Eksperimentel tumorbiologi - dyremodeller i kræftforskning

Transkript

1 Eksperimentel tumorbiologi - dyremodeller i kræftforskning Kasper Almholt, Histology, Novo Nordisk (tidligere ved Finsenlaboratoriet, Rigshospitalet) Kursus i Tumorbiologi og Klinisk Onkologi, 12. januar 2010

2 Eksperimentel tumorbiologi 7 egenskaber der adskiller cancerceller fra raske celler Tumormodeller fra reagensglasset til musen Tumormodeller i mus Pause Cancer-relaterede forskelle på mand og mus Metastasemodeller Eksempel fra mit eget arbejde

3 6+1 egenskaber der adskiller cancerceller fra raske celler Cancerceller kan: 1. vokse uafhængigt af vækst-fremmende signaler 2. vokse på trods af vækst-hæmmende signaler 3. undgå programmeret celledød 4. dele sig ubegrænset (udødelighed) 5. inducere dannelse af nye blodkar 6. invadere og metastasere Et af Finsenlaboratoriets fokusområder Hallmarks of cancer (Hanahan & Weinberg 2000, Cell 100, 57) 7. undgå immunforsvaret

4 7 egenskaber der adskiller cancerceller fra raske celler Cancerceller kan: 1. vokse uafhængigt af vækst-fremmende signaler 2. vokse på trods af vækst-hæmmende signaler 3. undgå programmeret celledød 4. dele sig ubegrænset (udødelighed) 5. inducere dannelse af nye blodkar 6. invadere og metastasere 7. undgå immunforsvaret Normal + Oncogen: EGF Cancer Herceptin EGF-R ErbB Vækst Vækst

5 7 egenskaber der adskiller cancerceller fra raske celler Cancerceller kan: 1. vokse uafhængigt af vækst-fremmende signaler 2. vokse på trods af vækst-hæmmende signaler 3. undgå programmeret celledød 4. dele sig ubegrænset (udødelighed) 5. inducere dannelse af nye blodkar 6. invadere og metastasere 7. undgå immunforsvaret Tumor suppressor: Tab af celle cyklus kontrol: Vækstfremmende signal Væksthæmmende signal (TGFβ) DNA skade Cancer Rb G1 S celledeling M G2

6 7 egenskaber der adskiller cancerceller fra raske celler Cancerceller kan: 1. vokse uafhængigt af vækst-fremmende signaler 2. vokse på trods af vækst-hæmmende signaler 3. undgå programmeret celledød - apoptosis 4. dele sig ubegrænset (udødelighed) 5. inducere dannelse af nye blodkar 6. invadere og metastasere 7. undgå immunforsvaret Døds-signaler Tumor suppressor: Overlevelsessignaler p53 DNA skade Cancer Programmeret celledød

7 7 egenskaber der adskiller cancerceller fra raske celler Cancerceller kan: 1. vokse uafhængigt af vækst-fremmende signaler 2. vokse på trods af vækst-hæmmende signaler 3. undgå programmeret celledød 4. dele sig ubegrænset (udødelighed) 5. inducere dannelse af nye blodkar 6. invadere og metastasere 7. undgå immunforsvaret + Telomerase: Kromosom Telomeren (hos mennesker) består af i alt DNA bp. En celledeling koster ca. 100 bp....(ttaggg) n Telomerasen forlænger enderne: aktiv i bl.a kønsceller og cancerceller...ttaggg..ttaggg... => Grænse for celledeling ~50 Stadie IV neuroblastom hos nyfødte : 85% spontan remission uden terapi ingen tumor telomerase aktivitet

8 7 egenskaber der adskiller cancerceller fra raske celler Cancerceller kan: 1. vokse uafhængigt af vækst-fremmende signaler 2. vokse på trods af vækst-hæmmende signaler 3. undgå programmeret celledød 4. dele sig ubegrænset (udødelighed) 5. inducere dannelse af nye blodkar 6. invadere og metastasere 7. undgå immunforsvaret + Neovaskularisering: National Cancer Institute

