Valideringsrapport Sysmex XE

VAL-3001-2 Klinisk Biokemisk Afdeling Klinisk Biokemisk Afdeling Valideringsrapport Sysmex XE Godkendt til ikrafttrædelse Dato: 2009-01-20 Godkendt udskrift nr. Henrik L. Jørgensen Overlæge, ph.d. Karina F. Rasmussen Afdelingsbioanalytiker

SYSMEX VALIDERINGSRAPPORT Godkendt til ikrafttrædelse Dato: 2009-01-20 Underskrift: 1. INDLEDNING... 2 2. ANALYSEDATA... 2 2.1 Navn, IUPAC-kode eller dansk kode og enhed... 2 2.2 Engelsk navn... 3 2.3 Indikation... 3 2.4 Apparatur... 3 2.5 Analyseprincip / -metode... 4 2.6 Kvalitetssikringskontroller leverandør og data... 4 3. KRAVSPECIFIKATIONER... 4 4. RESULTATER FRA METODEETABLERINGEN... 5 4.1 Linearitet... 5 4.2 Måleinterval (nedre målegrænse og øvre målegrænse)... 5 4.3 Detektionsgrænse... 6 4.4 Metodesammenligning... 6 4.5 Korrekthed...10 4.6 Analytisk specificitet...11 4.7 Præcisionsprofil (intraseriel og intermediær præcision)...12 4.8 Metrologisk sporbarhed...14 4.9 Robusthed...14 4.10 Afsmitning...14 4.11 Apparatsammenligning...15 4.12 Præanalytiske forhold...16 4.13 Referenceinterval / klinisk beslutningsgrænse...16 4.14 Måleusikkerhedsbudget...17 4.15 Flag/Aktion...18 5. KONKLUSION... 18 6. SIKKERHED, MILJØ OG HYGIEJNE... 19 7. REFERENCER... 20 7.1 Interne...20 7.2 Eksterne...20 8. DATABLADE... 20 Side 1 af 20

1. INDLEDNING I denne rapport redegøres der for valideringen af alle hæmatologiske analyser i forbindelse med udskiftning (august 2008) af den ene SYSMEX XE-2100 (XE-2), med en SYSMEX XE- 5000 (XE-2). Samtidig er rettelser i forbindelse med overgang til nyt LIS-system Labka II indskrevet. Undtaget fra valideringen er den manuelle differentialtælling af leukocytter, den automatiske bestemmelse af erythroblaster og umodne granulocytter. 2. ANALYSEDATA 2.1 Navn, IUPAC-kode eller dansk kode og enhed IUPAC-navn IUPAC-Kode Enhed Referenceinterval i Labka II B-Leukocytter; antalk. NPU02593 10 9 /l 3,5 8,8 * LEU Labka kode B-Erythrocytter; antalk. NPU01960 10 12 /l B-Hæmoglobin(Fe); stofk. NPU02319 mmol/l B-Erythrocytter; vol.fr. NPU01961 1 k: 3,94-5,16 * m: 4,25 5,71 * k: 7,1 9,3 * m: 8,1-10,3 * k: 0,35-0,46 * m: 0,40-0,50 * ERY HB HCT B-Erythrocytter; entitisk vol. NPU01944 fl 82 98 * MCV Ercs(B)-Hæmoglobin(Fe); entitisk stofm. NPU02320 fmol 1,6 2,0 * MCH Ercs(B)-Hæmoglobin(Fe); entitisk stofk. Ercs(B)-Erythrocyt-volumina; rel.fordelingsbredde(proc.) NPU02321 NPU18162 mmol/l 19,2-21,6 * MCHC % < 16 ERYRDW B-Reticulocytter; antalk. NPU08694 10 9 /l 25-99 RETIC B-Thrombocytter; antalk. NPU03568 10 9 /l 145 390 * THROM B-Lymphocytter; antalk. NPU02636 10 9 /l 0,70 4,80 LYMF B-Monocytter; antalk. NPU02840 10 9 /l < 1,10 MONO B-Neutrophilocytter; antalk. B-Eosinophilocytter; antalk. B-Basophilocytter; antalk. NPU02902 NPU01933 NPU01349 10 9 /l 1,80 7,40 NEUT 10 9 /l < 0,45 EOS 10 9 /l < 0,20 BASO Disse er besluttet anvendt af harmoniseringsgruppen under Region H. De stjernemarkerede er NORIP referenceintervaller. De nye referenceintervaller, er taget i brug i forbindelse med implementering af Labka II på BBH 2008-10-07. Side 2 af 20

