11. Bilag Bilag 1

Transkript

1 11. Bilag Bilag 1

2

3 11.2. Bilag 2 HÆM-AN57 Hemoglobin F; stoffr Variant II Turbo 20, Biorad Aa Dato Initialer Titel Hb(B)-Hemoglobin F;stoffr Variant II Turbo 2,0 - Biorad Version: 2 Gældende for Dokumenttype Analyseforskrift Ledelsesansvarlig Afdelingsledelsen Fagligt ansvarlig Elsebet Møller Nielsen Udarbejdet af / dato Elsebet Møller Nielsen Godkendt af / dato Birthe Gaardahl og Elsebet Møller Nielsen Review ansvarlig / dato Elsebet Møller Nielsen Erstatter (B)Hb-Hemoglobin F;stoffr (1999) Version: 1 Ændringer i forhold til tidligere dokument Dokumentstatus Aktiv fra Nedlagt Antal papirkopier 1 Papirkopier placering Analysepladsen Hb(B)-Hemoglobin F; stoffr. Variant II Turbo 2,0 - Biorad NPUnr Prøvemateriale: Se analyseforskrift Hb(B)-Hemoglobin A1c stoffr; Variant II Turbo kit 2,0 - Biorad 2. Sikkerhed: Se analyseforskrift Hb(B)-Hemoglobin A1c stoffr; Variant II Turbo kit 2,0 - Biorad 3. Utensilier: Se analyseforskrift Hb(B)-Hemoglobin A1c stoffr; Variant II Turbo kit 2,0 Biorad 4. Fremgangsmåde: Se analyseforskrift Hb(B)-Hemoglobin A1c stoffr; Variant II Turbo kit 2,0 Biorad 5. Kontroller: Se analyseforskrift Hb(B)-Hemoglobin A1c stoffr; Variant II Turbo kit 2,0 - Biorad 6. Kalibrering: Se analyseforskrift Hb(B)-Hemoglobin A1c stoffr; Variant II Turbo kit 2,0 - Biorad 7. Beregning og svarafgivelse: HbF aflæses i % med 1 decimal i rubrikken Area %, f.eks. 5,1 % på kromatogram fra Turbo 2,0 ved F top (rubrikken Peak name). Afrundes til 0 decimaler. Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 1 af 3

4 HÆM-AN57 Hemoglobin F; stoffr Variant II Turbo 20, Biorad Aa Dato Initialer Svar afgives i fraktion, dvs. HbF i % (helt tal) divideret med 100, f.eks. aflæst 5% / 100 = 0,05. Svar <1% afleveres som <0,01. Se kurveeksempel på Bilag 1. Tryk analyseplads Tryk manuel resultatindtastning Tryk bruger Tryk pr. prøve Tryk prøvenummer i prøvenr. feltet Tryk søg Tryk indtast svar Skriv HbF svaret i fraktion som ovenfor beskrevet, f.eks (5%) 8. Referenceinterval: 0 30 dage 0,65 0, mdr. 0,30 0, mdr. 0,05 0, mdr. < 0,10 > 6 mdr. < 0,02 Præmature børn har en højere HbF fra fødslen. 9. Klinik: Se analyseforskrift Hb(B)-Hemoglobin A1c stoffr; Variant II Turbo kit 2,0 - Biorad 10. Fejlkilder: Se analyseforskrift Hb(B)-Hemoglobin A1c stoffr; Variant II Turbo kit 2,0 - Biorad 11. Dataopbevaring: Se analyseforskrift Hb(B)-Hemoglobin A1c stoffr; Variant II Turbo kit 2,0 Biorad 12. Tekniske bemærkninger/apparaturvejledning Se analyseforskrift Hb(B)-Hemoglobin A1c stoffr; Variant II Turbo kit 2,0 - Biorad 13. Referencer: Se analyseforskrift Hb(B)-Hemoglobin A1c stoffr; Variant II Turbo kit 2,0 - Biorad 14. Princip: Se analyseforskrift Hb(B)-Hemoglobin A1c stoffr; Variant II Turbo kit 2,0 - Biorad Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 2 af 3

5 HÆM-AN57 Bilag 1: Hemoglobin F; stoffr Variant II Turbo 20, Biorad Aa Bilag Dato Initialer Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 3 af 3

6 HHS juli Bilag 3 Vejledning til vurdering af prøvemateriales holdbarhed (eller andre præanalytiske forhold) Før holdbarhedsforsøget udføres I analysegruppen diskuteres den aktuelle problemstilling. De ønskede kriterier for holdbarhedsforsøget fastsættes, dette kan være timer, dage, stuetemp., køl, frys osv. Der vurderes om prøverne skal analyseres i dobbeltbestemmelser. Desuden tages der stilling til hvilke acceptkrav, der skal opstilles for at vurdere de opnåede resultater. Disse krav kan opstilles på flere måder, afhængigt af hvilken parameter, der skal vurderes: Krav til bias 1 og totalfejl (TEa% 2 ) ud fra den biologiske variation (Westgard). Evt. Andre kilder til Bias og TEa krav. Klinisk relevante præcisionskrav Analysens præcision på patientmateriale Holdbarhedsforsøget udføres Der analyseres 10 patientprøver fordelt jævnt over måleintervallet. Det anbefales at prøverne fordeler sig med 3-4 i det lave område, 3-4 i midten og 3-4 i den høje ende af måleområdet. Vægtningen afhænger af den aktuelle parameter og den rent praktiske mulighed for at opsamle prøvemateriale i de ønskede niveauer. Prøverne behandles på samme måde som rutineprøverne, og analyseres på vanlig vis for at bestemme udgangsværdien (Tid 0). Prøverne henstilles i den ønskede tid og ved den/de ønskede temperatur(er). Prøverne bør udportioneres i separate glas til de respektive analysetidspunkter. Evt. kan prøverne tilproppes eller dækkes med folie så fordampning undgås i opbevaringsperioden. Herefter vælges en af følgende muligheder: (1) Prøverne analyseres umiddelbart på de valgte tidspunkter 1 Bias % er defineret som: 0,25* + 2 Tea % er defineret som: 1,65* (0,5*CV intraindividuel )+Bias eller 1,65* CV analytisk +Bias

7 HHS juli 2013 (2) Hvis det er muligt, kan prøverne nedfryses til -80 C på de valgte tidspunkter og alle prøver optøs og analyseres i samme analyseserie til sidst. Dataindtastning Data for holdbarhedsforsøget indtastes i bilag 1(Se figur 1). Hvis prøverne er analyseret i dobbeltbestemmelser indtastes middelværdien. Figur 1 Eksempel. Skema til indtastning af resultater (Bilag1) I de røde felter noteres hvilken analyse det drejer sig om, enhed, temperaturforhold og dato. Krav til bias% og TEa% indtastes. (Evt. bruges Westgard). Er det ikke muligt eller relevant, at finde krav ud fra biologisk variation, og/eller er der i analysegruppen taget beslutning om andre krav, kan disse indtastes. Prøve-id. og måleresultater indtastes i de blå felter i det første skema. Der laves automatisk: Beregninger i skema 2

8 HHS juli 2013 Plot A og B, til vurdering af resultaterne, dannes automatisk. Bias og TEa krav bliver, hvis indtastet, også automatisk indsat. (Se eksempel bilag 2) Figur 2 Eksempel på skema til holdbarhedsforsøg PTH (Bilag 2) Vurdering af data: Plot A: Den første målings resultat, svarende til rutineanalysering, kaldes Tid 0 og fastsættes til 100%. De efterfølgende målingers resultater,tid 1-4, omregnes til procent af Tid 0. Disse indsættes automatisk i plot A hvor TEa% (hvis indtastet) ligeledes indtegnes automatisk. I dette plot er den enkelte måling, der vurderes på, med de usikkerheder det medfører. Ingen af resultaterne pr. tidsenhed må overskride grænsen for TEa%.

9 HHS juli 2013 Figur 3 Eksempel på plot A PTH(Bilag 2) Plot B: For hver tidsenhed(f.eks. for dag 1) beregnes gennemsnittet af alle prøver. Igen sættes gennemsnittet af Tid 0 til 100% og de efterfølgende gennemsnitsmålinger omregnes til procent af Tid 0. Der beregnes automatisk 90 % konfidensinterval (CI) omkring middelværdierne. Middelværdier med 90% CI indtegnes automatisk i plot B, hvor Bias%(hvis indtastet) ligeledes indtegnes automatisk. Ingen resultater pr. tidsenhed inkl. 90% CI må overskride grænsen for Bias%. Figur 4 Eksempel på Plot B PTH (Bilag 2) Både Tea% kravet i plot A og Bias% kravet i plot B skal være overholdt for at holdbarheden er ok. Hvis/når de indsatte grænser i plot A (TEa%) og/eller i plot B (Bias%)overskrides, er holdbarheden af prøvematerialet er overskredet. Er der usikkerhed omkring konklusionen kan forsøget evt. gentages med et større antal prøver.

10 HHS juli 2013 Vurdering af præcision på prøvematerialet Hvis prøverne analyseres i dobbeltbestemmelse, kan man få et billede af analysens præcision på patientmaterialet. Præcisionen vurderes i et X/Y plot med variationen (%) ad Y-aksen og middelværdien(konc) på dobbeltbestemmelsen ad X-aksen? Hvis der ses tydelig forskel i præcisionen over måleområdet, kan man dele prøverne op i to differensplot, f.eks. lavt og højt område inden holdbarheden vurderes. Er der en meget stor impræcision i f.eks. det lave område kan dette føre til overskridelse af de opsatte krav, uden at dette nødvendigvis er et udtryk for et holdbarhedsproblem. Kilde: Prøvematerialets holdbarhet kriterier og vurderinger A. Åsberg, K. Bodal Solem, G. Mikkelsen

11 11.4. Bilag 4 HÆM-AN56 Hemoglobin A1c Variant II Turbo 20, Biorad Aa Dato Initialer Hb(B)-Hemoglobin A1c stoffr. Variant II Turbo kit 2,0 Biorad Hb(B)-Hæmoglobin A1c(IFCC) NPU-nr.: P-Glucose, middel(fra HbA1c) NPU-nr.: Variant II Turbo kit 2,0 - BioRad Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 1 af 75

12 HÆM-AN56 Hemoglobin A1c Variant II Turbo 20, Biorad Aa Dato Initialer Indholdsfortegnelse 1. PRØVEMATERIALE: SIKKERHED: UTENSILIER: AFFALD...5 FREMGANGSMÅDE: PRØVEFORBEREDELSE/MANUEL FORTYNDING AF PRØVER START DAGENS SERIE OPSTART AF APPARATET PLACERING AF KONTROLLER PLACERING AF RACK AFSLUTNING AF SERIE START OG STOP AF APPARAT...7 START AF APPARATET EFTER INAKTIV...7 START AF APPARAT EFTER MANUEL...7 START AF APPARAT EFTER PAUSED PÅFYLDNING AF REAGENS SKIFT AF REAGENS KONTROLLER: KALIBRERING: BEREGNING, RESULTATVURDERING OG SVARAFGIVELSE: EKSEMPEL PÅ IDENTIFIKATIONSVINDUER(PEAK TABLE)...10 OMKØRSLER (PÅ GRUND AF AREAL)...11 HBA1C-KONCENTRATION KURVEVURDERING...12 SVAR AFLEVERING...13 SAMMENHÆNG MELLEM HBA1C VÆRDIER...14 AFLEVERING AF SVAR I LABKA II...14 OVERFØRSEL AF MISTEDE RESULTATER TIL LABKA VIA DATA...15 MANGELLISTE REFERENCEINTERVAL: KLINIK: DANNELSE AF HBA1C INTERFERENS OG FEJLKILDER: DATAOPBEVARING: TEKNISKE BEMÆRKNINGER: Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 2 af 75

13 HÆM-AN56 Hemoglobin A1c Variant II Turbo 20, Biorad Aa Dato Initialer 12.1 UDPRINT EN NY ARBEJDSLISTE UDPRINT AF ET PRØVESVAR ELLER SE OM PRØVERNE ER KØRT UDPRINT AF FLERE PRØVESVAR UDPRINT AF KALIBRERINGSRAPPORT INSTALLERING AF NY KOLONNE OG FORFILTER MED SAMME BATCHNR PROCEDURE VED SKIFT AF FORFILTER/PREFILTER OPDATERING AF NY FORFILTER/PREFILTER PROCEDURE VED SKIFT AF KOLONNE OPDATERING AF NY KOLONNE ISÆTNING AF KOLONNE OG/ELLER FORFILTER VARIANT II TURBO SÆTTES I AKTIV PRIMING OG KALIBRERING AF KOLONNE EFTER SKIFT AF KOLONNE FREMSTILLING AF PRIMER FREMSTILLING AF CALIBRATORER SKIFT TIL NYT BATCHNR VEDLIGEHOLDELSE...24 VEDLIGEHOLDELSE DAGLIGT...24 VEDLIGEHOLDELSE HVER 14. DAG...24 MÅNEDELIG VEDLIGEHOLDELSE...25 VEDLIGEHOLDELSE HVER 2. MÅNED...25 ½ ÅRLIG VEDLIGEHOLDELSE...26 VEDLIGEHOLDELSE VED LEJLIGHED FEJLMEDDELELSER...27 PROCEDURE1 VED LUFT ELLER PROBLEMER MED GRUNDLINJEN...27 PROCEDURE 2 VED LUFT ELLER PROBLEMER MED GRUNDLINJE OPSTARTSEKVENS EFTER STRØMSVIGT FREMGANGSMÅDE TIL NEDLUKNING AF SYSTEMET EFTER FUNKTONSMÅDEN FAULT (FEJL) ELLER MANUAL (MANUEL) REFERENCER: PRINCIP: APPARATBESKRIVELSE: RUTINE FOR HVER PRØVEANALYSE...30 PATIENTVEJLEDNING I PRØVETAGNING TIL HBA1C...31 REAGENSBLAD OVERSIGT OVER FREMSTILLING AF KONTROLLER, CALIBRATORER OG PRIMER BILAG 1 TØMNING AF DATABASE PÅ VARIANT II TURBO 2, BILAG 2 CHECK OG VEDLIGEHOLDELSESSKEMA HBA1C...40 BILAG 3 TABEL OVER SAMMENHÆNGEN HBA1C VÆRDIER...41 BILAG 4 PATIENT RAPPORTER...42 BILAG 5 FEJLKILDER...74 BILAG 6 BREVSKABELON... Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 3 af 75

14 HÆM-AN56 Hemoglobin A1c Variant II Turbo 20, Biorad Aa Dato Initialer 1. Prøvemateriale: Blod stabiliseret med EDTA. Citratblod og Li-Heparin kan anvendes. Kapillærblod opsamlet i Hemoglobin Capillary Collection System(HCCS). Holdbarhed: EDTA: 7 døgn ved 4 C. 2 døgn ved stuetemperatur (egne undersøgelser, tåler forsendelse) Hæmolysat med wash/diluent: 1 døgn ved stuetemperatur Hæmolysat fra Hemoglobin Capillary Collection System (HCCS): 2 uger ved stuetemperatur. 4 uger ved 2-8 C. 4 dage ved 42 C Hæmolysat: 3-12 måneder ved -80 C. Stabiliseret blod:minimum 12 måneder ved -80 C. Hæmolyse: Icterus: Lipæmi: Uden betydning. Uden betydning. Undersøgt op til Bil-T ca. 350 μmol/l. Uden betydning. Undersøgt op til triglycerider 6,8 mmol/l 2. Sikkerhed: Buffer A, Buffer B og Wash/Diluent Solution indeholder < 0,05 % Natrium Azid. Na-Azid er meget giftigt (LD mg/kg), mutagent og påvirker centralnervesystemet ved < 1 mg/kg. Brug egnede handsker og beskyttelsesbriller. Koncentrationen af azid er i APB dog vurderet til ikke at skulle have en APB. Na-Azid må ikke komme i kontakt med hud og øjne, sker dette skylles med vand. Ved bortskaffelse skylles efter med rigelig mængde vand. Må ikke blandes med syre. Der henvises til APB. Calibratorer og kontroller er af human oprindelse. Er testet og fundet negative for Hepatitis B, Hepatitis C og HIV-1, HIV-2 og Syfilis. Undgå kontakt med hud og øjne. Der henvises i øvrigt til APB mappe. 3. Utensilier: Finn-pipetter: 5-40 μl μl 1-5 ml 1,5 ml prøverør med prop (Biorad eller Roche) Adaptor til mikroprøverør. Adaptor til kontroller, calibratorer, blank og primer. Sysmex rack til primær EDTA-rør. Hemoglobin Capillary Collection System (HCCS) Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 4 af 75

