EnVision DuoFLEX Doublestain System, (Link)

Transkript

1 EnVision DuoFLEX Doublestain System, (Link) Kode SK110 Udgave 06/15 Dette sæt indeholder reagenser til analyser. Til Autostainer Link instrumenter. ( ) P04070DK_01/SK110/ s. 1/11

2 Indhold Side Tilsigtet anvendelse... 3 Resumé og forklaring... 3 Reagenser... 3 Forholdsregler... 5 Opbevaring... 7 Klargøring af reagens... 7 Indsamling og klargøring af prøver... 8 Procedure... 8 Kvalitetskontrol Fortolkning af resultater Referencer ( ) P04070DK_01/SK110/ s. 2/11

3 Tilsigtet anvendelse Anvendes til in vitro diagnostik. Dako EnVision DuoFLEX Doublestain System er beregnet til brug ved immunhistokemi, sammen med Dako Autostainer Link instrumenter. Systemet er beregnet til samtidig detektion af flere forskellige antigener i ét præparat. Systemet detekterer primære murine og kaninantistoffer, og reaktionen visualiseres med EnVision DuoFLEX DAB+ og EnVision DuoFLEX permanente røde kromogener. EnVision DuoFLEX reagenser er beregnet til brug på formalinfikserede, paraffinindstøbte vævssnit. Resumé og forklaring Dako EnVision DuoFLEX Doublestain System er designet til optimal farvning på Dako Autostainer Link instrumenter ved anvendelse af protokollen, der anbefales i denne indlægsseddel. Dette system er nyttigt til samtidig detektering af flere antigener, som er til stede i lave eller høje koncentrationer i ét præparat. Visualiseringen er baseret på peroxidase (HRP) med anvendelse af DAB+ som kromogen og alkalisk fosfatase (AP) med anvendelse af permanent rød som kromogen. Systemet er biotinfrit og reducerer derfor i høj grad uspecifik farvning, der skyldes endogen avidin-biotin-aktivitet. Proceduren er en simultan dobbeltfarvning, hvor to antigener visualiseres ved hjælp af henholdsvis HRP/DAB+ og AP/permanent rød.envision DuoFLEX Dual Endogenous Enzyme Block hæmmer endogen alkalisk fosfatase, peroxidase og pseudoperoxidaseaktivitet til stede i nogle væv. Efter endogen enzymblokering er det første trin inkubation af præparatet med en optimalt fortyndet cocktail af primært muse- og kaninantistof efterfulgt af inkubation med EnVision DuoFLEX /HRP reagens og dernæst EnVision DuoFLEX /AP. Reaktionen visualiseres ved EnVision DuoFLEX DAB+ Chromogen for museantistof og EnVision DuoFLEX Permanent Red for kaninantistof. Alle angivne reagenser, undtagen primære antistoffer, leveres med sættet. Vi anbefaler brug af Dako DuoFLEX brugsklare antistoffer i en cocktail eller Dako koncentrerede primære antistoffer. EnVision FLEX Antibody Diluent (K8006) anbefales til fortynding af Dako koncentrerede antistoffer. BEMÆRK: Reagenserne i dette kit er beregnet til at blive brugt som et system, og de skal bruges som beskrevet i afsnittet Procedure. Især gælder det, at alle reagenser skal bruges som anvist forud for påføring af kromogen-opløsninger, også selv om der kun skal påføres et enkelt kromogen. Manglende overholdelse af den specificerede protokol kan resultere i ukorrekte farvningsresultater, herunder muligheden for fravær af observerbar farvning. Reagenser A: Materialer, der følger med kode SK110 1 x 30 ml EnVision DuoFLEX Dual Endogenous Enzyme Block Ready-to-Use Endogen enzymblokeringsopløsning ph 2, indeholdende 1-<5 % hydrogenperoxid, enzymhæmmere, vaskemidler og konserveringsmiddel. ( ) P04070DK_01/SK110/ s. 3/11

