MAX Enteric Parasite Panel P0219(02) Til in vitro-diagnostik Til brug med BD MAX-systemet

Transkript

1 MAX Enteric Parasite Panel P0219(02) Til in vitro-diagnostik Til brug med BD MAX-systemet Dansk 4 I TILSIGTET BRUG BD MAX Enteric Parasite Panel (BD MAX enterisk parasitpanel), som det udføres på BD MAX-systemet, er en automatisk in vitro-diagnostisk test til direkte kvalitativ påvisning af enteriske parasitiske patogener. BD MAX Enteric Parasite Panel påviser nukleinsyrer fra: Giardia lamblia Cryptosporidium (kun C. hominis og C. parvum) Entamoeba histolytica Testning udføres på ukonserveret eller 10 % formalinfikseret fæcespræparater fra symptomatiske patienter med formodet gastroenteritis, enteritis eller colitis. Analysen er beregnet som en hjælp til diagnosticering af gastrointestinal infektion, når den bruges i forbindelse med klinisk evaluering og andre laboratoriefund. Testen foretages direkte på præparatet ved brug af en realtidspolymerase-kædereaktion (PCR) til amplifikation af specifikke mål. Testen anvender fluorogene genspecifikke hybridiseringsprober til påvisning af det amplificerede DNA. Denne test er beregnet til brug i forbindelse med klinisk præsentation, laboratorieresultater og epidemiologiske oplysninger som en hjælp til differentialdiagnosticeringen af infektioner med Giardia lamblia, Cryptosporidium hominis og C. parvum og Entamoeba histolytica. Resultaterne for denne test må ikke anvendes som den eneste basis for diagnose, behandling eller andre beslutninger vedrørende patientbehandling. Positive resultater udelukker ikke samtidig infektion med andre organismer, som ikke påvises af denne test, og må ikke udgøre den eneste og definitive årsag til patienters sygdom. Negative resultater i forbindelse med klinisk sygdom, der er kompatibel med gastroenteritis og/eller colitis, kan skyldes infektion med patogener, som ikke påvises af denne test, eller ikke-infektiøse årsager, som f.eks. colitis ulcerosa, colon irritabile eller Crohns sygdom. RESUMÉ OG FORKLARING AF PROCEDUREN Organismer, som forårsager enteriske sygdomme, repræsenterer en betydelig årsag til morbiditet og mortalitet på verdensplan. Enteriske infektioner får adgang til kroppen via mave-tarm-kanalen og spredes typisk via kontaminerede fødevare og vand eller kontakt med opkast eller fæces. CDC anslår, at der er 48 million tilfælde af fødevarebårne sygdomme i USA hvert år, hvilket medfører hospitalsindlæggelser og dødsfald. 1 I udviklingslandene forårsager disse sygdomme årligt 2,5 millioner dødsfald bland småbørn. 2 Hver af de ætiologiske agenser kan medføre mindre afvigelser i symptomatologi, herunder mavekrampe eller -smerter, appetitløshed, kvalme eller opkast, som dog alle resulterer i diarré. 3 Gentagne anfald med diarré og vedvarende diarré-sygdom forstyrrer tarmfunktionen og -absorptionen, hvilket potentielt medfører fejlernæring hos børn og retarderet vækst. 4 Ætiologierne for diaré omfatter virusser, bakterier og parasitter. Giardia lamblia, Cryptosporidium hominis og C. parvum og Entamoeba histolytica anses for at være betydelige diarré-forårsagende parasitter. Alle disse organismer overføres via fækal-oral vej gennem indtagelse af kontaminerede fødevarer eller vand og forbindes ofte med udbrud. På verdensplan er Giardia en af de mest hyppigt identificerede parasitter, der er forbundet med vandbårne sygdomsudbrud. 5 Giardiasis er karakteriseret af diarré, mavekramper, oppustethed, vægttab og malabsorption. Enteriske lidelser, allergier og reaktiv artrit er blevet forbundet med giardiasis. Sygdommen er generelt selvbegrænsende, og symptomatiske infektioner kan også opstå. Cryptosporidium hominis and C. parvum forårsager cryptosporidiose, som er karakteriseret ved vandholdig diarré, som ledsages af mavekramper, feber, kvalme, opkast og vægttab. Hos immunokompromitterede patienter kan der som resultat af infektionen udvikles cholangitis eller pancreatitis. 5,6 Asymptomatiske infektioner kan dog ligeledes opstå. Entamoeba histolytica-infektioner er ofte asymptomatiske. Når der optræder symptomer, er der ofte tale om svær diarré og oppustethed. Når sygdommen er vedvarende, kan den forværres til vægttab og træthed. 6 Infektioner med Entamoeba histolytica kan også blive invasive, hvilket medfører vævsnedbrydning og leverabsces. 7 1

2 Mikroskopisk påvisning af disse parasitter er ufølsom og kræver betydelig tid, udstyr og uddannelse. Desuden kan mikroskopi ikke skelne Entamoeba histolytica fra de nonpatogene arter Entamoeba dispar. 8 PCR er mere følsom end traditionelle metoder og kan være i stand til tidligere påvisning, som kan reducere behovet for at teste flere fæcesprøver og forbedre patientbehandlingen og infektionskontrol. 