2.2 Engelsk navn Ikke relevant. 2.3 Indikation IUPAC-navn B-Leukocytter; antalk. B-Erythrocytter; antalk. B-Hæmoglobin(Fe); stofk. B-Erythrocytter; vol.fr. B-Erythrocytter; entitisk vol. Ercs(B)-Hæmoglobin(Fe); entitisk stofm. Ercs(B)-Hæmoglobin(Fe); entitisk stofk. Indikation SA, mistanke om infektion, myeloproliferative tilstande m.m. SA, anæmiudredning m.m. SA, anæmiudredning m.m. SA, anæmiudredning m.m. Anæmiudredning m.m. Anæmiudredning m.m. Anæmiudredning m.m. Ercs(B)-Erythrocyt-volumina; rel.fordelingsbredde(proc.) Anæmiudredning m.m. B-Reticulocytter; antalk. B-Thrombocytter; antalk. B-Lymphocytter; antalk. B-Monocytter; antalk. B-Neutrophilocytter; antalk. B-Eosinophilocytter; antalk. B-Basophilocytter; antalk. SA = standardanalyse på nyindlagte patienter m.m. Anæmiudredning m.m. SA, udredning af blødningsforstyrrelser m.m. Mistanke om infektion, myeloproliferative tilstande m.m. Mistanke om infektion, myeloproliferative tilstande m.m. Mistanke om infektion, myeloproliferative tilstande m.m. Mistanke om allergi, parasitinfektion m.m. Mistanke om allergi, myeloproliferative tilstande m.m. 2.4 Apparatur Sysmex samlede hæmatologi-system på KBA BBH består af en XE-2100 (XE-1) og en XE-5000 (XE-2), samt et modul til udstrygning og farvning af præparater til manuel differentialtælling, SP-100. De tre apparater er fysisk sammenkoblet via HST transportsystem. SYSMEX XE-1 betragtes som reference apparat. Side 3 af 20

2.5 Analyseprincip / -metode SYSMEX XE måler i 7 kanaler iflg. nedenstående skema: Analyse Kanal Princip WBC, BASO WBC/BASO Optisk spredt lys NEUT, LYMF, MONO, EOS 4 DIFF Optisk spredt lys og flourescens NRBC NRBC Optisk spredt lys og flourescens RET, IRF, PLT-O RETIC Optisk spredt lys og flourescens RBC, HCT, PLT RBC Sheat flow, impedans HGB HGB Fotometri efter lysering med SLS (SodiumLaurylSulfat) Umodne celler, HPC IMI RF/DC impedans Beregnede parametre: B-Erythrocytter; entitisk vol.(mcv)= HCT/RBC Ercs(B)-Hæmoglobin(Fe); entitisk stofk.(mchc)= HGB/HCT Ercs(B)-Hæmoglobin(Fe); entitisk stofm.(mch)= HGB/RBC Ercs(B)-Erythrocyt-volumina; rel.fordelingsbredde(proc.)(rdv)= SD/Middel*100 For yderligere oplysninger se [EXT-0008 Sysmex operator s manual, XE-2100 Main 7]. 2.6 Kvalitetssikringskontroller leverandør og data Intern kontrol E-Check kontroller fremstilles og leveres af Sysmex i tre niveauer, indeholdende alle analyser i samme kontrol. Alle tre niveauer måles en gang dagligt for alle analyser, på det apparat, der analyseres på. Level 3 kl. ca. 9, level 2 kl. ca. 14, level 1 kl. ca. 21. Ekstern kontrol 3041-DK DEKS-Hæmatologikontrol, udsendes 10 gange årligt. 3. KRAVSPECIFIKATIONER Absolut bias er valgt til alle validerede Sysmex analyser. På baggrund af referenceintervallerne og den kliniske anvendelse af analyserne på patientpopulationen er nedenstående krav udarbejdet udfra en konkret lægefaglig vurdering. Apparatsammenligning Sysmex XE-2 i forhold til XE-1. Det maksimale absolutte biaskrav er beregnet som 3% af differencen mellem øvre og nedre grænse for referenceintervallet eller 3% af klinisk beslutnings grænse. Det maksimale absolutte krav til 95%-grænser for spredningen på bias er valgt som det absolutte biaskrav gange 4. Metodevurdering Sysmex i forhold til Pentra. Det maksimale absolutte biaskrav er beregnet som 5% af differencen mellem øvre og nedre grænse for referenceintervallet eller 5% af klinisk beslutnings grænse. Det maksimale Side 4 af 20

absolutte krav til 95%-grænser for spredningen på bias er valgt som det absolutte biaskrav gange 4. Korrekthed Sysmex i forhold til KBA, Amager hospital. Det maksimale absolutte biaskrav er beregnet som 5% af differencen mellem øvre og nedre grænse for referenceintervallet eller 5% af klinisk beslutnings grænse. Det maksimale absolutte krav til 95%-grænser for spredningen på bias er valgt som det absolutte biaskrav gange 4. Præcisionsprofil For de intermediære præcisioner er der opstillet krav til variationskoefficienterne i tre niveauer ud fra en konkret, lægefaglig vurdering af de maksimalt klinisk acceptable impræcisioner. For de intraserielle præcisioner er kravene sat til at være to tredjedele (2/3) af kravene til de intermediære præcisioner. 4. RESULTATER FRA METODEETABLERINGEN 4.1 Linearitet Producenten angiver, at der er linearitet indenfor nedenstående måleområder [EXT-0008 Sysmex operator s manual, XE-2100 Main 1-16] og [EXT-0057 Program Version History. Program :6XE21 Version: 00-30] Da analyserne er CE-mærkede og IVD-godkendt, er der ikke udført forsøg til vurdering af lineariteten. Analyse Opgivet Nedre Øvre Antal decimaler Enhed måleinterval målegrænse målegrænse på afgivet resultat WBC 0-440 10 9 /l 0,2 440,0 1 RBC 0-8,0 10 12 /l 0,02 8,00 2 HGB 0-15,0 mmol/l 0,1 15,0 1 HCT 0,00-0,75 1 0,00 0,75 2 RET 0-720 10 9 /l 0 720 0 PLT 0-2000 10 9 /l 10 2000 0 For analyserne WBC og PLT opgives resultatet som mindre end nedre målegrænse. For alle andre analyser gælder det, at større end eller mindre end resultater ikke er klinisk relevante i forhold til den nuværende patientpopulationen på. 4.2 Måleinterval (nedre målegrænse og øvre målegrænse) Der er udført forsøg på frisk frosset donorplasma til kontrol af detektionsgrænse samt den nedre målegrænse. Der er analyseret 20 bestemmelser umiddelbart efter hinanden på XE-1. WBC RBC HGB HCT PLT NEUT LYMF MONO EOS BASO RET Middelværdi (M) 0,00 0,00 0,00 0,000 2,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,0 SD 0,005 0,000 0,00 0,000 0,324 0,005 0,003 0,000 0,000 0,000 0,0 Detektionsgrænse M + 5SD 0,028 0,000 0,00 0,000 3,622 0,026 0,018 0,000 0,000 0,000 0,00 Nedre målegrænse M + 10SD 0,052 0,000 0,00 0,000 5,244 0,050 0,034 0,000 0,000 0,000 0,00 Side 5 af 20

