EnVision FLEX, High ph (Dako Omnis)

Transkript

1 EnVision FLEX, High ph (Dako Omnis) Code GV udgave Sættet indeholder reagenser til 600 analyser. Til Dako Omnis-instrumenter. Valgfri reagenser: Kode Produktnavn Analyser GV804 GV805 EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) (Dako Omnis) EnVision FLEX Target Retrieval Solution, Low ph (50x) (Dako Omnis) GC807 Wash Buffer (20x) (Dako Omnis) GC808 Hematoxylin (Dako Omnis) 600 GV809 EnVision FLEX+ Rabbit LINKER (Dako Omnis) 75 GV821 EnVision FLEX+ Mouse LINKER (Dako Omnis) 75 GV825 EnVision FLEX DAB+ Substrate Chromogen System (Dako Omnis) 150 Andre muligheder: K8020 FLEX IHC Microscope Slides 500 ( ) P04120DK_001_GV800/ s. 1/11

2 Indhold Side Tilsigtet anvendelse... 3 Resumé og forklaring... 3 Reagenser... 4 A. Medfølgende materialer... 4 B. Nødvendige materialer, der ikke medfølger... 4 C. Valgfri reagenser... 5 Forholdsregler... 6 Opbevaring... 6 Klargøring af reagens... 7 Indsamling og klargøring af præparater... 7 Procedure... 8 Farvningsprocedure... 8 Kvalitetskontrol Fortolkning af resultater Begrænsninger Symbolforklaring ( ) P04120DK_001_GV800/ s. 2/11

3 Tilsigtet anvendelse Til in vitro-diagnostisk brug. EnVision FLEX, High ph (Dako Omnis) visualiseringssystem er beregnet til anvendelse i immunhistokemi sammen med Dako Omnis-instrumenter. Systemet detekterer primære murine og kanin-antistoffer, og reaktionen visualiseres med EnVision FLEX DAB+ Chromogen. Når det anvendes med EnVision FLEX+ Rabbit LINKER (kode GV809) eller EnVision FLEX+ Mouse LINKER (kode GV821), kan der opnås signalforstærkelse af hhv. primære kanin-antistoffer eller primære murine antistoffer. EnVision FLEX-reagenserne er beregnet til brug på formalinfikserede, paraffinindstøbte vævssnit. Resumé og forklaring EnVision FLEX visualiseringssystemet er et fleksibelt system, der giver optimal farvning på Dako Omnis-instrumenter, når der anvendes den protokol, der anbefales i indlægssedlen. Før farvning undergår formalinfikserede, paraffinindstøbte vævssnit afparaffinering og hydrering i instrumentet, efterfulgt af varmeinduceret epitop-retrieval (HIER) vha. det target-retrieval-reagens, der er angivet i indlægssedlen for det primære antistof. Dette sæt omfatter EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) (DM848). Alternativt anbefales brug af EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) (kode GV804) eller EnVision FLEX Target Retrieval Solution, Low ph (50x) (kode GV805). Visse primære antistoffer kræver enzym-forbehandling af vævet i stedet for HIER for at opnå en optimal farvning. Endogen peroxidase skal blokeres med EnVision FLEX Peroxidase-Blocking Reagent (DM841), der medfølger i sættet. På grund af den effektive vaskeprocedure og tilstedeværelsen af stabiliserende proteiner i Dako-reagenser er det ikke nødvendigt at udføre ekstra blokeringstrin for at reducere ikkespecifik baggrundsfarvning. Som valgfrit reagens anbefales Wash Buffer (20x) (GC807). Sættet indeholder ikke primære antistoffer. Vi anbefaler brug af Dako FLEX Ready-to-Use Primary Antibodies eller koncentrerede Primary Antibodies fra Dako (se den relevante indlægsseddel for at få retningslinjer). EnVision FLEX+ Rabbit LINKER (kode GV809) kan anvendes for at få optimal signalforstærkning af primære kanin-antistoffer. EnVision FLEX+ Mouse LINKER (kode GV821) kan anvendes for at få optimal signalforstærkning, når der anvendes primære murine antistoffer. Som en retningslinje: EnVision FLEX+ Rabbit LINKER forstærker signalet 2-3 gange, og EnVision FLEX+ Mouse LINKER forstærker signalet 4-5 gange. Dako EnVision FLEX /HRP-reagens (DM842) i sættet består af et dextran-backbone, hvortil der er koblet et stort antal HRP-molekyler (peberrodsperoxidase) og sekundære antistof-molekyler. Der anvendes en unik kemisk koblingsreaktion, som giver mulighed for at binde op til 100 HRP-molekyler og op til 20 antistof-molekyler pr. backbone. Substratsystemet i sættet består af to komponenter: EnVision FLEX DAB+ Chromogen (DM847), en koncentreret diaminobenzidin-opløsning (DAB), og EnVision FLEX Substrate Buffer (DM843) indeholder hydrogenperoxid. Før brug skal EnVision FLEX DAB+ Chromogen fortyndes med EnVision FLEX Substrate Buffer. Substratsystemet danner et tydeligt brunt slutprodukt på stedet for målantigenet. Rettidig blanding af kromogen og buffer udføres automatisk i Dako Omnis-instrumentet. Hematoxylin (kode GC808) anbefales til modfarvning. Reagenset giver en klar, blå kernefarvning. De farvede vævssnit skal monteres med monteringsmedie baseret på organisk solvent. ( ) P04120DK_001_GV800/ s. 3/11

