BBL Group A Selective Strep Agar with 5% Sheep Blood (ssa) og BBL Trypticase Soy Agar with 5% Sheep Blood (TSA II) Bi-Plate

Transkript

1 BBL Group A Selective Strep Aar with 5% Sheep Blood (ssa) o BBL Trypticase Soy Aar with 5% Sheep Blood (TSA II) Bi-Plate Rev. 11 April 2015 KVALITETSKONTROLPROCEDURER I II INDLEDNING Group A Selective Strep Aar with 5% Sheep Blood (ssa) (Gruppe A selektivt steptokokaar med 5 % fåreblod) er et selektivt medium til bru ved isolerinen o den foreløbie identifikation af ruppe A streptokokker fra svælpodniner o andre præparater. Trypticase Soy Aar with 5% Sheep Blood (TSA II) (Trypticase sojaaar med 5 % fåreblod) brues til vækst af kræsne oranismer o til visualiserin af hæmolytiske reaktioner. TSA II mediumsektoren er mærket I o ssa mediumsektoren er mærket II i den to-pladede skål. FUNKTIONSTESTPROCEDURE A. Group A Selective Strep Aar with 5% Sheep Blood 1. Inokulér repræsentative prøver med de kulturer, der er fortyndet til at indeholde 10 3 til 10 4 CFU/0,01 ml. a. Tilsæt 0,01 ml af fortyndinen til hver plade o udstry for at isolere. Lav et stikmærke i det primære udstryninsområde, inden resten af pladen udstryes. b. Anbrin en Taxo A skive ved skærinen mellem det første o andet område af udstryninen på alle plader, der er inokuleret med S. pyoenes stammer. c. Inkubér pladerne ved 35 ± 2 ºC i en aerob atmosfære beriet med kuldioxid. d. Inkludér Trypticase Soy Aar with 5% Sheep Blood (TSA II) plader som nonselektive kontroller for alle oranismer. 2. Undersø pladerne efter 18 til 24 h for beta-hæmolyse i området med stikmærket o for vækstmænde, hæmnin, kolonistørrelse o hæmolytiske reaktioner. Aflæs o notér zonestørrelserne omkrin Taxo A skiven med S. pyoenes. 3. Forventede resultater Streptococcus pyoenes... Rimeli til krafti vækst (afhæni af stammen o fortyndinen) af (2 stammer) knappenålsstørrelse til meet små kolonier omivet af zoner med beta- *ATCC hæmolyse. En væksthæmninszone er klart tydeli omkrin Taxo A ATCC skiven. Streptococcus mitis... Delvis hæmnin ATCC 6249 *Staphylococcus aureus... Fuldstændi hæmnin ATCC Neisseria subflava... Fuldstændi hæmnin ATCC Pseudomonas aeruinosa... Fuldstændi hæmnin ATCC *Anbefalet oranismestamme til bruerkvalitetskontrol. B. Trypticase Soy Aar with 5% Sheep Blood 1. Inokulér repræsentative prøver med fortyndiner af de kulturer, der er anført herunder. a. Tilfør med en volumetrisk pipettor eller tilsvarende metode 0,01 ml af en fortyndin, hvilket iver 30 til 300 CFU til hver plade, o inokulér ved hjælp af sprednin med en steril lasspreder. b. Inkubér Staphylococcus stammen ved 35 ± 2 C i en aerob atmosfære o Streptococcus stammerne ved 35 ± 2 C i en aerob atmosfære beriet med kuldioxid. 2. Undersø pladerne efter 18 til 24 h for vækst, kolonistørrelse o hæmolytiske reaktioner. 1