9 BD MAX Enteric Parasite Panel er en multiplex-analyse, som samtidig og differentielt påviser Giardia lamblia, Cryptosporidium hominis og C. parvum og Entamoeba histolytica. BD MAX Enteric Parasite Panel kan, når det bruges kombineret med BD MAXsystemet, levere resultater for 24 præparater på cirka 4,5 timer. BD MAX Enteric Parasite Panel effektiviserer og forenkler testprocessen ved at eliminere behovet for operatørintervention fra tidspunktet, hvor prøven anbringes i BD MAX-systemet, indtil resultaterne er tilgængelige. En fæcespræparatet opsamles og transporteres til laboratoriet, hvor den homogeniseres og overføres vha. en podenål til et BD MAX Enteric Parasite Panel Sample Buffer Tube. Prøvebufferrøret lukkes med membranhætte og opvarmes derefter på BD Pre-warm Heater for at fremme lysering af parasitorganismerne. Prøvebufferrøret vortexes derefter og overføres til BD MAXsystemet, hvorefter de følgende automatiserede procedurer gennemføres: Cellerne lyseres, nukleinsyrer ekstraheres på magnetiske perler og koncentreres og derefter tilsættes en afmåling af de eluerede nukleinsyrer til PCR-reagenser, som indeholder målspecifikke primere, der bruges til at amplificere de genetiske mål i BD MAX PCR Cartridge (BD MAX PCR-kassette), hvis de er til stede. Analysen omfatter også en prøvebearbejdningskontrol. Prøvebearbejdningskontrollen er til stede i ekstraktionsrøret og udsættes for ekstraktions-, koncentrations- og amplifikationstrinnene for at kunne overvåge for hæmmende stoffer, som skyldes instrument- eller reagensfejl. Operatørindgriben er ikke nødvendig, så snart prøven, en BD MAX Unitized Reagent Strip (BD MAX-reagensstrimmel) og PCR-kassetten er sat i BD MAX-systemet. BD MAX-systemet automatiserer prøvelysering, nukleinsyreekstraktion og -koncentration, reagensrehydrering, nukleinsyre-amplifikation og påvisning af målnukleinsyresekvensen ved brug af polymerasekædereaktion (PCR) i realtid. Amplificerede mål påvises med hydrolysesonder mærket med hæmmede fluoroforer. Amplificering, påvisning og tolkning af signaler udføres automatisk af BD MAX-systemet. PROCEDURENS PRINCIPPER Fæcesprøver indsamles fra patienter og transporteres til laboratoriet i en ren beholder, ukonserveret eller 10 % formalinfikseret. Præparatet vortexes, og en podenål på 10 µl isættes til dybden af podenålen i præparatet og trykkes ud vha. en slyngende bevægelse i et BD MAX-prøvebufferrør. Prøvebufferrøret lukkes med membranhætte og opvarmes derefter på BD Pre-warm Heater for at fremme lysering af parasitorganismerne. Prøvebufferrøret vortexes og overføres til BD MAX-systemet. Når arbejdslisten er genereret, og prøven er sat i BD MAX-instrumentet med en BD MAX Enteric Parasite Panel Unitized Reagent Strip og en PCR-kassette, startes kørslen, hvorefter yderligere operatørindgriben ikke er påkrævet. BD MAX-systemet automatiserer prøveklargøringen, herunder lysering af målorganismen, DNA-ekstraktion og -koncentration, reagensrehydrering, målnukleinsyresekvensamplifikation og -påvisning ved brug af PCR i realtid. Tolkning af signalet udføres automatisk af BD MAX-systemet. Analysen omfatter også en prøvebearbejdningskontrol, som leveres i ekstraktionsrøret og udsættes for ekstraktions-, koncentration-, og amplifikationstrin. Prøvebearbejdningskontrollen er inkorporeret i lyserings-, ekstraktions-, koncentrations- og amplifikationstrinnene for at kunne overvåge for tilstedeværelsen af potentielt hæmmende stoffer samt system- eller reagensfejl. Efter enzymatisk cellelysering ved en forhøjet temperatur indfanges de frigjorte nukleinsyrer på magnetiske affinitetsperler. Perlerne med de bundne nukleinsyrer vaskes, og nukleinsyrerne elueres vha. varme og høj ph i elueringsbuffer. Elueret DNA neutraliseres og overføres til Master Mix-blandingsrøret for at hydrere PCR-reagenserne. Efter rehydrering dispenserer BD MAX-systemet en fast mængde PCR-klar opløsning til BD MAX PCR-kassetten. Mikroventiler i BD MAX PCR-kassetter forsegles af systemet, inden PCR startes, for at lukke amplifikationsblandingen og derved forhindre fordampning og kontaminering. De amplificerede DNA-mål påvises vha. hydrolyseprober (TaqMan), som er mærket med en fluorescerende reporterfarvestof (fluorofor) i den ene ende og med en quencherdel. Prober, der er mærket med forskellige fluoroforer, anvendes til at påvise amplikoner for enteriske parasitmål og prøvebearbejdningskontrollen i fire forskellige optiske kanaler i BD MAX-systemet: Giardia lamblia-målamplikoner påvises i FAM-kanalen, Cryptosporidium hominis/parvum -målamplikoner påvises i ROX-kanalen, Entamoeba histolytica-målamplikoner påvises i VIC-kanalen og prøvebearbejdningskontrolamplikoner påvises i Cy5.5-kanalen. Når sonderne er i deres normale tilstand, kvæles fluoroforen af fluorescensen pga. dens nærhed til quencheren. Ved tilstedeværelsen af mål-dna hybridiseres sonderne dog til deres komplementære sekvenser og hydrolyseres af DNA-polymerasens 5' 3' exonukleaseaktivitet, da den syntetiserer den nydannede streng langs DNA-skabelonen. Som følge heraf adskilles fluoroforerne fra quenchermolekylerne, og fluorescensen afgives. BD MAX-systemet overvåger disse signaler ved hver cyklus og tolker dataene i slutningen af programmet for at kunne levere det endelige resultat. REAGENSER OG MATERIALER REF. Indholdsfortegnelse Antal BD MAX Enteric Parasite Master Mix (A7) Ovntørret PCR Master Mix, der indeholder TaqMan-specifikke molekylære prober og primere sammen med en prøvebearbejdningskontrolspecifik TaqMan-sonde og -primere. BD MAX Enteric Parasite Unitized Reagent Strips Enhedsinddelt reagensstrimmel, der indeholder alle flydende reagenser og engangspipettespidser, der er nødvendige til DNA-ekstraktion. BD MAX Enteric Parasite Extraction Tube (B2) Ovntørret pellet, der indeholder DNA-magnetiske affinitetsperler, proteasereagenser og prøvebearbejdningskontrol. BD MAX Enteric Parasite Sample Buffer Tube Membranhætter test 24 test 24 test 24 test 2