15 HÆM-AN56 Hemoglobin A1c Variant II Turbo 20, Biorad Aa Dato Initialer 3.1.Affald Bliver opsamlet i affaldsdunk, tømmes efter behov. 4. Fremgangsmåde: Prøverne skal have stuetemperatur (15-30 C) inden analysering. Prøverør sættes direkte i Sysmex rack. Stregkodens placering er uden betydning. Prøver taget i Bio-Rad s kapillærprøvetagningsrør sættes op i adaptor med spalte. OBS: Etiketten må ikke gå under glassets nederste kant. Etiketten må IKKE kunne ses i hullet på adaptoren. Ved brug af adaptorer eller ved 7,5 ml prøverør fjernes indsatsen i rack-positionen. Venojekt og Vacuette placeres direkte. 4.1 Prøveforberedelse/manuel fortynding af prøver Hvis prøverør er af en type, der ikke kan sættes direkte i rack, eller der er for lidt blod i primær glas, må prøven fortyndes i 1,5 ml prøverør. Prøven fortyndes i Hemoglobin Capillary Collection System (HCCS): Prøverøret forsynes med tilklippet stregkode/nr. Etiketten må ikke gå under glassets nederste kant Kapillærrør 5 μl fyldes med blod. Overfør kapillærrøret til prøvetagningsglasset med hæmolysat fra Hemoglobin Capillary Collection System(lyseblå låg). Sæt låget på glasset, ryst glasset så alt blodet rystes ud af kapillærrøret. Glasset placeres i adaptor med spalte. (OBS: etiketten) Dødvolumen ca. 50 μl, opsugningsmængde ca. 400 μl. Eller der laves manuel fortynding: Prøverøret(lilla låg Biorad 1,5 ml glas) forsynes med tilklippet stregkode/nr. Etiketten må ikke gå under glassets nederste kant. 5 μl velblandet blod afpipetteres μl (2 X 750 µl) eller 1,5 ml wash/diluent tilsættes. Glasset tilproppes og blandes grundigt (rystes). Glasset placeres i adaptor med spalte. (OBS: etiketten) Dødvolumen ca. 50 μl, opsugningsmængde ca. 400 μl. 4.2 Start dagens serie Prøver fra foregående kørsel fjernes fra apparatet og placeres i stativer, mærket med dato, rack nummer, stativ nummer og apparaturnavn. 4.3 Opstart af apparatet Lav daglig vedligeholdelse i henhold til Logbog (HÆM-TI45,46,47): Sæt apparatet i Ready: Hvis apparatet er i inaktiv: Se punktet start af apparat efter INAKTIV punkt 4.7 Ved pause på mere end 30 minutter går apparatet i inaktiv. Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 5 af 75

16 HÆM-AN56 Dato Initialer Hemoglobin A1c Variant II Turbo 20, Biorad Aa Opsætning af prøver Tænd evt. for skærmen ved at bevæge musen. Tryk ok (der er ingen password). Kontrollér antal injektioner på kolonne og forkolonne. Tryk setup, tryk test, tryk cartridges (se vedligeholdelsesskema). Fyld papir i printeren. Kontrollér reagensmængder: 1 flaske buffer A ~ ca. 600 prøver. 1 flaske buffer B ~ ca prøver. 1 flaske Wash/diluent ~ ca. 600 prøver. Prøveopsætning om morgenen (efter inaktiv). Klargør Rack 1: Blank, ca µl manuelt fortyndet blod, evt. fra tidl. kørsel. 1 Dag - dag (gerne fra dagen før). Kalibrator 1( ) og 2( ) som kontroller i adaptor med spalte, eller BioRad kontrol 1 og 2 i adaptor mærket kontrol level 1 og kontrol level 2. Derefter patientprøver(stuetemperatur). Hvis prøverne har stået i køleskab blandes de inden opsætning på apparat ellers er opblanding ikke nødvendig. Eksempel: Rack nr. Positio n Prøve Adaptor BLANK Gammel d.d. Cal 1( ) eller Biorad 1 Cal 2( ) eller Biorad 2 Blank Patientprøver inkl. kontrol - Mikroprøver Kontrol for ca. hver prøver. Der skiftes mellem: Biorad-kontrol 1 Biorad-kontrol 2 eller Calibrator 1( ) Calibrator 2( ) eller Med spalte Med spalte eller til Biorad kt Med spalte eller til Biorad kt Control level 1 Control level 2 eller med spalte (Cal. 1 + Cal. 2) Når første Rack er klar og apparatet er i Ready, startes apparatet: Tryk RUN - Tryk evt. Work-list. Tryk Start. Tryk dine initialer i operator ID. Tryk Start. Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 6 af 75

17 HÆM-AN56 Hemoglobin A1c Variant II Turbo 20, Biorad Aa Dato Initialer De næste racks gøres klar: patientprøver, kontrol for hver prøver. Se skema ovenfor. 4.4 Placering af kontroller Der analyseres kontrol for ca. hver prøver. Dagens serie sluttes altid med en kontrol. Der skelnes mellem 3 hold af kontroller: 1. Calibrator 1( ) og calibrator 2( ). Opbevares på køl. Opløses efter behov. 2. BioRad kontrol 1 (LC-Low) og BioRad kontrol 2 (HC-High). Opbevares ved 80 C 3. Patientprøvekontrol i 2 niveauer (dag - dag kontroller). Medtages en gang dagligt. Niveau HbA1C ca. 31 mmol/mol = ca. 64 mmol/mol = Dag - dag kontroller findes i dagens serie, fra Turbo 1(samme apparat hver dag). 4.5 Placering af rack Rack placeres altid med racks nr. fremad. Fyld op i højre side og derefter i venstre side (se foto), maks. 10 racks. Højre side 6 racks - venstre side 4 racks. 4.6 Afslutning af serie For at slutte en serie: Adaptoren STOP sættes i, eller et tomt Rack sættes som afslutning på serien. Efter analysering af den sidste prøve, går systemet automatisk over i ready state. Efter 30 minutters pause, påbegynder systemet automatisk et kort vaskeprogram, lukker temperaturen og detektorlampen ned. Apparatet går derefter over i inaktiv status. 4.7 Start og stop af apparat Start af apparatet efter INAKTIV I øverste venstre hjørne står Variant II T # 1 V2Turbo_A1C inaktiv. Tryk på MAINTAIN. Tryk på RETURN TO READY state eller ACTIVE Tryk på NO. Tryk DO Startup Actions (fra rullelisten i Execute Commands) Tryk START Apparaturet udfører nu en opstart (varer 6 minutter). Når proceduren er færdig efter 6 minutter ses teksten Ready i feltet Variant II T #1 i øverste venstre hjørne, dvs. apparatet er klar til opsætning af prøver. Ved opsætning af prøver efter INAKTIV startes altid med en blankprøve og en kontrol. Start af apparat efter MANUEL Hvis apparatet efter et problem er gået i status manuel: I øverste venstre hjørne står Variant II T #1 V2 Turbo_A1C manual. Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 7 af 75

18 HÆM-AN56 Hemoglobin A1c Variant II Turbo 20, Biorad Aa Dato Initialer Tryk på feltet. Tryk på RETURN TO READY STATE eller Active STATE Tryk på OK x 2 Når proceduren er færdig, ses teksten: READY eller PAUSED i feltet Variant II T #1 V2 Turbo_A1C. Analyseringen kan fortsætte med blankprøve(vigtigt), derefter sidst kørte prøve, som kontrol. Bemærk om der er prøver, der ikke er analyseret. Tryk på RUN og evt. WORK LIST. Lysfyret lyser gult eller grønt Tryk på lysfyret Tryk på CONTINUE eller START Start af apparat efter PAUSED Hvis apparatet er gået i status pause: I øverste venstre hjørne står Variant II T # 1 V2Turbo_A1C paused. Hvis rack står i apparat til analysering: Tryk på RUN og evt. WORK LIST. Lysfyret lyser gult. Tryk på lysfyret. Tryk på STOP: Racket køres ud. Tryk evt. på STOP igen for at få Variant II Turbo til at stoppe med det samme Analyseringen kan fortsætte med blankprøve, derefter sidst kørte prøve, som kontrol. Bemærk om der er prøver der ikke er analyseret. Start apparat: Se start af apparat efter manuel ovenfor. Hvis rack til analysering er kørt ud: Tryk på RUN og evt. WORK LIST. Lysfyret lyser gult. Tryk på lysfyret. Tryk CONTINUE Analyseringen kan fortsætte med blankprøve, derefter sidst kørte prøve, som kontrol. Bemærk om der er prøver der ikke er analyseret. Start apparat: Se start af apparat efter manuel ovenfor. Stop en kørsel En kørsel kan stoppes ved enten at initiere en pause eller et stop. Tryk på Run Tryk på lysfyret (start/stop) Tryk på STOP Apparatet vil lukke ned og gå i inaktiv, manuel eller Ready. For at fortsætte kørslen, se: Start af apparat efter inaktiv eller manuel. Bemærk at sidste prøve mistes og må køres om. Tryk evt. på STOP igen, hvis apparatet skal stoppe med det samme. Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 8 af 75

19 HÆM-AN56 Hemoglobin A1c Variant II Turbo 20, Biorad Aa Dato Initialer Pause en kørsel Tryk på lysfyret (start/stop). Tryk på PAUSE. Apparatet vil nedsætte flowhastigheden til 0,2 ml/min. For at fortsætte kørslen, se startapparatet efter PAUSED. Bemærk at sidste prøve mistes og må køres om. 4.8 Påfyldning af reagens Kan foretages under analysering ved hjælp af tragt. Kontrollér, at slangerne når bunden. Slangerne må ikke tages op. 4.9 Skift af reagens Reagensflaskerne kan skiftes når Flow står på 0 ml/min. Reagenset vendes forsigtigt, inden det sættes på instrumentet. Under en kørsel: Tryk STOP i Run/Work-list billede. Tryk Pause. Vent til der står Pause i Variant II billedet. Bemærk, at Flow er 0,2 ml/min. Skift reagens. Tryk Continue. OBS: Den sidste prøve mistes og må køres om. 5. Kontroller: (Fremstilling, se R-blad 3 af 3) Biorad kontrol 1 og 2 medtages minimum 1 gang daglig. Calibrator 1, labka nr og calibrator 2 labka nr medtages 1 gang daglig i adaptor med spalte. Dag-dag kontrol: lav (ca. 31 mmol/mol) labka nr og mellem (ca. 64 mmol/mol) labka nr medtages minimum 1 gang daglig. Findes i dagens kørte prøver på Turbo 1. Kontrolregler: Omkørselsregel: 1:3 SD Dvs. hvis 1 resultat ligger udenfor 3 SD. Analyseserien forkastes og der genanalyseres. Advarselsregel: 4:1SD Dvs. hvis 4 på hinanden følgende resultater ligger udenfor 1 SD. Analyseserie godkendes. Årsag findes, problemet løses fremadrettet. Ekstern kontrol: 5 gange om året modtages to eksterne kontroller fra Labquality, måned 2,4,6,8 og 10. Analyseres helst samme dag som de er modtaget. Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 9 af 75

20 HÆM-AN56 Hemoglobin A1c Variant II Turbo 20, Biorad Aa Dato Initialer Kontrollerne modtages i Labka og rekvisitionerne printes inden analysering. Rekvisitionerne ligger forudbestilt som kontrol med cpr.nr A27K. Udskriv de rekvisitioner(6 stk.) med den laveste dato. Husk at rette dato til: modtage dato for kontrol. Forsyn de fortyndede kontroller med tilhørende stregkode. I note felt på rekvisitionen er angivet hvilket apparat og kontrol (ret evt kontrol nr.) stregkoden tilhører. Kontrollerne analyseres i dobbeltbestemmelse på begge apparater. Samtidig analyseres kalibratorer fra DEKS som opbevares ved -80 grader. Svarene noteres på kopi af svarark medsendt fra labquality eller på rekvisitionssedlerne. Afdelingsbioanalytiker eller fagspecialist kontaktes mht. aflevering af svar til labquality. Regionskontroller: En gang pr måned udsendes 2 kontroller til regionens sygehuse i samarbejde med koagulation. Se specialvejledning i mappe regionskontroller. DEKS kalibratorer: DEKS L, M, H kalibratorer medtages ved behov: ca. 1 gang pr måned, ved kørsel af ekstern kontrol fra Labquality og ved reagens lot nr. skifte. Skrives på kontrolskemaer. 6. Kalibrering: I et rack placeres en Blank og en prøve (Dag-dag kontrol fra dagen før) og derefter Kalibrator 1 og 2 i adaptor mærket henholdsvis calibrator 1 og calibrator 2. Ved kalibrering i dagens serie sættes Calibrator 1 og 2 i adaptor mærket henholdsvis calibrator 1 og calibrator 2 i stedet for 2 prøver, blank ikke nødvendig. Analysér derefter Biorad kontrol 1 og 2 eller dag til dag kontrollerne, derefter prøver. Efter analysering af calibratorerne beregnes slope og intercept automatisk. Gem udskrifterne i mappe minimum 1 år. Der kalibreres ved ibrugtagning af ny kolonne eller hvis kontrollerne ligger uden for 3 SD. 7. Beregning, resultatvurdering og svarafgivelse: Kontrollerne føres på blåt kontrolskema. Kontrolregler 1:3SD, omkørselsregel. 4:1SD, advarselsregel. Analysen er lineær fra 15 mmol/mol til 184 mmol/mol HBA1C. Prøver < 15 mmol/mol og > 184 mmol/mol - kontakt afdelingsbioanalytiker. 7.1 Eksempel på identifikationsvinduer(peak table) Kan varierer ved nyt lot reagens. Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 10 af 75

21 HÆM-AN56 Hemoglobin A1c Variant II Turbo 20, Biorad Aa Dato Initialer Retentionstiden er målt fra tiden for prøvens injektion til maksimalpunktet for hver prøve. Den aktuelle peak table findes i Set-up, test, peak table. Som afslutning på en serie, udskrives en Summary Report indeholdende prøvens: Injektionsnr., Rack ID, Tube nr. (placering i Rack). Type: PR = primer. BL = blank, C = calibrator, LC og HC =Biorad kontroller, P = prøve, Lotnr./sample ID = prøvens LABKAnr. eller lotnr på Biorad 1 og 2, Total-area = Total areal, A1c (IFCC) = koncentration af prøvens HbA1c i mmol/mol, Variant Window (%) = koncentrationen af Hb variant E, D eller S i %, HbC % = koncentrationen af evt. HbC i %. Eksempel: Totalt areal skal ligge mellem og Er dette ikke tilfældet, markeres det med *, prøven køres om se nedenfor. 7.2 Omkørsler (på grund af areal) Veneblodsprøver analyseres igen. Mikroprøver tilsættes mere wash, hvis arealet er > Er arealet stadig markeret med *, genanalyseres prøven i manuel fortynding (se punkt 4.1) eller anden fortynding (manuelt). Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 11 af 75