Daglig analyseres fortyndingsreagenset, Cellpack, for at kontrollere apparatets blindværdier for nedenstående analyser. De tilladte blindværdier ifølge leverandøren er: Analyse Tilladt blindværdi Enhed WBC 0.2 10 9 /l RBC 0.02 10 12 /l HGB 0.06 mmol/l PLT 10 10 9 /l Det udførte forsøg til kontrol af detektionsgrænse og nedre målegrænse bekræfter at disse ligger under de af leverandøren tilladte blindværdier. Detektionsgrænse og nedre målegrænse fastsættes derfor til at være de tilladte blindværdier. Jævnfør punkt 4.1 anvendes leverandørens opgivne øvre målegrænser. 4.3 Detektionsgrænse Se pkt. 4.2 4.4 Metodesammenligning Der er ultimo 2004 analyseret mellem 92 og 140 patientprøver (HGB = 45, RET = 61) parallelt på henholdsvis Pentra og Sysmex XE-2100, fordelt over flere dage. Metodesammenligningen er således udført før ikrafttrædelse af {PRO-2004 Validering af analysemetoder}. Sysmex er et nyere apparat med forbedret teknologi og må formodes at have en bedre akkuratesse end Pentra. Kravoverskridelserne i nedenstående skema har ikke givet anledning til ændring i referenceinterval, faktorisering eller til meddelelse om niveauskift til de kliniske afdelinger. Et yderligere argument for at acceptere kravoverskridelserne er fundet i den eksterne kvalitetskontrol hvor Sysmex-værdierne ligger væsentlig tættere på targetværdierne end Pentra-værdierne, et eksempel herfor er vist for analyserne B-Reticulocytter, antalk. og B-Thrombocytter; antalk. Se Q/KBA/ISO15189/Dokumenter/3000-VAL Valideringsrapporter/3001-VAL Sysmex/ {3001- MES Sysmex_Pentra_analyse} Derudover findes rådata sammen med kurver m.m. i mapperne: Validering, Sysmex, rådata. Placeret i rum 6.K06. Side 6 af 20

Sysmex overfor Pentra Analyse Valideret Ref.interval Enhed Bias krav Bias 95% krav 95% grænser Hældningskoeff. Konfidensint. for hældningskoeff. skæring med y- akse Konfidensint. for skæring med y-akse WBC 3,0-9,0 10 9 /l 0,3-0,2100 1,2-1,3060 0,8860 0,931 0,910 0,952 0,438 0,222 0,654 0,982 RBC 3,70-6,10 10 12 /l 0,12 0,1947 0,48-0,0057 0,3951 1,023 0,993 1,053 0,100-0,023 0,224 0,971 HGB 7,0-11,0 mmol/l 0,2 0,1267 0,8-0,1075 0,3608 1,056 1,029 1,082-0,300-0,505-0,095 0,993 HCT 0,35-0,52 *1 0,02 0,0125 0,08-0,0374 0,0625 0,994 0,911 1,078 0,015-0,018 0,047 0,803 PLT 150-400 10 9 /l 13 34,6259 52-7,1112 76,3630 1,089 1,058 1,119 11,158 2,477 19,838 0,973 NEUT 1,8-7,4 10 9 /l 0,3-0,0978 1,2-0,7135 0,5179 0,986 0,963 1,009-0,010-0,165 0,144 0,988 LYMF 0,7-4,8 10 9 /l 0,2 0,00691 0,8-0,4212 0,5593 1,153 1,101 1,205-0,208-0,311-0,104 0,955 MONO <1,1 10 9 /l 0,1 0,0263 0,4-0,3023 0,3549 0,981 0,884 1,077 0,040-0,035 0,114 0,814 EOS <0,45 10 9 /l 0,02-0,0605 0,08-0,1437 0,0226 1,007 0,960 1,054 0,062-0,077-0,047 0,951 BASO <0,20 10 9 /l 0,01 0,0027 0,04-0,0331 0,0385 0,779 0,597 0,962 0,009 0,003 0,016 0,441 RET 25-99 10 9 /l 4 28,6885 16-21,6693 79,0463 2,3234 1,987 2,481-12,593-21,790-3,397 0,847 Specifikke kommentarer: For RET og PLT er set markante forbedringer mht. akkuratesse ved den eksterne kvalitetskontrol ved overgangen fra Pentra til Sysmex, hvorfor Sysmex resultaterne tillægges større troværdighed end Pentra resultaterne. Ved en beklagelig fejl er der ikke i forbindelse med indførelse af Sysmex-udstyret udsendt meddelelse til klinikerne om den forbedrede Thrombocyt akkuratesse. For BASO har det kun været muligt at fremskaffe meget lave prøver til metodesammenligningen. Variationskoefficienten omkring den nedre målegrænse er meget høj. Endvidere afrunder begge apparater til hele 1/100, hvilket introducerer en høj afrundingsfejl i et så lavt måleområde. Derfor bliver korrelationskoefficienten så lav. r 2 Side 7 af 20

