkunnelevereantiserummetO:12,ogdettevarfuldtfølsomtmedallegradueringeri top. Forderesterendetoantisera,O:8ogO:9,opnåedeSSIendiagnostisksensitivitetpå100%. Gradueringerneblevfordeltmed70%forO:8og90%forO:9på+++.Desidstereaktioner fikallegradueringen(+++).bioradfikligeledesensensitivitetpå100%fordetoantisera. SifinogDenkaSeikenfikbeggeensensitivitetpå90%forO:8,oghavdedesamme9 reaktionermedgradueringen+++.reaktionenmedkoll.nr.310varnegativhosbegge producenter.sammereaktionhavdehosssiogdifcofåetgradueringen(+++),somvarden lavestegradueringfordisseproducenter.sifinfikensensitivitetpå100%foro:9,mens DifcosogDenkaSeikensblevberegnettilhenholdsvis80%og70%. H antisera Itabel3sesdet,atallefemproducenteropnåendeendiagnostisksensitivitetpå100%for H:i.IndenforstyrkenafreaktionernevardetkunDifco,derfikgradueringen+++ialleti reaktioner.difcoogbioradhavdebeggeni+++reaktionerogen(+++)reaktion.denka seikenhavdeottereaktionermedgradueringen+++,og2reaktionermed++(setabel4). AllereaktionertestetmedSSIsantiserumfikgradueringen++. ForantiserummetH:rfikbådeSSI,Biorad,SifinogDifcoensensitivitetpå100%,Denka Seikenhavdetofalskenegativereaktioner,ogfikderforensensitivitetpå80%fordette SAMMENLIGNINGAFSALMONELLAANTISERA AFSUSANNEDAAEPLUMLIND 17

18 antiserum. AlleproducenterundtagenSSIopnåedeensensitivitetpå90%forantiserummetH:m.SSI opnåedefuldsensitivitet.biorad,sifin,difcoogdenkaseikenhavdealledensamme negativereaktion.koll.nr.1809varnegativehosdefireførnævnteproducenter,dogvar denpositivmedgradueringen++nårdenblevtestetmedantiserumfrassi.dettekunne tydepå,atstammenudtrykkerantigenetsvagt. H:2antiserumproduceretafSSIopnåedeensensitivitetpå90%,menssensitivitetenaf antiserumproduceretafsifinogdifcobeggeblev80%.bioradopnåededenlavestedelsensitivitetpå30%forantiserumh:2(setabel3).indenfordissereaktionervardetkun reaktionenmedkoll.nr.209,derhavdesammegradueringforfireafproducenterne.den varnegativ.denkaseikenvarenesteproducent,derhavdeetfuldtfølsomtantiserum Diagnostiskspecificitetoggradueringer Modsatsensitivitetbrugesdiagnostiskspecificitettilatvurderemetodensegenskabtilat givesandenegativesvar.idetteprojekterspecificitetknyttettilkrydsreaktionerne,dadet erdissederskalundgåsforatkunnestolepåresultatet.diagnostiskspecificitetbliver derforbrugtsometudtrykforhvormangesandenegativekrydsreaktionerderer. O antisera Allefemproducenteropnåedeenberegnetdiagnostiskspecificitetpå100%foralle O antiseraerne.detbetyder,atallefabrikanterhavdereaktionermedgradueringerpå (++).MerepræcisthavdeprocenterneBiorad,SifinDifcoogDenkaSeikenalleudelukkende reaktionermedgradueringen.ssihavdeligeledesreaktionermedgradueringen,med undtagelseafkoll.nr.665testetmedantiserumo:7.dennereaktionfikgradueringen(+), mendadennebetragtessomnegativ,hardetingenbetydningforresultatetfor specificiteten(setabel5). H antisera ForH antiseravardetkunssiogdenkaseiken,deropnåedeensamletspecificitetpå 100%.ForSSIfik94,9%afkrydsreaktionernegradueringen,desidste5,1%svarertilto reaktionerderfikgradueringen(+).fordenkaseikenfik97,4%afkrydsreaktionerne gradeeringen,densidstereaktionerblevvurderettil(++)(setabel5). Itabel6sesdet,atbådeBioradogSifinopnådespecificiteterpå100%forH:i,H:rogH:2.I SAMMENLIGNINGAFSALMONELLAANTISERA AFSUSANNEDAAEPLUMLIND 18