9 7 egenskaber der adskiller cancerceller fra raske celler Cancerceller kan: 1. vokse uafhængigt af vækst-fremmende signaler 2. vokse på trods af vækst-hæmmende signaler 3. undgå programmeret celledød 4. dele sig ubegrænset (udødelighed) 5. inducere dannelse af nye blodkar 6. invadere og metastasere 7. undgå immunforsvaret + Extracellulær proteolyse: Myo-epithelium Cancerceller Protease (MMP-13) Nielsen 2001, Cancer Res 61, 7091

10 7 egenskaber der adskiller cancerceller fra raske celler Cancerceller kan: 1. vokse uafhængigt af vækst-fremmende signaler 2. vokse på trods af vækst-hæmmende signaler 3. undgå programmeret celledød 4. dele sig ubegrænset (udødelighed) 5. inducere dannelse af nye blodkar 6. invadere og metastasere 7. undgå immunforsvaret antigen, MHC, o.lign. Tab af MHC I på overfladen => ingen CD8 T-celle genkendelse. Janeway et al, Immunobiology 6 th edition, 2005

11 Tumormodeller fra reagensglasset til musen Kompleksitet Prediktiv værdi(?) 2D in vitro modeller 3D in vitro modeller Tumormodeller i ikke-pattedyr Tumormodeller i mus (og andre pattedyr)

12 Tumormodeller fra reagensglasset til musen Kompleksitet Prediktiv værdi(?) 2D in vitro modeller 3D in vitro modeller Tumormodeller i ikke-pattedyr Tumormodeller i mus Væksthastighed af cancercellelinje i en cellekulturskål Cellemigrationsmåling: for eks. lukning af et skrab i et konfluent enkeltlag af cancerceller Galiacy 2003, Exp Cell Res 283, 215

13 Tumormodeller fra reagensglasset til musen Kompleksitet Prediktiv værdi(?) 2D in vitro modeller 3D in vitro modeller Tumormodeller i ikke-pattedyr Tumormodeller i mus 2½D måling af invasion gennem en membran mellem 2 cellekulturskåle Angiogenese i en 3D cellekulturmatrix Rød: endothelceller Grøn: pericytter Darland 2001, Angiogenesis 4, 11

14 Tumormodeller fra reagensglasset til musen Kompleksitet Prediktiv værdi(?) 2D in vitro modeller 3D in vitro modeller Tumormodeller i ikke-pattedyr Tumormodeller i mus Melanom model i genetisk modificeret zebrafisk fordel: nemt at lave genetiske forandringer fordel: sparer tid og plads i forhold til arbejde med mus ulempe: forskelle i gener og cellesignalering ift. mennesker ulempe: organforskelle ift. mennesker: lunge, bryst Patton 2005, Curr Biol 15, 249

15 Tumormodeller fra reagensglasset til musen Kompleksitet Prediktiv værdi(?) 2D in vitro modeller 3D in vitro modeller Tumormodeller i ikke-pattedyr Tumormodeller i mus CAM assays (chorioallantoisk membran) Immundeficient miljø Xenogen tumormodel fordel: nem detektion af humane tumorceller ulempe: molekylær species barriere Enkelte trin i mestastasering for eks. intravasering Kim 1998, Cell 94, 353

16 Tumormodeller i mus 5 forskellige typer i to grupper Kompleksitet Prediktiv værdi(?) 2D in vitro modeller 3D in vitro modeller Tumormodeller i ikke-pattedyr Tumormodeller i mus transplanterede modeller spontane modeller syngene transplanterede modeller xenotransplanterede modeller virusinducerede modeller kemisk inducerede modeller genetisk inducerede modeller mus til mus menneske til mus

17 Tumormodeller i mus transplanterede modeller spontane modeller syngene transplanterede modeller Tumoren opstået én gang. Dyrkes herefter uendeligt. mus til mus Spontan el. kemisk induceret tumor

