Directigen Meningitis Combo Test

Transkript

1 Directigen Meningitis Combo Test Til detektion af Haemophilus influenzae type b, Streptococcus pneumoniae, Escherichia coli K1, Streptococcus gruppe B og Neisseria meningitidis gruppe A, B, C, Y og W JAA 2008/02 Dansk TILSIGTET BRUG Directigen Meningitis Combo Test er en latex-agglutinationstest til direkte, kvalitativ, foreløbig detektion af antigener fra H. influenzae type b, S. pneumoniae, N. meningitidis gruppe A, B, C, Y og W135 samt Escherichia coli K1 i cerebrospinalvæske (CSF), serum og urin. Testen kan desuden bruges til direkte, kvalitativ detektion af antigener fra Streptococcus gruppe B i CSF og serum. Derudover kan test-kittet bekræfte identiteten og fastlægge serotypen af formodede kolonier af H. influenzae type b, S. pneumoniae, Streptococcus gruppe B og N. meningitidis gruppe A / Y, B eller C / W135. Synlig agglutination indtræffer, når en prøve indeholdende et af disse bakterielle antigener reagerer med de tilsvarende antistof-coatede latexpartikler. RESUMÉ OG FORKLARING Diagnose af bakteriæmi og meningitis kan være vanskelig, specielt hos mindre børn. I helt op til 55 % af tilfældene bliver børnene lægeundersøgt og sat i antibiotisk behandling, inden meningitis er konstateret 1. Detektion af mikrobielle antigener i CSF er en hurtig og nyttig metode i diagnostisk mikrobiologi. Denne test kan være langt den vigtigste i tilfælde af delvis behandlet meningitis, da gramfarvning og dyrkning kan være negative. Detektion af et specifikt antigen er et klinisk betydende fund og et værdifuldt hjælpemiddel ved valg af antimikrobiel behandling 2. Haemophilus influenzae type b, Neisseria meningitidis og Streptococcus pneumoniae er indberettet som de tre ætiologiske agenser i omkring 84 % af alle tilfælde af bakteriel meningitis 3. Streptococcus gruppe B og Escherichia coli K1 er vigtige patogene bakterier hos nyfødte 4-7. Stammer af streptokokker af gruppe B og E. coli K1 koloniserer ofte vagina og/eller rectum og kan være forbundet med maternel septicaemi og neonatal septicaemi, pneumoni og meningitis 8. Polysaccharid-antigenet i E. coli K1 er påvist at være strukturelt og immunologisk svarende til antigenet i Neisseria meningitidis gruppe B 9,10. Skønt Directigen latexreagenset til Neisseria meningitidis gruppe B således ikke kan skelne mellem de to antigener, kan det være nyttigt til diagnose af neonatal meningitis med E. coli K1. Den høje morbiditet og mortalitet, der er forbundet med gruppe B streptokokker og E. coli K1 hos nyfødte, gør det yderst vigtigt at råde over en hurtig og nøjagtig metode til identifikation af disse organismer 4. Til detektion af karakteristiske exoantigener fra patogene mikroorganismer i patienters kropsvæsker (CSF, serum, urin) er immunologiske metoder typisk hurtigere end traditionelle metoder som dyrkning. Til de immunologiske teknikker hører krydset immunelektroforese (CIE) og latexagglutination Latexagglutinationsmetoden er fundet at være hurtigere og mere følsom end CIE til detektion af renset antigen METODENS PRINCIPPER Specifikke antistoffer er bundet til overfladen af latexpartikler. I tilstedeværelse af specifikke antigener bliver aggregationen af latexpartikler tilstrækkelig stor til at muliggøre hurtig visualisering af positiv agglutination. Sådanne specifikke, opløselige polysaccharid-antigener akkumulerer i CSF, serum eller urin som følge af infektion med H. influenzae type b, S. pneumoniae og N. meningitidis gruppe A, B, C, Y eller W135 samt Escherichia coli K1, foruden i CSF og/eller serum som følge af infektion med Streptococcus gruppe B. Alle de nævnte antigener kan detekteres med Directigen Meningitis Combo Test Kit. REAGENSER Directigen Meningitis Combo Test Reagens 1 (1,0 ml), Anti-H. influenzae type b, suspension af latexpartikler coatet med polyklonalt kaninantistof, Reagens 2 (1,0 ml), Anti-S. pneumoniae, suspension af latexpartikler coatet