19 allekrydsreaktionersketederingenagglutination.forantiserummeth:mopnåedebiorad enspecificitetpå80%,hvilketsvarertil12negativereaktioner,somallefikgradueringen.sifinopnåedeendiagnostiskspecificitetpå93,3%.reaktionenmedkoll.nr.1460blev positiv,mensde14andreblevnegativesomforventet. Difcossamledediagnostiskespecificitetblevberegnettil30,8%,hvilketeruacceptabelt lavt.udaf39blevkun12reaktionernegative,ogudafdemkunhalvdelenheltudennogen gradafagglutination(setabel5).værstvardetforantiserummeth:r,deropnåedeen specificitetpå0%.forderesterendeh antiserablevdeenkeltespecificiteterberegnettil 50%forH:i,33,3%forH:mog28,6%forH:2(setabel6).Afdenneårsagmenerjegikke, ath antiserafradifcokanbrugestildiagnostik Andresundersøgelserogresultater ArtiklenskrevetafSchrader,KimmiN.etalhandleromenevalueringafSalmonella antiseraaffabrikatetdenkaseiken [17].O,H ogvi antiserablevtesteogvurderetmed henblikpåsensitivitetogspecificitet.totaltsetblev1vi antiserum,38h antiseraog16 grupperafo antiseratestet. Underforsøgetblevtoforskelligeagglutinationsmetoderbrugt;tube agglutinationog objektglasagglutination.sidstnævnteeriøvrigtsammemetode,somerbrugttilforsøgeti dennerapport.forsøgetblevfortagetsåledes,atbådealmindeligeogsjældnesalmonella serotyperblevtestet.forkrydsreaktionerblevderudvalgtserotyper,somsvarertilwho s guidelines.alleo ogvi antiserablevigennemsnittestetmed9,9salmonellaserotyper.hantiserablevfortube agglutinationertestetmed9,8stammer,imensderfor objektglasagglutinationerigennemsnitblevtestetmed5,2bakteriestammer.for krydsreaktionerblevbrugtcirka5bakteriestammervedtubeagglutinationerforo,vi og H antisera,ogforobjektglasagglutinationerminimum1ogmaksimum8bakteriestammer. Resultatetafundersøgelsenblev,atDenkaSeikenopnåedeensensitivitetogspecificitetpå 100%forbådeO ogvi antisera.fortube agglutinationervarh antiseraligeledes100% specifikke,menssensitivitetenlåpå99%.forobjektglasagglutinationervarsensitiviteten 89%ogspecificiteten91%forH antisera.hvismankunserpåh antiseraernei,m,rog2 blevsensitivitetogspecificitetenforh antiserabegge100%. IdetteprojektsforsøgblevsensitivitetenforO antisera90%,mensdenforh antiserablev SAMMENLIGNINGAFSALMONELLAANTISERA AFSUSANNEDAAEPLUMLIND 19

20 92,5%(setabel7). Sermanalenepåspecificitetenfradetoforsøg,erbeggeparterkommetfremtilsamme resultatforo antiseraogforh antisera,hvismanalenemedtagerh:i,h:m,h:rogh:2.hvis manderimodserpåresultatetforspecificitetenfor alle H antisera,liggerdeniartiklen på91%.forskellenpå9procentpoint,menerjeg,kanskyldesindividuelle vurderingskriterierellerdetfaktum,atresultatetiartiklenerbaseretpåreaktionerfor38 H antisera.jegmener,detsammeergældendeforsensitivitetsværdierneforh antisera. Hererenforskelpå3,5procentpoint.SermanalenepåresultaternefordefireH antisera, erderenforskelpå7,5procentpoint.denneforskelkanskyldes,atdetikkeerdesamme stammer,dererblevettestetidetoforsøgellerenandenvurderingenafresultaterne. Forskellenkunnemuligvisogsåværeetudtrykforenlilleforskelifremgangsmådenunder forsøget. Tabel7:SammenfatningafresultaterfraforsøgetiartiklenafSchraderetalogdetteprojekt Tabellenviserdefundneværdierfordiagnostisksensitivitetogspecificitet.DefireudvalgteH antiseraerh:i,h:m,h:rogh:2,somalleer medtagetidetteprojekt.værdierneforh antisera(alle)dækkeroverresultaterbegegnetudfrade38h antiseramedtagetiforsøget beskrevetiartiklenafschrader,kimmin.etal [17] Artiklensforsøg Detteforsøg Sensitivitet Specificitet Sensitivitet Specificitet O antisera 100% 100% 90% 100% H antisera(4udvalgte) 100% 100% 92,5% 100% H antisera(alle) 89% 91% SensitivitetenforO antiserablevberegnettilhenholdsvis100%og90%idetoforsøg(se tabel7).forskellenmellemdissetoværdierkanligesomvedh antiseraerneskyldes forskeliantalletafantisera,dertestes.jegmener,ensensitivitetpå90%giveretgodt billedeafantiseraernesfølsomhed,menhvisdetteskulleværedetkorrektesvar,villedet ikkehaveværetmuligtatfåensensitivitetpå100%ietandetforsøgmedlignende opsætning.derformåenafårsagernetilforskellenværeudvalgetafsalmonellastammer brugttilforsøgene.vedatsammenholdelisterneforbakterierbrugtveddetoforsøg(afoantisera),varkun11stammerens.dettekunneforklarenogetafforskellen 4.2.0Forsøgsopsætningen Valgetafforsøgsmetodenkanhaveindflydelsepåudfaldetafresultaterne. SAMMENLIGNINGAFSALMONELLAANTISERA AFSUSANNEDAAEPLUMLIND 20