18 Tumormodeller i mus transplanterede modeller spontane modeller syngene transplanterede modeller mus til mus B16 melanom er en klassisk cancercellelinje oprindeligt fra et spontant opstået melanom på en C57BL/6 mus. Her injiceret subcutant på en genetisk identisk C57BL/6 mus synlige metastaser. Gorrin-Rivas 2000, Clin Cancer Res 6, 1647 Palumbo 2000, Blood 96, 3302

19 Tumormodeller i mus transplanterede modeller spontane modeller syngene transplanterede modeller mus til mus Definition på syngen musestamme: 20 generationers bror-søster parring, ~4 år Historien om syngene transplanterede modeller Årstal Model Cancertype. ~1915 Første syngene musestammer L1210, P388 leukæmi 1951 LLC - Lewis lung carcinoma lungecarcinom 1954 B16 melanom ~1970 Syngene stammer standardiseres

20 Tumormodeller i mus transplanterede modeller spontane modeller xenotransplanterede modeller Tumoren opstået én gang. Dyrkes herefter uendeligt. menneske til mus

21 Tumormodeller i mus transplanterede modeller spontane modeller xenotransplanterede modeller menneske til mus Normal mus Eksempel: HeLa celler fra human cervix carcinom (Henrietta Lacks, 1951) Afhængig af immundeficiente værtsmus som for eks. nøgne mus Nøgen mus (nude) ingen T celler

22 Tumormodeller i mus transplanterede modeller spontane modeller xenotransplanterede modeller Historien om xenotransplanterede modeller er = historien om den immundefekte mus Årstal Immunsupprimeret model Immundeficiens. <1960 Tranpl.-> øjets forkammer, kindpose immunpriviligeret organ <1960 Bestråling/kemisk induceret typisk anti-proliferativt 1961 Athymisk mus (thymektomi) T 1969 Nøgne (nude) mus T 1983 SCID mus T,B (lille rest) 1992 RAG-2 deficiente mus T,B (absolut) ( ) Miller 1961, Lancet 2, 748 Rygaard 1969, APMIS 77, 758 Bosma 1983, Nature 301, 527 Shinkai 1992, Cell 68, 855

23 Tumormodeller i mus transplanterede modeller spontane modeller Samme type tumor opstår igen og igen. virusinducerede modeller Naturlige vira

24 Tumormodeller i mus transplanterede modeller spontane modeller Meget få modeller: PyV Mouse polyomavirus MLV mouse leukemia virus virusinducerede modeller MMTV mouse mammary tumor virus ~1930 Eksempel: MMTV en retrovirus Integration i cellens genom (som regel et uinteressant sted) Oncogen: Wnt1 / FGF3 Hormon receptor

25 Tumormodeller i mus transplanterede modeller spontane modeller Samme spektrum af tumorer opstår igen og igen. kemisk inducerede modeller UV

26 Tumormodeller i mus transplanterede modeller spontane modeller kemisk inducerede modeller DMBA/PMA to-stadie hudcarcinogenese Initiator: DMBA DNA skader Promoter: PMA vækststimulus DMBA (PAH): fra tjære ~1930 To-stadie model: 1941 PMA: fra croton planten 1965 A.S. Perkins 2003

27 Tumormodeller i mus transplanterede modeller spontane modeller Samme type tumor opstår igen og igen. genetisk inducerede modeller oncogen kromosom tumor suppressor kromosom

28 Tumormodeller i mus transplanterede modeller spontane modeller genetisk inducerede modeller Eksempel: MMTV-neu brystcancermodellen Store mængder af neu oncogenet (ErbB2) produceres specifikt i brystkirtelepithelet Første genetisk inducerede cancermodel: 1984 Sacco 2000, Cancer Res 60, 2660