2 3. Forventede resultater CLSI-kontroloranismer (ATCC stammer) *Streptococcus pyoenes... Vækst, beta-hæmolyse (19615) *Streptococcus pneumoniae... Vækst, alfa-hæmolyse (6305) *Staphylococcus aureus... Vækst (25923) *Escherichia coli... Vækst (25922) *Anbefalet oranismestamme til bruerkvalitetskontrol. III YDERLIGERE KVALITETSKONTROL 1. Undersø pladerne som beskrevet under Produktforrinelse. 2. Undersø visuelt repræsentative plader for at sikre, at eventuelle eksisterende fysiske defekter ikke vil påvirke anvendelsen. 3. Bestem ph potentiometrisk ved stuetemperatur for at overholde specifikationen på 7,4 ± 0,2 for bee medier. 4. Bemærk pladernes fasthed under inokulerinsproceduren. 5. Inkubér ikke-inokulerede repræsentative plader ved 35 ± 2 C i 72 h, o undersø dem for mikrobiel kontaminerin. PRODUKTINFORMATION IV TILSIGTET BRUG Group A Selective Strep Aar with 5% Sheep Blood (ssa) anbefales som et primært, selektivt plademedium til primær isolerin af ruppe A streptokokker (S. pyoenes) fra svælpodniner o andre præparater, hvor der forventes tilstedeværelse af S. pyoenes. Gruppe B streptokokker vil oså vokse på dette medium; de fleste andre streptokokker, neisseriae, staphylokokker o ramneative bakterier er hæmmet. Mediet er desinet til bru sammen med Taxo A (bacitracin, 0,04 enheder) skiver til foreløbi identifikation af S. pyoenes. Trypticase Soy Aar with 5% Sheep Blood (TSA II) brues til dyrknin af kræsne oranismer o til visualiserin af hæmolytiske reaktioner, som frembrines af mane bakteriearter. V RESUMÉ OG FORKLARING Infektion med Lancefield ruppe A streptokokker (S. pyoenes) kan ive alvorlie sequelae som fx itfeber o akut lomerulonephritis. Derfor er tidli påvisnin o identifikation vitit. Den ernærinsmæssie sammensætnin af Trypticase sojaaar har jort det til et populært medium, både usuppleret o som en base for medier indeholdende blod. Trypticase Soy Aar with 5% Sheep Blood (TSA II) brues i stor udstræknin til isolerin o dyrknin af kræsne mikrobearter o til bestemmelse af hæmolytiske reaktioner, som er vitie differentierinskarakteristika for bakterier, især Streptococcus arter. På rund af overvæksten af normal flora, som er til stede i svældyrkninsprøver på rutinemæssie blodaarplader er der tilsat selektive inredienser til fåreblodaar for at forbedre påvisninen af ruppe A streptokokker. Evaluerin af forskellie antimikrobielle stoffer i vores laboratorier resulterede i en kombination med forbedret selektivitet frem for andre testede, selektive medier. Dette medium (ssa) muliør foreløbi identifikation af ruppe A streptokokker, baseret på bacitracin-følsomhed o beta-hæmolyse, inden for 24 h efter inokulerin med præparatet, når mediet inkuberes i en CO 2 -beriet atmosfære. 1 Den opdelte plade, der indeholder den non-selektive blodaar (TSA II) i sektoren mærket I o den selektive blodaar (ssa) i sektoren mærket II, tillader isolerin af ruppe A streptokokker o evaluerin af den samlede mikrobiota for præparatet med én skål. VI PROCEDURENS PRINCIPPER Kombinationen af kasein o sojapeptoner i Trypticase sojaaarbasen ør mediet særdeles nærende ved at ive oranisk nitroen. Natriumkloriden opretholder osmotisk lievæt. 2

3 Defibrineret fåreblod iver streptokokkernes korrekte hæmolytiske reaktioner. Desuden hæmmes vækst af Haemophilus hemolyticus, et non-patoen, hvis hæmolytiske kolonier ikke kan skelnes fra kolonier af beta-hæmolytiske streptokokker. Trypticase Soy Aar with 5% Sheep Blood (TSA II) iver udmærket vækst o beta-hæmolyse ved Streptococcus pyoenes (Lancefield ruppe A) o iver oså udmærket vækst o passende hæmolytiske reaktioner med andre kræsne oranismer. Det er enet til bru med lavkoncentrations (0,04 enheder) bacitracin