Ved metodevurderingen i 2004 blev der konstateret en forskel på B-Reticulocytter,antalk. mellem Pentra og Sysmex med en bias på ca. 30 *10 9 /l. Vi har med anskaffelse af Sysmex opnået en væsentlig forbedring i akkuratessen af B- Reticulocytter,antalk., hvilket dokumenteres af to nedenstående udskrifter fra eksterne prøveudsendelser fra DEKS. Ved metodevurderingen i 2004 blev der konstateret en forskel på B-Thrombocytter,antalk. mellem Pentra og Sysmex med en bias på ca. 35 *10 9 /l. Side 8 af 20

Vi har med anskaffelse af Sysmex opnået en væsentlig forbedring i akkuratessen af B- Thrombocytter,antalk., hvilket dokumenteres af to nedenstående udskrifter fra eksterne prøveudsendelser fra DEKS. Side 9 af 20

4.5 Korrekthed Der er analyseret mellem 56 og 60 patientprøver parallelt på henholdsvis Sysmex BBH og Sysmex AH, fordelt over 3 dage (15-17/1 2007). Se Q/KBA/ISO15189/Dokumenter/3000-VAL Valideringsrapporter/3001-VAL Sysmex/ {3001-MES BBH_AH analyse} Derudover findes rådata sammen med kurver m.m. i mapperne: Validering, Sysmex, rådata. Placeret i rum 6.K06. Sysmex BBH overfor Sysmex AH Analyse Valideret Ref.interval Enhed Bias krav Bias 95% krav 95% grænser Hældningskoeff. Konfidensint. for hældningskoeff. skæring med y- akse Konfidensint. for skæring med y-akse WBC 3,0-9,0 10 9 /l 0,3 0,1677 1,2-0,3498 0,6852 0,998 0,969 1,027 0,185-0,061 0,432 0,988 RBC 3,70-6,10 10 12 /l 0,12-0,0177 0,48-0,1015 0,0661 1,015 0,999 1,030-0,076-0,141-0,012 0,997 HGB 7,0-11,0 mmol/l 0,2 0,0250 0,8-0,1265 0,1765 1,027 1,013 1,040-0,172-0,272-0,072 0,998 HCT 0,35-0,52 *1 0,02-0,0017 0,08-0,0096 0,0061 1,023 1,007 1,038-0,010-0,016-0,004 0,997 PLT 150-400 10 9 /l 13 6,8833 52-12,8791 26,6457 1,021 0,996 1,045 0,659-7,061 8,378 0,992 NEUT 1,8-7,4 10 9 /l 0,3 0,1133 1,2-0,2958 0,5224 1,004 0,977 1,030 0,092-0,064 0,248 0,990 LYMF 0,7-4,8 10 9 /l 0,2-0,0435 0,8-0,3166 0,2296 0,966 0,916 1,016 0,016-0,078 0,110 0,964 MONO <1,1 10 9 /l 0,1 0,0965 0,4-0,1870 0,3800 0,967 0,829 1,105 0,119 0,017 0,221 0,781 EOS <0,45 10 9 /l 0,02 0,0064 0,08-0,0483 0,0610 1,054 1,015 1,092-0,006-0,017 0,006 0,981 BASO <0,20 10 9 /l 0,01 0,0039 0,04-0,0170 0,0248 0,885 0,717 1,054 0,007 0,002 0,013 0,664 RET 25-99 10 9 /l 4 2,6554 16-7,3400 12,6508 1,014 0,976 1,053 1,700-1,206 4,606 0,981 Specifikke kommentarer: For RBC vurderes afvigelsen for skæringen med Y-aksen ikke at have klinisk betydning. For HGB og HCT er afvigelserne for hældningskoefficient og skæring med y-aksen modsat rettede og vurderes ikke at have klinisk betydning. For MONO er afvigelsen for skæring med y-aksen uden klinisk betydning. For EOS er afvigelsen for hældningskoefficienten uden klinisk betydning. For BASO har det kun været muligt at fremskaffe meget lave prøver til korrekthedsforsøget. Variationskoefficienten omkring den nedre målegrænse er meget høj. Endvidere afrunder begge apparater til hele 1/100, hvilket introducerer en høj afrundingsfejl i et så lavt måleområde. Derfor bliver hældningskoefficienten og korrelationskoefficienten så lave. r 2 Side 10 af 20