med polyklonalt kaninantistof, Reagens 3 (1,0 ml), Anti-Streptococcus gruppe B, suspension af latexpartikler coatet med polyklonalt kanin-antistof, Reagens 4 (1,0 ml), Anti-N. meningitidis gruppe C og W135, suspension af latexpartikler coatet med polyklonalt kanin-antistof, Reagens 5 (1,0 ml), Anti-N. meningitidis gruppe A og Y, suspension af latexpartikler coatet med polyklonalt kanin-antistof, Reagens 6 (1,0 ml), Anti-N. meningitidis gruppe B/E. coli K1, suspension af latexpartikler coatet med polyklonalt murint antistof, Reagens A (0,5 ml), Kontrol-latex, suspension af latexpartikler coatet med kanin-immunoglobulin, Reagens B (0,5 ml), Kontrol-latex, suspension af latexpartikler coatet med murint immunoglobulin, hvert af ovenstående med 0,2 % natriumazid (konserveringsstof), Control (9,0 ml), Polyvalent positiv antigen-kontrol, antigener fra H. influenzae type b, S. pneumoniae, Streptococcus gruppe B og N. meningitidis gruppe A, B, C, Y og W135,

2 Kontrol (9,0 ml), Negativ antigen-kontrol, saltvand med glycinbuffer, hvert af ovenstående med 0,2 % natriumazid (konserveringsstof), Prøvebuffer (8,0 ml), Bufferopløsning med prøve, indeholdende EDTA. Forholdsregler: Til diagnostisk brug in vitro. Advarsel: Patogene mikroorganismer, herunder hepatitisvirus og HIV, kan forekomme i kliniske prøver. "Standardforholdsregler" og institutionelle retningslinier skal overholdes ved håndtering af alle materialer, der er kontamineret med blod og andre legemsvæsker. Sterilisér præparatbeholdere og andre kontaminerede materialer ved autoklavering inden bortskaffelse. Reagenser: Må ikke bruges efter udløbsdatoen. Efter udtagning af køleskab skal reagenserne henstå, til de har nået stuetemperatur (15 til 30 C), før de bruges. For at sikre korrekt dråbeafgivelse skal reagensdoseringsflasken holdes lodret, så den afgiver én fritfaldende dråbe ad gangen. Advarsel: Reagenserne indeholder natriumazid, som er meget giftigt ved indånding, ved hudkontakt og ved indtagelse. Udvikler giftgas ved kontakt med syrer. Ved kontakt med huden vaskes området straks med rigeligt vand. Natriumazid kan reagere med bly- og kobberrør og danne højeksplosive metalazider. Ved bortskaffelse skylles med rigeligt vand for at forhindre ophobning af azider. Kontroller: Test-kittet må ikke anvendes, hvis Kontrol og Kontrol - ikke giver korrekte resultater. Testkort: Kortene skal ligge fladt for at give korrekte reaktioner. Glat om nødvendigt kortene ud ved at bøje dem bagud i modsat retning af den bøjede kant. Vær påpasselig med at undgå fingeraftryk i testområderne, da dette kan medføre fedtet belægning og forkerte testresultater. Brug kun kortet én gang, og kassér det efter brugen. Opbevar kortene i den oprindelige emballage på et tørt sted ved stuetemperatur. Undgå at ridse kortet med plast-rørepinden, når prøverne påføres i testområderne. Kan prøven ikke spredes helt ud til omkredsen af testområdet, skal De benytte et andet testområde på kortet. Testplade (glas): Bruges testplade (glas), skal denne desinficeres efter hver gangs brug og vaskes før genbrug. Et phenol-desinfektionsmiddel foreslås. Sørg for, at alle rengørings- og/eller desinfektionsmidler skylles grundigt af testpladen, før denne genbruges. Rotation: Den anbefalede mekaniske rotationshastighed er 100 ± 2/min., men udsving inden for 95 til 110/min. påvirker ikke resultaterne nævneværdigt. Rotatoren skal bevæge sig omkring en cirkel med en diameter på ca. to centimeter i det vandrette plan. For at undgå udtørring af prøverne under rotationen skal anvendes et fugtgivende låg. Opbevaring af reagenser: Ved modtagelsen udtages kartonen med reagenserne og sættes i køleskab ved 2 til 8 C. MÅ IKKE FRYSES. Hætterne skal sættes tilbage på reagensflaskerne, og flaskerne sættes tilbage i køleskabet, når de ikke er i brug. Undgå at forbytte de farvekodede hætter. PRØVEINDSAMLING OG -HÅNDTERING Yderligere oplysninger om metoder til