22 HÆM-AN56 Hemoglobin A1c Variant II Turbo 20, Biorad Aa Dato Initialer Areal < 1 mill, f.eks. 8 μl blod μl wash/diluent solution. Areal > 3,5 mill., f.eks. 4 μl blod μl wash/diluent solution. 7.3 HbA1C-koncentration kurvevurdering Prøven < 27 og > 108 mmol/mol markeres med *. Undersøg om prøven bør gentages, når HbA1c <20 eller >108 mmol/mol, ved at vurdere patientens øvrige tal. HbA1c <27 mmol/mol vurdér kromatogram en ekstra gang. Nedenstående vurderes og kommentarer noteres på svararket under comments. Se kurvevurdering med eksempler til de enkelte punkter i Bilag 4, B-blad side Hvis LA1c toppen er højere end A1c toppen og de er dårligt adskilt, sendes prøven til Thisted til analysering.(formentlig Hb-Athens), der laves sendeliste. HbA1c målt på Turbo afvises. Kromatogram arkiveres med svar fra Thisted påskrevet, uden navn og CPR nr. Prøver med skulder: Hvis HbA1c er mindre end 44 mmol/mol og større end 53 mmol/mol kan HbA1c analyseret på Turbo afleveres. Hvis HbA1c er fra mmol/mol sendes prøven til Thisted til analysering, der laves sendeliste. HbA1c målt på Turbo afvises. Kromatogram arkiveres med svar fra Thisted påskrevet, uden navn og cpr nr. Brede toppe og høj grundlinje(måles for høje) sendes til Thisted uden sendeliste. Måles i Thisted på immunologisk metode (DCA) og Tosoh (HPLC). Specielt følgebrev medsendes, se bilag 6, da vi selv afleverer svar. Svaraflevering kontakt afdelingsbioanalytiker eller fagspecialist for svaraflevering, når Thisted har faxet svar tilbage. Kromatogram gemmes i mappe Problemprøver. Prøver med normale resultater < 44 mmol/mol skal normalt ikke sendes. Kurven vurderes evt. af afdelingsbioanalytiker eller fagspecialist. Top F: Ved HbF > 4 % (areal). HbA1c svaret kan afleveres, HbF afleveres som intern prøvekommentar. HbF x %, hvor x (helt tal) er den aktuelle % (i helt tal) for HbF. Undersøg derefter om patienten er kendt med HbF. Hvis det er en kendt patient afleveres HbF kun første gang den findes. Hvis patienten ikke er kendt kontakt afdelingsbioanalytiker/fagspecialist/læge for området, idet kurven og patientdata tages fra, til vurdering af om HbF skal afleveres. HbF tilføjes evt. senere, hvis det vurderes af læge at den skal afleveres, som ekstern prøvekommentar: Der er fundet en HbF, der udgør x%(helt tal) af total Hb. Kromatotogram arkivers i mappe. Hvis HbF er større end 25 % kan HbA1c ikke afleveres. Standardsvar: Se note. I ekstern prøvekommentar tilføjes: HbA1c måles ikke korrekt da HbF er XX %, XX % rettes til aktuelle HbF koncentration. Top HbA1c. Dårlig adskillelse. Køres om evt. på den anden Turbo. Sendes evt. til Thisted. HbA1c-værdi <27 mmol/mol, hvis kromatogram er normalt tilføjes ekstern prøvekommentar: Lav Hba1c, kan forårsages af nedsat erytrocytlevetid eller blødning. Søg i ekstern prøvekommentar på: lav hba1c eller i referencekode på lha. Kromatogram arkiveres i mappe Hba1c < 27 mmol/mol uden navn og cpr nr. Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 12 af 75

23 HÆM-AN Hemoglobin A1c Variant II Turbo 20, Biorad Aa Dato Initialer Top P3/P4>10% eller top P3>5% ved hæmoglobinvariantprøver, kontakt afdelingsbioanalytiker eller fagspecialist. Kan evt. betyde at det er en gammel prøve. Der bedes evt. om ny prøve. Kan også betyde at der er en ukendt Hb-variant. Top i variantvindue (E, D eller S): HbA1c svaret afleveres, ekstern prøvekommentar tilføjes: Der er fundet en Hb-variant, formentlig HbE, HbD eller HbS, der udgør XX (helt tal) % af total Hb. For yderligere undersøgelse kan Hb-type rekvireres. Kommentaren søges i ekstern prøvekommentar, Tryk Opslag: Søg i referencekode på forkortelsen ha1. xx% rettes til aktuelle % for varianten(helt tal). Fund af Hb variant afleveres hver gang den observeres. Kromatogram arkiveres 1. gang der observeres hb-variant. Kontakt evt. afdelingsbioanalytiker/fagspecialist. Hvis Hb-varianten er >60 % kan HbA1c ikke afleveres. Kromatogram arkiveres i mappe uden navn og CPR nr. Top C: Som Top i variantvindue, se punkt 8. Kommentaren søges i ekstern prøvekommentar, Tryk opslag: Søg i referencekode på forkortelsen Ha2 slettes-(eller søg i forkortelse på forkortelsen HbC). xx% rettes til aktuelle % for HbC. Kromatogram arkiveres i mappe uden navn og CPR nr. Grundlinjen viser drift. Prøven køres om. Øvrige uregelmæssigheder og tvivl kontakt afdelingsbioanalytiker. Brede toppe: mange brede toppe kan skyldes dårlig kolonne. Prøver der skal sendes til Thisted sættes normalt på sendeliste. Thisted afleverer svaret når prøven er kørt. I specielle tilfælde afleveres svar af Hba1c Aalborg, når der er kommet svar fra Thisted. 7.4 Svar aflevering HbA1c afleveres i Labka II som en liste: Hb(B)-Hæmoglobin A1c(IFCC)= HbA1Ci P-Glucose, middel(fra HbA1c)= EAG Efter resultatvurdering kan svar afleveres via Labka II. Resultatet udskrives som mmol/mol (IFCC) i summary report. Dette afleveres i Labka II. HbA1C(IFCC) bliver afleveret fra Variant II Turbo til Labka ll efter hver injektion. Der beregnes automatisk eag, efter godkendelse af HbA1c(IFCC). Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 13 af 75

24 HÆM-AN56 Hemoglobin A1c Variant II Turbo 20, Biorad Aa Dato Initialer 7.5 Sammenhæng mellem HbA1c værdier Se endvidere Bilag 3 Tabel fra laboratorievejledningen. 7.6 Aflevering af svar i LABKA II Tryk på analyseplads. Tryk på godkendelse(f7). Vælg arbejdsplads - koagulation. Leverandør: Turbo 1, Turbo 2 eller Turbo 3 Svar der er klar til aflevering markeres og der trykkes Godkend. HbA1ci og eag beregnes, når der trykkes Godkend, markér beregningerne og godkend dem. Tryk evt. opdater og godkend resten af beregningerne. Kontrollér at alle resultater er overført til LABKA II (positionsnr. i højre kolonne). Kontroller: Værdierne fra (Calibrator 1) og (calibrator 2) samt og godkendes i Labka ll, hvis de er i orden(kontrolskema). Biorad I og Biorad II resultaterne afvises. Omkørsel: Hvis der er svar der skal køres om eller sendes til Thisted, markeres disse og der trykkes på afvis(gentest). Rettelse af ikke læste numre: Højreklik på prøvenummer og vælg ret prøvenr. Det rigtige prøvenummer indtastes. Søg tidligere svar på patient: Marker linje med resultatet. Højreklik og vælg vis, vis svar (kumuleret svar). Her ses evt. tidligere svar. Numre der er sendt manuelt via LIS på Turbo, overføres til sidst eller midt i den serie, der kører. Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 14 af 75

25 HÆM-AN56 Hemoglobin A1c Variant II Turbo 20, Biorad Aa Dato Initialer Kontroller: Værdierne fra (cal 1) og (cal2) samt og (D-D prøverne) overføres til Labka. Manuel aflevering af svar: Tryk analyseplads. Tryk manuel resultatindtastning. Vælg leverandør og arbejdsplads: Koagulation, type: instrument, navn: Turbo 1, Turbo 2 eller Turbo 3. Vælg pr. prøve. Indtast prøvenr. Tryk SØG. Tryk INDTAST SVAR. Resultatet indtastes i mmol/mol under HbA1ci. EAG beregnes automatisk, godkendes i godkendelsesbilledet til Turbo 1/Turbo 2, eller autogodkendes. 7.7 Overførsel af mistede resultater til LABKA via Data Tryk data Tryk select Vælg All in run selection Vælg All in sample selection Tryk view run Tryk på det run nr. der ønskes prøver overført fra. I feltet: From inj#: Indtast injektions nr. på første prøve der ønskes overført. I feltet: To inj#: Indtast injektionsnr. på sidste prøve der ønskes overført. Tryk export to lis. Resultaterne overføres samlet uden rack nr. identifikation. 7.8 Mangelliste Mangelliste tages ud indtil foregående dag til kl Mangelliste laves inden kl , da gamle hæmatologiprøver bliver smidt ud kl Vælg analyseplads Vælg mangleliste Vælg faneblad gruppe Søgekriterier: Vælg søg sluttid. Foregående dag Vælg arbejdsplads Vælg koagulation/hba1c Vælg variant/turbo HbA1C Vælg vis eller udskriv Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 15 af 75

26 HÆM-AN56 Hemoglobin A1c Variant II Turbo 20, Biorad Aa Dato Initialer Hæmatologiprøver: ADVIA 4 (Syd) ADVIA 6 (Syd) ADVIA 8 (Syd) ADVIA 7 (Nord) 8. Referenceinterval: Hb(B)-Hæmoglobin mmol/mol A1c(IFCC): P-Glucose, middel(fra HbA1c): 5,4-7,3 mmol/l Hb(B)-Hæmoglobin 0,050-0,062 A1c(DCCT): Afleveres ikke fra den 7. januar 2013 Rettet 1. oktober 2006 i forbindelse med LABKA II, ansvarlig N. J. Christensen, Århus, Tage Hansensgade Klinik: Glykeret hæmoglobin (hemoglobin A1c): Siden begyndelsen af 1980'erne har muligheden for at måle mængden af glykeret hæmoglobin og den øgede selvmonitorering af blodglukose stort set overflødiggjort måling af uringlukose. Glykeret hæmoglobin (HbA1c) er den delmængde (fraktion) af hæmoglobinet, hvor glukose eller glukose-deriverede produkter er bundet. Mængden af glykeret hæmoglobin afspejler det integrerede (gennemsnitlige) blodglukose over de forløbne 6 uger. Normalområdet for hæmoglobin A1c hos individer uden diabetes er 0,050-0,062. Som tommelfingerregel kan det gennemsnitlige blodsukker-niveau beregnes som aktuel HbA1c % x 2 minus 6. Tabel 2: Kilde: Bayer Diagnostica. Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 16 af 75

27 HÆM-AN56 Hemoglobin A1c Variant II Turbo 20, Biorad Aa Dato Initialer Tabel 3 (Indført ) Behandlingsmålet for den metaboliske langtidsregulation er HbA1c på 0,075. Dette mål må ofte lempes, f.eks. på grund af hypoglykæmitendens. Ved type I diabetes anbefales kontrol af HbA1c hver 3. måned og ved type II diabetes hver 3. til 12. måned. Tilstande med nedsat erythrocytoverlevelse (blødningsanæmi og hæmolyse), og nefrotisk syndrom samt graviditet giver anledning til relativt for lave hæmoglobin A1cværdier pga. erytrocytternes forkortede levetid. Prøver fra patienter med polycytæmi eller efter splenektomi kan vise forhøjede HbA1c værdier pga. erytrocytternes forholdsvise længere levetid. Forekomst af abnorme hæmoglobin-varianter (HbS, HbC og HbF) kan påvirke HbA1cværdien, men vil blive bemærket under analysen med det udstyr, der anvendes på FBE Klinisk Biokemi Syd, Aalborg Sygehus. Se endvidere bilag 5 med faktorer som kan influere på Hba1c og dets måling. Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 17 af 75

28 HÆM-AN56 Hemoglobin A1c Variant II Turbo 20, Biorad Aa Dato Initialer 9.1 Dannelse af HbA1c Hb + glc La1C Hba1c Dannelse af Schiff base (LAIc) er direkte proportional med glucosekoncentrationen i blodet. Koncentrationen af HbA1c afhænger af både glucosegennemsnitskoncentrationen og erythrocytoverlevelsen i cirkulationen. HbA1c dannes i 2 trin ved en ikke enzymatisk glykering af HbA. Første trin er dannelsen af ustabilt aldimin (shiffs base, labilt A1c/ præ-a1c), en reversibel reaktion mellem glukosens carbonylgruppe og N-terminalen valin på Hb s beta-kæde. Dannelse af labilt A1c er direkte proportional med blodglucosekoncentrationen. Under cirkulation af erytrocytter omdannes en del af det labile A1c (Amodorirearrangement) til et stabilt ketoamin, HbA1c. 10. Interferens og fejlkilder: Ukendte/unormale Hb varianter kan influere på Hba1c målingen og give forkert Hba1c værdi. 11. Dataopbevaring: Arbejdsliste med resultater gemmes i ringbind under dato, minimum en måned. Kurver gemmes i tidsskriftskasette i 1 uge. Manuelt indtastede svar gemmes 5 år. Kontrolresultater gemmes 10 år. Kalibreringsresultater gemmes i 1 år. Databasen tømmes når der kommer en meddelelse derom på apparaturskærmen. Resultaterne overføres til CD-R. Se bilag 1. Gemmes i 10 år. Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 18 af 75

29 HÆM-AN56 Hemoglobin A1c Variant II Turbo 20, Biorad Aa Dato Initialer 12. Tekniske bemærkninger: 12.1 Udprint en ny arbejdsliste Tryk Data. Tryk Select Vælg All i Run selection og Sampel selection. Tryk View Run. Tryk på det Runnr., der skal udprintes. Tryk Print 12.2 Udprint af et prøvesvar eller se om prøverne er kørt Tryk Data. Tryk Select. Instrument Selection: Kun Instrument # 1 skal være markeret. Run Selection: All skal være markeret. Tryk i By Sample ID eller By Injection og indtast enten prøvenr. eller injektionsnr. Tryk View Sample. Tryk Print 12.3 Udprint af flere prøvesvar Tryk Data. Tryk Select. Instrument Selection: Kun instrument # 1 skal være markeret. Run Selection: All skal være markeret. Sample Selection: All skal være markeret. Tryk View Run. Markér det run number i øverste boks, hvori prøven er kørt. Tryk View Sample. Tryk Print. Tryk i feltet: From inj#, skriv injektionsnr på første og sidste prøve der ønskes udskrevet. Tryk OK Udprint af kalibreringsrapport Tryk Data. Tryk Select Vælg All og All Tryk view run Tryk på den ene af calibratorerne I den nederste boks(joblisten hvor der er kalibreret) Tryk view sample Tryk print Vælg calibration summary report Tryk OK Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 19 af 75

30 HÆM-AN56 Hemoglobin A1c Variant II Turbo 20, Biorad Aa Dato Initialer 12.5 Installering af ny kolonne og forfilter med samme batchnr. Anvendelse af Variant II Turbo kræver et forfilter og en analytisk kolonne til prøveanalyse. Hver kolonne har en kapacitet på minimum 2500 injektioner, der er reagens til kørsel af ca injektioner. Når 2500 eller injektioner er nået, kommer en meddelelse på skærmen, men analyseringen fortsætter. Hver forfilter har en kapacitet på minimum 500 injektioner. Hvis trykket stiger til omkring 100 kg/cm2 vurderes om filtret skal skiftes. Når 500 injektioner er nået komme en meddelelse på skærmen, men analyseringen fortsætter Procedure ved skift af forfilter/prefilter Hvis kun forfiltret skal skiftes skal/kan apparatet stå i ready eller inaktiv. Efter skift af forfilter/prefilter startes serien direkte med blank og kontroller Opdatering af ny forfilter/prefilter Tryk SET UP Tryk TEST Tryk Cartridge Tryk på pilen ud for YES ud for det prefilter, der skal kasseres. Tryk NO i den ny rubrik der dannes. Tast prefilterets lot nr. (står på posen). Tryk på NO ud for det nye prefilter. Tryk på YES. Se punkt for skift af forfilter Procedure ved skift af kolonne 1:Fremstilling af primer til brug ved kolonne skift, se punkt Sæt apparatet i INACTIVE: Tryk MAINTAIN. Tryk MAKE INACTIVE. Vælg Normal TRYK YES Vent til der står INACTIVE i øverste venstre hjørne Opdatering af ny kolonne Tryk SET UP. Tryk TEST. Tryk Cartridge. Tryk på pilen ud for YES ud for den kolonne(a1c_turbo), der skal kasseres. Tryk NO i den ny rubrik der dannes. Tast kolonnens lot nr. (står på posen) i Lot # Tast serienr. Kolonnens serie nummer står på siden af kolonnen. Tryk på NO ud for den nye kolonne. Tryk på YES. Derefter isættes ny kolonne og/eller forfilter(vurder om filteret skal skiftes). Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 20 af 75

31 HÆM-AN56 Hemoglobin A1c Variant II Turbo 20, Biorad Aa Dato Initialer Isætning af kolonne og/eller forfilter Skift af forfilter/prefilter Følg punkterne 1, 2, 3, 5, 6, og 7. Forfilter 1. Åben lugen til Chromatografen (VCS). Find kolonnens termomodul i midten af VCS en. Lås op for varmedøren ved at dreje håndtaget en kvart omgang. Åben dækslet, og lad det hvile til venstre. 2. Løft kolonneholderen ud af klipsene. Løsen skruen øverst i kolonneholderen(udløbshætten). Grib fat i holderens nederste del(indløbshætte) samt den beige konnektor (peak-kabinet), og drej den med uret for at fjerne den fra den beige konnektor. Fjern forfiltret. Lad forfilteradaptoren i rustfrit stål blive siddende i holderens nederste del. Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 21 af 75