3 NØDVENDIGT UDSTYR OG MATERIALER, DER IKKE ER VEDLAGT BD Pre-warm Heater (BD Diagnostic Systems katalognr ) BD MAX PCR Cartridges (BD Diagnostic Systems katalognr ) VWR Multi-Tube Vortex Mixer eller tilsvarende Vortex Genie 2 eller tilsvarende Nalgene Cryogenic Vial Holder eller tilsvarende Engangshandsker, pudderfri 10 µl-podenåle (BD Diagnostic Systems katalognr ) Til ukonserverede fæcespræparattyper: Tørre, rene beholdere til opsamling af fæcespræparater Til 10 % formalinfikserede fæcespræparattyper: 10 %-formalintransport (15 ml) ADVARSLER OG FORHOLDSREGLER Fare H319 Forårsager alvorlig øjenirritation. H360 Kan skade forplantningsevnen eller det ufødte barn. P280 Bær beskyttelseshandsker/beskyttelsestøj/øjenbeskyttelse/ansigtsbeskyttelse. P264 Vask grundigt efter brug. P201 Indhent særlige anvisninger før brug. P202 Anvend ikke produktet, før alle advarsler er læst og forstået. P305+P351+P338 VED KONTAKT MED ØJNENE: Skyl forsigtigt med vand i flere minutter. Fjern eventuelle kontaktlinser, hvis dette kan gøres let. Fortsæt skylning. P308+P313 VED eksponering eller mistanke om eksponering: Søg lægehjælp. P337+P313 Ved vedvarende øjenirritation: Søg lægehjælp. P405 Opbevares under lås. P501 Indholdet/beholderen bortskaffes i henhold til alle lokale, regionale, nationale og internationale regulativer. BD MAX Enteric Parasite Panel er beregnet til in vitro-diagnostik. Statslige og lokale myndigheder inden for sundhedssektoren har publiceret retningslinjer for meddelelse om rapporterbare sygdomme inden for disses ansvarsområde, herunder, men ikke begrænset til, Giardia, Cryptosporidium og Entamoeba for at fastlægge de nødvendige tiltag til verificering af resultater med henblik på identificering og sporing af udbrud. Laboratorier er ansvarlige for at følge deres statslige eller lokale bestemmelser for indsendelse af klinisk materiale eller isolater for positive præparater til disses statslige laboratorier inden for sundhedssektoren. Forholdsregel relateret til rapportering i sundhedsvæsnet: Lokale, statslige og føderale bestemmelser for underretning om rapporterbare sygdomme opdateres løbende og omfatter en række organismer, som overvåges, og undersøgelse af udbrud. 18,19 Desuden anbefaler Centers for Disease Control (CDC) i USA, at laboratoriet, når der påvises patogener fra rapporterbare sygdomme ved en dyrkningsuafhængig diagnostisk test (CIDT), skal stå for indhentning af isolatet eller kliniske materialer, der skal indsendes til det relevante laboratorium i det offentlige sundhedssystem, for at fremme påvisning af udbrud og epidemiologiske undersøgelser. Laboratorier er ansvarlige for at følge deres statslige og/eller lokale bestemmelser og skal kontakte laboratorierne i det offentlige sundhedssystem for at få retningslinjerne for indsendelse af isolater og/eller kliniske præparater. Anvend ikke reagenserne og/eller materialer, der er for gamle. Sættet må ikke bruges, hvis mærkaten, der forsegler den ydre emballage, er brudt ved modtagelse. Reagenser må ikke bruges, hvis de beskyttende poser er åbne eller defekte ved modtagelse. Anvend ikke reagenser, hvis tørremidlet ikke er til stede eller er brudt inden i reagensposerne. Tørremidlet må ikke tages ud af reagensposerne. De beskyttende poser med reagenser skal straks lukkes til med lynlåsen efter hver brug. Fjern eventuel luft i poserne, inden de forsegles. Beskyt reagenser mod varme og fugt. Længerevarende udsættelse for fugt kan have en negativ indflydelse på produktets ydelse. Reagenserne må ikke anvendes, hvis folien er blevet brudt eller beskadiget. Bland ikke reagenser fra forskellige poser og/eller kits og/eller partier. Hætter fra de forskellige reagenser må ikke ombyttes eller genbruges, da dette kan medføre kontaminering og kompromittere testresultaterne. Kontroller Unitized Reagent Strips for korrekt væskefyldning (sørg for, at væskerne befinder sig i bunden af rørene) (se figur 1). 3