4 1 x 30 ml EnVision DuoFLEX/HRP Ready-to-Use Peberrodperoxidase og affinitetsisolerede immunglobuliner i form af dextranpolymerkonjugater. Leveres i Tris/HCl-buffer indeholdende stabiliserende protein og et konserveringsmiddel. 1 x 30 ml EnVision DuoFLEX/AP Ready-to-Use Alkalisk fosfatase og affinitetsisolerede immunglobuliner i form af dextranpolymerkonjugater. Leveres i buffer indeholdende stabiliserende protein og et konserveringsmiddel. 2 x 36 ml EnVision DuoFLEX DAB+ Substrate Buffer Substratbufferopløsning, ph 7,5, indeholdende <0,1 % hydrogenperoxid, stabilisatorer, forstærkere og et antimikrobielt stof. 1 x 2,16 ml EnVision DuoFLEX DAB+ Chromogen 3,3'-diaminobenzidin-tetrahydroklorid-kromogenopløsning. 2 x 36 ml EnVision DuoFLEX Permanent Red Substrate Buffer Substratbufferopløsning 1 x 0,72 ml EnVision DuoFLEX Permanent Red Chromogen Permanent rød kromogenopløsning. 3 x 30 ml EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) 50x koncentreret tris/edta buffer, ph 9 1 x 1 L EnVision FLEX Wash Buffer (20x) 20x koncentreret tris-bufferet saltvandsopløsning, indeholdende Tween 20, ph 7,6 (±0,1). ( ) P04070DK_01/SK110/ s. 4/11

5 3 x 12 ml Reagensflaske, som kan genpåfyldes, kapacitet 12 ml Flaskerne skal bruges til blanding og til at indeholde DAB+ arbejdsopløsning og permanent rød arbejdsopløsning (se også afsnittet Klargøring af reagens). B. Nødvendige materialer, der ikke medfølger Autostainer Link instrument Dako PT Link Dako Proteinase K, Ready-to-Use (om nødvendigt) Dako DuoFLEX brugsklare antistoffer i en cocktail eller korrekt fortyndede, koncentrerede, kanineller museantistoffer fra Dako Dako instrumentredskaber Objektglas Generelle laboratoriereagenser til fjernelse af paraffin på paraffinindstøbte vævssnit Monteringsmedie (vandigt eller organisk opløsningsmiddelbaseret) og dækglas C. Valgfri reagenser K8004 K8005 K8006 K8007 K8008 EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) 3 x 30 ml, 50x koncentreret tris/edta buffer, ph 9 EnVision FLEX Target Retrieval Solution, Low ph (50x) 3 x 30 ml, 50x koncentreret citratbuffer, ph 6,1 EnVision FLEX Antibody Diluent 120 ml, brugsklar Tris buffer, ph 7,2, indeholdende 15 mmol/l NaN 3 og protein. EnVision FLEX Wash Buffer (20x) 1 x 1 L, 20x koncentreret tris-bufferet saltvandsopløsning, indeholdende Tween 20, ph 7,6 (±0,1) EnVision FLEX Hematoxylin Forholdsregler 1. Må kun anvendes af uddannet personale. 2. EnVision DuoFLEX/HRP og DuoFLEX/AP indeholder materiale af animalsk oprindelse. Som med alle produkter afledt fra biologiske kilder bør der iagttages korrekte håndteringsprocedurer. 3. Hverken EnVision DuoFLEX DAB+ Chromogen eller EnVision DuoFLEX Permanent Red Chromogen eller den klargjorte DAB+ arbejdsopløsning eller arbejdsopløsningen permanent rød må udsættes for stærkt lys. 4. EnVision DuoFLEX Endogenous Enzyme Block indeholder < 0,1% 3(2H)-Isothiazolon, 5- chloro-2-methyl-, mixt. med 2-methyl-3(2H)-isothiazolon og er mærket: H314 H317 Fare Forårsager svære forbrændinger af huden og øjenskader. Kan forårsage allergisk hudreaktion. ( ) P04070DK_01/SK110/ s. 5/11