32 HÆM-AN56 Hemoglobin A1c Variant II Turbo 20, Biorad Aa Dato Initialer 3. Åben posen med den nye forfilter. Tryk forfilteret godt ned over forfilteradaptoren i holderens nederste del. Forfilteret kan installeres i begge retninger. Skru peekkabinet og indløbshætten sammen igen. Kolonne Grib fat i den beige konnektor(peek-kabinet) og udløbshætten(del 1), og drej den med uret for at fjerne den fra toppen af holderen. Fjern analysekolonnen. Fjern lågene fra den nye analysekolonne. Placer kolonnen, med pilen pegende i flowretningen (nedefra og op efter), i den beige konnektor. Skub kolonnen ordentlig på plads i den beige konnektor. Skru udløbshætten(del 1) fast over kolonnen på den beige konnektor Fælles Skruen øverst i kolonneholderen(udløbshætten) skrues fast igen. Placer kolonneholderen i klipsene indeni termomodulblokken, og kontroller, at opløsningslinjerne hviler i rillerne (se figur 3-14). Hold opløsningslinjerne øverst i rillen, og luk termoduldækslet. Drej håndtaget med uret for at låse varmedøren Variant II Turbo sættes i aktiv Tryk på Maintain Tryk return to Ready State eller active Tryk no Vælg do start-up actions fra rullelisten Execute commands Tryk Start, kontrollér om der er utætheder. Apparaturet udfører nu en opstart(varer 6 minutter). Når proceduren er færdig ses teksten Ready i feltet Variant II T # 1 i øverste venstre hjørne. Kolonnen er nu klar til priming og calibrering: Priming og kalibrering af kolonne efter skift af kolonne Afpipettér ca μl primer i 2 mikrorør. Fremstilling af primer, se nedenfor. Placér dem i adaptor, mærket primer i position 1 og 2. I de næste 3 positioner sættes dest. H2O. Næste position 1 BLANK, 1 dag til dag kontrol, Calibrator 1 og 2 i kalibreringsadoptor, derefter Biorad 1 og Biorad 2 i kontrol adaptor, samt patientprøver, se skema nedenfor. Tryk RUN Tryk START Sæt flueben i Automatic Priming feltet. Vigtigt for at man kan prime og kalibrere i en procedure Tryk START Vurdér kalibrerings og kontrolresultater Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 22 af 75

33 HÆM-AN56 Prøverørs position Hemoglobin A1c Variant II Turbo 20, Biorad Aa Dato Initialer Adaptoretiket Prøve Primer Primer Adaptor med spalte Adaptor med spalte Adaptor med spalte Blank Rekonstitueret fuldblodsprimer (1 ml) Rekonstitueret fuldblodsprimer (1 ml) Destilleret H2O Destilleret H2O Destilleret H2O Fortyndet prøve (1 ml) Dag til dag kontrol Calibrator 1 Calibrator 2 Biorad kontrol 1 Biorad kontrol 2 Prøver incl kontroller Calibrator level 1 Calibrator level 2 Control level 1 Control level Fremstilling af primer Primer opbevares i køleskab Når stuetemperatur er opnået: Tilsæt 1000 μl destilleret H2O Lad glasset stå 10 min. ved stuetemperatur Vend glasset forsigtigt nogle gange, så materialet blandes Opløsningen er klar til brug Holdbar 1 døgn i køleskab Fremstilling af calibratorer HbA1c calibratorer level 1 og 2 opbevares i køleskab. Når stuetemperatur er opnået: Tilsæt 7,0 ml (2 X 3,5 ml) calibrator diluent (kold, temperatur underordnet) Lad calibratorerne stå 2 min. Blandes derefter grundigt (slettet) 3-5 min. Calibratorerne er derefter klar til brug Fordeles i mikrorør (Biorad) af min. 690 μl (10 stk.) Holdbarhed: 20 dage i køleskab (egen undersøgelse) Skift til nyt batchnr. Apparatet sættes i inactiv Tryk Set up Indsæt medfølgende cd-rom i cd- drevet Tryk Update Kit Tryk Drives. Vælg e: Vælg den test der skal opdateres(v2turbo_a1c) Tryk OK Tag CD-rom ud igen. Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 23 af 75

34 HÆM-AN56 Hemoglobin A1c Variant II Turbo 20, Biorad Aa Dato Initialer Kalibrator 1 og 2 værdier: kontrollér at værdierne passer med paknings insert. Tryk set-up, tryk sampletypes, tryk calibrator Skift kolonne, evt. forfilter(afhængig af antal injektioner) og reagenser Turbo sættes i Ready, se punktet start efter inaktiv. Systemet skylles med de nye reagenser. Set-up, test, cartridges, start systemflush vælg den korte skylning Nyt lot calibratorer tages i brug. Følg punkt 12.12: Priming og kalibrering af kolonne efter kolonneskift. Brug nyt lot calibratorer. Medtag DEKS kalibratorer L, M og H Vedligeholdelse Vedligeholdelse dagligt Skyl stempel/forseglingsvaskeport. Fyld sprøjten på 10 ml med demineraliseret vand. Indsæt sprøjten i stempel/forseglingsvaskeporten. - se billede. Tryk langsomt sprøjtestemplet i bund, indtil al væske er dispenseret. Lad vandet blive i linjerne. Kontrollér antal injektioner på kolonnen og forfiltret Tryk set-up. Tryk Test. Tryk Cartridges (colonne) - notér på vedligeholdelsesskema, hvor mange injektioner, der er udført på kolonnen(a1c_turbo) og prefilter(forfilter). Se endvidere vedligeholdelsesskema. Vedligeholdelse hver 14. dag FORSIGTIG! Prøvenålen er meget spids. Håndter nålen forsigtigt så skader undgås. ADVARSEL! Nålens dør er blokeret. Når nålen skal udskiftes, vil låsekontakten slukke strømmen på nålesamlingsenheden. Rengør fortyndingskammeret på VSS en Sluk for Variant II Turbo prøvestationen (VSS) Fjern nåldøren. Skub nålophænget tilbage, væk fra fortyndingskammeret. Rens fortyndingskammeret med vatpinde og demineraliseret vand. Fjern partikelrester ved at fylde kammeret med demineraliseret vand. brug herefter vatpinde til at rense og opsuge partikelrester. Sæt nåldøren på igen. Tænd for VSS, vent til prøvetageren færdiggør opstart og skyllecyklus. Klik evt. på OK i CDM-feltet for kommunikationsfejl, prøvetager, nulstilling og racknulstilling, således af systemet returneres til Ready State. Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 24 af 75

35 HÆM-AN56 Hemoglobin A1c Variant II Turbo 20, Biorad Aa Dato Initialer Månedelig vedligeholdelse. Rensning af probe-slanger med hypochlorit Apparatet sættes i inaktiv. Fjern kolonnen og forfiltret med adaptor - erstat kolonnen med plastikkolonne (dummy) og plastikfilter (dummy). Tryk set up. Tryk test. Vælg testen decon_t i Select New Test. Slangen mellem detektoren og kolonneholderen skrues af. Dekontamineringsslange sættes på udgangsstudsen på kolonneholderen. Den anden ende af dekontamineringsslange sættes i beholder til opsamling af affald. Tryk i feltet Variant II T#1 V2Tubo_A1C. Tryk Return to aktiv - tryk yes. Placér 5 prøvekopper med 5 % natrium-hypoclorit opløsning i adaptorer i de første 5 positioner. Placér 5 prøvekopper med dest. vand i de sidste 5 positioner. Klargør 5 ml blanding af fuldblod i dest. H2O: 500 ul fuldblod + 4,5 ml dest. H2O. Placér 5 prøvekopper med 1 ml i hver af hæmolysatopløsningen i adaptorer. Sættes i nyt rack. Placér racket på prøvestationens højre bånd. Placér et tomt rack bagved. Når der står Ready, startes apparatet på vanlig vis. Når apparatet vender tilbage til Ready Status, er renseproceduren slut Tryk set up. Vælg V2TURBO_A1C I Select new test. Tryk OK. Tryk Maintain. Tryk Make Inactive. Fjern plastikkolonnen og plastikfilter, skyl kolonneholderen med dest. H2O og isæt originalkolonnen og filter med adaptor. Slangen mellem detektoren og kolonneholderen sættes på igen. Apparatet sættes i Ready. Analyseringen kan starte. Vedligeholdelse hver 2. måned Rengøring af stregkodelæser: (hvis kun dette foretages) Tag alle rack bort fra prøvestationen. Tag beskyttelseskappen af. Nu er stregkodelæseren synlig. Tør snavs og støv bort med linsepapir eller en blød pensel. Sæt beskyttelseskappen tilbage. Efter opstartprocessen er systemet klart til brug. Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 25 af 75

36 HÆM-AN56 Hemoglobin A1c Variant II Turbo 20, Biorad Aa Dato Initialer Rensning af ydre overflader Yder overflader aftørres med en fugtig klud, opvredet i vand. Rengøring af rack, special Hvis der er problemer med rackfremføring kan rack rengøres med sprit og derefter evt. smøres lidt med siliconefedt. ½ årlig vedligeholdelse Set klokken: Luk CDM ned Dobbeltclik på uret i højre hjørne Ret klokkeslæt Start CDM Vedligeholdelse ved lejlighed Tømning af database Der kommer en meddelelse om, at databasen er fyldt, dog tømmes databassen ved maks injektioner. Se vejledning bilag 1. Data overføres til CD-R. Data gemmes i 10 år. Rengøring af transportbånd Tage alle rack væk fra transportbåndet. Tryk Maintain i CDM. Tryk på pilen ud for Execute Commands. Vælg Cleaning Belts. Tryk Start. Transportbåndet starter og kan rengøres med en fugtig klud. Ved spild af blod kan transportbåndet aftørres med 50 % alkohol og derefter en klud, fugtet med vand. Tryk Stop. Rengøring eller udskiftning af nål Tryk Maintain i CDM. Tryk Sampler og vælg Replace Needle. Vent til nålen har flyttet sig, tag beskyttelseskappen bort. Skru slangen af, som sidder på nålen. Løft nålen af og rengør den i alkohol eller i ultralydsbad. FORSIGTIG nålen er meget spids. Håndteres så skader undgås. Sæt nålen tilbage (ny eller rengjort) med nålåbningen mod venstre. Sæt beskyttelseslåget på. Tryk Move Needle Home. Vælg at nålen skylles. Kontroller at nålen sidder korrekt under skylning. Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 26 af 75

37 HÆM-AN56 Hemoglobin A1c Variant II Turbo 20, Biorad Aa Dato Initialer Fejlmeddelelser Hvis trykket er ustabilt, kan det skyldes luft i systemet. Hvis der er luft i systemet, fjernes luft fra pumperne på følgende måde: Procedure1 ved luft eller problemer med grundlinjen Pumpe A (buffer A): Sæt 50 ml sprøjte på venstre ventil. Åbn ventilen og træk ml luft/buffer ud. Luk ventilen og fjern sprøjte. Kontrollér at trykket er stabilt. Må svinge maks. 2 kg/cm3 fra x. Hvis der stadig er luft: Udfør samme procedure for pumpe B (buffer B). Hvis der stadig er luft: Løsn fitting over ventilen. Se om der kommer luft ud. Slå evt. let på Askruen@. Skru fitting til igen. Kontrollér at trykket er stabilt. Hvis der stadig er luft: Løsn fitting over ventilen igen. Tryk Maintain Tryk Instruments Sæt Flow Rate til 2,2 ml For at fjerne luft i pumpe A (venstre), sættes % B = 0. For at fjerne luft i pumpe B (højre), sættes % B = 100 Pumpe A (buffer A): Sæt 50 ml sprøjte på venstre ventil. Tryk Start Flow. Åbn ventilen og træk ml luft/buffer ud. Tryk Stop Flow. Luk ventilen og fjern sprøjten. Kontrollér at trykket er stabilt. Må svinge maks. 2 kg/cm3 fra x. Hvis der stadig er luft sættes slange med fitting og sprøjte (værktøj) på, og luft trækkes ud, Se manual Procedure 2 ved luft eller problemer med grundlinje Turbo skal være i ready. Tryk Maintain Tryk open purge valve i feltet PUMP Flow rate 2,9 ml/min % B:50 Tryk start Flow Turbo kører buffer igennem systemet i 10 min uden om kolonnen. Gentages evt. Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 27 af 75

38 HÆM-AN56 Hemoglobin A1c Variant II Turbo 20, Biorad Aa Dato Initialer Efterfølgende kan der evt. køres buffer igennem kolonnen for at se at trykket er stabilt: Turbo i Ready Tryk Maintain Tryk close purge valve Flow rate 2,0 ml/min Tryk start flow Turbo kører buffer igennem systemet i 10 min. Observér at trykket er stabilt, +/- 3 kg/cm2 Start derefter kørsel af prøver Opstartsekvens efter strømsvigt Afbryd både VCS og VSS. Tænd for computeren. Lad computeren køre gennem den automatiske kontrolsekvens. Tryk på tasterne Ctrl + Alt + Delete samtidig for at logge på. Tryk på tasten Enter, når du bliver bedt om en adgangskode. På Microsoft -skrivebordet skal du dobbeltklikke på CDM-ikonet. Lad CDM indlæses. CDM sender en kommunikationsfejlbesked. Tænd for både VCS og VSS. Vent 3 minutter på, at alle moduler starter. På skærmbilledet RUN/worklist skal du klikke på knappen. Start/stop (hvis kørslen løber til End of Run Gradient, skal du lade den køre færdig og herefter genstarte kørslen ved næste prøve se skærmbilledet DATA/View Run. Ellers skal du klikke på knappen Continue for at genstarte kørslen). Bemærk: Der noteres intet kørselsnummer, hvis ikke prøven blev injiceret før strømsvigtet Fremgangsmåde til nedlukning af systemet efter funktonsmåden Fault (fejl) eller Manual (manuel) I situationer, hvor systemet ikke er blevet slukket på korrekt måde (f.eks. ved fejl i systemet, strømsvigt eller aktiviteter i manuel funktion), og brugeren ikke har planer om at starte en ny kørsel omgående, skal følgende nedlukningsprocedure udføres for at sikre optimal holdbarhed på kolonnen: Gå til skærmbilledet Maintain/Instruments (Vedligeholdelse/instrumenter) Indtast 0 for % B under Pump (Pumpe) Indtast 2.0 (ml/min) ofr Flow Rate (Flowhastighed) Indtast (min) for Flov Timer (Flowtimer) Klik på Start Flow Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 28 af 75

39 HÆM-AN56 Hemoglobin A1c Variant II Turbo 20, Biorad Aa Dato Initialer Når pumpen har gået i 10 minutter, klikkes der op knappen Make Inactive (Inaktivér) De nødvendige nedlukningsfunktioner udføres ved at klikke på Yes (CDM 3.6T) (Ja) eller Normal (CDM 4.0) fra dialogboksen. 13. Referencer: Brugervejledning variant II Turbo Hba1c kit 2,0, BioRad. 14. Princip: Variant II Turbo HbA1C programmet er baseret på ionbytningskromatografi med HPLCprincip. Prøverne fortyndes automatisk i prøvemodulet og injiceres til analyse på kolonnen. Kromatografimodulet(VCS) indeholder 2 pumper, der sørger for at buffer i en programmeret buffergradient af gradvis stigende ionstyrke og prøver sendes gennem kolonnen. De forskellige hæmoglobinformer separeres herefter på basis af deres ioniske vekselvirkning med kolonnematerialet. De adskilte hæmoglobiner passerer gennem en flow-celle, hvor forandringer i absorbansen måles af et filterfotometer ved 415 nm. Et andet filter korrigerer for baggrundsabsorbansen ved 690 nm. Clinical Data Management (CDM) software behandler rådata fra hver prøve. En to-punkts kalibrering anvendes og resultatet af HbA1c udskrives i % sammen med prøve identifikation og kromatogram. HbA1c toppen er skraveret. Det skraverede areal er beregnet ved anvendelse af det matematiske princip EMG (exponentially modified gaussian algoritme), som udelukker labilt HbA1c og carbamyleret Hb fra A1c top området. 15. Apparatbeskrivelse: Variant II Turbo, HbA1c program er baseret på chromatografisk adskillelse af HbA1c på en kationbytter kolonne. Adskillelsen er optimeret, således at interferens fra hemoglobinvarianter, -schiff-base og carbamyleret hemoglobin er elimineret. Variant II Turbo betjener sig af automatisk prøvefremføring (sysmex system) i rack á 10 prøverør. Max. 10 x 10 prøver - ved "walk away" håndtering. Der kan anvendes både primærrør og forfortyndede prøver i mikrorør. Begge typer rør kan læses af stregkodelæser. Glassene skal være tilproppede. Fuldblod fortyndes automatisk. Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 29 af 75