prøveindsamling og -håndtering findes i den pågældende litteratur. Prøverne skal testes så snart som muligt. Kan en prøve ikke testes straks, skal den opbevares enten ved 2 til 8 C (i indtil 48 timer) eller ved -20 C. Serum skal adskilles fra helblod inden testning eller opbevaring. FORBEHANDLING AF PRØVER Brug af tildækkede reagensglas (borsilikatglas) i et (kogende) vandbad ved 100 C er mest effektiv som behandling af prøverne. Skønt prøverørene kan varmes i varmeblok, kan dette medføre øget variation i gennemvarmningen af prøven som følge af forskelle i størrelsen af rør og prøvevolumen. PROCEDURER Testområde, reagenser, testprøver og testkomponenter skal have stuetemperatur (15 til 30 C) ved anvendelsen. Vedlagte materialer: Alle de under "Reagenser" anførte materialer samt arbejdsstation, engangstestkort og tilbehør. Nødvendige materialer, der ikke er vedlagt: Directigen-testplade til meningitis-test, rotator, fugtgivende dæksel, mikropipette (50 µl) og pipettespidser (se "Bestilling"). Desuden kræves nødvendigt laboratorieudstyr til præparation, opbevaring og håndtering af kliniske prøver af CSF, serum og urin. Prøvepræparation (CSF): 1. Opvarm prøverne i 3 min. ved 100 C (f.eks. i vandbad eller varmeblok), og lad dem køle af til rumtemperatur før brug. For at få optimal følsomhed skal testningen for N. meningitidis gruppe B og E. coli K1 udføres på uopvarmede prøver (se "Procedurens begrænsninger"). 2. CSF-prøver, der er uklare, skal efter opvarmning centrifugeres i 10 min. ved 1400 x g før testning. Supernatanten anvendes som prøve. 3. Test prøverne som beskrevet i "Testprocedure". Præparation af prøver (serum): 1. Fortynd serumprøverne, der er på mindst 0,6 ml, med Directigen-prøvebuffer i forholdet 1:1, og bland. 2. Opvarm prøverne i 5 min. ved 100 C (f.eks. i vandbad eller varmeblok), og lad dem køle af til rumtemperatur før brug. 3. Løsn det dannede protein-"koagulat", og slyng indholdet kraftigt (i ca. 5 sek.). 4. Centrifugér ved mindst 1400 x g i 15 min. 5. Test supernatanten som beskrevet i "Testprocedure". 2

3 Præparation af prøver (ukoncentreret urin): 1. Fortynd urinprøverne, der er på mindst 0,4 ml, med Directigen-prøvebuffer i forholdet 1:1, og bland. 2. Opvarm prøverne i 5 min. ved 100 C (f.eks. i vandbad eller varmeblok), og lad dem køle af til rumtemperatur før brug. 3. Centrifugér ved mindst 1400 x g i 10 min. 4. Test supernatanten som beskrevet i "Testprocedure". Præparation af prøver (koncentreret urin): 1. Urinprøver, der er uklare eller indeholder partikler, skal centrifugeres ved 1400 x g i 10 min., før de koncentreres. 2. Urinprøver kan koncentreres 25 gange med Minicon B-15-koncentrator (Amicon Corporation, Danvers, Massachusetts). 3. Fortynd mindst 200 µl urinkoncentrat med Directigen-prøvebuffer i forholdet 1:1, og bland. 4. Opvarm prøverne i 5 min. ved 100 C (f.eks. i vandbad eller varmeblok), og lad dem køle af til rumtemperatur før brug. 5. Centrifugér ved mindst 1400 x g i 10 min. 6. Test supernatanten som beskrevet i "Testprocedure". Præparation til bekræftelse af kolonier fra kultur: 1. Lokaliser de mistænkte kolonier på agaroverfladen af timers kulturer, der har morfologiske og gramfarvningsmæssige egenskaber som organismer egnet til testning med Directigen-latex-reagenser til meningitis. Bemærk: Før testning skal der foretages en gramfarvning for at sikre, at organismerne er egnede til testning med Directigen latex-reagenser til meningitis. 2. Afpipettér 0,5 ml (ca. 10 dråber) kontrolreagens i et lille prøverør (10 x 75 mm eller tilsvarende). 3. Vælg adskillige (2 3) isolerede kolonier med omtrent samme morfologi fra den oprindelige plade eller subkulturpladen ved hjælp af en steril podenål med øje, og opslæm dem i ovennævnte rør, så der fås en suspension svarende til en McFarland uklarhedsstandard #1. Bemærk: Overinokulation vil gøre suspensionen for tyk, hvilket kan give forkerte resultater. 