4.6 Analytisk specificitet Sysmex HGB-metode omfatter lysering af leukocytterne, hvorfor et højt leukocyttal ikke interfererer på HGB-målingen, hvilket er en forbedring i forhold til Pentra. Thrombocytter kan måles på to forskellige metoder, dels som impedansmåling (PLT-I) sammen med erythrocytterne, dels som en optisk måling i RETI-kanalen (PLT-O), efter fluoroscensmærkning af cellerne. Hvis det er svært at adskille thrombocytter og erythrocytter i impedansmålingen, f.eks. p.g.a. store thrombocytter eller små erythrocytter/ erythrocytfragmenter, kan thrombocytterne i stedet måles i RETI-kanalen. SYSMEX afgør selv, hvilken af målingerne, der er mest valid. I tilfælde af Platelet Clumps (thrombocytaggregation) vil SYSMEX komme med et flag, og scattergrammerne fra DIFF- og IMI-kanalen vil ligeledes vise det. For yderligere information henvises til [SIS regelsæt Bispebjerg XE-2100 Vers. 1,4 20050113 (fortroligt dokument)]. Side 11 af 20

4.7 Præcisionsprofil (intraseriel og intermediær præcision) Intraseriel præcision Forsøgene er analyseret på Sysmex kontrollerne i de tre niveauer. For alle tre niveauer er analyseret minimum 20 gange på XE-2 samme dag (2008-08-07 og 2008-08-08). Se Q/KBA/ISO15189/Dokumenter/3000-VAL Valideringsrapporter/3001-VAL Sysmex/ XE-5000 {3001-PRÆ_analyse_XE-5000} Derudover findes rådata sammen med kurver m.m. i mapperne: Validering, Sysmex, rådata. Placeret i rum 6.K06. Analyse M SD CV% Niveau 1 Niveau 2 Niveau 3 Krav til CV% M SD CV% Krav til CV% M SD CV% WBC 2,791 0,0656 2,3 5 6,254 0,126 2,0 5 16,486 0,205 1,2 5 RBC 2,347 0,013 0,6 5 4,359 0,015 0,3 5 5,221 0,022 0,4 5 HGB 3,5 0 0,0 5 7,475 0,044 0,6 5 9,7 0,046 0,5 5 HCT 0,172 0,001 0,6 5 0,350 0,002 0,7 5 0,441 0,005 1,2 5 PLT 53,9 1,889 3,5 5 204,2 2,949 1,4 5 474,65 5,896 1,2 5 NEUT 1,187 0,038 3,2 7 3,099 0,088 2,8 7 8,531 0,2399 2,8 7 LYMF 1,0255 0,03899 3,8 7 1,871 0,0368 2,0 7 4,3995 0,119 2,7 7 MONO 0,327 0,028 8,6 14 0,626 0,043 6,9 14 1,603 0,103 6,4 14 EOS 0,252 0,022 8,9 14 0,662 0,055 8,2 14 1,955 0,125 6,4 14 BASO 1,733 0,055 3,2 14 4,33 0,112 2,6 14 12,00 0,163 1,4 14 RET 58,235 3,768 6,5 7 123,135 4,988 4,1 7 152 7,070 4,7 7 MCV 73,095 0,487 0,7 3 80,41 0,535 0,7 3 84,65 0,185 0,2 3 MCH 1,492 0,009 0,6 3 1,715 0,012 0,7 3 1,858 0,011 0,6 3 MCHC 20,405 0,157 0,8 3 21,32 0,185 0,9 3 21,925 0,121 0,6 3 RDW 14,14 0,0598 0,4 5 14,815 0,114 0,08 5 16,58 0,1399 0,8 5 Krav til CV% Side 12 af 20

Intermediær præcision Forsøgene er analyseret på Sysmex kontrollerne i de tre niveauer i perioden 2008-08-07 til 2008-09-01. For alle tre niveauer er analyseret minimum 40 gange på XE-1 og XE-2. Se Q/KBA/ISO15189/Dokumenter/3000-VAL Valideringsrapporter/3001-VAL Sysmex/XE-5000 {3001-PRÆ_analyse_XE-5000} Derudover findes rådata sammen med kurver m.m. i mapperne: Validering, Sysmex, rådata. Placeret i rum 6.K06. Analyse Niveau 1 Niveau 2 Niveau 3 M SD CV% Krav M SD CV% Krav M SD CV% Krav WBC 2,77 0,091 3,3 7 6,17 0,137 2,2 7 16,47 0,229 1,4 7 RBC 2,34 0,016 0,7 7 4,37 0,036 0,8 7 5,24 0,049 0,9 7 HGB 3,51 0,027 0,8 7 7,51 0,056 0,7 7 9,77 0,114 1,2 7 HCT 0,17 0,002 0,9 7 0,35 0,004 1,1 7 0,45 0,008 1,7 7 PLT 54,65 2,949 5,4 7 202,68 5,361 2,6 7 468,08 7,454 1,6 7 NEUT 1,18 0,047 4,0 10 3,05 0,095 3,1 10 8,57 0,212 2,5 10 LYMF 1,00 0,046 4,6 10 1,82 0,061 3,4 10 4,33 0,153 3,5 10 MONO 0,34 0,031 9,3 20 0,64 0,045 7,1 20 1,68 0,140 8,4 20 EOS 0,26 0,022 8,7 20 0,67 0,050 7,5 20 1,90 0,132 7,0 20 BASO 1,72 0,078 4,5 30 4,28 0,112 2,6 30 11,94 0,222 1,9 30 RET 56,63 3,826 6,8 10 115,95 7,805 6,7 10 145,26 10,283 7,1 10 MCV 72,87 0,6445 0,9 5 80,42 0,402 0,5 5 85,2 0,648 0,8 5 MCH 1,50 0,014 0,9 5 1,72 0,011 0,6 5 1,87 0,014 0,7 5 MCHC 20,55 0,255 1,2 5 21,36 0,184 0,9 5 21,87 0,255 1,2 5 RDW 14,14 0,063 0,4 7 14,86 0,096 0,6 7 16,72 0,130 0,8 7 Side 13 af 20