skiver (Taxo A) til foreløbi identifikation af ruppe A streptokokker (S. pyoenes). Group A Selective Strep Aar with 5% Sheep Blood (ssa) indbefatter en enestående kombination af selektive inredienser i Trypticase Soy Sheep Blood Aar (TSA II) til at undertrykke normal svælflora med henblik på forbedret isolerin af S. pyoenes. Defibrineret fåreblod leverer berielse til væksten af sådanne kræsne oranismer o tillader påvisnin af den typiske beta-hæmolyse af S. pyoenes. Beta-hæmolytiske streptokokker, som víser en hæmninszone omkrin en bacitracin-skive (0,04 enhed) kan ive en foreløbi identifikation som ruppe A streptokokker. VII REAGENSER Group A Selective Strep Aar with 5% Sheep Blood (ssa) Omtrentli formel* pr. liter renset vand Pankreatisk fordøjelse af kasein... 14,5 Papain-fordøjelse af sojabønnemåltid... 5,0 Natriumklorid... 5,0 Aar... 14,0 Vækstfaktorer... 1,5 Selektive stoffer... 40,2 m Fåreblod, defibrineret... 5% *Justeret o/eller suppleret som påkrævet for at leve op til funktionskriterier. Trypticase Soy Aar with 5% Sheep Blood (TSA II) Omtrentli formel* pr. liter renset vand Pankreatisk fordøjelse af kasein... 14,5 Papain-fordøjelse af sojabønnemåltid... 5,0 Natriumklorid... 5,0 Aar... 14,0 Vækstfaktorer... 1,5 Defibrineret fåreblod... 5% *Justeret o/eller suppleret som påkrævet for at leve op til funktionskriterier. Advarsler o forholdsreler Til in vitro dianostik. Hvis der ses for krafti futihed, inverteres bunden over et forskudt lå, hvilket iver mulihed for lufttørrin for at forhindre dannelse af en forselin mellem toppen o bunden af pladen under inkubation. Patoene mikrooranismer, inklusive hepatitisvira o humant immundefekt virus, kan forekomme i kliniske prøver. Standardforholdsreler 2-5 o institutionelle retninslinier skal overholdes ved håndterin af alle emner, der er kontamineret med blod o andre kropsvæsker. Efter bru skal præparerede plader, prøvebeholdere o andre kontaminerede materialer steriliseres ved autoklaverin, inden de kasseres. Opbevarinsinstruktioner Opbevares efter modtaelse i mørke ved 2 8 C. Undå nedfrysnin eller overopvarmnin. Må ikke åbnes, før de skal brues. Minimér eksponerin for lys. Klarjorte plader, der opbevares i deres oriinale emballae ved 2 8 C indtil lie før bru, kan inokuleres indtil udløbsdatoen o inkuberes i de anbefalede inkubationstider. Lad mediet opnå stuetemperatur inden inokulerin. Produktforrinelse Pladerne må ikke anvendes, hvis de viser ten på mikrobiel kontaminerin, misfarvnin, udtørrin eller andre ten på forrinelse. VIII PRØVEINDSAMLING OG -HÅNDTERING Svælpræparater, der er enet til dyrknin, kan taes ved at pode pharynx- o tonsillærområdet i svælet med en podepind med polyester- eller polyurethan-spids, idet 3

4 det undås at berøre tune eller uvula. (Bemærk: Hvis podniner oså brues med direkte antienpåvisninstests, er bru af polyester-, rayon- eller polyurethanpodepinde på plasticskaft påkrævet; fx CultureSwab o CultureSwab EZ opsamlins- o transportsystemer.) Andre kilder end svælet bør dyrkes i henhold til anbefalede procedurer. Læs relevante tekster for at få detaljerede oplysniner. 