4. Opvarm suspensionen i 3 min. ved 100 C (f.eks. i kogende vandbad eller varmeblok), og lad den køle af til rumtemperatur før testning. 5. Centrifugér ved mindst 1400 x g i 10 min. 6. Test supernatanten som beskrevet i "Testprocedure". Bemærk: Hvis der iagttages atypiske agglutinationsmønstre, henvises til "Procedurens begrænsninger". Brugerkvalitetskontrol: Medtag test af Kontrol og Kontrol for hvert parti prøver, der testes som beskrevet under trin 1, "Testprocedure". Kvalitetskontrol skal finde sted efter krav, der er fastsat i henhold til gældende lokale eller statslige bestemmelser eller akkrediteringskrav og laboratoriets rutinemæssige kvalitetskontrolprocedurer. Det anbefales, at brugeren følger de relevante CLSI (tidligere NCCLS)-retningslinjer og CLIA-bestemmelser for kvalitetskontrolpraksis. Testprocedure (CSF, serum, urin, koncentreret urin og kolonibekræftelse): Tag reagenserne ud af køleskabet, og anbring reagenser og kort (eller test-glasplade) i de angivne fordybninger i arbejdsstationens bakke. Brug kun det testkort eller den testplade, der anbefales til dette test-kit. Før testpladen benyttes, skal den rengøres grundigt med en fnugfri serviet. Se illustrationen til procedureskemaet på folde-ud siden (s. 9) 1. Påfør én dråbe Kontrol i cirkel 1 til 6 i række "". Påfør én dråbe Kontrol i cirkel 1 til 6 i række " ". 2. Påfør 50 µl prøve med mikropipette i cirkel 1 til 6 i række "S" (prøve) og i cirklerne mærket "A" og "B". Række "" (positiv) og " " (negativ) fungerer som kontrol. Til de efterfølgende prøver kan anvendes række, række og S med nye (eller rengjorte) testkort (testplader af glas). 3. Hold doseringsflasken i hætten, og slyng den grundigt (uden at vende den på hovedet), så reagens 1 6 og reagens A og B blandes grundigt. Inden De tager låget af hver flaske, skal De forsigtigt banke flaskens bund mod bordpladen for at sikre, at der ikke sidder noget latex-reagens tilbage i spidsen. 4. Afsæt én dråbe af reagens A (kontrolsuspension af latex-partikler) i cirkel "A". Afsæt én dråbe af reagens B (kontrolsuspension af latex-partikler) i cirkel "B". 5. Afsæt én dråbe af latex-suspensionen reagens 1 på cirklerne i søjle 1, række "" (positiv), række " " (negativ) og række "S" (prøve). Gentag proceduren for de øvrige latex-suspensioner (reagens 2 6) i rækkerne "", " " og "S", søjle 2 til Bland prøverne og latex-reagenserne i hver cirkel med en rørepind af plast, og brug skiftevis først den ene, derefter den modsatte ende til næste cirkel. Kassér rørepinden. 7. Anbring kortet eller testpladen på en mekanisk rotator, og lad det rotere ved en hastighed på 100 ± 2/min. i 10 min. Benyt et fugtgivende dæksel til at forhindre fordampning. 8. Aflæs straks testresultaterne makroskopisk under en kraftig glødelampe, når de 10 minutter er gået. Bemærk: Ved testning af en prøve (CSF, serum, urin, koncentreret urin eller kolonibekræftelse) med ét enkelt af reagenserne 1 5 skal reagens A anvendes. Til testning med ét enkelt reagens 6 skal reagens B anvendes. Følg ovenstående procedure. 3

4 TOLKNING AF TESTRESULTATER Notér først testresultaterne for kontrol og kontrol : Kontrol skal give kraftig agglutination i cirklerne i række "" inden for 10 min. Kontrol skal ikke give nogen agglutination i cirklerne i række " ". Resultaterne er ufortolkelige, hvis der er agglutination i nogen cirkel indeholdende kontrol. Notér testresultaterne for prøven: Positiv test skal vise agglutination. Enhver grad af agglutination i et af latex-reagenserne viser tilstedeværelse af det tilsvarende antigen. Resultaterne er ufortolkelige hvis der er agglutination i to eller flere af latexreagenserne eller i det tilsvarende reagens A (reagens 1 5) eller reagens B (reagens 6). Negativ test må ikke vise agglutination. PROCEDURENS BEGRÆNSNINGER Latex-agglutinationstests er ikke tænkt at skulle træde i stedet for dyrkning af bakterier. Bekræftende diagnose af bakteriel meningitis er kun mulig med