4.8 Metrologisk sporbarhed Metoderne er sporbare til ICSH Reference Method ifølge [EXT-0058 Metrological Traceability of Values Assigned to Sysmex SCS-1000 Haematological Calibrator SJI_Version 020103] 4.9 Robusthed I valideringsperioden er reagenser med forskellig lot.nr. blevet anvendt. Erfaring viser at skift i reagenser, temperatur, operatør ikke påvirker apparatets ydeevne. 4.10 Afsmitning Carryover er fra SYSMEX side opgivet til at være 1,0% eller mindre på følgende analyser: WBC, RBC, HGB, HCT, PLT [EXT-0008 Sysmex operator s manual, XE-2100 Main 1-16]. Side 14 af 20

4.11 Apparatsammenligning Der er analyseret mellem 61 patientprøver parallelt på henholdsvis Sysmex XE1og Sysmex XE2, fordelt over flere dage (aug. 2008). Se Q/KBA/ISO15189/Dokumenter/3000-VAL Valideringsrapporter/3001-VAL Sysmex/XE-5000 {3001-MES Sysmex XE2_XE1_analyse_XE- 5000}. Derudover findes rådata sammen med kurver m.m. i mapperne: Validering, Sysmex, rådata. Placeret i rum 6.K06. Sysmex XE2 overfor Sysmex XE1 Analyse Valideret Ref.interval Enhed Bias krav Bias 95% krav 95% grænser Hældningskoeff. Konfidensint. for hældningskoeff. skæring med y- akse Konfidensint. for skæring med y-akse WBC 3,0-9,0 10 9 /l 0,2 0,0593 0,8-0,4780 0,3593 1,010 0,996 1,025-0,148-0,284-0,013 0,997 RBC 3,70-6,10 10 12 /l 0,07-0,0372 0,28-0,1095 0,0351 0,990 0,972 1,008 0,007-0,073 0,088 0,995 HGB 7,0-11,0 mmol/l 0,1-0,0967 0,4-0,2352 0,0417 1,012 0,994 1,031-0,200-0,359-0,041 0,995 HCT 0,35-0,52 *1 0,01-0,0042 0,04-0,0275 0,0190 0,948 0,876 1,019 0,016-0,012 0,045 0,922 PLT 150-400 10 9 /l 8 7,1475 32-7,5234 21,8185 1,041 1,018 1,064-3,714-10,133 2,705 0,993 NEUT 1,8-7,4 10 9 /l 0,2 0,0143 0,8-0,5552 0,5837 1,051 1,029 1,073-0,260-0,394-0,126 0,994 LYMF 0,7-4,8 10 9 /l 0,1-0,0289 0,4-0,2371 0,1794 0,994 0,963 1,026-0,016-0,089 0,056 0,985 MONO <1,1 10 9 /l 0,1 0,0156 0,4-0,1316 0,1627 1,003 0,937 1,069 0,014-0,035 0,062 0,940 EOS <0,45 10 9 /l 0,01-0,0008 0,04-0,0666 0,650 0,941 0,913 0,968 0,014 0,004 0,025 0,987 BASO <0,20 10 9 /l 0,01-0,008 0,04-0,0284 0,0268 1,014 0,908 1,119-0,001-0,007 0,004 0,861 RET 25-99 10 9 /l 2 7,0082 8-2,6797 16,6961 1,113 1,056 1,170 1,539-1,447 4,525 0,963 Specifikke kommentarer: WBC og HGB: Den minimale afvigelse på skæring med y-aksen skønnes ikke at have klinisk betydning. Kravoverskridelsen har ikke givet anledning til rekalibrering. PLT: Den minimale afvigelse for hældningskoefficienten skønnes ikke at have klinisk betydning. Kravoverskridelsen har ikke givet anledning til rekalibrering. NEUT: De minimale afvigelser på hældningskoefficienten samt for skæring med y-aksen skønnes ikke at have klinisk betydning. Kravoverskridelserne har ikke givet anledning til rekalibrering. EOS: De minimale afvigelser på 95%-grænserne, hældningskoefficienten samt for skæring med y-aksen skønnes ikke at have klinisk betydning. Kravoverskridelserne har ikke givet anledning til rekalibrering. r 2 Side 15 af 20