21 4.2.1Aflæsningsproblematikoggraduering Hvordanenreaktionsstyrkevurdereserenindividuelsag,menietforsøg,hvorderer fleretilatudføredet,skalkriterierneforvurderingenværetilnærmelsesvisens.deter relativtnemtatseomenreaktionskalhave+++,dareaktionenskalskemeddetsamme. Ligeledeserdetnemtatseomenreaktionskalhave,dadersletikkemåskeen agglutinering.deterdemellemstegradueringer,derersværeatbedømme.skillelinjen mellemenpositivognegativreaktioneridetteforsøgbestemttilatværemellem++og (++).Eksempelviskanenagglutinationbegyndeisidstesekundafvippe tiden,menskal dennereaktionsåvurderessompositiv,ellererdeten forsinketreaktion,somdenka Seikennævner.Detkanogsåforekomme,atbaggrundenertemmeliguklar,når reaktionstidenerudløbet,ogderersmåsynligekornivæsken.skaldennereaktionså betragtessompositiv?ligeledeskandetværesværtatbedømmehvornårenreaktioner stærkellersvagudenathaveenklardefinitionfordet.hertænkerjegpådenkaseiken. IartiklenafSchradereralfra2008 [17] bliverdetteemnebehandlet.hernævnes,athvis ikkederhavdeværetenrepræsentantfradenkaseikentilstedeunderendelafforsøget, villemangeafreaktionerneværeblevetaflæstforkert.mangeafdereaktioner,manville havevurderettilatvære2+( 50%agglutination,letskyetbaggrund)efterderesskala, blevbetragtetsomværendestærkeafdenkaseikensrepræsentant.havde repræsentantenikkeværettilstede,villereaktionerneværetblevetbetragtetsom negative.detbliveriartiklenanbefaletatdenkaseikenudarbejderenklarogtydelig definitionaf enstærkreaktion ellermedsendernoglebillederaf,hvadderbetragtessom værendeenpositivreaktion. Jegkankunværeenigmedartiklen,idetdetersværtatvurdere,hvadfirmaernebag antiseraernebetragtersomværendestærktellersvagt.påsammemådeerdetvanskeligt fortopersoneratvurdereenreaktionens.forathavenogleretningslinjeratholdesigtil, erderudarbejdetengradueringsskalatildetteprojekt.skalaentagerhensyntildeenkelte firmaersvejledninger.ifølgevejledningenfradifcoskalreaktionervurderesefter mængdenafagglutinering. Hvisenreaktionliggerpåskillelinjenmellempositivognegativ,erdetoptil bioanalytikerenatbestemmeudfaldet.dettekanhaveindflydelsepådeberegnedeværdier fordiagnostisksensitivitetogspecificitet,idetenøgetantalsandepositivesvarviløget værdienforsensitivitetogmodsat. SAMMENLIGNINGAFSALMONELLAANTISERA AFSUSANNEDAAEPLUMLIND 21

