Klinisk relevante markører rer og laboratoriemetoder Lars Henrik Jensen, overlæge ph.d. Onkologisk afdeling Sygehus Lillebælt
Markører og metoder - eksempler fra 3 store sygdomme Mamma HER2 Vævsanalyser Lunge EGFR/erlotinib, ALK/crizotinib PCR CRC MSI, RAS Metylering
Molekylært målrettet m medicinsk behandling Specifik hæmning af molekyler, der stimulererer carcinogese og cancercellevækst Ideelt Molekylært angrebspunkt target Target kan måles Måling af target korrelerer med effekt Reelt Antistoffer -mab er Kinaseinhibitorer -ib er
Markører rer i klinisk onkologi Biologisk karakteristikum ved en individuel cancer. Klinisk relevant information om Ætiologi Diagnose Prognose hvordan går det alt andet lige Prædiktion hvor godt vil en behandling virke
Trastuzumab (mammacancer) Cetuximab og panitumumab (colorektalcancer) -mab Mutation Ligand Protein Bevacizumab (colorektalcancer lungecancer) Mutation Erlotinib (c. pulm.) Receptor Gefitinib (c. pulm.) KRAS BRAF Cytoplasm Proteinekspression IHC -nib MEK Regulation mirna ERK Genekspression RNA Genamplifikation FiSH DNA Activation of transcription factors Nucleus Polymorfi
Mammacancer
Onkogenet HER2 Overekspression hos 10-20% Prognostisk faktor? Prædiktiv faktor?
Immunhistokemi IHC
FISH (Fluorescence In Situ Hybridization)
Herceptin og Pertuzumab
CLEOPATRA study Pertuzumab, trastuzumab, and docetaxel for HER2-positive metastatic breast cancer: overall survival results from a randomised, double-blind, placebocontrolled, phase 3 study Lancet Oncol 14, May 2013, 461 471
KRIS Perjeta (Pertuzumab) Perjeta (Pertuzumab) anbefales sammen med trastuzumab i kombination med docetaxel som 1. linjebehandling af patienter med HER-2 positiv metastaserende eller lokalt avanceret brystkræft. Såfremt Perjeta og trastuzumab anvendes i kombination med andre lægemidler, skal effekten monitoreres.
Lungecancer
Nature Reviews Cancer 10, 760-774
Aktiverende mutationer C.pulm, gefitinib, erlotinib CML, imatinib GIST, imatinib Nature Reviews Cancer 10, 760-774
Praktisk mutationsanalyse Mikrodissektion eller lasermikrodissektion DNA-oprensning 2 dage Real-time PCR
Kemoterapi eller gefitinib? IPASS
Crizotinib N=133 Crizotinib was well tolerated in patients with pretreated ALK-rearranged NSCLC 51% ORR (including 1 CR and 67 PRs) PKI 450 Da Antistof 150.000 Da J Clin Oncol 29: 2011; (suppl; abstr 7514)
Crizotinib og NSCLC: respons
ALK rearrangement FISH Nature 448, 561-566
Colorektalcancer
To hovedtyper Kromosominstabilitet Berører hele eller dele af kromosomer 85 % Mikrosatellitinstabilitet MSI DNA sekvenser diploid DNA Få kromosomale ændringer 15 % proksimal colon, ældre patienter, kvinder, HNPCC/Lynch Syndrome
Mikrosatellitinstabilitet MSI Klinisk relevant markør Bedre prognose Nedsat effekt af 5FU Relateret til arvelig cancer (HNPCC eller Lynch Syndrome) JNCI. 2011 103:1 J Clin Oncol. 2005 Jan 20;23(3):609-18. N Engl J Med. 2005 May 5;352(18):1851-60. N Engl J Med. 2003 Jul 17;349(3):247-57
Hvad er MSI? Hvad er mismatch repair?