29 Tumormodeller i mus transplanterede modeller spontane modeller genetisk inducerede modeller Eksempel: p53-deficiens musen p53(+/-) heterozygote mus udvikler spontant leukæmier og lymphomer Mangler tumorsuppressoren p53 i alle kroppens celler, p53(+/-) menneske (Li-Fraumeni) osteosarcom, brystcancer, adrenocortical tumor, leukæmi, hjernesvulster p53(+/-) mus: leukæmi, lymphom, sarcom Svarer til Li-Fraumeni syndromet hos mennesker Donehower 1992, Nature 356, 215

30 Forskellige tumormodeller til forskellige cancerstadier musemodeller transplanterede spontane In vitro modeller (xeno-/syngene) virus kemisk genetisk Initiering hyperplasi microinvasion angiogenese vækst invasion metastasering

31 Transplanterede modeller Spontane modeller xeno: human til mus syngen: mus til mus Immunforsvar Immundeficient Immunkompetent Immunkompetent % diffus nekrose diffus nekrose diffus nekrose Behandling afprøves på - humane cancerceller - muse cancerceller - muse cancerceller falsk pos./neg.? falsk pos./neg.? Cancercellerne vokser i - et artsfremmed miljø - samme artsmiljø - samme artsmiljø molekylær mismatch molekylær match molekylær match Molekylær lighed - human c. dårlig dårlig god cancercellerne laver fx selv makrofagproteiner Canceren gennemløber kun sene stadier kun sene stadier også tidlige stadier Reproducerbarhed lab.-lab. lav lav høj Variabilitet (samme lab.) lav lav høj Antallet af tumormodeller er - stort - noget mindre - lille men voksende Tidsforbrug lille lille stort

32 Transplanterede modeller Spontane modeller ektopisk orthotopisk Cancercellerne er i fremmed type væv i eget type væv opstået i eget væv cellulær mismatch cellulær match cellulær match matrix mismatch matrix match matrix match Eksempel Lewis lungecarcinom under huden MCF-7 brystcancer til brystkirtlen Kemisk induceret hudcancer Hyppigt anvendte sites under huden (s.c.) brystkirtel brysttkirtel i huden (i.d.) i huden (i.d.) hud nyrekapsel colon (caecum) tyndtarm bughulen (i.p.) prostata prostata hjernen pancreas blodet

33 Cancer-relaterede forskelle på mand og mus Den livslange akkumulerede kræftrisiko er ~30% hos mus og ~30% hos mennesker, men mennesket er 3000 gange større og bliver 30 gange ældre end mus. =>Hvis menneskets celler var ligeså udsatte for kræft ville vi ikke overleve tiden ved Mors bryst!! Mennesket har evolutionært udviklet en række beskyttelsesmekanismer mod kræft. 7-fold nedsat metabolisme => stærkt reduceret mængde endogene oxidanter Inaktivering af telomerase i næsten alle celler => begrænset replikativt potentiale Korte telomerer ~10 kb (mus kb) => begrænset replikativt potentiale Ændret metabolisme af carcinogener i leveren Ændret intracellulær signalering Rangarajan 2003, Nat Rev Cancer 3, 952

34 Samme mutation giver ikke samme cancer i mand og mus Rangarajan 2003, Nat Rev Cancer 3, 952

35 Cancer-relaterede forskelle på mand og mus Tumorceller hos mennesker har næsten altid omfattende kromosomale forandringer, i mus er der ofte få/ingen synlige kromosomale forandringer. Sammenhæng med telomerasefunktion: Tumorer hos mus med inaktiveret telomerase og afkortede telomerer udviser store kromosomale forandringer (som hos mennesket). Telomer intakt Telomer dysfunktion Artandi 2000, Nature 406, 641 Rangarajan 2003, Nat Rev Cancer 3, 952

36 Spontane cancere i mus svarer til cancer hos børn Cancer hos voksne mennesker er typisk epitheliale (carcinomer), spontane tumorer hos mus er typisk mesenchymale (sarcomer, lymfomer). Menneske Mus DePinho 2000, Nature 408, 248

37 Metastasering hvorfor er der så få gode modeller? Metastasering er skyld i 90% af alle cancerdødsfald Extravasering Intravasering Lokal lymfeknude kolonisering Overlevelse i blodcirkulation Vækst i nyt miljø