22 Idetteprojektharjegprøvetattagehøjdefordettevedatkoordineremedmin samarbejdspartneritilfældeaftvivl.detudelukkerdogikkeeventuelleforskellei vurderingenafreaktionsgraderne,mendetminimeredem Mono /polyklonaltantiserum betydningforsensitivitetogspecificitet? AlleantiserafraSSI,Biorad,DenkaSeikenogDifcoerpolyklonale.Sifinproducererbåde monoklonaleogpolyklonalesalmonellaantisera.alledeantiseraviharfåetfrasifin, undtagenh:m,ermonoklonale.h:merpolyklonal. TestresultaterneforSifinharvist,atdemonoklonaleantiseraharopnåetbedrespecificitet enddetpolyklonaleantiserum.detteeralenebaseretpåkrydsreaktionerforh:m,hvor Sifinhavdeetenkeltpositivresultatforreaktionenmedkoll.nr.1460(sebilag2under krydsreaktionerh:m).dennereaktionblevdogogsåfundetpositivafbioradogdifco.om detderforskullehavenogetatgøremed,atantiserummeterpolyklonaltellermonoklonalt ersværtatsige,idetdennereaktionblevfundetpositivaf3udaf5polyklonaleh:m antisera.indenforsensitivitetforantiserafrasifinerderentendenstil,atdemonoklonale antiseraopnårhurtigereogtydeligerereaktionerenddepolyklonale.reaktionermedde monoklonaleantistoffero:4,o:5,o:7,o:8ogo:9samth:iogh:rliggeralleitoppenaf gradueringsskalaen.h:2,someretmonoklonalantiserum,falderlidtudenfordette.to reaktionerblevfundetnegativeogtoreaktionerlåpågrænsentilatværenegative.det monoklonaleantiserumh:mhavdederimodenreaktionmedkoll.nr.1809,somfaldt negativud.dennereaktionblevogsåfundetnegativafbiorad,difcoogdenkaseiken. Derfortyderdetpå,atantigenetersvagtudtrykt.ReaktionenblevfundetpositivafSSI, hvilketerbevispå,atstammenudtrykkerantigenetidendyrkning.treandrereaktioner (koll.nr.46,226og551)forsifinsh:mfikenlavgraduering,menerstadigpositiv.koll.nr. 46og551fikhosalleandreproducentertopgraduering,mensnr.226fikto topgradueringerogto(+++)gradueringer. Ovenståenderesultatertegneretbilledeaf,atdemonoklonaleantistofferklarersigbedre enddepolyklonale.deresterendeproducenter(ssi,biorad,difcoogdenkaseiken)har ikkeklaretsigdårligereendsifin.resultaterneforo:4,o:5,o:7og8harværetligegodefor depolyklonaleogdetmonoklonale.gradueringerneharliggetsåtætpåhinanden,atjegvil påstå,atdenforskelderer,skyldestilfældighederellervurderingsårsager.foro:9harssi ogsifinopnåetsammegradueringer.bioradfølgertrop.difcoogdenkaseikenharmindre SAMMENLIGNINGAFSALMONELLAANTISERA AFSUSANNEDAAEPLUMLIND 22

23 goderesultater.alligevelmenerjegikke,deternoktil,atmankansige,atmonoklonale antiseraerbedre Andresundersøgelser IenartikelafLuk,Johnetalfra1991 [16],omhandlendemonoklonaleantistofferogderes brugbarhedindenfordiagnostik,sammenholdesmonoklonaleantistoffermedpolyklonale antistoffervedobjektglasagglutination.resultatetafundersøgelsenblev,atmonoklonale ogpolyklonaleantistofferreageredemeddesammesalmonellastammer,ogsensitiviteten afdemerderforligegod.detotyperantiserablevogsåtestetmedandrebakterieraf familienenterobacteriaceaesamtandregramnegativebakterier.herklaredede monoklonaleantiserafrisag,mensdepolyklonalehavdenoglekrydsreaktioner. Specificitetenafdemonoklonaleantistofferblevdermedvistatværebedreendde polyklonaleantiseras.artiklennævnerdogikkehvemderharproduceretdepolyklonale antisera.desudenvardethjemmefabrikeredemonoklonaleantistoffer,derblevanvendttil sammenligningen. Artiklenskonklusionerstemmeroverensmeddedelkonklusionerjegerkommetfremtil. Alligevelmenerjegikke,derergrundlagforatsige,atmonoklonaleantistoffererbedre enddepolyklonale.deterrelativtfåantisera,somerblevettestetidetteprojektogmed kunenproducentafmonoklonaleantisera.derformenerjegikke,mankankonkludere nogetendeligt.resultaterneliggerendvideremegettætopadhinandennårman sammenlignerssi(somrepræsentantforpolyklonaleantisera)ogsifin. Pågrundafmetodentilfremstillingafmonoklonaleantistoffer,kanmanfåetmeget specifiktantiserum.detladertil,atsammespecificitetdogkanopnåsvedabsorptionen underfremstillingenafpolyklonaleantisera Andreforhold Diagnostiskspecificitetogsensitivitetergodeparametretilatvurdereetprodukts ydeevne.jegsynesdogikke,manaleneskalbedømmeetproduktudfradet.pris, håndteringogmedfølgendevejledningererogsåenvigtigdelafproduktet.nedenforviljeg derforkortgennemgådiss. SAMMENLIGNINGAFSALMONELLAANTISERA AFSUSANNEDAAEPLUMLIND 23