Mismatch Repair C A C A C A C A C A C A G T G T G T G T G T G T
Mismatch Repair Base:Base Mispair C A C A C A C A C A C A G T G T G T G T G T G T C-A Deletion Loop C G C A C A C A C A G T G T G T G T G T
Mismatch Repair Base:Base Mispair C A C A C A C A C A C A G T G T G T G T G T G T MLH1 PMS2 MSH2 MSH6 C A C A C A C A C A C A G T G T G T G T G T G T Mismatch Repair C-A C G C A C A C A C A G T G T G T G T G T Deletion Loop DNA Damage Signaling A P O P T O S I S
Mismatch Repair Deficiency Wildtype Mutation Base:Base Mispair Methylation Mutation C A C A C A C A C A C A G T G T G T G T G T G T C-A C G C A C A C A C A G T G T G T G T G T MLH1 PMS2 MSH2 MSH6 Deletion Loop Mismatch Repair DNA Damage Signaling Hypermutability and DNA Damage Tolerance CANCER
Mikrosatellitinstabilitet MSI Normal mikrosatellit Tumour MSI: Længdemutationer i tumor DNA sammenlignet med normal DNA
PCR Anticancer Res 2006;26,2069
MSI på protein niveau Protein detection of the four important mismatch repair genes MLH1, MSH2, MSH6 or PMS2
Metylering
Metylering og genekspression
MSI og metylering 5 -AACGAATTAATAGGAAGAGCGGATAGCG -3 Cytosine 5 -AAUGAATTAATAGGAAGAGUCCTATCUG-3 Uracil NH 4 + Sodium bisulfite treatment CH 3 CH 3 Methylated cytosine 5 -AACGAATTAATAGGAAGAGCGGATAGCG -3 Methylated cytosine 5 -AACGAATTAATAGGAAGAGCGGATAGCG -3
Lynch Syndrome
MSI og Lynch Syndrome MSI skyldes sporadisk metylering eller arvelige mutationer Hvis der ikke påvises metylering, så skal patienten henvises til genetisk rådgivning Molekylær screening for arvelig tarmkræft
EGFR aktivering
Selvaktivering
KRAS og NRAS kan have aktiverende mutationer
PRIME-studiet
Forbedret patientselektion
RAS negativ prædiktor
ECC 2013 LATE BREAKING ABSTRACT: Analysis of KRAS/NRAS and BRAF mutations in FIRE-3: A randomized phase III study of FOLFIRI plus cetuximab or bevacizumab as first-line treatment for wild-type (WT) KRAS (exon 2) metastatic colorectal cancer (mcrc) patients
FOLFIRI + cetuximab FOLFIRI + bevacizumab ORR Fisher s one-sided p WT ITT (n= 592) 62.0% 58.0% 0.183 RAS WT (n= 301) 76.0% 65.2% 0.026 RAS MT (n=55) 42.9% 66.7% 0.066 BRAF MT (n=40) 63.2% 42.9% 0.167 PFS Logrank p WT ITT (n= 592) 10.0 mo 10.3 mo 0.547 RAS WT (n= 334) 10.5 mo 10.4 mo 0.627 RAS MT (n=62) 6.1 mo 12.2 mo 0.006 BRAF MT (n=43) 6.3 mo 5.7 mo 0.629 OS Logrank p WT ITT (n= 592) 28.7 mo 25.0 mo 0.017 RAS WT (n= 334) 33.1 mo 25.9 mo 0.010 RAS MT (n=62) 19.1 mo 20.6 mo 0.622 BRAF MT (n=43) 12.9 mo 11.0 mo 0.448
ECC 2013 LATE BREAKING ABSTRACT: ASPECCT: a randomized, multicenter, open-label, phase 3 study of panitumumab (pmab) vs cetuximab (cmab) for previously treated wild-type (WT) KRAS metastatic colorectal cancer (mcrc)
OS- median, mos (95% CI) HR (95% CI) P value PFS- median, mos (95% CI) HR (95% CI) ORR- % (95% CI) Pmab N=499 10.4 (9.4-11.6) 4.1 (3.2-4.8) 22 (18.4-26.0) Cmab N=500 10.0 (9.3-11.0) 0.97 (0.84-1.11) 0.0007 4.4 (3.2-4.8) 1.00 (0.88-1.14) 19.8 (16.3-23.6)