RET: De minimale afvigelser på 95%-grænserne samt hældningskoefficienten skønnes ikke at have klinisk betydning. Kravoverskridelserne har ikke givet anledning til rekalibrering. BIAS: Da overskridelsen ikke vurderes til at have klinisk betydning, besluttes det at også denne parameter tages i brug. Overskridelsen har dog medfødt justering af XE-2 (XE-5000) d. 2008-11-17. Efter justeringen var kravene til maksimal bias overholdt. Resultatet for parallelanalyseringen i november måned viser ingen bias. Se referat fra QCmøde d. 2008-09-05 og 2008-12-09. 4.12 Præanalytiske forhold K 3 -EDTA-stabiliseret fuldblod, alternativt citratblod Der kan udføres Hgb-måling på heparinblod. Den automatiske sampler suger 200 l blod. Validering af XE-2100 i 2004 blev foretaget med baggrund af prøvetagning i Vacutainer Lilla 5 fra BD, K 3 -EDTA-stabiliseret fuldblod,(bd varenr. 368857). Ultimo 2007 overgik region H samlet til prøvetagning i nye rør. Specifikt for analyserne Vacuette Lilla3S. Overgangen til de nye rør har ikke givet anledning til ændringer. Se BBH notat vedr. Greiner rør 2007-12-17. Validering af XE-5000 i 2008 blev foretaget med prøvetagningsrør fra Greiner (Hettich) K 3 -EDTA-stabiliseret fuldblod, udtaget i Greiner-vacuette (varenr. 454217). Prøvematerialet er holdbart iflg. nedenstående skema: Parametre WBC og DIFF PLT RBC, HGB RETI Guders holdbarheder ved stuetemperatur* 7 dage 7 dage 4 dage 1 dag Egne holdbarheder ved stuetemperatur 24 timer * [W. G. Guder, S. Narayanan, H. Wisser, and B. Zawta. Samples: From the Patient to the laboratory. The impact of preanalytic variables on the quality of laboratory results, Darmstadt, Germany: GIT VERLAG GMBH, 2001.] 4.13 Referenceinterval / klinisk beslutningsgrænse Se punkt 2.1 Side 16 af 20

4.14 Måleusikkerhedsbudget Se Q/KBA/ISO15189/Dokumenter/3000-VAL Valideringsrapporter/3001-VAL Sysmex/XE-5000 {3001-PRÆ_analyse_XE-5000}. Derudover findes rådata m.m. i mapperne: Validering, Sysmex, rådata. Placeret i rum 6.K06. Analyse SD intermediær SD kalibrant Niveau 1 Niveau 2 Niveau 3 SD præanalyse u c (SD) SD intermediær SD kalibrant SD præanalyse u c (SD) SD intermediær SD kalibrant SD præanalyse WBC 0,091 0,1325 0,2 0,256 0,137 0,1325 0,2 0,276 0,229 0,1325 0,2 0,332 RBC 0,016 0,0365 0,045 0,076 0,036 0,0365 0,045 0,076 0,049 0,0365 0,045 0,076 HGB 0,027 0,0363 0,074 0,087 0,056 0,0363 0,074 0,010 0,114 0,0363 0,074 0,140 HCT 0,002 0,00455 0,004 0,006 0,004 0,00455 0,004 0,007 0,008 0,00455 0,004 0,010 PLT 2,949 3,7 4,4 6,461 5,360 3,7 4,4 7,861 7,454 3,7 4,4 9,413 NEUT 0,047-0,110 0,120 0,095-0,110 0,145 0,212-0,110 0,239 LYMF 0,046-0,100 0,110 0,061-0,100 0,117 0,153-0,100 0,183 MONO 0,031-0,018 0,036 0,045-0,018 0,049 0,140-0,018 0,141 EOS 0,022-0,008 0,024 0,050-0,008 0,050 0,132-0,008 0,132 BASO 0,055-0,005 0,078 0,112-0,005 0,112 0,222-0,005 0,222 RET 3,826-2,3 4,464 7,805-2,3 8,136 10,283-2,3 10,537 MCV 0,645 0,09575 0,23 0,691 0,402 0,09575 0,23 0,473 0,648 0,09575 0,23 0,694 MCH 0,014 0,0163 0,740 0,740 0,011 0,0163 0,740 0,740 0,014 0,0163 0,740 0,740 MCHC 0,255 0,05111 0,103 0,280 0,184 0,05111 0,103 0,217 0,255 0,05111 0,103 0,280 Der er ikke foretaget biaskorrektioner, hvorfor dette ikke er med i usikkerhedsbudgetterne. Den udvidede usikkerhed Udelta er beregnet som k * u c, hvor dækningsfaktoren (k) er sat til 2. Resultaterne for Udelta er ikke vist i dette skema, men kan findes i de enkelte analysers datablade. For MCV, MCH og MCHC beregnes kalibratorusikkerheden, som summen af de enkelte kalibratorers usikkerhed der indgår i formlen for beregning af parameteren. Eksempel: CV kalibmcv = kvrod (CV kalibhct 2 +CV kalibrbc 2 ), idet den opgivne værdi for kalibratorerne og deres usikkerhed benyttes. Til sidst beregnes SD kalibmcv = CV kalibmcv * HCT kalib /RBC kalib. For DIFF-parametrene og RET foretages der ikke kalibrering, hvorfor SD kalib ikke indgår i usikkerhedsbudgetterne for disse parametre. u c (SD) Side 17 af 20