40 HÆM-AN56 Hemoglobin A1c Variant II Turbo 20, Biorad Aa Dato Initialer Analysetiden er på 97 sek. pr. prøve. Efter hver kørsel udskrives en arbejdsliste. Efter sidste prøve går apparatet over i pause. Hvis der efter 30 minutter ikke sættes flere prøver op, foretages automatisk rensning og nedlukning af programmet. EDB: Programmerne er baseret på Windows NT. Apparatet kan kobles 2vejs til LABKA II, men er koblet 1vejs til Labka II Rutine for hver prøveanalyse Følgende trin skal udføres for hver prøveanalyse: 1. Primære prøverør Stregkodeinformation for prøverøret aflæses af stregkodeaflæseren. Prøvenålen perforerer, hvorefter der udtrækkes prøve fra ampul. Prøven fortyndes i fortyndingskammeret. Prøven injiceres i bufferstrømmen. Prøvenålen og slangen skylles for at minimere krydskontaminering mellem prøverne. Prøve- og bufferblandingen strømmer gennem kolonnen, hvor prøven separeres i dens bestanddele. Prøvens bestanddele og buffer strømmer gennem detektoren, hvor absorbansen for hver prøvebestanddel måles. Det endelige chromatogram vises på CDM. En systemskylning fjerner eventuelle tilbagesiddende prøvekomponenter. 2. Præfortyndede prøver Stregkodeinformation for prøveampul aflæses af stregkodeaflæseren. Prøvenålen overfører prøve fra ampullen til fortyndingskammeret. Prøven injiceres i bufferstrømmen. Prøvenålen og slangen skylles for at minimere krydskontaminering mellemprøverne. Prøve- og bufferblandingen strømmer gennem kolonnen, hvor prøven separeres i dens bestanddele. Prøvens bestanddele og buffer strømmer gennem detektoren, hvor absorbansen for hver prøvebestanddel måles. Det endelige chromatogram vises på CDM. En systemskylning fjerner eventuelle tilbagesiddende prøvekomponenter. Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 30 af 75

41 HÆM-AN56 Hemoglobin A1c Variant II Turbo 20, Biorad Aa Dato Initialer Patientvejledning i prøvetagning til HbA1c Formål Vejledning af patienter i prøvetagning af HbA1c. Anvendelsesområde Patienter og personale tilhørende Diabetes Ambulatoriet, Medicinsk Endokrinologisk Afdeling, Aalborg Universitetshospital Diabetes Ambulatoriet, Børneafdelingen, Aalborg Universitetshospital Medicinsk Ambulatorium, Sygehus Himmerland, Hobro og Farsø Gynækologisk Ambulatorium, Aalborg Universitetshospital, Aalborg Universitetshospital Prøvetagning Blodprøven tages senest 1 uge før det aftalte besøg i diabetes ambulatoriet Se punkterne Vigtigt Det er vigtigt, at vejledningen følges nøje. Hvis prøven ikke er korrekt mærket kan den måske ikke analyseres. 1. Vask hænderne i varmt vand i ca. 3 min. og tør dem godt 2. Kuverten indeholder to beholdere. En beholder med klart låg, der indeholder et lille glasrør og en beholder med blå låg, der indeholder en klar uskadelig væske 3. Tag det lille glasrør ud af beholderen med det klare låg og kassér beholderen. 4. Prik på sædvanlig vis i en fingerspids (eller øreflip) med din fingerprikker 5. Tør første bloddråbe væk og fyld det lille rør helt op med blod (røret suger selv blodet op, når du holder det hen til bloddråben) Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 31 af 75

42 HÆM-AN56 Hemoglobin A1c Variant II Turbo 20, Biorad Aa Dato Initialer 6. Læg røret ned i beholderen med væske (blå prop) 7. Sæt proppen godt på og ryst grundigt, så blodet blandes med den væske, der er i beholderen. Det lille rør skal blive i beholderen. 8. Tag en stregkodeetikette (mrk. HbA1c) fra blodprøvesedlen og sæt den på langs af beholderen med blodprøven (blå prop). 9. Beholderen med blodprøven (blå prop) lægges ned i lommen i det absorberende materiale og læg det ned i plastposen. 10. Fjern den blanke beskyttelsesstrimmel fra plastposens øverste kant og pres den fast sammen. 11. Skriv dato på blodprøvesedlen i rubrikken: Tid 12. Læg plastposen med blodprøven og blodprøvesedlen i kuverten. 13. Post prøven senest et døgn efter prøvetagningen (søndag til torsdag) 14. Hvis prøven ikke sendes samme dag, opbevares den i køleskabet indtil forsendelse. Patientvejledning i prøvetagning til HbA1c Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 32 af 75

43 HÆM-AN56 Hemoglobin A1c Variant II Turbo 20, Biorad Aa Dato Initialer Reagensblad Variant II Turbo HbA1c kit 2,0, Reorder Pack (cat.no EX) fra BioRad. Hver reagenspakke indeholder materiale til analysering af 2500 prøver. Buffer A: 5 flasker á 2500 ml natriumperchloratbuffer, ph 6,0. Indeholder < 0,05 % Na-Azid som konserveringsmiddel. 1 flaske ~ ca. 500 injektioner. Ref.nr Opbevares ved C. Holdbarhed efter åbning: 30 dage. Buffer B: 1 flaske á 2000 ml natriumperchloratbuffer, ph 6,7. Indeholder < 0,05 % Na-Azid som konserveringsmiddel. 1 flaske ca injektioner. Ref. nr Opbevares ved C. Holdbarhed efter åbning: 90 dage. Forskellige lot af buffer A og B kan anvendes i et kolonneresin lot. Buffer og kolonneetiketterne er kodet med bogstav, der viser kompatibilitet. Et kompatibelt sæt buffere og kolonne har samme bogstavkode på alle etiketter. Kolonnesæt: 1 kationbytter kolonne, 4,6 mm indre diameter X 27,5 mm. Kapacitet op til 2500 prøver. 5 forfiltre til kationbytning. 500 analyser. Ref. nr Opbevares ved 2 8 C. Holdbarhed i instrumentet: Kolonnen: 90 dage. Hemoglobin A1C Calibratorer: 2 niveauer, 2 glas af hver. Kalibratorhætteglassene indeholder frysetørret humant hæmolysat med gentamycin, tobramycin og EDTA som konserveringsmidler. Rekonstitueret volumen 7,0 ml pr. glas. 1 flaske kalibrator fortyndingsvæske indeholder 100 ml desioniseret vand med < 0,05 % natriumazid som konserveringsmiddel. Ref. nr Opbevares ved 2-8 C. Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 33 af 75

44 HÆM-AN56 Hemoglobin A1c Variant II Turbo 20, Biorad Aa Dato Initialer Hemoglobin primer: 2 glas frysetørret humant hæmolysat med gentamycin, tobramycin og EDTA som konserveringsmidler. Ref. nr Rekonstitueres med 1,0 ml dest. H2O pr. glas. Opbevares ved 2-8 C. Prøveglas: 100 prøveglas á 1,5 ml med gennemtrængelig låg. CD: 1 CD med Variant II Turbo HBA1C kit 2,0 med lot.nr. informationer. Variant II Turbo kit 2,0 Wash/Diluent Solution: 4 flasker med 2500 ml deioniseret vand konserveringsmiddel. Ref. no Opbevares ved C. med <0,05 % Na-Azid som Holdbarhed efter åbning: 60 dage. Biorad kontroller: Lyphocheck Diabetes bilevel Control ref nr. 740, 6 x 0,5 ml, 2 niveauer. Ref. nr. 740x Bilevel minipak, 2 x 0,5 ml. Er fremstillet af humant fuldblod og indeholder konserveringsmidler og stabilisatorer. Leveres frysetørret. Opbevares på køl ved 2-8 C. Efter rekonstruktion holdbar 7 dage ved 2-8 C. Rekonstruktion se senere. Hemoglobin Capillary Collection System (HCCS): Ref.nr test pr. æske. Til udlevering til mikro-hba1c. Når der udleveres en æske udleveres samtidigt pose med 100 micro-centrifuge tubes. DEKS kalibratorer lav, mellem og høj: Bestilles 1 gang/år. Opbevares ved - 80 C. Efter optøning holdbar 48 timer ved 2-8 C.. Fortyndes som mikroprøver og fryses ved -80 C. Se endvidere produktcertifikat fra DEKS/MCA. Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 34 af 75

45 HÆM-AN56 Hemoglobin A1c Variant II Turbo 20, Biorad Aa Dato Initialer Oversigt over fremstilling af kontroller, calibratorer og primer Fremstilling af calibratorer: HbA1c calibratorer level 1 og 2 opbevares i køleskab. Når stuetemperatur er opnået: Tilsæt 7,0 ml calibrator diluent (kold, temperatur underordnet) (2 X 3,5 ml). Lad calibratorerne stå 2 min. Blandes derefter grundigt ved at rulle glassene 3-5 min. Calibratorerne er derefter klar til brug. Fordeles i mikrorør (Biorad) af min. 690 μl. Holdbarhed: 20 dage i køleskab (egen undersøgelse). Fremstilling af primer: Primer opbevares i køleskab. Når stuetemperatur er opnået: Tilsæt 1000 μl dest. H 2O. Lad glasset stå 10 min. ved stuetemperatur. Bland forsigtigt og grundigt inden brug. Opløsningen er klar til brug. Holdbar 1 dag i køleskab. Fremstilling af kontroller: Biorad 1 og 2: Opbevares i køleskab. Når stuetemperatur er opnået: Tilsæt 500 μl dest. H2O (brug vægt eller konstriktionspipette). Lad glassene stå 5-10 min. Bland grundigt ved at rulle glassene i ca. 3-5 min., for at sikre homogen opblanding. Lav fortyndinger i mærkede microrør (Biorad). 5 μl kontrol μl Wash/diluent eller 500 μl kontrol ml wash/diluent. Fordeles med 750 μl i bioradkopper mærket 1 og 2. Tilproppes og sættes ved 80 C. Holdbarhed: Måneder. Efter optøning skal de analyseres inden 2 timer. Dag-dag kontrol: Fra dagskørslen findes 2 prøver. Findes fra samme instrument hver dag(turbo 1). Lav ca. 31 mmol/mol Mellem ca. 64 mmol/mol Den fundne værdi skrives på etiketten, mærket med dato og respektive stregkodeetiket, kontrol lav ( ), kontrol mellem ( ). Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 35 af 75

46 HÆM-AN56 Hemoglobin A1c Variant II Turbo 20, Biorad Aa Dato Initialer Bilag 1 Tømning af database på Variant II Turbo 2,0 1a: Print Biorad kontrol resultater ud, da de bliver slettet. Sæt CD-R i cd-drev Udprint af Biorad kontroller Tryk data, Tryk QC DATA, Tryk Start Query Tryk Print, Tryk Print graph, Vælg den anden kontrol i feltet level options, Tryk print, Tryk print graph. Gemmes i mappe med kontrolresultater Tryk Ok Vent nogle minutter Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 36 af 75

47 HÆM-AN56 Hemoglobin A1c Variant II Turbo 20, Biorad Aa Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Dato Initialer Side 37 af 75

48 HÆM-AN56 Hemoglobin A1c Variant II Turbo 20, Biorad Aa Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Dato Initialer Side 38 af 75

49 HÆM-AN56 Hemoglobin A1c Variant II Turbo 20, Biorad Aa Dato Initialer 9: CD-R tages ud. Mærkes med dato og instrument nr., gemmes. Variant II Turbo 2,0 er klar til start igen. Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 39 af 75

50 HÆM-AN56 Hemoglobin A1c Variant II Turbo 20, Biorad Aa Dato Initialer Bilag 2 Check og vedligeholdelsesskema HbA1C I forbindelse med overførsel til Q-Pulse er bilag 2 taget ud og lagt for sig som "related document" HÆM-TI9 Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 40 af 75

51 HÆM-AN56 Hemoglobin A1c Variant II Turbo 20, Biorad Aa Dato Initialer Bilag 3 Tabel over sammenhængen HbA1C værdier Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 41 af 75

52 HÆM-AN56 Hemoglobin A1c Variant II Turbo 20, Biorad Aa Dato Initialer Bilag 4 Patient rapporter Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 42 af 75

53 HÆM-AN56 Hemoglobin A1c Variant II Turbo 20, Biorad Aa Dato Initialer Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 43 af 75

61 HÆM-AN56 Hemoglobin A1c Variant II Turbo 20, Biorad Aa Dato Initialer Punkt 3, Brede toppe høj grundlinie Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 51 af 75

64 HÆM-AN56 Hemoglobin A1c Variant II Turbo 20, Biorad Aa Dato Initialer Punkt 3 og 5, Bred toppe høje grunlinie, dårlig adskillelse Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 54 af 75

65 HÆM-AN56 Hemoglobin A1c Variant II Turbo 20, Biorad Aa Dato Initialer Punkt 4, HbF >4 % Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 55 af 75

66 HÆM-AN56 Hemoglobin A1c Variant II Turbo 20, Biorad Aa Dato Initialer Punkt 4, HbF >4 % Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 56 af 75

67 HÆM-AN56 Hemoglobin A1c Variant II Turbo 20, Biorad Aa Dato Initialer Punkt 4, HbF > 25% Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 57 af 75

70 HÆM-AN56 Hemoglobin A1c Variant II Turbo 20, Biorad Aa Dato Initialer Punkt 5 og 11, dårlig adskillelse og øvirg uregelmæssighed Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 60 af 75

76 HÆM-AN56 Hemoglobin A1c Variant II Turbo 20, Biorad Aa Dato Initialer Punkt 9, Hbc Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 66 af 75

79 HÆM-AN56 Hemoglobin A1c Variant II Turbo 20, Biorad Aa Dato Initialer Punkt 10, Grundliniedrift Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 69 af 75

81 HÆM-AN56 Hemoglobin A1c Variant II Turbo 20, Biorad Aa Dato Initialer Punkt 11, Øvrig uregelmæssighed Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 71 af 75

82 HÆM-AN56 Hemoglobin A1c Variant II Turbo 20, Biorad Aa Dato Initialer Punkt 12, bred top p.g.a dårlig kolonne Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 72 af 75

83 HÆM-AN56 Hemoglobin A1c Variant II Turbo 20, Biorad Aa Dato Initialer Ekstra kurve eksempel, Homozygot for HbE Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 73 af 75

84 HÆM-AN56 Hemoglobin A1c Variant II Turbo 20, Biorad Aa Dato Initialer Bilag 5 Fejlkilder Kilde: WHO report HbA1c Use of Glycated Haemoglobin (HbA1C) in the Diagnosis of Diabetes Mellitus. Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 74 af 75

85 HÆM-AN56 Hemoglobin A1c Variant II Turbo 20, Biorad Aa Dato Initialer Bilag 6 Brevskabelon Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 75 af 75

86 11.5. Bilag 5 KVAL-AN18 Valideringsforskrift Verificering (minimal validering) Dato Initialer Titel Validering af Præcision og Akkuratesse for kvantitative Version: 2 analysemetoder - Verificering (Minimal validering) Gældende for Dokumenttype Procedureforskrift Ledelsesansvarlig Afdelingsledelsen Fagligt ansvarlig Simon Lykkeboe Udarbejdet af / dato Anne Marie Arre Godkendt af / dato Simon Lykkeboe Review ansvarlig / dato Simon Lykkeboe Erstatter Validering af Præcision og Akkuratesse for kvantitative analysemetoder - Verificering (Minimal validering) Version: 1 Ændringer i forhold til tidligere dokument Dokumentstatus Aktiv fra Nedlagt Antal papirkopier Ingen Papirkopier placering Ingen Validering af Præcision og Akkuratesse for kvantitative analysemetoder Verificering (Minimal validering) Omfang af minimal validering...2 Indledende procedure...2 Valideringsdata fra producenten...2 Fortrolighedsperioden...2 Reagenser...2 Kalibrering...2 Kvalitetskontrol...2 Prøvemateriale til præcisionsbestemmelse...3 Prøvemateriale til akkuratessebestemmelse...3 Analyseringsprocedure for akkuratesse og præcisionsbestemmelse...3 Data opsamling; præcision...4 Data opsamling; akkuratesse...5 Resultatbehandling...5 Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 1 af 5