passende dyrkningsprocedurer. Prøver med ekstremt lille antigenindhold, f.eks. tidligt i infektionens forløb, kan give falske negative resultater. Ligeledes kan prøver med meget høj antigenkoncentration udvise prozoneeffekt og give falske negative resultater. Prozone-fænomenet ikke er fuldstændig undersøgt, men er kun iagttaget i prøver tilsået med ekstremt høje antigenmængder, ikke i kliniske prøver. Dette assay er beregnet til kvalitativ påvisning af antigener fra H. influenzae type b, S. pneumoniae, N. meningitidis gruppe A, B, C, Y eller W135 og E. coli K1 i CSF, serum eller urin samt Streptococcus gruppe B i CSF og serum. Derudover kan test-kittet anvendes til formodede kolonier af H. influenzae type b, S. pneumoniae, Streptococcus gruppe B og N. meningitidis gruppe A, B, C, Y og W135. Testpræstationerne med andre typer prøver er ikke evalueret. Directigen Meningitis Combo Test kan ikke bruges med bloddyrkningsmedier. Et positivt eller negativt resultat for gruppe B streptokokker er kun tegn på tilstedeværelse eller fravær af gruppe B streptokok-antigen og er ikke diagnostisk for tilstedeværelse eller fravær af infektion med gruppe B streptokokker. Dette udstyr bør ikke træde i stedet for bakteriedyrkning til diagnose af septicaemi med gruppe B streptokokker og/eller meningitis. Et positivt eller negativt resultat skal betragtes som foreløbigt for gruppe B streptokok-antigen. Resultatet kræver bekræftelse ved dyrkning. For spædbørn er serum og cerebrospinalvæske de eneste prøver, der anbefales benyttet til direkte kvalitativ påvisning af gruppe B streptokok-antigen. Testning af urin fra spædbørn med reagenser til direkte kvalitativ detektion af gruppe B streptokok-antigen kan for indeværende ikke anbefales; der foreligger endnu ikke tilstrækkelige oplysninger om testens præstationer til, at den kan anvendes på urin som en pålidelig prædiktor for infektion med gruppe B streptokokker. Pneumokokker og Haemophilus influenzae type B (uden kapselantigen) vil ikke nødvendigvis blive detekteret med immunologiske teknikker. Krydsreaktioner med H. influenzae-reagens vides at finde sted i tilstedeværelse af Escherichia coli K100. Reagenset for N. meningitidis gruppe C og W135 vides at krydsreagere i tilstedeværelse af Escherichia coli K92. Andre krydsreaktioner samt ufortolkelige og falske positive resultater kan forekomme, men kan begrænses eller elimineres ved korrekt prøvepræparation (se "Forbehandling af prøver" og "Procedurer Forbehandling af prøver"). Undersøgelser af CSF-prøver tilsået med antigen fra N. meningitidis gruppe B og E. coli K1 har tydet på, at der kan forekomme noget tab af følsomhed efter opvarmning, sammenlignet med uopvarmede prøver. Ubehandlet serum og urin kan give ufortolkelige resultater med latex-reagenserne og bør behandles som angivet under "Procedurer Forbehandling af prøver". Prøver af CSF, der er uklare, skal efter opvarmning centrifugeres i 10 min. ved 1400 x g, før de testes. Supernatanten anvendes som prøve. Urinprøver, der er behandlet som angivet under "Procedurer Forbehandling af prøver" og giver resultater, der er ufortolkelige eller mistænkes for at være falske positive, kan filtreres med et MILLIPORE Millex-HA 0,45 µm filter (#SLHA-0250S) og testes igen med det eller de pågældende latex-testreagenser og det eller de tilsvarende latex-kontrolreagenser. Prøver til kolonibekræftelse, der giver ufortolkelige eller atypiske agglutinationsreaktioner, kan kræve fortynding af supernatanten med kontrolreagens i forholdet 1:10. Det bør undgås at anvende bakteriesuspensioner med større uklarhed end McFarland-uklarhedsstandard #1. Latex-agglutinationstests på urin er potentielt nyttige til bekræftelse af tilstedeværelse af patogene organismer i små børn, der har feber med ikke-lokaliserbart focus. 