6 P280 P261 P264 P272 P304 + P340 + P310 P301 + P310 + P330 + P331 P303 + P361 + P353 + P363 + P310 P302 + P352 P333 + P313 P305 + P351 + P338 + P310 P405 P501 Brug egnede beskyttelseshandsker. Bær beskyttelse til øjne og ansigt. Brug særligt arbejdstøj. Undgå indånding af damp. Vask hænder grundigt efter brug. Tilsmudset arbejdstøj bør ikke fjernes fra arbejdspladsen. VED INDÅNDING: Flyt personen til et sted med frisk luft og sørg for, at vedkommende hviler i en stilling, som letter vejrtrækningen. Ring omgående til en GIFTINFORMATION eller en læge. I TILFÆLDE AF INDTAGELSE: Ring omgående til en GIFTINFORMATION eller en læge. Skyl munden. Fremkald IKKE opkastning. VED KONTAKT MED HUDEN (eller håret): Alt tilsmudset tøj tages straks af. Skyl/brus huden med vand. Tilsmudset tøj skal vaskes, før det kan anvendes igen. Ring omgående til en GIFTINFORMATION eller en læge. VED KONTAKT MED HUDEN: Vask med rigeligt vand/ Ved hudirritation eller udslet: Søg lægehjælp. VED KONTAKT MED ØJNENE: Skyl forsigtigt med vand i flere minutter. Fjern eventuelle kontaktlinser, hvis dette kan gøres let. Fortsæt skylning. Ring omgående til en GIFTINFORMATION eller en læge. Opbevares under lås. Indholdet og beholderen bortskaffes i henhold til alle lokale, regionale, nationale og internationale regler. 5. EnVision DuoFLEX DAB+ Chromogen, indeholder 1 5% biphenyl-3,3',4,4'- tetrayltetraammonium-tetrachlorid og er mærket: H350 H341 P201 P202 P280 Fare P308 + P313 P405 P501 Kan fremkalde kræft. Mistænkt for at forårsage genetiske defekter. Indhent særlige anvisninger før brug. Anvend ikke produktet, før alle advarsler er læst og forstået. Brug egnede beskyttelseshandsker. Bær beskyttelse til øjne og ansigt. Brug særligt arbejdstøj. VED eksponering eller mistanke om eksponering: Søg lægehjælp. Opbevares under lås. Indholdet og beholderen bortskaffes i henhold til alle lokale, regionale, nationale og internationale regler. 6. Forsigtig. Dette produkt indeholder et stof, der endnu ikke er gennemtestet. Sikkerhedsdatablad kan rekvireres af erhvervsmæssige brugere. 7. EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) indeholder 5-10% trometamol, 1-5% nonylphenol, ethoxyleret, og 1-5% eddikesyre, (ethylenedinitrilo)tetra-, dinatriumsalt, dihydrat. EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) er mærket: Advarsel H319 H411 P280 P273 P264 P305 + P351+ P338 P337 + P313 Forårsager alvorlig øjenirritation. Giftig for vandlevende organismer, med langvarige virkninger. Bær øjen- eller ansigtsbeskyttelse. Undgå udledning til miljøet. Vask hænder grundigt efter brug. VED KONTAKT MED ØJNENE: Skyl forsigtigt med vand i flere minutter. Fjern eventuelle kontaktlinser, hvis dette kan gøres let. Fortsæt skylning. Ved vedvarende øjenirritation: Søg lægehjælp. ( ) P04070DK_01/SK110/ s. 6/11

7 P501 Indholdet og beholderen bortskaffes i henhold til alle lokale, regionale, nationale og internationale regler. 8. EnVision FLEX Wash Buffer (20x) indeholder 10-30% 2-Amino-2-(hydroxymethyl)propan- 1,3-diol-hydrochlorid og er mærket: Advarsel H319 Forårsager alvorlig øjenirritation. H315 Forårsager hudirritation. P280 Bær beskyttelseshandsker. Bær øjen- eller ansigtsbeskyttelse. P264 Vask hænder grundigt efter brug. P302 + P352 + VED KONTAKT MED HUDEN: Vask forsigtigt med rigeligt sæbe og P P363 vand. Alt tilsmudset tøj tages af. Tilsmudset tøj skal vaskes, før det kan anvendes igen. P332 + P313 Ved hudirritation: Søg lægehjælp. P305 + P351 + VED KONTAKT MED ØJNENE: Skyl forsigtigt med vand i flere minutter. P338 Fjern eventuelle kontaktlinser, hvis dette kan gøres let. Fortsæt skylning. P337 + P313 Ved vedvarende øjenirritation: Søg lægehjælp. 9. Det valgfrie reagens EnVision FLEX Antibody Diluent (kode K8006) indeholder natriumazid (NaN 3 ), et kemikalie, der er yderst giftigt i ren form. Selvom koncentrationen i produktet ikke er klassificeret som farligt, kan natriumazid reagere med bly og kobber og danne meget eksplosive ophobninger af metalazider. Efter bortskaffelse skylles med rigelige mængder vand for at hindre ophobning af metalazid i afløb. 