4 Kontroller Unitized Reagent Strips for at sikre, at alle pipettespidser er til stede (se figur 1). Vær forsigtig, når der bruges kemiske opløsninger, da læsbarheden for stregkoden på Master Mix- og ekstraktionsrør kan ændres. God laboratorieteknik er afgørende for korrekt udførelse af denne analyse. Pga. høj analytisk sensitivitet for denne test skal der udvises meget stor forsigtighed for at opretholde renheden for alle materialer og reagenser. I tilfælde, hvor der foretages andre PCR-test i samme umiddelbare område af laboratoriet, skal der udvises forsigtighed for at sikre, at BD MAX Enteric Parasite Panel, eventuelle nødvendige reagenser til testning og BD MAX-systemet ikke kontamineres. Undgå altid mikrobiologisk kontaminering og deoxyribonucleasekontaminering (DNase) af reagenser. Der skal skiftes handsker, inden der håndteres reagenser og kassetter. For at undgå kontaminering af miljøet med amplikoner må BD MAX PCR Cartridges ikke adskilles efter brug. Forseglingerne af BD MAX PCR Cartridges er udviklet for at forhindre kontaminering. Hvis BD MAX Enteric Parasite Panel udføres uden for de anbefalede tidsrammer, kan resultaterne blive ugyldige. Analyser, som ikke udføres inden for de specificerede tidsrammer, bør gentages. Yderligere kontroller kan testes i henhold til retningslinjer eller regler fra lokale eller offentlige myndigheder eller akkrediteringsorganisationer. Alle præparater skal altid håndteres som værende smittefarlige og i henhold til sikre laboratorieprocedurer, som f.eks. dem, der er beskrevet i CLSI Document M29 10 og i Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. 11 Benyt egnet beskyttelsestøj og engangshandsker ved håndtering af alle former for reagenser. Vask hænderne grundigt efter udførelse af testen. Undgå pipettering med munden. Undgå at ryge, drikke, tygge eller spise inden for områder, hvor der behandles prøver eller analysekitreagenser. Bortskaf ubrugte reagenser og affald i overensstemmelse med lokale og/eller nationale regler. Se brugervejledningen til BD MAX-systemet 12 for yderligere advarsler, forholdsregler og procedurer. OPBEVARING OG STABILITET Indsamlede prøver, enten ukonserverede eller 10 % formalinfikseret fæces, skal opbevares ved en temperatur på mellem 2 og 25 C under transport. Beskyttes mod frost eller for kraftig varme. Præparater, enten ukonserverede eller 10 % formalinfikseret fæces, kan opbevares i op til 120 timer (5 dage) ved 2 8 C eller i maksimalt 48 timer ved 2 25 C inden testning. Inden eller efter forvarmning kan inokulerede prøvebufferrør opbevares til testning (eller gentestning) i maksimalt: Tid Temperatur 120 timer (5 dage) 2 8 C 48 timer 2 25 C BD MAX Enteric Parasite Panel-komponenter er stabile ved 2 25 C inden den angivne udløbsdato. Anvend ikke komponenter, der er for gamle. BD MAX Enteric Parasite Master Mix og -ekstraktionsrør leveres i forseglede poser. Produktet skal forsegles igen umiddelbart efter åbning for at beskytte det mod fugt. Reagensrør er stabile i op til 14 dage ved 2 25 C efter første åbning og genforsegling af posen eller indtil udløbsdatoen, alt efter den der kommer først. BRUGSANVISNING Præparatindsamling/transport For at kunne indsamle et passende prøvemateriale skal prøvetagningsproceduren følges nøje. Fæcespræparater indsamles i henhold til følgende procedure: Ukonserverede præparater: Overfør fæcespræparatet til en tør, ren beholder. Undgå kontaminering med vand eller urin. Mærk beholderen, og transporter den til laboratoriet i henhold til instituttets standardprocedurer (se afsnittet Opbevaring og stabilitet). Undgå at blande toiletpapir, vand eller sæbe i præparatet. 10 % formalinfikserede præparater: Overfør fæcespræparatet til fikseringsanordningen i overensstemmelse med fabrikantens anvisninger. Undgå kontaminering med vand eller urin. Mærk beholderen, og transporter den til laboratoriet i henhold til instituttets standardprocedurer (se afsnittet Opbevaring og stabilitet). Undgå at blande toiletpapir, vand eller sæbe i præparatet. 4

5 Klargøring af præparater 1. Mærk et stregkodemærket BD MAX-prøvebufferrør (klar hætte) med den korrekte prøveidentifikation. Stregkoden må ikke tildækkes. 2. Vortex ukonserverede eller fikserede præparater ved høj hastighed i 15 sekunder. Udvis forsigtighed ved åbning af præparater, der er vortexet, da materialet kan sætte sig fast på beholderens låg. 3. Tag den klare hætte af prøvebufferrøret. 4. Inokulering af BD MAX-prøvebufferrør: a. Til ukonserverede fæcespræparater: i. Isæt en 10 µl inokuleringspodenål til engangsbrug, indtil hele podenålsdelen er neddyppet i præparatet. Podenålen må ikke isættes så langt ned, at der kommer fæces på skaftet, da det kan overbelaste PCR-reaktionen. ii. Isæt den fyldte podenål i prøvebufferrøret, og tryk præparatet ud med en slyngende bevægelse. iii. Fjern podenålen, og kassér den. BEMÆRK: Det er ikke nødvendigt at fjerne hele præparatet fra podenålen. Farven på den resulterende opløsning i prøvebufferrøret må ikke være mørkere end te-farvet. b. Til 10 % formalinfikserede fæcespræparater: i. Isæt en 10 µl inokuleringspodenål til engangsbrug, indtil hele podenålsdelen er neddyppet i præparatet. Dannelse af en stabil boble i podenålen kan være vanskelig at opnå med fikserede præparater. ii. Isæt den fyldte podenål i prøvebufferrøret, og tryk præparatet ud med en slyngende bevægelse. iii. Fjern podenålen, og kassér den. 5. Luk det inokulerede prøvebufferrør med en blå membranhætte. 6. Forbered eventuelt yderligere prøver til testning ved at gentage trin 1 til 5, og fortsæt derefter med betjeningen af BD Pre- warm Heater. Betjening af BD Pre-warm Heater (Se brugervejledningen til BD Pre-warm Heater 13 for betjeningsinstruktioner.) 