4 Reagenser A. Medfølgende materialer DM841 DM842 EnVision FLEX Peroxidase-Blocking Reagent (Dako Omnis) 8 x 22,5 ml, brugsklar Fosfatbuffer indeholdende hydrogenperoxid, 15 mmol/l NaN 3 og detergent. DM847 DM843 DM848 EnVision FLEX /HRP (Dako Omnis) 8 x 22,5 ml, brugsklar Dextran koblet med peroxidasemolekyler og sekundære gede-antistofmolekyler mod kanin- og muse-immunoglobuliner. I bufferet opløsning, der indeholder stabiliserende protein og konserveringsmiddel. EnVision FLEX DAB+ Chromogen (Dako Omnis) 8 x 1 ml 3,3'-diaminobenzidin tetrahydrochlorid i organisk solvent. Farven på dette reagens kan variere fra stærk violet til farveløs, uden at det har nogen indflydelse på sættets ydeevne. EnVision FLEX Substrate Buffer (Dako Omnis) 16 x 26 ml Bufferet opløsning indeholdende hydrogenperoxid og konserveringsmiddel. EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) (Dako Omnis) 9 x 68 ml, 50x koncentreret Tris/EDTA-buffer, ph 9 B. Nødvendige materialer, der ikke medfølger Antistof-fortynder, f.eks. Dako Antibody Diluent (kode S0809) Clearify Clearing Agent (kode GC810) Dako FLEX Ready-to-Use Primary Antibodies eller korrekt fortyndede, koncentrerede, primære kanineller murine antistoffer fra Dako Dako Omnis-instrument Dako Omnis-instrumentredskaber Dako Proteinase K, Ready-to-Use (efter behov) (kode S3020) FLEX Universal Negative Control, Rabbit, Ready-to-Use (kode GA600), FLEX Universal Negative Control, Mouse, Ready-to-Use (kode GA750), eller et egnet negativt kontrolreagens til det primære antistof Hematoxylin (Dako Omnis) (kode GC808) eller et egnet hæmatoxylin-reagens til modfarvning Objektglas, f.eks. Dako FLEX IHC Microscope Slides (kode K8020) Monteringsmedie (organisk solvent-baseret) og dækglas Wash Buffer (20x) (Dako Omnis) (kode GC807) 0.3 M Sulfuric Acid (kode GC203) ( ) P04120DK_001_GV800/ s. 4/11