10. Brug egnet personligt beskyttelsesudstyr for at undgå kontakt med øjne og hud. 11. Ubrugt opløsning skal bortskaffes i henhold til lokale, nationale og EU-bestemmelser. Opbevaring Opbevar EnVision DuoFLEX og EnVision FLEX reagenser ved 2-8 C. Opbevar EnVision FLEX Hematoxylin (kode K8008) ved stuetemperatur. Må ikke anvendes efter den udløbsdato, der er trykt på sættet. Sættets komponenter må ikke skiftes ud med komponenter fra andre partier. Hvis reagenserne opbevares under andre betingelser end de specificerede, skal betingelserne verificeres af brugeren. Kontakt vores tekniske service, hvis der observeres uventet farvning, som ikke kan forklares med variationer i laboratorieprocedurer, og der er mistanke om et problem med produktet. Klargøring af reagens 1. EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph Fortynd en passende mængde EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph med destilleret eller deioniseret vand til den planlagte farvning. Ubrugt fortyndet opløsning kan opbevares ved 2-8 C i en måned. Kassér opløsningen, hvis den er uklar. Når den fortyndede opløsning anvendes i PT Link til en 3-i-1 præparatklargøringsprocedure, kan den anvendes 3 gange inden for en 5 dages periode, hvis den opbevares ved stuetemperatur. 2. EnVision FLEX Wash Buffer Fortynd en passende mængde EnVision FLEX Wash Buffer med destilleret eller deioniseret vand til den planlagte farvning. Ubrugt fortyndet opløsning kan opbevares ved 2-8 C i en måned. Kassér opløsningen, hvis den er uklar. ( ) P04070DK_01/SK110/ s. 7/11

8 3. DAB+ arbejdsopløsning DAB+ arbejdsopløsning klargøres ved omhyggeligt at blande 1 ml EnVision DuoFLEX DAB+ Substrate Buffer med 1 dråbe (25-30 µl) DAB+ kromogen. Klargør kun den mængde, der kræves til det antal objektglas, som skal farves. Klargjort DAB+ arbejdsopløsningen er stabil i ca. 5 dage, hvis den opbevares ved 2 8 C. Opløsningen skal blandes grundigt inden brug. Eventuel udfældning, der dannes i opløsningen inden for 5 dage, påvirker ikke farvningskvaliteten. DAB+ arbejdsopløsningen skal klargøres i en Autostainer Link reagensflaske, når den skal anvendes på Dako Autostainer Link instrumentet. 4. Permanent rød arbejdsopløsning. En arbejdsopløsning af permanent rød klargøres ved omhyggeligt at blande 100 dele permanent rød substratbuffer med 1 del permanent rød kromogen, bland f.eks. 1 ml permanent rød substratbuffer med 10 µl permanent rød kromogen. Klargør kun den mængde, der kræves til det antal objektglas, som skal farves. Opløsningen skal bruges inden for 30 minutter. Arbejdsopløsningen permanent rød skal klargøres i en Autostainer Link reagensflaske, når den skal anvendes på Dako Autostainer Link instrumentet. 5. Retningslinjer for optimal fortynding af primære antistoffer EnVision DuoFLEX Doublestain System er kompatibel med Dako DuoFLEX brugsklare antistoffer i en cocktail. Optimal fortynding skal afgøres af brugeren for andre antistoffer i en cocktail fremstillet af koncentrater. Indsamling og klargøring af prøver Præparaterne kan være formalinfikserede, paraffinindstøbte vævssnit. Der kan anvendes flere forskellige fiksativer til bevaring af præparaterne. Præparaterne må ikke fikseres i neutral bufferet formalin i mere end 24 timer og helst i kortere tid. Den optimale tykkelse for paraffinindstøbte snit er ca. 4 µm. Præparaterne skal monteres på