1. Vælg valgmuligheden <BD MAX ENT PARA 53 > under panelet Run > Worklist Panel (Kør > Arbejdsliste) 2. Vælg det kittets lotnummer for BD MAX Enteric Parasite (for lotsporbarhed) (bemærk, at kittets lotnummer skal scannes separat, inden det kan findes på den afventende arbejdsliste) BEMÆRK: Sørg for, at registrering af lotnumre er aktiveret under Configuration > System (Konfiguration > System). 3. Angiv stregkoden fra hvert BD MAX Enteric Parasite Panel-prøvebufferrør i feltet Sample Tube (Prøverør) vha. stregkodescanneren eller manuel indtastning sammen med patientens accessions-id. 4. Den afventende arbejdsliste opdateres nu og viser afkrydsningsfeltet for, at forvarmningen kan planlægges. 5. Planlæg prøven ved at markere feltet på arbejdslisten. 6. Anbring BD MAX Enteric Parasite Panel-prøvebufferrøret (der indeholder prøven) på BD Pre-warm Heater. Stationen kan rumme op til 24 prøvebufferrør. 7. Luk låget på BD Pre-warm Heater, og vælg Start Pre-warm (Start forvarm) på panelet Run > Worklist (Kør > Arbejdsliste). En specifik opvarmnings- og afkølingsprofil for BD MAX Enteric Parasite Panel startes. BEMÆRK: Kontrollér, at rørene er anbragt fysisk på BD Pre-warm-stativet, og at stativet er isat i BD Pre-warm Heater. Klik derefter på OK, når du får vist meddelelsen Start Pre-warm (Start forvarmning). 8. Varigheden til fuldførelse af forvarmningskørslen vises på skærmbilledet Status, og skærmbilledet med arbejdslisten angiver at forvarmningen er In progress (I gang). 9. På skærmbilledet med arbejdslisten vises den valgte prøve/test nu som Pre-warm Complete (Forvarmning udført), hvis forvarmningen blev udført. 10. Efter korrekt udførelse af trinnet Pre-warm (Forvarm) fjernes prøvebufferrøret fra BD Pre-warm Heater, og hvert prøvebufferrør vortexes kortvarigt i 5 sekunder, eller alternativt placeres alle prøvebufferrør på en vortexer til flere rør i op til 1 minut. 11. Gå til BD MAX System Operation (Betjening af BD MAX-systemet) for at opsætte BD MAX-systemstativet. BEMÆRK: Hvis forvarmningen ikke bliver gennemført, vil timerens status på BD MAX-systemet vise Failed / Cooling (Mislykket/afkøler). Det kan være nødvendigt at gentage forvarmningen, inden der kan testes på BD MAX-systemet. Ved udførelse af trinnet Pre-warm failure cooling (Forvarmning mislykket, afkøler) henvises der til skærmbilledet med arbejdslisten. Hvis statussen for Pre-warm (Forvarmning) viser Failed (Mislykket) for den pågældende prøve, skal trinnet Pre-warm (Forvarmning) gentages. Hvis Pre-warm (Forvarmning) viser Complete (Udført), kan testen af disse rør med BD MAX Enteric Parasite Panel fortsætte. BEMÆRK: BD MAX Enteric Parasite Panel kan kun anvendes efter korrekt udførelse af forvarmningen ovenfor. Prøver, som har gennemgået forvarmningscyklussen korrekt, skal ikke opvarmes igen, hvis det er nødvendigt at udføre flere test (se afsnittet Opbevaring og stabilitet). BEMÆRK: På laboratorier med mere end ét BD MAX-system og mere end én BD Pre-warm Heater skal prøverne testes og/eller gentestes på det samme BD MAX-system, som forvarmningen blev udført på. BEMÆRK: Efter forvarmning skal testning af BD MAX Enteric Parasite Panel udføres umiddelbart inden for tidsrammerne, der er angivet under Opbevaring og stabilitet. Hvis det er nødvendigt at udføre testen igen, skal prøven(-erne) vortexes igen. 5

6 Betjening af BD MAX-systemet BEMÆRK: Der henvises til brugervejledningen til BD MAX-systemet 12 for detaljerede instruktioner (afsnittet Betjening). BEMÆRK: Der kræves ét (1) prøvebufferrør, én (1) membranhætte, én (1) Master Mix (A7), ét (1) ekstraktionsrør (B2) og én (1) Unitized Reagent Strip til hver prøve og hver ekstern kontrol, der skal testes. Sæt det nødvendige antal BD MAXmaterialer til side fra deres beskyttende poser eller æsker. Poser med Master Mix-blanding eller ekstraktionsrør opbevares ved at fjerne eventuel luft og lukke dem vha. lynlåsen, og det skal sikres, at tørremidlet ligger i poserne. 1. Tænd BD MAX-systemet (hvis det ikke allerede er sket), og log på ved at angive <username> (brugernavn) og <password> (adgangskode). 2. Der skal skiftes handsker, inden der håndteres reagenser og kassetter. 3. Fjern det påkrævede antal Unitized Reagent Strips fra BD MAX Enteric Parasite Panel-kittet. Bank forsigtigt hver Unitized Reagent Strip på en hård overflade for at sikre, at alle væskerne befinder sig i bunden af rørene. 4. Fjern det nødvendige antal ekstraktionsrør og Master Mix-blandingsrør fra beskyttelsesposerne. Fjern eventuel overskydende luft, og luk poserne vha. lynlåsen. 5. For hvert præparat, der skal testes, skal der placeres én (1) URS (Unitized Reagent Strip) på BD MAX-systemstativet. Start med position 1 på stativ A for fortsæt fortløbende. 6. Klik ét (1) ekstraktionsrør (hvid folie) i hver URS (Unitized Reagent Strip) i position 1, som det er vist på figur Klik ét (1) Master Mix-rør (grøn folie) i hver Unitized Reagent Strip i position 2, som det er vist på figur 1. Figur 1: Klik BD MAX Enteric Parasite Panel-ekstraktionsrør og Master Mix-rør fast i Unitized Reagent Strips. 8. Anbring prøvebufferrørene i BD MAX-systemstativ(er) svarende til de Unitized Reagent Strips, der blev samlet i trin 5 til 7. BEMÆRK: Anbring prøvebufferrørene i prøvestativ(er) med 1D-stregkodeetiketterne udad (det gør det lettere at scanne prøvebufferrørene, når prøverne logges på). 9. Anbring det påkrævede antal BD MAX PCR-kasetter i BD MAX-systemet (se figur 2). Hver kassette kan rumme op til 24 prøver. BD MAX-systemet vælger automatisk positionen og rækken på PCR-kassetten for hver kørsel. BD MAX PCR-kassetter kan bruges flere gange, indtil alle baner er anvendt. For at maksimere brugen af BD MAX PCR-kassetter med Sample Mode skal du vælge Run Wizard (Kørselsguide) under fanen Worklist (Arbejdsliste) for banetildelinger. Se brugervejledningen til BD MAX-systemet 12 for at få flere oplysninger. Figur 2: Isæt BD MAX PCR-kassetter. 6