5 C. Valgfri reagenser GV804 DM848 GV805 DM849 EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) (Dako Omnis) 3 x 68 ml, 50x koncentreret Tris/EDTA-buffer, ph 9 EnVision FLEX Target Retrieval Solution, Low ph (50x) (Dako Omnis) 3 x 68 ml, 50x koncentreret Citratbuffer, ph 6,1 GC807 DM851 GC808 DM846 GV809 DM845 GV821 DM844 GV825 DM847 + DM843 Wash Buffer (20x) (Dako Omnis) 20 x 175 ml, 20x koncentreret Tris-bufferet saltvandsopløsning med Tween 20, ph 7,6 (±0,1). Hematoxylin (Dako Omnis) 8 x 22,5 ml, brugsklar Vandbaseret opløsning af hæmatoxylin. EnVision FLEX+ Rabbit LINKER (Dako Omnis) 1 x 22,5 ml, brugsklar Bufferet opløsning indeholdende stabiliserende protein og et antimikrobielt middel. EnVision FLEX+ Mouse LINKER (Dako Omnis) 1 x 22,5 ml, brugsklar Bufferet opløsning indeholdende stabiliserende protein og et antimikrobielt middel. EnVision FLEX DAB+ Substrate Chromogen System (Dako Omnis) EnVision FLEX DAB+ Chromogen (Dako Omnis) 2 x 1 ml 3,3'-diaminobenzidin tetrahydrochlorid i organisk solvent. Farven på dette reagens kan variere fra stærk violet til farveløs, uden at det har nogen indflydelse på sættets ydeevne. EnVision FLEX Substrate Buffer (Dako Omnis) 4 x 26 ml Bufferet opløsning indeholdende hydrogenperoxid og konserveringsmiddel. ( ) P04120DK_001_GV800/ s. 5/11

6 Forholdsregler 1. Må kun anvendes af uddannet personale. 2. EnVision FLEX /HRP indeholder materiale af animalsk oprindelse, og det kan ikke udelukkes, at der kan være sporbare mængder af humant materiale pga. fremstillingsprocedurerne. Som med alle produkter afledt fra biologiske kilder bør der iagttages korrekte håndteringsprocedurer. 3. Udsæt ikke EnVision FLEX Peroxidase-Blocking Reagent, EnVision FLEX /HRP, EnVision FLEX Substrate Buffer, EnVision FLEX DAB+ Chromogen eller EnVision FLEX Substrate Working Solution for kraftige lyskilder. 4. EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) indeholder 5-10% trometamol, 1-5% nonylphenol, ethoxylat, og 1-5% acetic acid, (ethylenedinitrilo)tetra-, disodium salt, dihydrate. EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) er mærket: Advarsel H319 Forårsager alvorlig øjenirritation. H411 Giftig for vandlevende organismer, med langvarige virkninger. P280 Brug egnede beskyttelseshandsker. Bær beskyttelse til øjne og ansigt. Brug særligt arbejdstøj. P273 Undgå udledning til miljøet. P264 Vask hænder grundigt efter brug. P305 + P351 + P338 VED KONTAKT MED ØJNENE: Skyl forsigtigt med vand i flere minutter. Fjern eventuelle kontaktlinser, hvis dette kan gøres let. Fortsæt skylning. P337 + P313 Ved vedvarende øjenirritation: Søg lægehjælp. P501 Indholdet og beholderen bortskaffes i henhold til alle lokale, regionale, nationale og internationale regler. 5. Professionelle brugere kan rekvirere et sikkerhedsdatablad for EnVision FLEX Peroxidase- Blocking Reagent. 6. EnVision FLEX DAB+ Chromogen indeholder 1-5% biphenyl-3,3',4,4'- tetrayltetraammoniumtetrachlorid og er mærket: H350 H341 P201 P202 P280 Fare P308 + P313 P405 P501 Kan fremkalde kræft. Mistænkt for at forårsage genetiske defekter. Indhent særlige anvisninger før brug. Anvend ikke produktet, før alle advarsler er læst og forstået. Brug egnede beskyttelseshandsker. Bær beskyttelse til øjne og ansigt. Brug særligt arbejdstøj. VED eksponering eller mistanke om eksponering: Søg lægehjælp. Opbevares under lås. Indholdet og beholderen bortskaffes i henhold til alle lokale, regionale, nationale og internationale regler. Som hovedregel gælder det, at personer under 18 år ikke må arbejde med dette produkt. Brugerne skal omhyggeligt vejledes i korrekt arbejdsprocedure, produktets farlige egenskaber og de nødvendige sikkerhedsforanstaltninger. Se yderligere oplysninger i sikkerhedsdatabladet. 7. Brug passende personlige værnemidler for at undgå, at materialet kommer i kontakt med øjne og hud. 8. Ubrugt opløsning skal bortskaffes i henhold til lokal, national og EU-retlig lovgivning. Opbevaring EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) skal opbevares ved 2-8 C. EnVision FLEX Peroxidase-Blocking Reagent, EnVision FLEX /HRP, EnVision FLEX DAB+ Chromogen og ( ) P04120DK_001_GV800/ s. 6/11