6,7 IX PROCEDURE Materiale vedlat Group A Selective Strep Aar with 5% Sheep Blood (ssa) o Trypticase Soy Aar with 5% Sheep Blood (TSA II) Bi-Plate Nødvendie materialer, der ikke er vedlat Hjælpedyrkninsmedier, reaenser, kvalitetskontroloranismer o laboratorieudstyr som påkrævet. Testprocedure Aaroverfladen skal være lat o futi, men uden overdreven fut. Udstry prøven så hurtit som mulit efter modtaelse i laboratoriet. Udstryninspladen anvendes primært til at isolere rene kulturer fra prøver, der indeholder blandet flora. Alternativt, hvis materialet dyrkes direkte fra en podepind, kan podepinden rulles over et lille område på overfladen ved kanten. Derefter stryes ud fra dette inokulerede område. Uden at resterilisere løkken laves et knivmærke i aaren to eller tre ane i det område med kraftist inokulerin. Når denne plade brues med det samme præparat, inokuleres TSA II siden mærket I først. Dernæst inokuleres ssa siden mærket II, o der anbrines en Taxo A skive på den podede del af den side; dvs. hvor det podede område er skåret iennem af området med initial løkkeudstrynin. Inkubér de inokulerede plader ved 35 ± 2 ºC i en atmosfære beriet med kuldioxid. Hvis pladerne inkuberes uden kuldioxid, vil de beta-hæmolytiske zoner o kolonistørrelser være mindre, o færre kolonier er måske synlie. Undersø pladerne efter 18 til 24 h. Bruerkvalitetskontrol Se Kvalitetskontrolprocedurer. Krav til kvalitetskontrol skal udføres i overensstemmelse med ældende lokale o/eller nationale reulativer eller akkrediterinskrav samt laboratoriets standardkvalitetskontrolprocedurer. Det anbefales at læse de relevante CLSI-retninslinjer o CLIA-reulativer mht. passende kvalitetskontrolprocedurer. X RESULTATER Efter 18 til 24 h inkubation i en atmosfære beriet med kuldioxid vil ruppe A streptokokker (S. pyoenes) på ssa se ud som delvis ennemsitie eller uiennemsitie hvide til rå, små (1 til 2 mm) kolonier omivet af en zone med beta-hæmolyse. En aftanin i størrelse sammenlinet med den non-selektive kontrol, Trypticase Soy Aar with 5% Sheep Blood, et typisk. Knappenålsstørrelse eller meet små kolonier af alpha-, nonhæmolytiske eller andre beta-hæmolytiske streptokokker kan vokse i små antal, men de bør ikke interferere med isolerinen af ruppe A streptokokker eller tolknin af resultaterne. Neisseria arter, viridansstreptokokker, staphylokokker, ramneative stave o de fleste beta-hæmolytiske streptokokker ud over ruppe A o B hæmmes på ssa mediet. Bacitracinfølsomhed kan brues til at differentiere ruppe A streptokokker fra ruppe B. Rimeli til krafti vækst af beta-hæmolytiske kolonier, der udviser en hæmninszone omkrin Taxo A skiven, kan rapporteres foreløbit som S. pyoenes. En PYR (pyrolutamsyre) test kan oså udføres. Den er mere specifik o lie så følsom som bacitracin-testen til dette formål. 7 Gramfarvniner bør oså foretaes o undersøes. Der kan udføres en testprocedure af seroloisk rupperin, hvis der findes tilstrækkelie velisolerede beta-hæmolytiske kolonier. XI PROCEDURENS BEGRÆNSNINGER Eftersom der ikke findes et perfekt medium, kan man møde nole stammer af ruppe A streptokokker (S. pyoenes), som vil vokse dårlit på ssa mediet; præparaternes 4