7 10. Sæt stativ(er) i BD MAX-systemet (se figur 3). Side A Side B Figur 3: Sæt stativ(er) i BD MAX-systemet. 11. Luk låget på BD MAX-systemet, og klik på <Start> for at starte behandlingen. 12. Når kørslen er færdig, skal resultaterne kontrolleres med det samme, eller prøvebufferrørene skal opbevares ved 2 8 C i op til 120 timer (5 dage) ELLER ved 2 25 C i maksimalt 48 timer, indtil resultaterne er kontrolleret. BEMÆRK: Hvis en hætte med membran blev beskadiget under kørslen, skal den udskiftes med en ny, inden prøven stilles til opbevaring. BEMÆRK: Forberedt BD MAX Enteric Parasite Panel-prøvebufferrør kan opbevares ved 2 8 C i op til 120 timer (5 dage) ELLER ved 2 25 C i maksimalt 48 timer, efter at prøven er føjet til prøvebufferrøret. Når der opnås inkonklusive (IND), uafklarede (UNR) eller ufuldstændige (INC) resultater, eller når der opstår en ekstern kontrolfejl, skal der inden for denne tidsramme udføres en gentagen test fra det klargjorte prøvebufferrør (se afsnittet Gentagen testprocedure). KVALITETSKONTROL Kvalitetskontrolprocedurer overvåger udførelsen af analysen. Laboratorierne skal etablere antallet, typen og hyppigheden for testning af kontrolmaterialer i henhold til retningslinjerne eller kravene i de lokale, statslige og/eller nationale regulativer eller akkrediteringsorganisationer for at overvåge effektiviteten for hele den analytiske proces. For at finde en generel vejledning omkring kvalitetskontrol kan brugeren vælge at se CLSI MM3 14 og EP Eksterne kontrolmaterialer leveres ikke af BD. Eksterne positive og negative kontroller anvendes ikke af BD MAX-systemsoftwaren med henblik på tolkning af prøvetestresultater. Eksterne kontroller behandles på samme måde som patientprøver. Se tabellen i afsnittet Tolkning af resultater for at få oplysninger om tolkning af resultater for eksterne kontrolanalyser. 2. Én (1) ekstern positiv kontrol og én (1) ekstern negativ kontrol skal mindst køres dagligt, indtil der er opnået tilstrækkelig procesvalidering på BD MAX-systemet i hvert laboratoriemiljø. Nedsat hyppighed for kontroltestning skal ske i henhold til gældende lovgivning. 3. Den eksterne positive kontrol er beregnet til overvågning med henblik på alvorlige reagensfejl. Den eksterne negative kontrol er beregnet til påvisning af kontaminering af reagenser eller miljø (eller carry-over) fra målnukleinsyrer. 4. Diverse typer eksterne kontroller anbefales for, at brugeren kan vælge den mest relevante til vedkommendes kvalitetskontrolprogram for laboratoriet. a. Ekstern negativ kontrol: Et ikke-inokuleret BD MAX Enteric Parasite Panel-prøvebufferrør. BD anbefaler, at den eksterne negative kontrol forberedes inden den eksterne positive kontrol for at reducere potentiel kontaminering pga. kontrolforberedelse. b. Ekstern positiv kontrol: Pga. manglende kommerciel tilgængelighed af organisme-oocyster/-cyster for alle mål og besværlige dyrkningsmetoder til trofozoit-formen af målorganismerne anbefaler BD genom-dna-forberedelser i overensstemmelse med tabel 1 nedenfor. Tabel 1: Kommercielt tilgængelige stammer til ekstern positiv kontrol Stamme til ekstern positiv kontrol Giardia intestinalis (Lambl) (ATCC 30888D) Cryptosporidium parvum (ATCC PRA-67D) Entamoeba histolytica (ATCC 30459D) Genom-DNA-koncentration pg/ml pg/ml 150 pg/ml 7

8 BEMÆRK: Ved opbevaring efter fabrikantens anbefalinger kan de kvantificerede stamopløsninger af genomt DNA anvendes til at forberede flere tripleksblandinger, som det er beskrevet nedenfor. (1) Hvis elementet modtages i tørret form, skal indholdet i hætteglasset rehydreres, som det er angivet på leverandørens produktblad, med 50 µl af 1X TE-buffer (10 mm Tris-HCl, 1 mm EDTA, ph = 8,0, molekylær biologisk grad). (2) Kvantificer hver DNA-forberedelse vha. spektometri med absorbans på 260 nm. (3) Forbered en blanding af de tre DNA-forberedelser ved seriel fortynding i 1X TE-buffer i overensstemmelse med de endelige koncentrationer for det genome DNA i tabellen ovenfor. (4) Vortex opløsningen, så den er godt blandet, og tilfør 10 µl af opløsningen til det tilsvarende BD MAX Enteric Parasite Panel-prøvebufferrør vha. en kalibreret pipette. Det genome DNA fra hver målorganisme vil være til stede ved 5X dens specifikke LoD i prøvebufferrøret. (5) Sæt en blå membranhætte på prøvebufferrøret, og vortex røret i 5 sekunder. 