87 KVAL-AN18 Valideringsforskrift Verificering (minimal validering) Dato Initialer Omfang af minimal validering Det eksperimentelle arbejde, der skal udføres for den minimale validering, er: Akkuratesse: 30 patient prøver fordelt over hele måleintervallet og enkelt bestemmelser på alle målinger Præcision: 2 stk. patientprøver/kontrolmateriale med koncentration af komponenten i relevant måleområde. De 2 prøver skal køres i 4 dobbelt bestemmelse på 5 forskellige dage. Indledende procedure Valideringsdata fra producenten Indskriv fra reagens insert i valideringsrapport eller dertil egnet skema 1. Producentens oplyste total-precision og repeatability (intraseriel) 2. Producentens oplyste akkuratesse 3. Sporbarheden Fortrolighedsperioden 1. Bliv fortrolig med apparatur og målemetode i træningsperioden a. Vedligeholdelse og reagensfremstilling b. Kalibrering inkl. håndtering af kalibreringsmateriale c. Analyse af flere patientprøver d. Analyse af kontroller og fastsættelse af middelværdier e. Benyt producentens middelværdi og total SD/CV% i kontrolskemaet 2. Fortsæt fortrolighedsperiode indtil resultater opnås problemfrit Reagenser 1. Anvend et lot-nummer af reagens under hele præcision/akkuratesse studiet 2. Hvis der alligevel anvendes mere en et reagens lot-nummer, skal det tydeligt fremgå af valideringsrapporten Kalibrering 1. Anvend kun et lot-nummer kalibreringsmateriale under hele præcision/akkuratesse studiet 2. Hvis producenten har fremstillet data for præcision og akkuratesse ud fra flere kalibreringer, kan det overvejes at udføre flere kalibreringer i studiet Kvalitetskontrol 1. Benyt producentkontroller og som minimum en ikke-producent kontrol 2. Fastsæt kontrolregler 3. Benyt producentens totale SD/CV% i kontrolskemaet Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 2 af 5

88 KVAL-AN18 Valideringsforskrift Verificering (minimal validering) Dato Initialer Prøvemateriale til præcisionsbestemmelse Vælg minimum 2 relevante koncentrationsniveauer svarende til producentens prøvemateriale og niveau Hvis producenten anvender patientprøvemateriale 1. Hvis producenten anvender patientprøvemateriale, fremstil da 2 pool i de anvendte niveauer (mængde svarende til > 24 prøvekopper) 2. Indfrys prøvematerialet ved -80ºC, hvis indsamling foregår over dage 3. Fremstil de 2 pool 4. Centrifuger de velblandede pool 5. Udportioner de 2 pool i 5+1 ekstra glas indeholdende prøvemateriale til > 4 bestemmelser 6. Indfrys prøvematerialet ved -80ºC Hvis producenten anvender kontrolmateriale 1. Hvis producenten anvender kontrolmateriale, fremstil da en portion af hvert kontrolmateriale i de 2 anvendte niveauer 2. Kontrolmateriale opbevares efter producentens vejledning Prøvemateriale til akkuratessebestemmelse 1. Udvælg minimum 30 patientprøver i det primære måleområde, 16 i, 7 under og 7 over referenceintervallet (mængde svarende til > 2 prøvekopper pr. patientprøve) 2. Prøverne skal være mærket med patientsporbart nummer i hele verifikationsperioden. Brug evt. et excel-regneark til registrering. 3. Indfrys prøvematerialet ved -80ºC Analyseringsprocedure for akkuratesse og præcisionsbestemmelse Præcision: Analyser de to patientpool i 4 bestemmelse på 5 forskellige dage. Det samlede tidsrum må ikke overstige 8 dage. Akkuratesse: Analyser maksimalt 8 patientprøver pr. dag Daglig procedure 1. Optø prøver til dagen præcisionsbestemmelse ved 37 ºC 2. Centrifuger de velblandede glas 3. Udportioner hver pool i 4 glas/kopper 4. Udtag dagens prøver til akkuratessebestemmelse (prøverne udvalgt i hele det primære måleområde) Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 3 af 5

89 KVAL-AN18 Valideringsforskrift Verificering (minimal validering) Dato Initialer 5. Optø prøverne ved 37 ºC 6. Centrifuger de velblandede glas 7. Udportioner hver prøve i 2 glas/kopper 8. Find afleveringskontrollerne 9. Ny metode: Analyser dagens serie på følgende måde: a. Bestil afleveringskontroller til analysering først i serien b. Placer de 4 glas/kopper til præcisionsbestemmelse i vilkårlig rækkefølge sammen med prøverne til akkuratessebestemmelse c. Bestil afleveringskontroller til analysering sidst i serien evt. oftere 10. Eksisterende metode: Analyser dagens serie på følgende måde: a. Bestil afleveringskontroller til analysering først i serien b. Placer patientprøverne til akkuratessebestemmelse i vilkårlig rækkefølge c. Bestil afleveringskontroller til analysering sidst i serien evt. oftere NB. Samme procedure benyttes, hvis der anvendes kontrolmateriale til præcisionsbestemmelsen Data opsamling; præcision Indtast dagligt resultater i excel-ark som illustreret nedenfor. Opsætningen vist nedenfor gør det let at anvende Excel-modulet Analyse-It til beregning af præcision. Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 4 af 5

90 KVAL-AN18 Valideringsforskrift Verificering (minimal validering) Dato Initialer Data opsamling; akkuratesse Undersøg resultaterne umiddelbart efter fremstilling. Hvis en patientprøve giver anledning til en markant større forskel mellem de 2 metoder, sammenlignet med andre patient prøver Gentest prøven i dobbelt bestemmelse på de 2 metoder. Hvor stor en forskel skal være, for at give anledning til gentestning, er lidt en skønsmæssig sag. Som tommelfingerregel; er du i tvivl, så gentest. Indtast dagens resultater inkl. kontroller i excel-ark til fuld validering illustreret nedenfor. Yderligere skal der i regneark noteres: 1) Dato-interval Altså perioden hvor undersøgelsen/målingerne er foretaget. 2) Lot-nummer på afleveringskontroller 3) Lot-nummer på kritiske reagenser 4) Evt. andre oplysninger om kontrol/patient materiale. Punkt 1 til 4 kan med fordel noteres i separat faneblad i excel-regnearket. Resultatbehandling 1. Resultaterne kan evt. behandles med Excel-modulet Analyse-It. Se instruktionen til Analyse-It. 2. Resultaterne vurderes i den pågældende analysegruppe. Efter færdiggørelse af rapport/validering fjernes evt. patienthenførbare data fra excel-ark. Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 5 af 5

91 Region Nordjylland Variant II F-blad 1 af Bilag 6 Titel Variant II Biorad, Variant II Turbo Version: 2 Gældende for Dokumenttype Apparaturforskrift Ledelsesansvarlig Afdelingsledelsen Fagligt ansvarlig Elsebet Møller Nielsen Udarbejdet af / dato Birthe Gaardahl Godkendt af / dato Elsebet Møller Nielsen Review ansvarlig / dato Elsebet Møller Nielsen Erstatter Version: Ændringer i forhold til tidligere dokument S3 ny titel EMN S11 ændring i punkt 2 og EMN B4 og B5 tilføjelser EMN : Placering af forskrift ændret fra (Biokemi II) Dokumentstatus Aktiv fra Nedlagt Antal papirkopier 1 Papirkopier placering Analysepladsen Variant II Biorad Variant II Turbo - Biorad Apparaturbeskrivelse Indholdsfortegnelse: Introduktion...2 Princip...2 Prøveveksler modul...5 Gradient for Variant II - Turbo...7 Gradient for Variant I...7 Chromatografmodul...9 Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor

92 Region Nordjylland Variant II F-blad 2 af 10 Introduktion: Variant II er et fuldautomatisk hemoglobin testsystem. Den består af 2 moduler. Prøveveksler- og chromatografisk modul. I tilslutning dertil er en computer, der kontrollerer og styrer Variant II ved hjælp af Clinical. Desuden er tilkoblet en printer. Princip: Variant II bruger HPLC-princip (high performance liquid chromatografi) for at adskille og måle den relative procent af normal og unormal hemoglobin. Variant II HbA1c program er baseret på chromoatografisk adskillelse af HbA1c på en cationbytter kolonne. Adskillelsen er optimeret, således at interferens fra hemoglobin varianter, schiff-base og carbamyleret hemoglobin er elimineret. Variant II betjener sig af automatisk prøvefremføring. I prøveveksler modulet blandes primærrørene. Prøvematerialet trækkes derefter automatisk op, foryndes og injiceres til analyse på kolonnen. Kromatografimodulet indeholder 2 pumper, der sørger for at buffer og prøver sendes gennem kolonnen og detectoren. Mellem hvert prøveoptræk rense prøvenålen med Wash Solution for at minimere en mulig afsmitning. Prøven bæres af bufferen gennem kolonnen, hvor prøven adskilles i dens individuelle komponenter. De adskilte hemoglobiner passerer gennem en flow-celle, hvor forandringer i absorbansen måles af et filter fotometer ved 415 nm. Et andet filter korrigerer for baggrundsabsorbansen ved 690 nm. Clinical Data Management (CDM) software behandler rådata. En to-punkts kalibrering anvendes, og resultatet af HbA1c udskrives i % sammen med prøveidentifikation og kromatogram. HbA1c toppen er skraveret. Arealet er beregnet ved anvendelse af det matematiske princip EMG (exponentially modified gaussion), som udelukker labilt HbA1c og carbamyleret Hb. Analysetiden er 3 min. pr. prøve. Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor

93 Region Nordjylland Variant II F-blad 3 af 10 Som afslutning på en analyseserie udskrives en samlet oversigt(jobliste) indeholdende: Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor

94 Region Nordjylland Variant II F-blad 4 af 10 Variant II består af følgende: Komponenter: Prøveveksler modul. Kromatografisk modul. Computer. Printer. Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor

95 Region Nordjylland Variant II F-blad 5 af 10 Prøveveksler modulets komponenter: Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor

96 Region Nordjylland Variant II F-blad 6 af 10 Prøveveksler-modulets komponenter: Nr. Navn Funktion Låg for prøvenål Dette gennemsigtige låg tillader brugeren at iagttage prøvenålens bevægelser samtidig med at det tjener til beskyttelse. Låget er lukket under normal kørsel; hvis det åbnes, lukker systemet automatisk ned. Prøvenål Prøvenålen ventilerer hvert primærrør og primærrør for at udligne et vakuum. Nålen renses, derefter opsuger den prøve. Prøven fortyndes i fortyndingskammeret. Prøverør holder Prøverør-holderen stabiliserer primærrøret, imens nålen går igennem proppen. Fortyndingskammer Fortyndingskammeret er hvor prøvenålen renses efter den første perforering af proppen, og hvor prøven fortyndes før analysering. Mixer hoved Mixer-hovedet blander fuldblodsprøver (1100 omdr./minut i få sekunder) før injektion for at sikre en homogen opløsning af prøven. Gælder ikke for Variant Turbo. Stregkodelæser Stregkodelæseren læser barcoden fra prøve rack et og prøverørene. CDM overfører automatisk denne information med prøveidentifikation som formål. Reagensflaskemodul Dette modul bærer 3 reagensflasker og monitorerer lav væskevolumen ved hjælp af en vægt. Når et reagens falder under den indsatte vægtgrænse, aktiveres en alarm via CDM. På skærmen vises den pågældende flaske desuden med rødt. Fremføringsbælte Fremføringsbæltet bevæger prøve rack et i y-aksen, enten fremad til prøveanalysering eller væk fra prøveanalyseringsområdet. Rack-bærer Rack-bærerne bevæger rack ene i x-akse-retningen. Den bageste rackbærer fører rack et ind i positionen til barcodelæser, blanding og prøvenål. Sprøjte #1 Denne sprøjte presser vaskeopløsning gennem prøvenålen for at rense efter den første perforering af proppen. Den dispenserer også fortyndingsvæske i forbindelse med prøvefortynding. 11 Sprøjte #2 Denne sprøjte trækker prøvemateriale op fra primærrøret under perforering. 12 Vakuumpumpe Vakuumpumpen er udformet til at fjerne overskydende væske fra fortyndingskammeret til den interne affaldsbeholder. 13 Affaldsbeholder Den 200 ml affaldsbeholder holder opløsningen tilbage ved hjælp af vakuumpumpen, indtil den tømmes over i den ydre 10 l affaldsbeholder / afløb. Affaldsbeholderen tømmes efter hver cyklus af prøvenålsvask og fortynding. Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor

97 Region Nordjylland Variant II F-blad 7 af 10 Gradient for Variant II - Turbo Tid A-buffer i % B-buffer i % , ,19 84,0 16,0 1,30 84,0 16,0 1,31 75,0 25,0 1,49 40,0 60,0 1, Gradient for Variant I Tid A-buffer i % B-buffer i % , , ,23 84, 16 1, , , , , Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor

98 Region Nordjylland Variant II F-blad 8 af 10 Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor

99 Region Nordjylland Variant II F-blad 9 af 10 Chromatografmodulets komponenter: Nr. Navn Funktion Degasser En indføringsslange med Teflon membran i et vakuumkammer fjerner luftbobler fra buffer 1 og 2. Pumper Pumpemodulet består af 2 vimpelpumper med hver 2 piston. Hver pumpe har en optisk føler, der kontrollerer pumpernes arbejde. Hvert pumpehoved har 1 indførings- og 1 udføringsventil, som regulerer retningen af buffer flow et. Pumpe A er den venstre halvdel af pumpemodulet, og pumpe B den højre halvdel af pumpemodulet. Pumpens inlet port for hver pumpe er placeret direkte under pumpehovedet; inlet porten tillader manuel priming af indføringsslangerne for buffer 1 (pumpe A) eller buffer 2 (pumpe B). Injektionsventil Injektionsventilen er forbundet med omskifterventilen, prøvenålen og prøve loop et. Injektionsventilen kontrollerer opsugningen og afleveringen af prøven i det analytiske flow. Omskifterventil Vælger automatisk blandingsmetode for den enkelte analysemetode. For HbA1c anvendes dynamisk blanding. Desuden fungerer den som purge ventil i forbindelse med system flush. Dynamisk mixer Den dynamiske mixer kombinerer udgangsvolumen fra pumpe A og B for at danne en gradient. Sprøjte Sprøjten trækker prøven fra prøvestationen til injector loop en og gennemskyller desuden prøveslangerne. Kolonne termomodul Termomodulet kontrollerer temperaturen, under hvilken separationen foregår. Hæmoglobin detector Detectoren måler absorbansen af prøvens indhold ved 415 nm med baggrundsmåling ved 690 nm. Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor

100 Region Nordjylland Variant II F-blad 10 af 10 Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor

101 11.7. Bilag 7 Tabel 1: Markering af HCCS mikrorør 0 punkt Forsøg 1 Forsøg 2 12 patientprøver A A0 A1 A2 B B0 B1 B2 C C0 C1 C2 D D0 D1 D2 E E0 E1 E2 F F0 F1 F2 G G0 G1 G2 H H0 H1 H2 I I0 I1 I2 J J0 J1 J2 K K0 K1 K2 L L0 L1 L2 Tabel 2: Analyseresultater for HbA1c for 12 HCCS mikroprøver (mmol /mol) i tre forskellige præeanlytiske forhold: patientprøver er analyseret umidelbart efter fortyndingen i HCCS (Tid 0); patientprøver er fortyndet i HCCS, nedfrosset, optøet og analyseret (Tid 1); patientprøver er fortyndet i HCCS, nedfrosset og optøet to gange i træk og derefter analyseret (Tid 2) Analyse / temperaturforhold Dato Tid Antal målinger Prøve ID A B C D E F G H I J K L Middel 41,25 42, ,08333 SD 16,98 17,17 17,05 Ændring i fht udgangsværdien 0,83 0,83