24 4.5.1Priser PrisenpådetenkelteSalmonellaantiserumafhængerformodentligaf,hvorkompliceret deteratfremstilleantiserummet,samthvorstoreomkostningerneharværet.foratgiveet overblikerderpåbilag4lavetenlisteoverlistepriser. IindkøbspriserliggerantiserafraSSItildedyreste,kunovergåetafprisenpåBioradsH:2 ogdenkaseikensh:iogh:2. Dadeterforskelligt,hvormegetantiserafirmaerneanbefalerpr.reaktion,erprisenpr.test beregnetpåbilag4. IdenbilligsteendeliggerDifcomedengennemsnitligprisprtestfordemedtagneantisera på2,83dkk.dennelavepriskanhængesammenmed,atantiseraerneleveresfrysetørret, ogatderderforskalberegnesekstraomkostningertilindkøbaf0,85%saltvand. AntiserafraSSIerdenæstbilligstemedengennemsnitligprispr.testpå3,95DKK. BioradogSifinharbeggeencirkaprisprtestpåomkring4,8DKK.DaikkealleSifins antiseraleveresfærdigblandet,mådertillæggesomkostningertilindkøbafsteriltvand. DenkaSeikenharforsøgetsdyresteprispr.testpå5,15DKK.Derskaldesudenbruges saltvandtilreaktionerne,såekstraomkostningertillægges. Dererikkemedregnetomkostningertilobjektglas,podenålemm.,dadisseomkostninger vilværeensforalleforbrugere. BedsttilprisenbliverSSIsantisera,pågrundafenlavprispr.testogenhøjdiagnostisk sensitivitetogspecificitet(setabel3og6) Håndtering SSIsantiserakommerfærdigblandetismåglasflaskermed3mlihver.Proppener udformetsomenlillepipette,hvilketgørdetnemtatafsætteendråbeantiserapå objektglasset. Bioradsprodukterkommersomdeenesteismåplastikflasker.Flaskerneerudformetuden pipette,mentilgengælder tuden påflaskenlille,hvilketgørdetnemtatafsætteenlille dråbe.antiseraerneerfærdigblandetogleveresi3mlflasker.detenestenegativeved detteprodukteratantiseraernenemtflyderudpåobjektglasset.detbetyder,atmanskal væreopmærksompå,atantiseraerneikkeflydersammen,hvismanharflerereaktionerpå sammeglas. SAMMENLIGNINGAFSALMONELLAANTISERA AFSUSANNEDAAEPLUMLIND 24

25 AntiserafraDenkaSeikenbliverleveretitoforskelligestørrelser.AlleO antiseraleveresi 2mlflasker,mensH antiseraeri5ml.alleantiseraerfærdigblandetvedlevering. Antiseraerneleveresiglasflaskermedenpipette prop.selvepipettespidsenermegetkort, hvilketgørdetsværtatfåsugetvæskeop.dogerdetmegetnemtatafsættedenrigtige mængdeantiserumpåobjektglasset. AntiserafraSifinleveresmed1mliflaskerne,menmankansepåflaskerne,atdeerlavet tilatrummeoptil3ml.demestgængseantiseraleveresfærdigblandet,mensmindre almindeligeantiseraleveresfrysetørret.selveflaskenerlavetiglasogleveresmeden pipette prop.idetilfælde,hvormanselvskalblandesera,erdersatetskruelågpåflasken, ogpipettenliggerløstiæskenindpakketiplastfolie.pipettenerudformetsådeternemtat sugevæskeop,ogderkanmedlidtøvelseafsættessmådråber.væskenhardogtendenstil atløbeud. AlleantiserafraDifcoleveressometfrysetørretpulverienlilleglasflaske.Deskalblandes opindenbrugmed3mlnacl0,85%.flaskerneerderforforsynetmedengummipropog etskruelågfrafabrikkensside,menderfølgerenpipette propmed.dennelåløstog uindparketiæsken.pipettenvarlangnoktilatkunnenåbundenafflasken,hvilketgørdet nemtatfådetsidsteiflaskenud Vejledning/indlægsseddel Bioradsmanglendevejledning/indlægsseddeleretstortminus.Dervaringenbeskrivelse afindholdetipakken,ingenvejledningtilatudføreagglutinationerkorrektellertilattolke resultatet.detvistesig,atmankunnefindeenvejledningpådereshjemmesideom hvordanenagglutinationskulleudføres.idennevejledning,henvisesdertil product technicaldatasheet.dettetyderpå,derfindesenindlægsseddel,oghvorfordenikkevar mederstadiguklar. SSIsindlægsseddelvarmegetkort,menfikbeskrevetdethele(princip,nødvendige materialer,procedure,tolkningafagglutinationogopbevaringmm.).dethelevarskrevet påengelsk.sammeindlægsseddeldækkedebådeo ogh antisera. IndholdetiDenkaSeikensindlægsseddeldækkeroverdesammeemnersomSSIs. Tekststørrelsesamtopsætningengørdetnemtatlæseindlægssedlen. Difcosindlægsseddelstårskrevetpåbådeenengelsk,fransk,tysk,italienskogspansk.Alle relevanteinformationer(princip,nødvendigematerialer,procedure,tolkningaf SAMMENLIGNINGAFSALMONELLAANTISERA AFSUSANNEDAAEPLUMLIND 25