22 Antigenudskillelsen af i urinen kan imidlertid hos små børn persistere i 3 14 dage eller indtil 30 dage efter administration af vaccine mod Haemophilus influenzae type b (Hib-vaccine). Antigenuriens hyppighed og varighed afhænger af patienten og den anvendte vaccinetype. Oplysninger om patientens vaccinationer er vigtige for korrekt tolkning af positive fund af Hib-antigen i urinen hos vaccinerede småbørn Visse stammer af streptokokker af viridans-gruppen (dvs. S. mitis, S. sanguis II, S. salivarius) har udløst krydsreaktioner med Directigen-latexreagenset til S. pneumoniae 25. Der kan derfor være behov for supplerende tests for at skelne streptokokker af viridans-gruppen fra S. pneumoniae. Der skal foretages en gramfarvning inden anvendelsen til kolonibekræftelse. Visse bakterieisolater fra blodkulturplader, som morfologisk ligner den formodede organisme i kolonien, men ikke svarer til den i gramfarvning (dvs. beta-hæmolytiske, ikke-patogene Neisseria-arter), kan udvise ikke-specifik agglutination og/eller falske positive reaktioner med latexreagenset til gruppe B Streptokokker. FORVENTEDE VÆRDIER Haemophilus influenzae type b, Neisseria meningitidis og Streptococcus pneumoniae er indberettet som de tre ætiologiske agenser, der er ansvarlige for omkring 84 % af alle tilfælde af bakteriel meningitis 3. 4

5 Streptococcus gruppe B og Escherichia coli K1 er vigtige bakterielle patogene hos nyfødte 4-7. Stammer af gruppe B streptokokker og E. coli K1 koloniserer ofte vagina og/eller rectum og kan være forbundet med maternel septicaemi og neonatal septicaemi, pneumoni og meningitis 8. FUNKTIONSDATA Følsomhed: I en serie retrospektive kliniske evalueringer blev prøver af cerebrospinalvæske (opvarmet og uopvarmet), serum og urin testet med Directigen-latex-reagenser til meningitis. Prøverne stammede oprindelig fra patienter, som ved dyrkning, CIE eller brug af gængse latexreagenser var fundet positive for infektion med enten Haemophilus influenzae type b, Streptococcus pneumoniae, Neisseria meningitidis gruppe A, B, C, W135 eller gruppe B streptokokker. Latex-resultaterne blev desuden sammenholdt med krydset immunelektroforese (CIE), men ikke alle prøver blev testet med CIE (tabel 1 på side 7). Directigen-latexreagenser til meningitis var jævnbyrdige med eller mere følsomme end CIE til detektion af antigen i prøver af CSF, serum og urin. Følsomheden for E. coli K1 blev bestemt ved at bruge hele E. coli K1-celler, der var sået i kropsvæsker, og blev sammenholdt med et gængs latex-agglutatinationsreagens. Directigen-latexreagens til N. meningitidis gruppe B var i stand til at detektere E. coli K1 i CSF (4/4), serum (4/4), urin (3/4) og koncentreret urin (4/4). Med følsomhederne som endepunkter var resultaterne jævnbyrdige med eller bedre end dem, der blev observeret ved et tilsvarende gængs latexreagens 15. Desuden blev hvert Directigen-latexreagens sammenholdt med CIE med hensyn til dets evne til at detektere delvis renset antigen udsået i CSF, serum, urin og koncentreret urin. I CIE-testen anvendtes gængs specifikt antiserum for hvert antigen. Directigen-latexreagenserne var mere følsomme end CIE 15. Specificitet: Specificiteten af Directigen-reagenserne til meningitis bestemtes ved retrospektiv og prospektiv testning af prøver af CSF, serum, urin og koncentreret urin i forskellige kliniske studier (tabel 2, side 7). Både dyrkningsnegative og ikke-indekserede dyrkningspositive prøver blev testet. Data viser, at specificiteten ligger i området %, afhængigt af det anvendte latexreagens og den testede prøve. Kolonibekræftelse: Latexreagenserne blev testet med suspensioner af isolerede kolonier svarende til organismernes morfologiske kendetegn. Funktionsdata er angivet i tabel 3 (på side 8). BESTILLING Kat. nr. Beskrivelse Directigen Meningitis Combo Test, (30 patienttests, 60 kontroller) Directigen Group B Strep Test, (30 patienttests, 60 kontroller) Directigen H. influenzae type b Test, (30 patienttests, 60 kontroller) Directigen N. meningitidis group B / E. coli K1 Test, (30 