objektglas. Snittene skal monteres på objektglassene så fladt og med så få folder som muligt. For mange folder vil påvirke farvningsresultaterne. BEMÆRK: Objektglassene skal have en bredde, der passer til Dako Autostainer Link instrumentet. Se brugervejledningen til de enkelte Dako instrumenter vedrørende en definition af brugbare objektglas. Paraffinsnit skal monteres fra et forvarmet vandbad med destilleret eller deioniseret vand. Vandbadet må ikke indeholde additiver (f.eks. gelatine, poly-l-lysin osv.). Snittene skal tørres inden opvarmning, generelt ved en temperatur på < 60 C, i mindst 60 minutter (f.eks. natten over). Det er vigtigt at fjerne vandet under snittene inden ovntørringen for at sikre, at snittene hæfter godt på objektglassene. Procedure Dako Autostainer Link instrumenter bruger teknikker, der er baseret på forskellige principper, for at opnå et optimalt farvningsresultat. Inden der køres protokoller på et Dako Autostainer Link instrument, skal brugervejledningen til det anvendte Dako-instrument læses grundigt igennem. For at sikre sig reproducerbar epitop-retrieval anbefales det, at objektglasholderen altid fyldes helt med objektglas. Dermed sikres den samme opvarmning af snittene i hver kørsel. Alle reagenser i sættet leveres i Autostainer Link reagensflasker. DAB+ arbejdsopløsningen og arbejdsopløsningen permanent rød skal begge klargøres i Autostainer Link reagensflasker, når de skal anvendes på Dako Autostainer Link instrumentet. Alle reagenser skal have stuetemperatur (20-25 C) inden immunfarvningen. Desuden skal alle inkubationer foregå ved stuetemperatur. ( ) P04070DK_01/SK110/ s. 8/11

9 Nedenstående forbehandlingstrin skal følges, inden EnVision DuoFLEX Doublestain System anvendes på formalinfikserede, paraffinindstøbte vævssnit. Præparatet skal afparaffineres og hydreres. Se afsnit A.5 og indlægssedlen til hver enkel Dako primær antistofcocktail vedrørende specifikke oplysninger om klargøring af præparater. Anbefalet 3-i-1 præparatklargøringsprocedure ved hjælp af PT Link: 1. Klargør en arbejdsopløsning ved at fortynde den koncentrerede EnVision FLEX Target Retrieval Solution med destilleret eller deioniseret vand. 2. Fyld PT Link karrene op med en tilstrækkelig mængde (1,5 L) arbejdsopløsning til at dække vævssnittene. 3. Indstil PT Link til at forvarme opløsningen til 65 C. 4. Nedsænk de monterede, formalinfikserede, paraffinindstøbte væv i den forvarmede EnVision FLEX Target Retrieval Solution (arbejdsopløsning), og inkuber i minutter ved 97 C. Den optimale inkubationstid skal fastsæt tes af brugeren. 5. Lad snittene afkøle i PT Link til 65 C. 6. Fjern hvert glasstativ fra PT Link-karret, og dyp straks objektglassene i et glas/kar (f.eks. PT Link Rinse Station, kode PT109) med fortyndet EnVision FLEX Wash Buffer, kode K8007, ved stuetemperatur. 7. Lad objektglassene stå i 1-5 minutter ved stuetemperatur i den fortyndede EnVision FLEX Wash Buffer, kode K Anbring objektglassene på et Dako Autostainer Link instrument, og gå videre med farvning. Snittene må ikke tørre ud under behandlingen eller under den immunhistokemiske farvningsprocedure. Udtørrede præparater kan udvise en øget uspecifik farvning. Når den fortyndede target retrieval-opløsning og den fortyndede vaskebuffer anvendes i PT Link til HIER-proceduren, kan de anvendes 3 gange inden for en 5 dages periode, hvis de opbevares ved stuetemperatur. HIER procedure ved hjælp af PT Link: Efter afparaffinering og hydrering til buffer (vand) skal de fleste vævssnit gennemgå varmeinduceret epitop-retrieval (HIER). 