26 agglutinationogopbevaringmm.)erlistetoppåenoverskueligmåde.difcoharsomden enesteproducentlavetetskemaoverhvordanagglutinationerneskalgradueresogtolkes, hvilketefterminmeningeretplus.enmindregodtingermåden,deharvalgtatgraduere på.deharvalgtatinddelereaktionerneefterhvormegetafvæsken,deragglutinerer.det kanværesværtatbedømmehvornårderer50%eller75%agglutination,hvilketer skillelinjenmellempositivreaktionognegativreaktion. Sifinsindlægsseddelerskrevetpåengelskogtysk,ogderfindestoseparateindlægssedler; enforo,vi antiseraogenforh antisera.indholdetidetosedlerermereellermindredet samme,ogdedækkersammeemnersomderesterendeproducenters.sifinomtaler hvordanreaktionerneskaltolkes,påensådanmåde,atdetertilatforstå.bådestærkeog svagepositiveognegativereaktionerbeskrives,mendereringenegentliggraduering.sifin sendtesomdeenestekvalitetskontrolcertifikatermedforhvertsera,dogvarhalvdelenaf dissepåtysk Levering Detharikkeværetmuligtatfindeudafomdeforskelligeproducenterharen leveringsgarantiistilmedssi.antiserafradenkaseiken,sifinogbioradblevbestilti midtenaffebruar.datoforleveringenafdemkanjegdesværreikkesigemedsikkerhed, menomkringslutningenafmarts/startenafaprilvardeflesteantiserafrabiorad,denka SeikenogSifinkommet.Restenafantiserafradissefirmaerblevleveretløbendeunder forsøget.leveringstidsmæssigtoverstigerdetssisleveringsgaranti.antiserafradifcoblev bestiltistartenafaprilmåned,pånæro:12.denneblevbestiltimidten/slutningenaf april.alleantiserafradifco,undtagen2ogo:12,blevleveretca.14dageefter1.bestilling. Desidsteseravarirestordre,ogblevleverethurtigstmuligt.Dethardogikkeværetmuligt atfålevereto:12,grundetproblemermedce mærkningen,somereteukrav Konklusion UdfradefundneværdierfordiagnostisksensitivitetogspecificiteterSalmonellaantisera frastatensseruminstitut,demsomharklaretsigbedst.medendiagnostisksensitivitetog specificitetpå99%og100%erssidetteforsøgsvinder.deenkeltereaktionerhavde fornuftigegraduering,setudfratypenafreaktion.antiserafradeandreproducenter SAMMENLIGNINGAFSALMONELLAANTISERA AFSUSANNEDAAEPLUMLIND 26

27 havdedogogsåhøjeværdierfordiagnostisksensitivitetogspecificitet,medundtagelseaf DifcosH antisera,somhavdeenuacceptabeldiagnostiskspecificitet Perspektivering Idetteprojekterkun10Salmonellaantiseramedtaget,ogdaikkeallefirmaerproducerer demalle,erdetfornogensvedkommendekun8antisera.derforerkonklusionenfordenne rapportkunvejledende,ogkanikkeanvendessomenendeligudtalelseforproducenternes samledekollektionafsalmonellaantisera.detkunnederforværeinteressantatfølgeoppå detteprojektvedattesteflereafproducenternesantisera. SAMMENLIGNINGAFSALMONELLAANTISERA AFSUSANNEDAAEPLUMLIND 27