patienttests, 60 kontroller) Directigen N. meningitidis groups A, C, Y and W135 Test, (30 patienttests, 60 kontroller) Directigen S. pneumoniae Test, (30 patienttests, 60 kontroller) Directigen-buffer til prøver, 8 ml Directigen negativ kontrol til meningitis Reagens, 9 ml, æske med Macro-Vue-rotator til korttest (med fugtgivende dæksel), 100 ± 2 o./min., automatisk ur, friktionsdrev, model 51-II (110 V) Directigen Meningitis, generic, 12 testcirkler, æske med 30. LITTERATUR 1. Rothrock, S.G., S.M. Green, J. Wren, D. Letai, L. Daniel-Underwood, E. Pillar: Pediatric bacterial meningitis: is prior antibiotic therapy associated with unaltered clinical presentation?, Annals Emerg. Med. 21: , Fasola, E. and P. Ferrieri: Laboratory diagnostic methods for central nervous system infections, Neuro. Clinics N. Amer. 3: , Morbidity and Mortality Weekly Report (CDC), Surveillance summary: bacterial meningitis and meningococcemia, United States, 28: , Finegold, S.M. and Martin, W.J.: Bailey and Scott s Diagnostic Microbiology, Sixth Ed., C.V. Mosby Co., Baker, C.J.: Summary of the workshop on perinatal infections due to group B Streptococcus, NIH News, J. Infec. Dis., 136: , Mulder, C.J.J., Van Alphen, L. and Zanen, H.C.: Neonatal meningitis caused by Escherichia coli in the Netherlands, J. Infect. Dis., 150:935, Sarff, L.D., McCracken, G.H., Jr., Schiffer, M.S., Glocle, M.P., Robbins, J.B. and Orskov, F.: Epidemiology of Escherichia coli K1 in healthy and diseased newborns, Lancet, 1: , Blaunstein, H., Tucker, E.B., and Gibson, B.C.: Identification and significance of Streptococcus agalactiae, Am. J. Clin. Path., 51: , Kasper, D.L., Winkelhake, J.L., Zollinger, W.D., Brandt, B.L. and Artenstein, M.S.: Immunochemical similarity between polysaccharide antigens of Escherichia coli: 07:K1 (L): NM and group B Neisseria meningitidis, J. Immunol., 110: , Lifely, M.R., Gilbert, A.S. and Moreno, C.: Sialic Acid polysaccharide antigens of Neisseria meningitidis and Escherichia coli: esterification between adjacent residues, Carbohydr. Res., 94: , Edwards, E.A.: Immunologic investigations of meningococcal disease, group-specific Neisseria meningitidis antigens present in the serum of patients with fulminant meningococcemia, J. Immunol. 106: , Whittle, H.C., Egler, J.J., Tugwell, P. and Greenwood, B.M.: Rapid bacteriological diagnosis of pyogenic meningitis by latex agglutination, Lancet, 2: , Ingram, D.L., Anderson, P. and Smith, D.H.: Countercurrent Immunoelectrophoresis in the diagnosis of disease caused by Haemophilus influenzae type b, J. Ped., 81: ,

6 14. Newman, R.B., Stevens, R.W. and Gaafar, H.H.: Latex agglutination test for the diagnosis of Haemophilus influenzae meningitis, J. Lab. Clin. Med., 76: , Data on file at BD Diagnostic Systems. 16. Tilton, R.C., Dias, F. and Ryan, R.W.: Comparative evaluation of three commercial products and counterimmunoel ectrophoresis for the detection of antigens in cerebrospinal fluid, J. Clin. Microbiol., 20: , Rench, M.A., Metzger, T.G. and Baker, C.J.: Detection of group B streptococcal antigen in body fluids by a latex-coupled monoclonal antibody assay, J. Clin. Microbiol., 20: , Clinical and Laboratory Standards Institute Approved Guideline M29-A3. Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections, 3rd ed. CLSI, Wayne, Pa. 19. Garner, J.S Hospital Infection Control Practices Advisory Committee, U.S. Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention. Guideline for isolation precautions in hospitals. Infect. Control Hospital Epidemiol. 