1. Klargør en arbejdsopløsning ved at fortynde den koncentrerede EnVision FLEX Target Retrieval Solution med destilleret eller deioniseret vand. 2. Fyld PT Link karrene op med en tilstrækkelig mængde (1,5 L) arbejdsopløsning til at dække vævssnittene. 3. Indstil PT Link til at forvarme opløsningen til 65 C. 4. Nedsænk de manuelt afparaffinerede/hydrerede væv i den forvarmede EnVision FLEX Target Retrieval Solution (arbejdsopløsning), og inkuber i minutter ved 97 C. Den optimale inkubationstid skal fastsættes af brugeren. 5. Lad snittene afkøle i PT Link til 65 C. 6. Fjern hvert glasstativ fra PT Link-karret, og dyp straks objektglassene i et glas/kar (f.eks. PT Link Rinse Station, kode PT109) med fortyndet EnVision FLEX Wash Buffer, kode K8007 ved stuetemperatur. 7. Lad objektglassene stå i 1-5 minutter ved stuetemperatur i den fortyndede EnVision FLEX Wash Buffer, kode K Anbring objektglassene på et Dako Autostainer Link instrument, og gå videre med farvning. Snittene må ikke tørre ud under behandlingen eller under den immunhistokemiske farvningsprocedure. Udtørrede præparater kan udvise en øget uspecifik farvning. 9. Til offline hæmatoxylinfarvning skal objektglassene nedsænkes i et hæmatoxylinbad. Inkubationstidens længde afhænger af styrken på den anvendte hæmatoxylin. ( ) P04070DK_01/SK110/ s. 9/11

10 Kontrastfarvningen med hæmatoxylin efterfølges af en grundig skylning i destilleret eller deioniseret vand. Coplin-skåle: 1. Anbring farvningsskåle, der indeholder fortyndet EnVision FLEX Target Retrieval Solution, i vandbad. 2. Opvarm vandbad og skåle fyldt med EnVision FLEX Target Retrieval Solution til C. Sæt låg på skålene for at stabilisere temperaturen og undgå fordampning. 3. Dyp snittene, der har stuetemperatur, i den forvarmede EnVision FLEX Target Retrieval Solution i farvningsskålene. 4. Bring temperaturen i vandbadet og EnVision FLEX Target Retrieval Solution tilbage til C. 5. Tag hele skålen med objektglassene op af vandbadet. Lad objektglassene køle af i EnVision FLEX Target Retrieval Solution i 20 (± 1) minutter ved stuetemperatur. 6. Dekanter EnVision FLEX Target Retrieval Solution, og skyl snittene med EnVision FLEX Wash Buffer. 7. Placer stativet med de skyllede snit i et Dako Autostainer Link instrument. Begynd straks den forprogrammerede farvning. BEMÆRK: Når den fortyndede EnVision FLEX Target Retrieval Solution og den fortyndede EnVision FLEX Wash Buffer anvendes i Coplin-skåle til HIER-proceduren, kan de kun anvendes 1 gang (engangsbrug). Nogle få epitoper tåler ikke HIER, og nogle kræver enzymatisk forbehandling. Se indlægssedlen til hvert enkel Dako primær antistofcocktail. Vævssnittene må ikke udtørre under behandlingen eller under den efterfølgende immunhistokemiske farvningsprocedure. Det tilrådes at anvende Dako FLEX IHC Microscope Slides (kode K8020), så vævssnittene hænger bedre fast på objektglassene. Inkubation med primær antistofcocktail: Dako DuoFLEX brugsklare antistoffer i en cocktail kan anvendes sammen med Dako EnVision DuoFLEX Doublestain system på formalinfikserede, paraffinindstøbte snit. Farvningstrinnene og inkubationstiderne er forprogrammerede i Autostainer Link softwaren som protokol DuoFLEX. Hvis protokollerne ikke er til rådighed på det anvendte Autostainer Link instrument, bedes du kontakte Dakos tekniske serviceafdeling. De optimale inkubationstider for den