7 EnVision FLEX Substrate Buffer skal opbevares mørkt ved 2-8 C. Låget skal være lukket under opbevaring. Holdbarhed i instrumentet for EnVision FLEX Peroxidase-Blocking Reagent, EnVision FLEX /HRP, EnVision FLEX DAB+ Chromogen og EnVision FLEX Substrate Buffer er 75 timer. Holdbarhed i instrumentet for fortyndet EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph og Low ph er 7 dage. Resterende holdbarhed i instrumentet spores af Dako Omnis-softwaren. Må ikke anvendes efter den udløbsdato, der er trykt på flaskerne. Hvis reagenserne opbevares under andre forhold end de specificerede, skal forholdene verificeres af brugeren. Kontakt teknisk support hos Dako, hvis der observeres uventet farvning, som ikke kan forklares med variationer i laboratorieprocedurer, og der er mistanke om et problem med produktet. Klargøring af reagens A.1 EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) (DM848, kode GV804) eller EnVision FLEX Target Retrieval Solution, Low ph (50x) (DM849, kode GV805) Klargør en brugsopløsning ved at fortynde koncentreret EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) eller Low ph (50x) 1:50 med destilleret eller deioniseret vand. Den følgende fremgangsmåde anbefales: 1. Fyld en Dako Omnis bulkflaske til påfyldningslinjen med destilleret eller deioniseret vand (3,325 L). Sørg for, at bulkflasken står på en plan overflade, før den fyldes. 2. Tøm en flaske koncentreret EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) eller Low ph (50x) (Dako Omnis) (68 ml) i bulkflasken. 3. Sæt den aftagelige mærkat fra koncentratflasken fast på bulkflasken. 4. Sæt låget på, og vend forsigtigt bulkflasken på hovedet 2-3 gange. Ubrugt fortyndet opløsning kan opbevares ved 2-8 C i en måned. Den fortyndede opløsning skal anvendes inden 7 dage, hvis den opbevares i Dako Omnis-instrumentet. Kasser opløsningen, hvis den er uklar. A.2 Wash Buffer (20x) (DM851, kode GC807) Klargør en brugsopløsning ved at fortynde koncentreret Wash Buffer (20x) (Dako Omnis) 1:20 med destilleret eller deioniseret vand i en Dako Omnis bulkflaske. For at minimere skumdannelse anbefales den følgende fremgangsmåde: 1. Fyld en Dako Omnis bulkflaske til påfyldningslinjen med destilleret eller deioniseret vand (3,325 L). Sørg for, at bulkflasken står på en plan overflade, før den fyldes. 2. Tøm en flaske koncentreret Wash Buffer (20x) (Dako Omnis) (175 ml) i bulkflasken. 3. Sæt den aftagelige mærkat fra koncentratflasken fast på bulkflasken. 4. Sæt låget på, og vend forsigtigt bulkflasken på hovedet 2-3 gange. Ubrugt fortyndet opløsning kan opbevares ved 2-8 C i en måned. Den fortyndede opløsning skal anvendes inden 7 dage, hvis den opbevares i Dako Omnis-instrumentet. Resterende holdbarhed i instrumentet spores af Dako Omnis-softwaren. Kasser opløsningen, hvis den er uklar. A.3 EnVision FLEX Substrate Working Solution EnVision FLEX Substrate Working Solution, der indeholder DAB, klargøres i Dako Omnisinstrumentet. Den automatiserede proces blander én del EnVision FLEX DAB+ Chromogen (DM847) med 50 dele EnVision FLEX Substrate Buffer (DM843). Substrate Working Solution klargøres altid for én holder (med 1-5 objektglas) ad gangen. De leverede volumener rækker til isætning af 200 holdere. Indsamling og klargøring af præparater Præparaterne skal være formalinfikserede, paraffinindstøbte vævssnit. ( ) P04120DK_001_GV800/ s. 7/11