28 6.0.0Litteraturliste Bøger 1. Andersen,Hansetal.,Immunkemiskemetoder teoriogpraksis,1udgave1995, Nucleus 2. Bendixen,Gunnaretal.,Basalogkliniskimmunologi,2udgave1994,FADL sforlag, side Brooks,Geo.F.etal,Jawetz,Melnick,&Adelberg smedicalmicrobiology,23.udgave, 2004,Langemedicalbooks/McGraw Hill,USA,kapitel2og16 4. Højby,Niels,Basalogkliniskmikrobiologi,2udgave,FADL sforlag,side Justesen,UlrikS.,KompendiumiBakteriologiogmykologi,2udgave2003,FADL s forlag 6. Kjeldsen,Keldetal.,Infektionssygdommeogmikrobiologi,2006,Akademiskforlag Rapporter,opslagsværker,dokumentermm.. 7. Masten,BarbaraJean,Thesalmonellaflagellarantigeng asapotentialcarrierof foreignepitopes,texastechuniversityhealthsciencescenter,december Popoff,MichelY.,Guidelinesforthepreparationofsalmonellaantisera,6udgave 2001,WHOogInstitutPasteur 9. Q dok,objektglasagglutination,immunologiskemetoder,dokumentnr.217version 01,StatensSerumInstitut 10. RIVMrapport /2007,TwelfthCRL Salmonellainterlaboratory comparisonstudy(2007)ontypingofsalmonellaspp. Internet hkkdflm.0&categorypath=%2fcatalogs%2ffood+%7c+animal+%7c+environment+ Testing%2fImmune+Sera%2fSalmonella+&catLevel=4&divName=Corporate&logge din=false&lang=english&country=dk&catoid=32775&ispa=false&servicelevel=lit +Request SAMMENLIGNINGAFSALMONELLAANTISERA AFSUSANNEDAAEPLUMLIND 28

29 14. Artikler 15. Guldagger,Mette,Salmonella epidemiløjeraf,politikkennetavis,dagligliv,27januar Luk,JohnM.C.etal,Anti Salmonellalipopolysaccharidemonoclonalantibodies: CharacterizationofSalmonellaBO,CO,DO,andEO specificclonesandtheir diagnosticusefulness,jclin.microbiology,november1991;29(11),side Schrader,KimmiN.etal,Evaluationofcommercialantiseraforsalmonella serotyping,jclin.microbiology,februar2008;46(2),side Indlægssedler 18. Difco SalmonellaOantisera,Difco SalmonellaHantisera,Difco Salmonella antiserumvi,difco,juni Enteroclonandtestserum,Anti SalmonellaH,Sifin,november EnteroclonAnti SalmonellaGr.B,C,D,E,EnteroclonAnti SalmonellaO,Vi,Sifin, januar Salmonellaantisera,DenkaSeiken,08august Salmonellaantiseraforinvivodiagnosticuse,Statensseruminstitut,december2005 SAMMENLIGNINGAFSALMONELLAANTISERA AFSUSANNEDAAEPLUMLIND 29

30 Bilag1:Listeoverbakteriestammer Koll.nr. Navn Serotype 1 S.ParatyphiA 1,2,12:a: 9 S.Typhimurium 4,5,12:i:1,2 13 S.Typhimurium 4,5,12: : 16 S.Heidelberg 4,5,12:r:1,2 23 S.Budapest 4,12:g,t: 42 S.Oranienburg 6,7:m,t: 46 S.Montevideo 6,7:g,m,s: 50 S.Newport 6,8:e,h:1,2 56 S.Glostrup 6,8:z 10:e,n,z S.Enteritidis 9,12:g,m: 66 S.Rostock 9,12:g,p,u: 67 S.Moscow 9,12:g,q: 94 S.Onderstepoort 1,6,14,25:e,h:1,5 98 S.Kentucky 8,20:i:z S.Muenchen 6,8:d:1,2 139 S.Weltevreden 3,10:r:z S.Taksony 1,3,19:i:z S.Concord 6,7:l,v:1,2 158 S.Infantis 6,7:r:1,5 161 S.Adelaide 35:f,g: 174 S.Pensacola 9,12:m,t: 184 S.Richmond 6,7:y:1,2 185 S.Gatuni 6,8:b:e,n,x 188 S.Shoreditch 9,46:r:e,n,z S.Monschaui 35:m,t: 200 S.Hildago 6,8:r:e,n,z S.Typhimurium 4,5,12:i:1,2 210 S.Bredeney 1,4,12,27:l,v: 219 Salmonellavar. 28:y: 221 S.ParatyphiB 4,5,12:b: 226 S.Enteritidis 9,12:g,m: 246 S.Takoradi 6,8:i:1,5 254 S.Kibusi 28:r:e,n,x 274 S.Leopoldville 6,7:b:z S.ParatyphiA 1,2,12: :1,5 283 S.Sanga 8:b:1,7 296 S.Haifa 1,4,5,12:z 10:1,2 310 S.Hindmarsch 8:r:1,5 321 S.Banana 4,5,12:m,t: 400 S.Westhampton 3,10:g,s,t: 408 S.Albuquerque 6,14,24:d:z S.Bleadon 17:f,g,t: 523 Salmonellavar 4,5,12:r: 529 Salmonellavar 9,12:r: 538 S.Garoli 6,7:i:1,6 551 S.Hato 4,5,12:g,m,s: 568 S.Kaduna 6,7:c:e,n,z 15 SAMMENLIGNINGAFSALMONELLAANTISERA AFSUSANNEDAAEPLUMLIND 30