5. Alle eksterne kontroller skal give de forventede resultater (positiv for ekstern positiv kontrol, negativ for ekstern negativ kontrol) og ingen mislykkedes eksterne kontroller (uafklarede, inkonklusive eller ufuldstændige resultater). 6. En ekstern negativ kontrol, som viser et positivt testresultat, viser, at der er et problem med prøvehåndtering og/eller kontaminering. Gennemgå præparathåndteringsteknikken for at undgå sammenblanding og/eller kontaminering. En ekstern positiv kontrol, som viser et negativt testresultat, viser, at der er et problem med prøvehåndtering/-forberedelse eller reagensfejl. Gennemgå prøvehåndterings-/klargøringsteknikken. 7. En ekstern kontrol, som viser inkonklusive, uafklarede eller ufuldstændige testresultater, viser, at der er en fejl i reagenset eller BD MAX-systemet. Kontrollér BD MAX-systemets skærm for eventuelle fejlmeddelelser. Der henvises afsnittet Oversigt over systemfejl i brugervejledningen til BD MAX-systemet 12 for tolkning af advarsels- og fejlkoder. Hvis problemet fortsætter, skal der anvendes reagenser fra en uåbnet pose eller et nyt analysekit. 8. Hvert ekstraktionsrør indeholder en prøvebearbejdningskontrol, som er et plasmid, der indeholder en syntetisk mål-dnasekvens. Prøvebearbejdningskontrollen ekstraheres, elueres og amplificeres sammen med eventuel DNA, der er til stede i den bearbejdede prøve, hvilket sikrer prædiktionen af analysen. Prøvebearbejdningskontrollen overvåger effektiviteten for DNAopsamling, -vask og -eluering under prøvebearbejdningstrinnene samt effektiviteten for DNA-amplifikation og -påvisning under PCR-analyse. Hvis resultatet for prøvebearbejdningskontrollen ikke opfylder godkendelseskriterierne, rapporteres resultatet for præparatet som uafklaret. Eventuelle positive (POS) analyseresultater rapporteres dog, og ingen mål kaldes negativt (NEG). Et uafklaret resultat viser, at der er en prøverelateret hæmning eller reagensfejl. Gentag alle præparater, der rapporteres som uafklarede i henhold til afsnittet Gentagen testprocedure nedenfor. TOLKNING AF RESULTATER Resultaterne findes på fanen <Results> (Resultater) i vinduet <Results> (Resultater) på BD MAX-systemets skærm. BD MAX-systemsoftwaren tolker automatisk testresultaterne. Resultaterne rapporteres for alle analytterne og for prøvebearbejdningskontrollen. Et testresultat kan angives som NEG (negativt), POS (positivt) eller UNR (uafklaret) på baggrund af amplifikationsstatussen for målet og prøvebearbejdningskontrollen. Resultaterne IND (inkonklusiv) eller INC (ufuldstændig) skyldes en fejl i BD MAX-systemet. I tilfælde af delvis UNR, hvor et eller flere mål viser et POS-resultat og alle andre mål viser et UNRresultat, er der ingen mål, der kaldes NEG. Tabel 2: Tolkning af BD MAX Enteric Parasite Panel-resultater Rapporteret analyseresultat Glamb POS Glamb NEG Glamb UNR Crypto POS Crypto NEG Crypto UNR Ehist POS Ehist NEG Ehist UNR IND INC Tolkning af resultat a Giardia lamblia-dna påvist Ingen Giardia lamblia-dna påvist Uafklaret hæmmende præparat eller reagensfejl ingen amplifikation af mål eller prøvebearbejdningskontrol Cryptosporidium parvum- eller hominis-dna påvist Ingen Cryptosporidium parvum- eller hominis-dna påvist Uafklaret hæmmende præparat eller reagensfejl ingen amplifikation af mål eller prøvebearbejdningskontrol Entamoeba histolytica-dna påvist Ingen Entamoeba histolytica-dna påvist Uafklaret hæmmende præparat eller reagensfejl ingen amplifikation af mål eller prøvebearbejdningskontrol Inkonklusivt resultat, som skyldes en fejl i BD MAX-systemet (med advarsels- og fejlkoder b ) Ufuldstændig kørsel (med advarsels- og fejlkoder b ) a BD MAX Enteric Parasite Panel-resultater kan anvendes til vejledning for forholdsregler i henhold til institutionens programmer og praksis. b Der henvises afsnittet Fejlfinding i brugervejledningen til BD MAX-systemet 12 for tolkning af advarsels- og fejlkoder. 8

9 GENTAGEN TESTPROCEDURE BEMÆRK: Mængden er tilstrækkelig til at udføre én gentagen test med prøvebufferrøret. For prøvebufferrør, der opbevares ved 2 25 C, skal den gentagne test udføres inden for 48 timer efter den første prøvebufferrørsinokulering af prøven og forvarmning. Alternativt for prøvebufferrør, der opbevares ved 2 8 C, skal gentagne test udføres inden for 120 timer (5 dage). Det resterende fæcespræparat kan også anvendes til gentagen testning inden for 5 dage fra indsamlingen, hvis det opbevares ved 2 8 C, eller inden for 48 timer, hvis det opbevares ved 2 25 C. BEMÆRK: Nye prøver kan testes i samme kørsel som gentagede prøver. Uafklaret resultat Uafklarede resultater kan opnås i tilfælde af, at et prøverelateret hæmning eller en reagensfejl forhindrer korrekt amplifikation af mål eller prøvebearbejdningskontrol. Hvis prøvebearbejdningskontrollen ikke amplificeres, rapporteres prøven som UNR. POS; eventuelle positive (POS) analyseresultater rapporteres, og ingen mål kaldes NEG. D MAX-systemet rapporterer resultater for hvert mål individuelt, et UNR-resultat kan optræde for et eller flere BD MAX Enteric Parasite Panel-mål. I tilfælde af komplet UNR, hvor alle mål viser et UNR-resultat, skal testen gentages. I tilfælde af