8 Fikseringstiderne afhænger af det anvendte fiksativ og vævstype/-tykkelse. For eksempel skal vævsblokke med en tykkelse på 3-4 mm fikseres i neutral bufferet formalin i timer. Den optimale tykkelse for paraffinindstøbte snit er 4 µm. Præparaterne skal monteres på objektglas. Det tilrådes at anvende FLEX IHC Microscope Slides (kode K8020), så vævssnittene hænger bedre fast på objektglassene. Snittene skal monteres på objektglassene så fladt og med så få folder som muligt. For mange folder vil påvirke farvningsresultaterne. BEMÆRK: Objektglassene skal have en bredde, der passer til Dako Omnis-instrumentet. Se den grundlæggende brugervejledning til Dako Omnis for at få en definition af brugbare objektglas. Paraffinsnit skal monteres fra et forvarmet vandbad med destilleret eller deioniseret vand. Vandbadet må ikke indeholde additiver (f.eks. gelatine, poly-l-lysin osv.). Snittene skal tørres vha. opvarmning, generelt ved en temperatur, der ikke overstiger 60 C, i mindst 60 minutter. Det er vigtigt at fjerne vandet under snittene inden ovntørringen for at sikre, at snittene hæfter godt på objektglassene. Procedure EnVision FLEX visualiseringssystemet er udviklet til brug i Dako Omnis-instrumentet sammen med primære antistoffer fra Dako. Den automatiserede procedure på Dako Omnis omfatter afparaffinering af vævssnit, varmeinduceret epitop-retrieval, immunhistokemisk farvning og modfarvning af formalinfikserede, paraffinindstøbte vævssnit. Protokoltrinnene til de automatiserede procedurer kan vises, udskrives og redigeres. For nærmere oplysninger henvises til den grundlæggende brugervejledning til Dako Omnis og Dako Omnis Advanced User Guide (Avanceret brugervejledning). Forbehandlingsproceduren og farvningsprotokollen afhænger af antistoffet. For flere oplysninger om de enkelte primære antistoffer fra Dako henvises til de respektive indlægssedler. Før der køres protokoller på Dako Omnis-instrumentet, skal brugervejledningen til Dako Omnis læses omhyggeligt. EnVision FLEX-protokollen er forprogrammeret i Dako Omnis-softwaren. Se den grundlæggende brugervejledning til Dako Omnis for at få detaljerede oplysninger om klargøring af instrumentet til farvning, og se Dako Omnis Advanced User Guide (Avanceret brugervejledning) for at få detaljerede oplysninger om protokoller. Farvningsprocedure Når der anvendes FLEX RTU Primary Antibodies til Dako Omnis, er den optimale farvningsprotokol programmeret i Dako Omnis-softwaren. Se indlægssedlen til hhv. FLEX RTU Primary Antibody eller koncentreret Primary Antibody fra Dako for at få oplysninger om optimale forbehandlingsmetoder og inkubationstider. For nem opsætning af nye protokoller anbefales det at bruge en af de protokolskabeloner, der er beskrevet nedenfor. Vælg en af de tre protokolskabeloner på Dako Omnis-arbejdsstationen, der indeholder de anbefalede farvningstrin og inkubationstider til EnVision FLEX visualiseringssystemet (se tabel 2 for at få en oversigt): FLEX FLEX+ Mouse FLEX+ Rabbit Protokolskabelonen kan anvendes til at danne brugertilpassede protokoller til specifikke primære antistoffer. De følgende protokoltrin kan brugertilpasses: Target retrieval-reagens (til varmeinduceret epitop-retrieval), temperatur og inkubationstid Primært antistof og inkubationstid Inkubationstid for mærket polymer (kun reduktion) Kontrastfarvereagens og inkubationstid Brugeren skal kontrollere den anvendte protokol. ( ) P04120DK_001_GV800/ s. 8/11