31 Koll.nr. Navn Serotype 581 S.Dublin 9,12:g,p: 646 S.Gloucester 1,4,12,(27):i:l,w 665 S.Buzu 1,6,14,25:i:1,7 975 S.Treforest 51:z:1,6 998 Salmonellavar. 4,5,12: : 1091 Salmonellavar. 16:l,v: 1143 S.Westerstede 1,3,19:l,z 13: 1311 Salmonellavar. 40: :1,5, S.Travis 4,5,12:g,(p),z 51:1, S.Maiduguri 1,3,19:f,g,t:e,n,z S.Agbeni 13,23,36:g,t: 1518 S.Vleuten 44:f,g: 1567 IIIb 50:r:1,5,(7) 1600 IIIa 40:g,z 51: 1638 S.Jönköping 4,5,12:g,s,t: 1728 S.Augustenborg 6,7:i:1, S.Chirrieol 6,8:g,m:j 1741 II 1,9,12:g,z 62:[e,n,x] 1744 II 9,46:g,z 62: 1756 S.Antarctica 9,12:g,z 63: 1809 S.Hillingdon 9,46:g,m: 1872 S.Seremban 9,12:i:1, S.Dublin 1,9,12:g,p: 1938 S.Bergues 51:z 10:1, S.Virchow 6,7:r:1, S.Yovokome 8,20:d:1, S.Enteritidis 1,9,12:g,m:! Allekoll.nr.henvisertilStatensSerumInstitutsSalmonellakollektionpå substratfabrikken,hillerød. SAMMENLIGNINGAFSALMONELLAANTISERA AFSUSANNEDAAEPLUMLIND 31

32 Bilag2:Resultatskemaer Normalreaktioner Koll.nr. Navn SSI Biorad Sifin Difco DenkaS. O:4 9 S.Typhimurium S.Heidelberg +++ (+++) S.Typhimurium S.ParatyphiB S.Banana (+++) (+++) Salmonellavar (+++) (+++) S.Hato (+++) Salmonellavar S.Travis S.Jönköping O:5 9 S.Typhimurium S.Typhimurium S.Heidelberg S.Typhimurium S.ParatyphiB SeO:4 (serumheddero:4,5) 321 S.Banana Salmonellavar (+++) S.Hato Salmonellavar S.Travis O:7 42 S.Oranienburg (+++) 46 S.Montevideo +++ (+++) S.Concord (+++) 158 S.Infantis +++ (+++) S.Richmond +++ (+++) S.Leopoldville (+++) 538 S.Garoli (+++) S.Kaduna S.Augustenborg S.Virchow (+++) O:8 56 S.Glostrup S.Kentucky S.Muenchen S.Gatuni (+++) (+++) S.Hildago (+++) (+++) S.Takoradi S.Sanga S.Hindmarsch (+++) +++ (+++) (++) 1734 S.Chirrieol S.Yovokome (+++) +++ Serumføresikke SAMMENLIGNINGAFSALMONELLAANTISERA AFSUSANNEDAAEPLUMLIND 32

33 Koll.nr. Navn SSI Biorad Sifin Difco DenkaS. O:9 64 S.Enteritidis (+++) S.Rostock (+++) 67 S.Moscow +++ (+++) S.Pensacola (+++) ++ (+++) (++) S.Shoreditch Salmonellavar (+++) 581 S.Dublin (+++) 1756 S.Antarctica (+++) 1809 S.Hillingdon (+++) 1872 S.Seremban (+++) (+++) O:12 9 S.Typhimurium S.Heidelberg S.Enteritidis S.Typhimurium S.ParatyphiB S.Banana Salmonellavar S.Hato S.Jönköping S.Seremban +++ Koll.nr. Navn Faseinv. SSI Biorad Sifin Difco DenkaS. H:i 9 S.Typhimurium SG S.Kentucky SG S.Taksony SG S.Typhimurium SG S.Takoradi SG S.Garoli SG S.Gloucester SG S.Buzu SG6 ++ (+++) (+++) S.Augustenborg SG S.Seremban SG H:m 42 S.Oranienburg S.Montevideo S.Enteritidis ++ (+++) (+++) (+++) S.Pensacola (+++) S.Monschaui S.Enteritidis (+++) (+++) S.Banana (+++) +++ (+++) S.Hato S.Chirrieol (+++) +++ (+++) S.Hillingdon Serumføresikke Serumføresikke Serumkunneikkeleveres Serumføresikke SAMMENLIGNINGAFSALMONELLAANTISERA AFSUSANNEDAAEPLUMLIND 33