38 To basale typer metastasemodeller Experimentel metastasering vækst af tumorceller injiceret i blodbanen Spontan metastasering spredning fra en etableret primær tumor (transplanteret eller spontan primær tumor)

39 Experimentel metastasering Disse modeller har meget lidt med metastasering at gøre I bedste fald er de en model for de sene stadier efter intravasering til blodbanen Stort set alle cancerceller injiceret i blodbanen er i stand til at danne ekperimentelle metastaser =>ubegrænset antal modeller Intravenøst injicerede cancerceller koloniserer første kapillærbarriere, typisk lunger eller lever (portalvene injektion). Venøs injektion Nogle cancerceller injiceret i arterielt blod (hjertets venstre ventrikel) koloniserer preferentielt bestemte væv. Eksempel: nogle brystcancerceller søger til knoglevæv. Arteriel injektion Luzzi 1998, Am J Pathol 153, 865 Koop 1995, Cancer Res 55, 2520 Koop 1996, PNAS 93, Winding 2002, Clin Cancer Res 8, 1932

40 Spontan metastasering Spontane modeller ser på hele processen på en gang man kan ikke afgøre på hvilket trin ens behandling har en effekt!! De fleste primære tumorer metastaserer slet ikke eller for lidt/ for sent til at bruges som metastasemodeller. Resten metastaserer med stor variation fordi metastasering er en stokastisk proces: - Metastasering: ikke-synkron start + eksponentiel vækst => meget stor variation - Genetiske modeller: ikke-synkron primær tumor vækst start + eksponentiel vækst => stor variation i primær tumorbyrde => kolossal variation i metastasebyrde

41 Spontan metastasering Eksempler Transplanterede modeller: B16 melanom og Lewis lungecarcinom + flere andre Kemiske og virus-inducerede modeller (% med metastaser): DEN+NMOR behandling af rotter => levercancer (10-100% i lunger) a Genetiske modeller (% med metastaser): MMTV-PymT brystcancer (95% i lunger) 1 MMTV-neu brystcancer (70 % i lunger) 2 MMTV-neu + MMTV-VEGF brystcancer (95 % i lunger) 3 MMTV-ras brystcancer (30% i lunger) 4 C3(1)-SV40-T brystcancer (10-60% i lunger) 5 TRAMP (probasin-sv40-t) prostatacancer (20-30% i lymfeknuder) 6 ASV (antithrombiniii-sv40-t) levercarcinom (10-40% i lunger) 7 MT1-HGF melanom (5% i lever) 8 a) Futakuchi 1999, Jpn J Cancer Res 90, ) Guy 1992, Mol Cell Biol 12, 954 2) Guy 1992, PNAS 89, ) Oshima 2004, Cancer Res 64, 169 4) Sinn 1987, Cell 49, 465 5) Maroulakou 1997, Mol Carcinog 20, 168 6) Greenberg 1995, PNAS 92, ) Dubois 1991, J Hepatol 13, 227 8) Otsuka 1998, Cancer Res 58, 5157

42 MMTV-PymT (spontan) genetisk brystcancermodel med metastaser til lunge og lymfeknuder Lunge µm lymfeknude 10 brystkirtler Metastasemodeller udvikles typisk på slump. Man laver en tumormodel og opdager at nogle af dem metastaserer. Guy 1992, Mol Cell Biol 12, 954 Almholt 2005, Int. J. Cancer 113, 525

43 MMTV-PymT (spontan) genetisk brystcancermodel med metastaser til lunge og lymfeknuder Hormon receptor Oncogen: PymT MMTV promoter PymT Yes Fyn Src Pl3K Shc PP2A PLC-γ gene transcription anti-apoptosis Guy 1992, Mol Cell Biol 12, 954

44 Eksempel fra mit eget arbejde: Extracellulær proteolyse og cancer Lungemetastase Protease (upa) Hvilken indflydelse har det hvis man genetisk fjerner en bestemt protease (upa)?