9 Kontakt Dakos tekniske serviceafdeling, hvis protokollerne ikke findes på Dako Omnis-systemet. Tabel 2. Oversigt over protokolskabeloner til EnVision FLEX/FLEX+. Fase Trin Reagens Skabelon for farvningsprotokol Fjernelse af voks FLEX FLEX+ Mouse FLEX+ Rabbit Fjernelse af voks Clearify Clearing Agent Ja Ja Ja Target Retrieval Farvning Modfarvning Target Retrieval EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph eller EnVision FLEX Target Retrieval Solution, Low ph eller 97±2 C* 30 min.* 97±2 C* 30 min.* 97±2 C* 30 min.* andet egnet reagens Primært antistof 20 min.* 20 min.* 20 min.* 20 min.* Endogen EnVision FLEX Peroxidase- 3 min. 3 min. 3 min. enzymblokker Blocking Reagent Sekundært EnVision FLEX+ Mouse eller - Mouse LINKER Rabbit LINKER reagens Rabbit LINKER 10 min. 10 min. Vask Wash Buffer (Dako Omnis) - vask vask Mærket polymer EnVision FLEX /HRP 20 min.* 20 min.* 20 min.* Substratkromoge n EnVision FLEX Substrate Working Solution 5 min. 5 min. 5 min. Kontrastfarve Hematoxylin (Dako Omnis)* 3 min.* 3 min.* 3 min.* Vask Deioniseret vand vask vask vask * Brugertilpasning er mulig. ( ) P04120DK_001_GV800/ s. 9/11

10 Efter-farvningsprocedure 1. Når kørslen er færdig, skal objektglasholderen tages ud af Unloading Station (Udtagningsstationen), og holderne skal overføres til frisk deioniseret vand. 2. Dehydrer, rens, og monter objektglassene med permanent monteringsmedie, og sæt dækglas på. Kvalitetskontrol Hver farvekørsel skal omfatte et kendt positivt kontrolpræparat for at sikre en korrekt ydeevne af alle de anvendte reagenser. Hvis det positive kontrolpræparat ikke udviser en positiv farvning, skal mærkningen af prøvepræparaterne betragtes som ugyldige. Der skal anvendes et negativt kontrolreagens sammen med hvert præparat for at identificere en eventuel uspecifik farvning. Hvis uspecifik farvning ikke kan adskilles tydeligt fra den specifikke farvning, skal mærkningen af prøvepræparatet betragtes som ugyldig. Fortolkning af resultater Substrate Working Solution, der indeholder diaminobenzidin, giver en brun farve på det sted, hvor det målantigen, der genkendes af det primære antistof, findes. Den brune farve skal kunne ses på det positive kontrolpræparat på det forventede sted for målantigenet. Hvis der er uspecifik farvning, vil dette kunne ses som en diffus, brun farvning på de objektglas, der er behandlet med det negative kontrolreagens. Kernerne farves blå med hæmatoxylinkontrastfarven. Begrænsninger 1. Kun til automatiseret anvendelse på Dako Omnis-instrumenter. Når farvningen udføres med koncentrerede primære antistoffer fra Dako, skal den optimale procedure fastlægges og verificeres af brugeren. 2. Kun til anvendelse på formalinfikserede, paraffinindstøbte vævssnit. Ved brug af frosne snit eller celleudstrygninger skal den optimale procedure bestemmes og verificeres af brugeren, medmindre andet er angivet i indlægssedlen til det pågældende Dako Primary Antibody. Ændringer af proceduren kan påvirke antallet af analyser, som kan udføres med sættet. ( ) P04120DK_001_GV800/ s. 10/11

11 Symbolforklaring Katalognummer Temperaturbegrænsning Batchkode GHS-farepiktogram (se afsnittet om forholdsregler) In vitro-diagnostisk medicinsk udstyr Opbevares mørkt Anvendes inden GHS-farepiktogram (se afsnittet om forholdsregler) Se brugsanvisningen Indeholder nok til <n> analyser Producent Dako EnVision systemerne er omfattet af det amerikanske patent 5,543,332 og det europæiske patent 594,772. Produceret af: Dako Denmark A/S Produktionsvej 42 DK-2600 Glostrup Denmark Tlf Fax ( ) P04120DK_001_GV800/ s. 11/11