102 Tabel 3: Analyseresultater for HbA1c for 12 HCCS mikroprøver hvor værdier for Tid 1 og Tid 2 er beregnet i % af udgangsværdier (Tid 0) Data i % af udgangsværdien (t=0) Tid Antal målinger Prøve ID ,3 101, ,0 101, ,0 100, ,3 101, ,2 102, ,8 102, ,6 102, ,0 103, ,0 100, ,7 103, ,7 103, ,2 104,2 Middel % ,02 102,02 Ændring % 2,02 2,02 SD 1,4 1,2 90 % konfidensinterval % 0,7 0,6 90 % konfidensinterval - øvre % 102,7 102,7 90 % konfidensinterval - nedre % 101,3 101,4

103 11.8. Bilag 8

104

105

106 11.9. Bilag 9 Tabel 1: HbF høj kontrol (Range 8,40 12,7 %) analyseresultater 1 dag 2 dag 3 dag 4 dag 5 dag 1 H 9,8 % 9,7 % 9,8 % 9,9 % 9,9 % 2 H 9,8 % 9,7 % 9,9 % 9,9 % 9,8 % 3 H 9,8 % 9,7 % 9,9 % 9,9 % 9,9 % 4 H 9,9 % 9,7 % 9,9 % 9,9 % 9,8 % Tabel 2: HbF lave kontrol (Range 1,80 2,70 %) analyseresultater Kontrol L 1 dag 2 dag 3 dag 4 dag 5 dag 1 L 2,4 % 2,3 % 2,4 % 2,4 % 2,5 % 2 L 2,4 % 2,4 % 2,4 % 2,5 % 2,5 % 3 L 2,4 % 2,3 % 2,4 % 2,4 % 2,5 % 4 L 2,4 % 2,4 % 2,4 % 2,5 % 2,5 %

107

108

109

110

111

112

113

114

115

116

117

118

119

120

121

122

123

124

125

126

127

128

129

130

131

132

133

134

135

136

137

138

139

140

141

142

143

144

145

146

147 Bilag 10 Dato Initialer KVAL-AN13 Analyse-It præcision og akkuratesse Præcision bestemmelse og generering af difference-plot med Excel modulet Analyse-It Introduktion...1 Præcision...1 Difference-Plot...7 Sammenbringning af rådata og rapport i samme regneark...12 Introduktion For at kunne bruge Excel modulet Analyse-It, kræves det at man har adgang til afdelinegns Q-drev. Programmet findes på stien: Q:\1 Administration\1-07 Dokumentation-information- IT\ ITprogrammer. Programmet aktiveres ved dobbelt-klik. I skrivende stund har afdelingen indkøbt licens til 2 samtidige brugere Dvs. forsøger man at bruge programmet, mens 2 andre brugere har åbnet programmet, bliver man nægtet adgang, Præcision Eksempel Der tages udgangspunkt i følgende eksempel, hvor en analyse udføres på samme prøve ved 4 dobbelte bestemmelser på 5 forskellige dage. Resultaterne er vist nedenfor: Rep.nr./Dato Resultaterne ovenfor skal indtastes i et Excel-regneark. Resultaterne indsættes i regnearket som vist i figuren næste side: Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 1 af 13

148 KVAL-AN13 Analyse-It præcision og akkuratesse Dato Initialer Det skal nævnes at det ingen betydning har, hvor i regnearket man placerer sine data. Man kunne i princippet havde placeret præcision data på række 1000 i regnearket. Efter data indtastning markere man en celle der indeholder præcisionsdata. Det er ligegyldigt, hvilken celle man vælger blot at cellen er en del af præcision data erne. Et eksempel er vist nedenfor: Derefter vælger man i øverste menu linie Analyse/Precision/1 & 2 Run over days, som vist næste side: Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 2 af 13

149 KVAL-AN13 Analyse-It præcision og akkuratesse Dato Initialer Når man har valgt Analyse/Precision/1 & 2 Run over days fremkommer skærmbilledet vist nedenfor: Klik på Næste og skærmbilledet nedenfor fremkommer: Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 3 af 13

150 KVAL-AN13 Analyse-It præcision og akkuratesse Dato Initialer Her er det vigtigt at den øverste valgmulig List er markeret. Klik på næste, skærmbilledet nedenfor fremkommer: Se efter at der er flue-ben i Apply Autoformat Der vil normalt altid være flue ben i Apply Autoformat så det eneste man skal foretages sig er at klikke på næste, hvorved skærmbilledet på næste side fremkommer: Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 4 af 13

151 KVAL-AN13 Analyse-It præcision og akkuratesse Dato Initialer Tryk udfør og skærmbilledet nedenfor fremkommer: Her er det vigtigt at man i rullepanelet Run 1 vælger Rep.nr. Som vist nedenfor: Når dette er gjort klikkes der på Ok og Analyse-It fremstiller en Præcisions rapport. Rapporten er vist næste side: Præcision rapporten indeholder flere statiske beregninger nedenfor er med rød cirkel vist dem der først og fremmest er vigtige nemlig: Total Precision (Intermediær precision) Repeatability (intra-seriel precision) Between day (inter-seriel precision) Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 5 af 13

152 KVAL-AN13 Analyse-It præcision og akkuratesse Dato Initialer Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 6 af 13

153 KVAL-AN13 Analyse-It præcision og akkuratesse Dato Initialer Difference-Plot Eksempel Der tages udgangspunkt i følgende eksempel, hvor en analyse udføres med to forskellige metoder; A og B. 50 patient prøver bliver analyseret med begge metoder. Data er vist nedenfor: For at lave difference plottet, skal man først i Excel-regnearket, markere en af cellerne indeholdende data der skal analyseres, f.eks Celle A1 eller A2. Derefter klikker man på menuen Analyse/Method-comparison/Diffrence Plot. Dette er vist nedenfor: Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 7 af 13

154 KVAL-AN13 Analyse-It præcision og akkuratesse Dato Initialer Når man har valgt Analyse/Method Comparison/Difference Plot fremkommer skærmbilledet vist nedenfor: Klik på Næste, hvorved skærmbilledet vist nedenfor fremkommer: Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 8 af 13

155 KVAL-AN13 Analyse-It præcision og akkuratesse Dato Initialer Her er det vigtigt at den øverste valgmulig List er markeret. Klik på næste - skærmbilledet vist på næste side fremkommer: Se efter at der er flue-ben i Apply Autoformat Der vil normalt altid være flue ben i Apply Autoformat så det eneste man skal foretages sig er at klikke på næste, hvorved skærmbilledet nedenfor fremkommer: Tryk på udfør og skærmbilledet næste side fremkommer: Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 9 af 13

156 KVAL-AN13 Analyse-It præcision og akkuratesse Dato Initialer 1. I rullepanelet Reference/Comparative method vælges reference metoden I dette tilfælde siger vi at metode A er reference metoden 2. I rullepanelet Test Method vælges metode B. 3. I rulepanelet Overlay vælges with Bias + Limits of Agreement Når ovenstående 3 punkter er udført skal menuen gerne se ud som vist nedenfor: Der klikkes på Ok og rapporten fremstilles. Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 10 af 13

157 KVAL-AN13 Analyse-It præcision og akkuratesse Dato Initialer Analyse-It genererer en række plots og statistiske test. Vigtigst er differens-plottet vist nedenunder: Som det ses på difference plottet ovenover så er differencerne vist på y-aksen i absolutte værdier. I nogen situationer kan det være en fordel at plotte differencerne som % af gennemsnittet. Dvs. (A- B)/((A+B)/2). Dette gøres ved at gå ind i Excel menuen Vis/Værktøjslinie og klikke i Analyse-It, så der fremkommer flueben. Dette er vist nedenfor: Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 11 af 13

158 KVAL-AN13 Analyse-It præcision og akkuratesse Dato Initialer Når man har sat flueben i Excel menuen Vis/Værktøjslinie/Analyse-It, gælder nu om at finde værktøjslinien kaldt Analyse (dette kan engang imellem drille) og klikke på ikonet kaldt Edit. Dette er vist nedenfor: Klik her for at redigere difference plottet Ved aktivering af Edit fremkommer Analyse-It menuen nedenfor. Som vist kan man i rule-panelet Plot vælge mellem Difference eller Difference As %. Vælg Difference As % og tryk Ok. Differenceplottet bliver nu dannet med procent differencer på y-aksen. Her vælges mellem absolutte eller procentvis differencer Sammenbringning af rådata og rapport i samme regneark Efter man har lavet en rapport i Analyse-It, befinder rapport og rådata sig i hver sit regneark. Rapporten og rådaterne skal bringes sammen i et regneark. Dette gøres ved at gå ind i Excel menuen Vis/Værktøjslinie og klikke i Analyse-It så der fremkommer flueben. Dette er vist næste side: Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 12 af 13

159 KVAL-AN13 Analyse-It præcision og akkuratesse Dato Initialer Herved fremkommer Analyse-It værktøjslinien. Det gælder nu om at finde værktøjslinien (dette kan engang imellem drille) og klikke på ikonet kaldt Collate. Dette er vist nedenfor: Klik Her for at bringe rapport og rådata ind i samme regenark Efter aktivering af knappen Collate samler Analyse-It rapport og rå-data i samme regneark. Herefter kan regnearket gemmes som bilag til en valideringsrapport. Gældende version findes i Q-Pulse eller i mappe på sekretærens kontor Side 13 af 13

160 Bilag 11

161

162

163

164

165

166

167

168

169 Bilag 12 DSKB s anbefaling til metodevalidering Validering af analysemetoder i klinisk biokemiske laboratorier Dato: 1. oktober 2010 Side: 1/9 INDHOLDSFORTEGNELSE 1. FORORD FORMÅL OG GYLDIGHEDSOMRÅDE BEGREBER, DEFINITIONER OG HENVISNINGER OMFANG INDHOLD AF VALIDERINGSPLAN OG -RAPPORT KVALITETSMÅL FOR ANALYSEMETODER I KLINISK BIOKEMI FORHÅNDSVEDTAGELSER METODEEGENSKABER FOR MÅLINGENS KVALITET Metrologisk sporbarhed Korrekthed og metodesammenligning Måleinterval Detektionsgrænse Analytisk specificitet Linearitet Intermediær præcision Robusthed Afsmitning Præanalytiske forhold Måleusikkerhedsbudget KONKLUSION REFERENCER IKRAFTTRÆDELSE...9

170 DSKB s anbefaling til metodevalidering Validering af analysemetoder i klinisk biokemiske laboratorier Dato: 1. oktober 2010 Side: 2/9 1. FORORD Dokumentet er en omarbejdet version af den tidligere DANAK retningslinje RL6, som nu er udgået. Dokumentet kan betragtes som et hjælperedskab til validering af analysemetoder og anbefales af Dansk Selskab for Klinisk Biokemi (DSKB). DANAK har deltaget i bearbejdelsen og er af den holdning, at efterlevelse af denne vejledning svarer til kravene i akkrediteringsstandarderne ISO og ISO FORMÅL OG GYLDIGHEDSOMRÅDE Denne hjælpevejledning fastlægger en fortolkning af kravene i DS/EN ISO/IEC 17025:2005 og DS/EN ISO 15189:2008 for klinisk biokemiske laboratorier vedrørende metodedokumentering herunder især laboratoriernes stillingtagen til nødvendig validering af anvendte analysemetoder, samt til vurdering af resultaterne af et sådant valideringsarbejde. Hjælpevejledningen bygger på den tidligere RL6 og er tilrettet med hjælp fra DANAK. Analysemetoder, der omhandler nominalegenskaber, er ikke medtaget her. 3. BEGREBER, DEFINITIONER OG HENVISNINGER Henvisninger til punkter i ISO og ISO er markeret med [ ]. Henvisninger til litteraturreferencer er markeret med ( ). ISO [ ]: Validering bekræfter ved undersøgelse og tilvejebringelse af objektivt vidnesbyrd, at de specielle krav til den givne anvendelse er opfyldt (1). ISO [ ]: Laboratoriet skal validere ikke-standardiserede metoder, selvudviklede metoder, standardiserede metoder, der anvendes uden for deres tilsigtede anvendelsesområde, og ændringer af standardiserede metoder for at bekræfte, at metoderne er egnede til det givne formål. Valideringens omfang skal svare til, hvad der er nødvendigt for den konkrete anvendelse eller det aktuelle anvendelsesområde. Laboratoriet skal registrere de fundne resultater, proceduren, der er anvendt ved valideringen, samt en erklæring om, hvorvidt metoden er egnet til det givne formål. ISO [5.5.2]: Laboratoriet må kun benytte validerede procedurer til bekræftelse af, at undersøgelsesprocedurerne er egnede til det forudsatte formål. Valideringerne skal være tilstrækkelig omfattende til at opfylde behovet for den givne anvendelse eller det givne anvendelsesområde. Laboratoriet skal registrere de opnåede resultater og den procedure, der er anvendt ved valideringen. De metoder og procedurer, som laboratoriet vælger at benytte, skal evalueres og konstateres at give tilfredsstillende resultater, inden de anvendes til medicinsk undersøgelse. I ISO anvendes begrebet undersøgelsesprocedure. I nærværende dokument anvendes i stedet den i klinisk biokemiske laboratorier ofte anvendte betegnelse analysemetode. Som led i valideringen skal der udføres et estimat over den samlede måleusikkerhed knyttet til måleværdien, jvf. Pkt Denne usikkerhed, sammenholdt med de kliniske krav til anvendelsen af måleresultatet, indgår i grundlaget for beslutningen om at anvende metoden i rutineproduktion.

171 DSKB s anbefaling til metodevalidering Validering af analysemetoder i klinisk biokemiske laboratorier Dato: 1. oktober 2010 Side: 3/9 Som led i valideringen bør der også tages stilling til, hvilke referenceintervaller der kan anvendes sammen med de valgte analysemetoder (ISO [5.5.5]) 4. OMFANG I ISO [ ] omtales standardmetoder og ikke-standardiserede metoder (1). Standardmetoder udføres efter anerkendte specifikationer og er færdigvaliderede. Laboratoriets eneste opgave er da kun at verificere, at metoden fungerer lokalt. Inden for klinisk biokemi findes ingen metoder, som kan betragtes som standardmetoder. De anvendte metoder er oftest videnskabeligt publicerede metoder, der er tilpasset af diagnostikaproducenten eller af laboratoriet, eller de kan være udviklet af laboratoriet. Det kan også dreje sig om metoder, der anvendes uden for deres oprindelige applikationsområde eller er ændret på anden vis. Alle sådanne metoder skal valideres. Valideringen eller dele af den kan være udført af diagnostikaproducenten eller af andre laboratorier. Med ikrafttræden af Bekendtgørelse om medicinsk udstyr til in vitro-diagnostik (3) ( IVD-direktivet ) er diagnostikaproducenten siden december 2003 lovmæssigt forpligtiget til at udføre en omfattende validering, hvorfor laboratoriets egne praktiske undersøgelser kan reduceres tilsvarende. Laboratoriet skal dog altid sikre, at metoden fungerer efter hensigten i eget laboratorium, hvilket betyder, at analysemetoden skal leve op til de, af laboratoriet, opstillede krav. CE-mærkede analyser CE-mærkede metoder er valideret af leverandøren til det af leverandøren opstillede formål. Det er EA/DANAK s og DSKB s holdning, at for CE-mærkede analyser er det almindeligvis tilstrækkeligt at udføre en verifikation af, om leveret udstyr/analysemetoder lever op til de opstillede krav til analyserne. I praksis kræves verifikation af følgende: Impræcision Korrekthed Måleusikkerhed Referenceintervaller, vejledende terapeutiske intervaller eller beslutningsgrænser Bestemmelse af korrektheden bør udføres ved undersøgelse af sporbart materiale, eksempelvis eksternt kvalitetskontrolmateriale som HK fra DEKS, eller, hvis muligt, referencematerialer med velegnet matrix (f.eks. serum X eller CRM470): Hvis materialet ikke er tillagt en sand værdi, må konsensusværdien bruges som det bedste udtryk herfor. Korrektheden kan kun bedømmes ved sammenligning med tidligere metode, såfremt denne er en sand og absolut metode. I praksis betyder det, at den nye metodes korrekthed kun kan bedømmes ved sammenligning med tidligere metode, såfremt korrektheden for den tidligere metode er kendt og lever op til laboratoriets krav. Laboratoriet skal opstille krav til analysemetodens måleusikkerhed og estimere dens størrelse på kvantitative analysemetoder (4). Estimatet bør så vidt muligt indeholde den intermediære impræsicion beregnet over så lang tid, at der indgår dag til dag variation, flere apparater, reagenslot skift og kalibreringer. Desuden kan firmaets oplyste usikkerhed på kalibratoren inkluderes. Man bør angive en ekspanderet måleusikkerhed med en dækningsfaktor på 2. Andre faktorer bør inkluderes i måleusikkerheden, såfremt usikkerhedsbidraget vurderes til at være af betydning. Hvis ønsket kan præanalytisk usikkerhed estimeres ud fra Blodprøvetagning som kilde til præanalytisk variation (5).