45 Extracellulær proteolyse - upa/plasmin systemet Macrophage PAI-1 tpa upar upa Plasmin Substrates: Fibrin, fibronectin, other ECM components Plasmin PAI-1 α2-ap Inactive enzymes Signalling molecules Fibrin Fibroblasts Endothelium

46 PA systemet - genetisk analyse af dets betydning for metastasering ved hjælp af knockout mus?? upar? PAI-1 tpa upa? α 2 -AP plasmin Fibrin (+andre substrater) Metastasering

47 PymT model: upa deficiency n=27 n=28 Primary tumor volume Wild type: 4.0 cm 3 upa-deficient: 3.0 cm 3 t-test: p=0.23 Final tumor volume (cm 3 ) Primary tumor volume Metastasis volume Wild type: 1.58 mm 3 upa-deficient: 0.21 mm 3 t-test: p=0.023 Lung metastasis volume (mm 3 ) Metastasis volume Percentile of mice Almholt 2005, Int. J. Cancer 113, 525 Metastasis / tumor ratio Wild type: 39*10-5 upa-deficient: 6.8*10-5 t-test: p=0.020 Metastasis vol./ tumor vol. ( ) Metastasis / tumor ratio Percentile of mice

48 PymT model: upar deficiency n=33 n=31 Primary tumor volume Wild type: 3.2 cm 3 upar-deficient: 3.0 cm 3 t-test: p=0.57 Final tumor volume (cm 3 ) Primary tumor volume Metastasis volume Wild type: 1.48 mm 3 upar-deficient: 1.89 mm 3 t-test: p=0.72 Lung metastasis volume (mm 3 ) Metastasis volume Percentile of mice Almholt et al., unpublished Metastasis / tumor ratio Wild type: 46*10-5 upar-deficient: 64*10-5 t-test: p=0.61 Metastasis vol./ tumor vol. ( ) Metastasis / tumor ratio Percentile of mice

49 PymT model: Plg deficiency n=27 n=24 Primary tumor volume Wild type: 3.37 cm 3 Plg-deficient: 3.45 cm 3 t-test: p=0.92 Final tumor volume (cm 3 ) Primary tumor volume Metastasis volume Wild type: 0.92 mm 3 Plg-deficient: 0.64 mm 3 t-test: p=0.61 Lung metastasis volume (mm 3 ) Metastasis volume Percentile of mice Almholt et al., unpublished Metastasis / tumor ratio Wild type: 27*10-5 Plg-deficient: 18*10-5 t-test: p=0.52 Metastasis vol./ tumor vol. ( ) Metastasis / tumor ratio Percentile of mice

50 PA systemet - genetisk analyse af dets betydning for metastasering ved hjælp af knockout mus upar? PAI-1 tpa upa α 2 -AP plasmin Fibrin (+andre substrater) Metastasering

51 Lungemetastase volumen vildtype: 1.58 mm 3 upa-deficient: 0.21 mm 3 Lung metastasis volume (mm 3 ) upa p=0.023 vildtype: mm 3 PAI-1-deficient: mm 3 Lung metastasis volume (mm 3 ) PAI-1 p=0.23 Mice ranked by metastasis burden Almholt 2003, Oncogene 22, 4389 Almholt 2005, Int. J. Cancer 113, 525

52 Tumor vaskulær densitet (mm blodkar / mm 3 tumor) Vascular length density (mm -2 ) wild type PAI-1-deficent anti-cd34 farvning middel (±SD) vildtype: 77 ±23 mm -2 PAI-1-deficient: 68 ±19 mm -2 t-test: p=0.13 Almholt 2003, Oncogene 22, 4389

53 PA systemet - genetisk analyse af dets betydning for metastasering ved hjælp af knockout mus ( ) upar PAI-1 tpa upa α 2 -AP plasmin Fibrin (+andre substrater) Metastasering

54 Udvikling af et mus-specifikt upa-neutraliserende antistof Rekombinant upa knock-out monoklonalt antistof: mus upa mus mus anti-mus upa