17: U.S. Department of Health and Human Services Biosafety in microbiological and biomedical laboratories, HHS Publication (CDC), 4th ed. U.S. Government Printing Office, Washington, D.C. 21. Directive 2000/54/EC of the European Parliament and of the Council of 18 September 2000 on the protection of workers from risks related to exposure to biological agents at work (seventh individual directive within the meaning of Article 16(1) of Directive 89/391/EEC). Official Journal L262, 17/10/2000, p Jones, R.G., Bass, J.W., Weisse, M.E., and Vincent, J.M. Antigenuria after immunization with Haemophilus influenzae oligosaccharide CRM197 conjugate (HbOC) vaccine. Pediatr. Inf. Dis. J. 1991; 10: Goepp, J.G., Hohenboken, M., Almeido-Hill, J., and Santocham, M. Persistent urinary antigen excretion to infants vaccinated with Haemophilus influenzae type b capsular polysaccharide conjugated with outer membrane protein from Neisseria meningitidis. Pediatr. Inf. Dis. J. 1992; 11: Rothstein, E.P., Madore, D.V., et. al. Comparison of antigenuria after immunization with three Haemophilus influenzae type b conjugate vaccines. Pediatr. Inf. Dis. J. 1991; 10: Holmberg, H., Danielsson, D., Hardie, J., Krook, A., Whiley, R.: Cross-reactions between α-streptococci and omniserum, a polyvalent pneumococcal serum, demonstrated by direct immunofluorescence, immunoelectroosmophoresis, and latex agglutination, J. Clin. Microbiol., 21: ,

7 Tabel 1 Sammenligning af Directigen og CIE i opbevarede prøver Prøve Antigen fundet Metoder Antal af positive Antal af negative H. influenzae type b Directigen CIE S. pneumoniae Directigen 36 9 CIE gruppe B Streptococcus Directigen 18 6 CSF CIE 2 4 N. meningitidis Directigen 22 3 gruppe A CIE Ikke testes Ikke testes N. meningitidis gruppe B Directigen CIE 7 20 N. meningitidis Directigen 8 0 gruppe C eller W135 CIE 2 4 H. influenzae type b Directigen 7 2 CIE 5 4 S. pneumoniae Directigen 17 5 Serum CIE 17 5 N. meningitidis Directigen 12 9 gruppe A, B, C eller W135 CIE 7 13 H. influenzae type b Directigen 12 4 CIE 2 14 S. pneumoniae Directigen 7 12 Urin CIE 1 18 gruppe B Streptococcus Directigen CIE 2 3 N. meningitidis Directigen 5 2 gruppe A eller C CIE 1 4 Tabel 2 Specificitet testning af dyrkningsnegative og dyrkningspositive kliniske prøver Prøve Latex-reagens Antel Antal af Specificitet % undersøgt negative H. influenzae type b S. pneumoniae CSF gruppe B Streptococcus N. meningitidis gruppe C / W ,3 N. meningitidis gruppe A / Y ,7 N. meningitidis gruppe B / E. coli K H. influenzae type b S. pneumoniae Serum gruppe B Streptococcus N. meningitidis gruppe C / W N. meningitidis gruppe A / Y ,2 N. meningitidis gruppe B / E. coli K H. influenzae type b S. pneumoniae Urin gruppe B Streptococcus ,7 N. meningitidis gruppe C / W N. meningitidis gruppe A / Y N. meningitidis gruppe B / E. coli K H. influenzae type b S. pneumoniae Koncentreret gruppe B Streptococcus ,5 urin N. meningitidis gruppe C / W ,1 N. meningitidis gruppe A / Y N. meningitidis gruppe B / E. coli K

8 TABEL 3 Funktionsdata - Kolonibekræftelse Directigen Meningitis kontra biokemisk identifikation Suspekte Antel Relativ sensitivitet Relativ specificitet % ikke-tolkelig organisme undersøgt (95 % (95 % initiale konfidensinterval) konfidensinterval) testning H. influenzae type b % (92 100) 98,5 % (92 100) 2 3,6 % S. pneumoniae & (84 98) 79,0 % (66 88) 1 0 % gruppe B Streptococcus % (95 100) 90,5 % (80 96) 1 0 % N. meningitidis gruppe A / Y % (83 100) 100 % (96 100) 2 10,4 % N. meningitidis gruppe C / W % (82 100) 98,5 % (92 100) 2 11,7 % N. meningitidis gruppe B % (55-98) 100 % (96 100) 2 4,7 % 1 Se "Procedurens begrænsninger". 2 Resultater efter gentages testning med en 1:10 fortynding 8

9 Procedureskema Udførelse af testen 1 Directigen MENI 2 Directigen MENIN - - S Becton, Dickinson and Company 3 4 Directigen MENINGITIS TEST - S Becton, Dickinson and Company 5 Directigen MENI 6 Directigen - - Directigen MENINGITIS TEST 7 Card Test Rotator S 9

10 10

11 Becton, Dickinson and Company 7 Loveton Circle Sparks, MD USA (800) BENEX Limited Bay K 1a/d, Shannon Industrial Estate Shannon, County Clare, Ireland Tel: Fax: MILLIPORE is a trademark of Millipore Corporation. BD, BD Logo, Directigen and Macro-Vue are trademarks of Becton, Dickinson and Company BD.