172 DSKB s anbefaling til metodevalidering Validering af analysemetoder i klinisk biokemiske laboratorier Dato: 1. oktober 2010 Side: 4/9 Test for evt. skred bør udføres med patientprøver sammenlignet med tidligere eller tilsvarende analysemetode udført andetsteds (viser at metoden lever op til klinisk anvendelighed) og indgår i bedømmelsen af det anvendte referenceinterval. Inspiration til verifikation kan hentes på The Association for Clinical Biochemistry s hjemmeside ( hvor der også findes færdige regneark til at løse opgaven. Validerings/verifikationsproceduren for CE-mærkede analyser er således væsentlig mindre omfattende end fremgangsmåden ved ikke-ce-mærkede analysemetoder. DSKB anbefaler imidlertid altid, at der foretages en grundig vurdering af mulige analyser før indkøb mhp. om de er velegnede til at løse de kliniske problemstillinger i dagligdagen. Dette kan eksempelvis gøres ved at vurdere analyserne ud fra oplysninger fra kolleger, eksterne kvalitetskontrol-udsendelser eller oplysninger fra leverandøren. Der bør særligt lægges vægt på impræcision, korrekthed samt måleområder, og om der findes formelle krav til en given analysemetode. Ikke CE-mærkede analyser For analyser, der ikke er CE-mærkede, skal der udføres en egentlig validering, se nedenfor. Dette gælder også såfremt en CE-mærkning brydes i anvendelsen af en egentlig CE-mærket analysemetode, eksempelvis ved anvendelse af kit på andet instrument/platform end valideret af producenten. 5. INDHOLD AF VALIDERINGSPLAN OG -RAPPORT I ISO [ ] anføres, at Valideringens omfang skal svare til, hvad der er nødvendigt for den konkrete anvendelse eller det aktuelle anvendelsesområde (1). Det anbefales, at der udarbejdes en valideringsplan (eller -protokol) med udgangspunkt i formålet med målingen og en beskrivelse af de relevante kvalitetsmål (se nedenfor). En valideringsplan eller protokol vil omfatte en detaljeret beskrivelse af, hvordan relevante metodeegenskaber (se nedenfor) planlægges undersøgt, f.eks. ved fremskaffelse af dokumentation fra diagnostikaproducenten, udførelse af undersøgelser i eget laboratorium, videnskabelig litteratur m.v. Efterfølgende frembringer laboratoriet dokumentation for: Specificerede kvalitetsmål, metodens egenskaber, og hvorvidt metoden tilfredsstiller kvalitetsmålene eller populært sagt: Hvor god skal metoden være, hvor god er den, og er det godt nok? Nedenfor er opstillet en række kvalitetsmål og metode-egenskaber for klinisk biokemiske analysemetoder. Det anbefales, at de praktiske undersøgelser afsluttes med en valideringsrapport, der indeholder plan eller protokol, bearbejdede data samt konklusioner. Alternativt kan man anvende skemaet Erklæring om validitet af metoden til bestemmelse af system, komponent, egenskabsart, som findes på under Ekstranet. Under alle omstændigheder skal valideringsproceduren afsluttes med en dokumenteret stillingtagen til, om planens mål er nået, og konklusioner om, hvorvidt analysemetoden er egnet til det givne formål. 6. KVALITETSMÅL FOR ANALYSEMETODER I KLINISK BIOKEMI Nedenfor er i ikke-prioriteret rækkefølge angivet et sæt modeller eller komponenter til at fastsætte specifikationer for analytisk kvalitet (6,7). En så høj grad af og niveau for opfyldelse som muligt bør tilstræbes. Kvalitetsmål sat af: Myndigheder. Organisationer, der udbyder præstationsprøvningsprogrammer (ekstern kvalitetsvurdering).

173 DSKB s anbefaling til metodevalidering Validering af analysemetoder i klinisk biokemiske laboratorier Dato: 1. oktober 2010 Side: 5/9 Klinikere, subsidiært laboratoriets ledelse. Publicerede anbefalinger: Fra nationale eller internationale ekspertgrupper. Lokale ekspertgrupper. Kvalitetsmål ud fra aktuel state of the art : Data fra ekstern kvalitetsvurdering. Data fra nylige publikationer. Evaluering af analysekvalitetens indvirkning på kliniske beslutninger generelt: Data baseret på biologisk variation, især den intraindividuelle. Data baseret på klinikernes vurdering. Evaluering af analysekvalitetens indvirkning på specifikke kliniske beslutninger, baseret på studier af det endelige kliniske resultat ( clinical outcome ). 7. FORHÅNDSVEDTAGELSER Inden den praktiske del af valideringen påbegyndes, kan det være hensigtsmæssigt at fastlægge og beskrive nedenstående, der under alle omstændigheder skal dokumenteres: Analysens/metodens navn (System Komponent; kvantitetsart), enhed (hvis relevant) samt evt. IUPAC / IFCC / DNK-kode. Apparatur/udstyr. Miljøfaktorer (f.eks. temperatur, fugtighed, krav i forbindelse med DNA-undersøgelser). Patientprøver, kontrolmateriale, dvs. korrekthedskontrolmateriale, præcisionskontrolmateriale, m.m. Kalibrator. Acceptgrænser for den maksimalt tilladelige kombinerede standardmåleusikkerhed, jf. måleusikkerhedsbudget, punkt Kravspecifikationer fra rekvirenterne. Biologisk referenceinterval (kilde samt vurdering af intervallet i forhold til egen population og metode). Sikkerhed og miljø. 8. METODEEGENSKABER FOR MÅLINGENS KVALITET Der kan ikke angives en fast procedure for alle analysemetoder, i stedet må valg af metodeegenskaber vurderes fra analysemetode til analysemetode. En række metodeegenskaber er omtalt i ISO [ ] og ISO [5.5.3] og ved udarbejdelse af valideringsplanen udvælges, suppleres og vægtes disse efter behov og relevans. 8.1 Metrologisk sporbarhed Definition: Egenskab hos et måleresultat eller værdien for en normal (målestandard), hvorigennem måleresultatet eller værdien kan relateres til givne referencer, sædvanligvis nationale eller internationale normaler, gennem en ubrudt kæde af sammenligninger, der alle har en oplyst usikkerhed (8,9).

174 DSKB s anbefaling til metodevalidering Validering af analysemetoder i klinisk biokemiske laboratorier Dato: 1. oktober 2010 Side: 6/9 Toppen af kalibreringshierarkiet skal angives. Dette hierarki vil oftest starte med en SI-enhed eller anden enhed og/eller en metode og/eller kalibrator og evt. gå gennem flere lignende lag til rutineanalysemetoden og resultatet. 8.2 Korrekthed og metodesammenligning Definition af korrekthed: Grad af overensstemmelse mellem middelværdien for en stor serie af måleresultater og en accepteret referenceværdi (10). Metodens korrekthed kan vurderes ved: analysering af certificeret korrekthedsmateriale eller lignende genfindingsforsøg sammenligning med andre laboratorier, der anvender samme eller anden metode. Den metode, der sammenlignes med, bør være en anerkendt, veldokumenteret metode, og prøvematerialet bør så vidt muligt være patientprøver. Identificeres en klinisk betydende bias, skal der tages stilling til eventuelle forholdsregler inklusiv korrektion. 8.3 Måleinterval Definition: Et lukket interval af mulige måleværdier, der er tilladt med en analysemetode, er afgrænset af den nedre målegrænse og den øvre målegrænse, og som har en angivet maksimal måleusikkerhed (modificeret efter 9). Måleintervallet må være passende i forhold til klinikernes behov. I praksis fremkommer måleområdet ofte som et primært måleinterval dækket af kalibreringskurven og et udvidet måleinterval, der fremkommer ved manuel eller maskinel fortynding, hhv. opkoncentrering af prøvematerialet. I disse tilfælde skal det dokumenteres ved målinger inkl. kalibrering også i det udvidede område, at måleværdierne har en usikkerhed mindre end den maksimale værdi. Den funktionelle sensitivitet (defineret som CV ved intermediær præcisionsundersøgelse på f.eks. mindre end 20%) kan indgå i fastsættelse af nedre ende af måleområdet. For metoder, hvortil anvendes CE-mærkede reagenser og kalibratorer, er producenten lovmæssigt forpligtiget til at angive måleintervallet og den tilhørende maksimale måleusikkerhed. 8.4 Detektionsgrænse Definition: Måleresultat med en given måleprocedure, som er signifikant forskellig fra 0, for hvilket sandsynlighed for et analytisk falsk negativt resultat er, givet sandsynligheden for et falsk positivt resultat (11). Detektionsgrænsen bestemmes hvis det er relevant ved gentagne målinger på patientprøver med meget lav måleværdi, subsidiært ved gentagne målinger på nul-kalibratoren. Koncentrationen svarende til målesignalets middelværdi + 5SD vil være et praktisk anvendeligt mål for detektionsgrænsen, som den er defineret ovenfor.

175 DSKB s anbefaling til metodevalidering Validering af analysemetoder i klinisk biokemiske laboratorier Dato: 1. oktober 2010 Side: 7/9 8.5 Analytisk specificitet Definition: Analysemetodens evne til alene at måle målestørrelsen (modificeret efter 9). Materialer med kendt indhold af beslægtede stoffer (krydsreaktionsforsøg) eller potentielt interfererende stoffer (tilsætningsforsøg) kan testes. 8.6 Linearitet Definition: Direkte proportionalitet mellem måleværdi og værdi af målestørrelsen inden for måleintervallet (12). Linearitet kan f.eks. valideres ved at anvende fortyndingsrækker fremstillet af prøver med kendte koncentrationer nær øvre, hhv. nedre målegrænse og blandet i forskellige forhold. 8.7 Intermediær præcision Definition: Grad af overensstemmelse mellem uafhængige måleresultater, opnået med samme analysemetode på identisk prøvemateriale i samme laboratorium, men angivet under forskellige målebetingelser (13). Den intermediære præcision bør estimeres ved repræsentative koncentrationer inden for måleintervallet. Koncentrationer i nærheden af kliniske beslutningsgrænser er specielt vigtige. Undersøgelserne kan foretages på patientprøver eller præcisionskontrolmateriale. Det er væsentligt, at undersøgelserne, for at kunne være repræsentative, skal foregå over et længere tidsinterval for at få vigtige elementer med i dag-til-dag variationen. Hvis flere instrumenter og/eller operatører anvendes valgfrit, skal disse variationskilder inkluderes. 8.8 Robusthed Ved validering af en analysemetodes robusthed er det vigtigt at fremkalde ændringer i ydre forhold, som kan tænkes at have indflydelse på målingerne f.eks. skift af reagenslot og kalibratorlot, temperatur og operatør. Størrelsen af evt. observerede afvigelser bør angives, men i praksis vil en fuldstændig vurdering af metodens robusthed ikke kunne nås inden for den tidsperiode, en validering sædvanligvis omfatter. Er analysemetoden CE-mærket i overensstemmelse med IVD-direktivet (som en del af et system til in vitro-diagnostik), bør validering af robusthed kunne baseres på diagnostikaproducentens oplysninger. 8.9 Afsmitning Afsmitning kan deles i reagensafsmitning og prøveafsmitning. Reagensafsmitning ses især ved random access udstyr, og vil ofte være beskrevet af diagnostikaproducenten. På grund af de mange kombinationsmuligheder bliver denne type afsmitning dog tit først opdaget, når apparaturet er taget i anvendelse i daglig drift. Prøveafsmitning ses især ved batch-analysering og kan undersøges ved at måle patientprøver med lave og høje koncentrationer i defineret rækkefølge Præanalytiske forhold

176 DSKB s anbefaling til metodevalidering Validering af analysemetoder i klinisk biokemiske laboratorier Dato: 1. oktober 2010 Side: 8/9 Valideringen kan også omfatte præanalytiske forhold, der kan have indflydelse på måleresultaterne, f.eks. patientforberedelse, prøvetagning, prøvehåndtering, opbevaring og transport Måleusikkerhedsbudget Usikkerhedsbudgettets formål er at orientere brugerne om den samlede måleusikkerhed for en given værdi samt at vise laboratoriet, hvor meget hver faktor bidrager til den samlede usikkerhed og dermed fokusområde for forbedring af den samlede kvalitet. Usikkerhedsbudgettet skal omfatte alle kendte betydende bidrag til usikkerheden. Disse kan med fordel grupperes for at gøre beregningen simplere (4,14). Almindeligvis vil følgende elementer være til stede: 1) Usikkerhedskomponenter ved præanalytiske forhold. 2) Usikkerheden på bestemmelse (tilskrivelse) af kalibratorens værdi. 3) Usikkerhed på bias-korrektioner. 4) Usikkerheden på selve målingen (sædvanligvis den intermediære præcision). Budgetterne bør, såfremt der ikke på overkommelig vis kan etableres eksperimentelle data, baseres på valide skøn. Usikkerhed fra så mange betydende faktorer som muligt skal være indeholdt i usikkerhedsbudgettet. I praksis mangler der ofte gode data for usikkerhedskomponenter ved præanalytiske forhold, men hvis ønsket kan præanalytisk usikkerhed estimeres ud fra Blodprøvetagning som kilde til præanalytisk variation (5). DANAK finder det derfor indtil videre tilstrækkeligt, at usikkerhedsbudgetter kun dækker punkterne 2, 3 og 4 i de tilfælde, hvor pålidelige data for usikkerheden for de præanalytiske forhold ikke er let tilgængelige. Den intraindividuelle biologiske variation (15) kan være relevant ved vurdering af måleresultatet, men kan opgives særskilt til klinikerne. Det skal dog bemærkes, at tilgængelige tal for intraindividuel biologisk variation kun dækker raske individer, og det er ofte uklart, om prøvetagningsusikkerhed indgår i tallene. 9. KONKLUSION Valideringen afsluttes med en vurdering af resultaterne og en konklusion om, hvorvidt metoden kan godkendes til brug i laboratoriet. 10. REFERENCER 1. DS/EN ISO/IEC 17025:2005: Generelle krav til prøvnings- og kalibreringslaboratoriers kompetence. 2. DS/EN ISO 15189:2008: Medicinske laboratorier Særlige krav til kvalitet og kompetence. 3. Bekendtgørelse om medicinsk udstyr til in vitro-diagnostik. BEK nr af 12/12/ Akkrediteringsbestemmelse 13, 5. Gerdes U. Blodprøvetagning som kilde til præanalytisk variation. Klinisk Biokemi i Norden 2003;15(4): Kenny D, Fraser CG, Petersen PH, Kallner A. Consensus agreement. Scand J Clin Lab Invest 1999;59: NA Dok. nr. 48a Klinisk Kjemi; DS:2344:1995: Metrologi, terminologi Grundlæggende og generelle begreber (6.12).

177 DSKB s anbefaling til metodevalidering Validering af analysemetoder i klinisk biokemiske laboratorier Dato: 1. oktober 2010 Side: 9/9 9. Dybkær R. Vocabulary for Use in Measurement Procedures and Description of Reference Materials in Laboratory Medicine. Eur J Chem Clin Biochem 1997;35(2): ISO : 2006: Statistics Vocabulary and symbols Part 1: Probability and general statistical terms (3.12). 11. DS/ISO : 2003: Detektionsevne Del 1: Termer og definitioner. 12. Egen definition. 13. DS/ISO standard : 1995: Nøjagtighed (korrekthed og præcision) af målemetoder og resultater. Del 2: Grundlæggende metode til bestemmelse af repeterbarhed og reproducerbarhed for en standardiseret målemetode. 14. Eurachem CITAC: Quantifying Uncertainty in Analytical Measurement, 2. edition, Ricos C, Alvarez V, Cava F, et al. Current databases on biologic variation: pros, cons and progress. Scand J Clin Lab Invest 1999;59: (med tilhørende online version og opdatering af databasen på IKRAFTTRÆDELSE 15. oktober 2010.

Vis mere