4.15 Flag/Aktion For valgte SIS regler henvises til [SIS regelsæt Bispebjerg XE-2100 Vers. 1,4 20050113 (fortroligt dokument)] KBA valgte aktioner tilføjet til SIS regler: Anemia Andre flag Resultat Handling iflg. SIS Thrombocytopenia Hgb 4,0 mmol/l Hvis Hgb ikke er bestilt efterbestilles den, og res. ringes. Hgb 6,5 mmol/l Hvis Hgb ikke er bestilt efterbestilles den. Plt < 10 x 10 9 /l Plt < 60 x 10 9 /l Hvis PLT ikke er bestilt efterbestilles den, og resultat ringes. Hvis PLT ikke er bestilt efterbestilles den. Thrombocytose Plt > 600 x 10 9 /l Hvis PLT ikke er bestilt efterbestilles den. Leukocytopenia WBC < 2,00 x 10 9 /l WBC < 0,5 x 10 9 /l Leukocytosis WBC > 30,00 x 10 9 /l NRBC present > 2,00 % NRBC efterbestilles. Hvis WBC ikke er bestilt efterbestilles den. Hvis WBC ikke er bestilt efterbestilles den, og res. ringes. Hvis WBC ikke er bestilt efterbestilles den. Hvis Diff. ikke er bestilt efterbestilles den. 5. KONKLUSION Sammenfattende er valideringsrapporten 3001-VAL Sysmex_Alle analyser udfærdiget i overensstemmelse med afdelingens procedurer for validering af nye analysemetoder {PRO- 2004 validering af analysemetoder}. Rapporten dokumenterer, at analyserne opfylder de opstillede krav. I de få tilfælde, hvor der har været uoverensstemmelser mellem krav og ydeevne, er der redegjort herfor i rapporten. Valideringsrapporten godkendes: Henrik L. Jørgensen Overlæge, ph.d. Karina Rasmussen Afdelingsbioanalytiker Side 18 af 20

6. SIKKERHED, MILJØ OG HYGIEJNE Der henvises til gul mappe mærket {Arbejdspladsbrugsanvisninger, HÆM, Rum nr. 6.018} og [EXT-0016 XE-2100 Brugsanvisning - afsnit 4] CELLPACK Reagensnavn Bogstavkode Anvendelse APBA CPK / EPK RBC, PLT, HGB. Sheath til WBC, Diff, NRBC, RETIC CELLSHEATH CSE / ESE Sheath til RBC, PLT SULFOLYSER SLS Hgb STROMATOLYSER-FB FBA WBC, BASO STROMATOLYSER-4DL FFD Diff. diluent STROMATOLYSER-4DS FFS Diff. farve APBA-6001 STROMATOLYSER-IM SIM IMI STROMATOLYSER-NR (lyse reagent og dye solution) RET SEARCH (II) (diluent og dye solution) SNR RED NRBC diluent NRBC Retic. diluent Retic. farve APBA-6002 APBA-6003 CELLCLEAN Rens af XE-2100 APBA-6004 METHANOL Rens af SP-100 APBA-6005 MAI-GRÜNVALD Farvereagens APBA-6006 GIEMSA Farvereagens APBA-6007 Side 19 af 20

7. REFERENCER 7.1 Interne 3001-MES BBH_AH analyse...10 3001-MES Sysmex XE2_XE1_analyse_XE-5000...15 3001-MES Sysmex_Pentra_analyse... 6 3001-PRÆ_analyse_XE-5000... 12;13;17 Arbejdspladsbrugsanvisninger, HÆM, Rum nr. 6.018...19 PRO-2004 validering af analysemetoder...18 7.2 Eksterne Metrological Traceability of Values Assigned to Sysmex SCS-1000 Haematological Calibrator SJI_Version 020103 EXT-0008 Sysmex operator s manual, XE-2100 Main 1-16 SIS regelsæt Bispebjerg XE-2100 Vers. 1,4 20050113 (fortroligt dokument) EXT-0016 XE-2100 Brugsanvisning - afsnit 4 EXT-0057 Program Version History. Program :6XE21 Version: 00-30 W. G. Guder, S. Narayanan, H. Wisser, and B. Zawta. Samples: From the Patient to the laboratory. The impact of preanalytic variables on the quality of laboratory results, Darmstadt, Germany: GIT VERLAG GMBH, 2001. 8. DATABLADE DAT-4040 B-Leukocytter; antalk. DAT-4041 B-Erythrocytter; antalk. DAT-4042 B-Thrombocytter; antalk. DAT-4043 B-Erythrocytter; vol.fr. DAT-4044 B-Reticulocytter; antalk. DAT-4045 B-Hemoglobin(Fe); stofk. DAT-4046 B-Ery.,volumen (MCV) DAT-4047 (B)-Ery-Hemoglobin(Fe),stofk. (MCHC) DAT-4048 (B)-Ery-Hemoglobin(Fe), stofm. (MCH) DAT-4049 B-Ery., størrelsesvariation. DAT-4050 B-Lymfocytter; antalk. DAT-4051 B-Neuthrofilocytter; antalk. DAT-4052 B-Monocytter; antalk. DAT-4053 B-Eosinofilocytter; antalk. DAT-4054 B-Basofilocytter; antalk. Side 20 af 20