55 Antistoffet afprøves i MMTV-PymT metastasemodellen vildtype: 1.58 mm 3 upa-deficient: 0.21 mm 3 Lung metastasis volume (mm 3 ) upa p=0.023 kontrol antistof: 0.44 mm 3 anti-upa antistof: 0.12 mm 3 Lung metastasis volume (mm 3 ) 100 anti-tnp-treated (n=27) 10 upa antistof mu1-treated (n=30) Percentile of mice p=0.15 Annika Jögi et al., unpublished

56 PA systemet - genetisk analyse af dets betydning for metastasering ved hjælp af knockout mus og proteasehæmmere upar PAI-1 tpa upa α 2 -AP? plasmin MMPs Fibrin (+andre substrater) Metastasering

57 Matrix metalloproteaser: Matrixnedbrydning med mere Opløselige eller membranbundne: Type 1 collagen fibre Basalmembraner Vækstfaktor-aktivering BP IGF IGF

58 23 forskellige humane matrix metalloproteaser (MMP er) MMP-7, 26 MMP-1, 3, 8, 10, 12, 13, 19, 20, 27 MMP-2, 9 MMP-11, 28 MMP-21 MMP-14, 15, 16, 24 MMP-17, 25 MMP-23A/B Egeblad & Werb 2002, Nat Rev Cancer 2, 161

59 Galardin (GM6001, Ilomastat): - en bredspektret og potent MMP hæmmer MMP no. common name Galardin Ki MMP-1 MMP-2 MMP-3 MMP-8 MMP-9 MMP-14 collagenase-1 gelatinase A stromelysin-1 collagenase-2 gelatinase B MT1-MMP nm nm nm 0.18 nm nm 13.4 nm Grobelny 1992, Biochemistry 31, 7152 Levy 1998, J. Med. Chem. 41, 199 Yamamoto 1998, J. Med. Chem. 41, 1209

60 Primærtumor-vækst i galardin-behandlede mus Tumor volume (cm 3 ) no treatment (n=27) placebo (n=26) galardin (n=26) pellet inserted age days Mouse age (days) Almholt 2008, Mol. Cancer Ther. 7, 2758

61 Øget collagen aflejring i galardin-behandlede MMTV-PymT mamma-tumorer Collagen farvning: PicroSirius Red + polariseret lys Placebo-behandlet Galardin-behandlet Normal mamma hos mus Almholt 2008, Mol. Cancer Ther. 7, 2758

62 PymT model: galardin treatment n=27 n=26 n=26 Almholt 2008, Mol. Cancer Ther. 7, 2758 Primary tumor volume Untreated: 3.4 cm 3 Placebo: 3.3 cm 3 Galardin: 1.7 cm 3 t-test: p= Metastasis volume Untreated: 1.39 mm 3 Placebo: 0.56 mm 3 Galardin: mm 3 Mann-Whitney: p< Metastasis / tumor ratio Untreated: 39*10-5 Placebo: 17*10-5 Galardin: 0.16*10-5 Mann-Whitney: p< Lung metastasis volume (mm 3 ) Final tumor volume (cm 3 ) Metastasis vol./ tumor vol. ( ) Percentile of mice Primary tumor volume Metastasis volume Metastasis / tumor ratio Percentile of mice

63 PA systemet - genetisk analyse af dets betydning for metastasering ved hjælp af knockout mus og proteasehæmmere upar PAI-1 tpa upa α 2 -AP plasmin MMPs Fibrin (+andre substrater) Metastasering

64 Eksempel på metastase-analyse af en enkelt MMP In situ RNA hybridization Str-1 (MMP3) H&E farvning 100 µm antisense A n=32 n=31 Metastase volumen Wild type: 0.04 mm 3 MMP3-def.: 0.13 mm 3 Mann-Whitney: p=0.39 Lung metastasis volume (mm 3 ) Percentile of mice Anna Juncker-Jensen et al, 2009, Mol. Carcinog. 48, 618