5 beskaffenhed o oranismernes fysioloiske tilstand kan få indflydelse på isolerin af de ønskede arter, såvel som modificere virkninerne af mediets hæmmende eenskaber. Det er derfor nyttit at sammenline væksten på bee sider af den todelte plade for at få yderliere oplysniner o for at sikre optimal isolerin af potentielle patoener. Dette præparerede medium er berenet til primær isolerin. Der kan udføres nole dianostiske tests med den primære plade. Der anbefales imidlertid en ren kultur til biokemiske tests o seroloiske procedurer. Læs de relevante tekster for detaljerede oplysniner o anbefalede procedurer. 6-8 XII FUNKTIONSDATA I en klinisk evaluerin bestående af 460 svælpodniner var der i alt 117 positive for ruppe A streptokokker på Group A Selective Strep Aar with 5% Sheep Blood (ssa) sammenlinet med 100 på SXT Sheep Blood Aar o 84 på Trypticase Soy Aar with 5% Sheep Blood (TSA II). Af disse positive kulturer blev 103 identificeret baseret på beta-hæmolyse o bacitracinfølsomhed (0,04 enheder) inden for 24 h med ssa sammenlinet med 80 på SXT o kun 32 på den non-selektive TSA blodaarkontrol. 9 XIII BESTILLING Kat. nr. Beskrivelse BD BBL Group A Selective Strep Aar with 5% Sheep Blood (ssa) // BD BBL Trypticase Soy Aar with 5% Sheep Blood (TSA II), Pakke med 20, to-pladede skåle XIV LITTERATUR 1. Evans, G.L., and T.E. O'Neill Development of an improved selective medium for the isolation of roup A streptococci from throat cultures, abstr. C-136, p Abstr. 84th Annu. Meet. Am. Soc. Microbiol National Committee for Clinical Laboratory Standards Approved Guideline M29-A2. Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections, 2nd ed. NCCLS, Wayne, Pa. 3. Garner, J.S Hospital Infection Control Practices Advisory Committee, U.S. Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention. Guideline for isolation precautions in hospitals. Infect. Control Hospital Epidemiol. 17: U.S. Department of Health and Human Services Biosafety in microbioloical and biomedical laboratories, HHS Publication (CDC), 4th ed. U.S. Government Printin Office, Washinton, D.C. 5. Directive 2000/54/EC of the European Parliament and of the Council of 18 September 2000 on the protection of workers from risks related to exposure to bioloical aents at work (seventh individual directive within the meanin of Article 16(1) of Directive 89/391/EEC). Official Journal L262, 17/10/2000, p Forbes, B.A., D.F. Sahm, and A.S. Weissfeld Bailey & Scott's dianostic microbioloy, 11th ed. Mosby, Inc., St. Louis. 7. Ruoff, K.L., R.A. Whiley, and D. Beihton Streptococcus, p In P.R. Murray, E.J. Baron, M.A. Pfaller, F.C. Tenover, and R.H. Yolken (ed.), Manual of clinical microbioloy, 7th ed. American Society for Microbioloy, Washinton, D.C. 8. Koneman, E.W., S.D. Allen, W.M. Janda, P.C. Schreckenberer, and W.C. Winn, Jr Color atlas and textbook of dianostic microbioloy, 5th ed. J.B. Lippincott Co., Philadelphia. 9. Carlson, J.R., W.G. Merz, B.E. Hansen, S. Ruth, and D.G. Moore Improved recovery of roup A betahemolytic streptococci with a new selective medium. J. Clin. Microbiol. 21: BD Dianostics Teknisk service o support: skal De kontakte den lokale BD repræsentant eller besø Becton, Dickinson and Company 7 Loveton Circle Sparks, MD USA Benex Limited Pottery Road, Dun Laohaire Co. Dublin, Ireland ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection. BD, BD Loo, and all other trademarks are property of Becton, Dickinson and Company BD 5