primære antistofcocktail, EnVision DuoFLEX/HRP og EnVision DuoFLEX /AP er afhængige af den anvendte primære antistofcocktail. Se indlægssedlen til hvert enkel Dako primær antistofcocktail. Brugeren skal kontrollere den anvendte protokol. Efter farvning skal objektglassene monteres. Monteringsmedier, som f.eks. Dako Glycergel Mounting Medium, kode C0563, eller Faramount Aqueous Mounting Medium, kode S3025, anbefales til vandbaseret montering. Til ikke-vandbaseret, permanent montering anbefales det, at objektglassene lufttørres fuldstændigt ved stuetemperatur eller lufttørres i 1 time ved 60 C, og dernæst inkuberes i xylen eller en xylenerstatning i 5 minutter. Bemærk, at der i visse tilfælde kan observeres små, punktformede artefakter på objektglas, der har været underkastet lufttørring før påføringen af dækglas. Dette kan korrigeres ved at behandle objektglassende i henhold til en af nedenstående procedurer: Mulighed 1: Direkte overførsel af objektglassene med væv fra Autostainer instrumentet til alkohol, som enten kan være: a) 99% alkohol med en inkubation på maksimalt 2 min, eller b) Tre på hinanden følgende 100% alkoholbade, 10 neddypninger i hver. ( ) P04070DK_01/SK110/ s. 10/11

11 Herefter skal objektglassene neddyppes 10 gange i hvert af to på hinanden følgende xylenbade efterfulgt af permanent montering. Mulighed 2: Direkte overførsel af objektglassene med væv fra Autostainer instrumentet til en gradueret alkohol-serie, men kun i 30 sek. i hvert trin og uden xylen-eksponering, efterfulgt af permanent montering. Længerevarende eksponering for alkohol og/eller xylen kan føre til kromogenekstraktion og deraf følgende dårligere farvning. Det skal bemærkes, at disse procedurer ikke er blevet afprøvet med samtlige primære antistoffer, og de skal derfor tages som en rettesnor. På samme måde skal ydeevnen for den justerede dehydreringsprotokol efterfulgt af permanent montering verificeres for at sikre, at den fortsat er gyldig også for det pågældende primære antistof. Hvert af de primære antistoffer, der bruges, skal evalueres med den justerede dehydreringsprotokol for at bekræfte, at farvningsmønstret er identisk med det farvningsmønster, der beskrives under Præstationskarakteristika for det primære antistof. Kvalitetskontrol Hver farvekørsel skal omfatte et kendt positivt kontrolpræparat for at sikre en korrekt ydeevne af alle de anvendte reagenser. Hvis det positive kontrolpræparat ikke udviser en positiv farvning, skal mærkningen af prøvepræparaterne betragtes som ugyldige. Fortolkning af resultater Antigenet, som blev genkendt af museantistoffet, er farvet brunt med DAB+ kromogenet. Antigenet, som blev genkendt af kaninantistoffet, er farvet rødt med permanent rød kromogenet. Begge farver giver mulighed for visualisering mod en hæmatoxylinkontrastfarve. Hvis der er uspecifik farvning, vil dette kunne ses som en diffus, brun eller rød farvning. Kernerne farves blå med hæmatoxylinkontrastfarven. Der kan muligvis observeres baggrundsfarvning i forbindelse med visse væv i små Autostainerkørsler (dvs. cirka ni objektglas eller færre). Denne baggrundsfarvning kan afhjælpes ved at øge skylletiderne i farvningsprotokollen. For yderligere vejledning kontakt Dakos tekniske serviceafdeling. Referencer 1. Sheehan DC, Hrapchak BB. Theory and practice of histotechnology. St. Louis: CV Mosby Company; 1980 Produceret af: Dako North America, Inc Via Real Carpinteria, CA 93013, USA ( ) P04070DK_01/SK110/ s. 11/11