delvis UNR, hvor et eller flere mål viser et POS-resultat og andre mål viser et UNR-resultat, anbefales det, at testen gentages, som det er beskrevet ovenfor. I sjældne tilfælde kan der observeres uoverensstemmende resultater, når en gentagen test køres for de mål, som først blev rapporteret som POS. Følg de relevante procedurer i henhold til de aktuelle laboratorieprocedurer. En eller flere prøver kan gentages fra deres tilsvarende prøvebufferrør inden for de tidsrammer, der er defineret ovenfor. Vortex de(n) relevante prøve(r) i ét (1) minut, og start forfra fra afsnittet Betjening af BD MAX-systemet. Det resterende fæcespræparat kan også bruges til gentagen testning med et nyt prøvebufferrør inden for de tidsrammer, der er angivet ovenfor. Start forfra med afsnittet Klargøring af præparat. Inkonklusivt resultat Inkonklusive resultater kan opstå, hvis der opstår en systemfejl. En eller flere prøver kan gentages fra deres tilsvarende prøvebufferrør, inden for den tidsramme, der er defineret ovenfor. Vortex de(n) relevante prøve(r) i ét (1) minut, og start forfra fra afsnittet Betjening af BD MAX-systemet. Det resterende fæcespræparat med et nyt prøvebufferrør kan også bruges til gentagen testning inden for den tidsramme, der er angivet ovenfor. Start forfra med afsnittet Klargøring af præparat. Der henvises til brugervejledningen til BD MAX-systemet 12 (afsnittet Fejlfinding ) for tolkning af meddelelser for advarsels- og fejlkoder. Ufuldstændigt resultat Ufuldstændige resultater kan opnås i tilfælde af, at klargøringen af prøver eller PCR ikke blev udført. En eller flere prøver kan gentages fra deres tilsvarende prøvebufferrør inden for de tilladte tidsrammer, der er defineret ovenfor. Vortex de(n) relevante prøve(r) i ét (1) min., og start forfra fra afsnittet Betjening af BD MAX-systemet. Det resterende fæcespræparat kan også bruges til gentagen testning med et nyt prøvebufferrør inden for de tidsrammer, der er angivet ovenfor. Start forfra med afsnittet Klargøring af præparat. Der henvises til brugervejledningen til BD MAX-systemet 12 (afsnittet Fejlfinding ) for tolkning af meddelelser for advarsels- og fejlkoder. Ekstern kontrolfejl Eksterne kontroller skal resultere i de forventede resultater, når de testes. Hvis prøverne skal gentages pga. et forkert eksternt kontrolresultat, skal de gentages fra deres prøvebufferrør sammen med de nyligt klargjorte eksterne kontroller inden for de tilladte tidsrammer, der er angivet ovenfor. Vortex prøverne i ét (1) min, og start forfra fra afsnittet Betjening af BD MAX-systemet. Forvarmningsfejl I tilfælde af en forvarmningsfejl, skal berørte prøvebufferrør forblive i forvarmningsstationen i hele nedkølingscyklussen på 30 min. Når nedkølingscyklussen er udfør, genstartes forvarmningsprocedure igen med de samme prøvebufferrør, som det er beskrevet i afsnittet Betjening af BD Pre-warm Heater, forudsat at prøvebufferrørene ligger inden for tidsgrænserne, der er defineret i afsnittet Opbevaring og stabilitet. Hvis tidsrammen er uden for den, der er defineret i Opbevaring og stabilitet for prøvebufferrør, skal der forberedes nye prøvebufferrør af det oprindelige præparat ved at starte igen fra afsnittet Klargøring af prøve. PROCEDURENS BEGRÆNSNINGER Dette produkt er kun beregnet til brug med ukonserverede eller 10 % formalinfikserede humane fæcespræparater. Fæcespræparater fra rektale podninger og fæces, der er kontamineret med barium, er ikke valideret med BD MAX Enteric Parasite Panel. Der kan dannes fejlbehæftede resultater som følge af ukorrekt prøvetagningsmetode, håndtering eller opbevaring, tekniske fejl, sammenblanding af prøver, eller fordi antallet af organismer i prøven ligger under testens analytiske følsomhedsniveau. Hvis BD MAX Enteric Parasite Panel-resultatet er IND, INC eller UNR, skal testen gentages. Et positivt resultat for BD MAX Enteric Parasite Panel er ikke nødvendigvis ensbetydende med forekomsten af levedygtige organismer. Det er dog en indikation på tilstedeværelsen af DNA fra Giardia lamblia, Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium hominis eller Entamoeba histolytica, hvilket gør det muligt at identificere BD MAX Enteric Parasite Panel-organismer. Mutationer eller polymorfismer i primer- eller sondebindende områder kan påvirke påvisningen af målorganismerne, hvilket resultere i et falsk negativt resultat med BD MAX Enteric Parasite Panel. Som med alle PCR-baserede in vitro-diagnostiske test kan ekstremt lave målniveauer under analytisk sensitivitet for analysen påvises, men resultaterne er muligvis ikke reproducerbare. Falsk negative resultater kan opstå pga. tab af nukleinsyre fra utilstrækkelig indsamling, transport eller opbevaring af prøverne, eller de kan skyldes utilstrækkelig organismelysering. Prøvebearbejdningskontrollen er føjet til testen for at bidrage til identifikationen af præparater, som indeholder hæmmere af PCR-amplifikation. Prøvebearbejdningskontrollen viser ikke, om der er opstået tab af nukleinsyre pga. utilstrækkelig indsamling, transport eller opbevaring af prøverne, eller om bakterieceller er utilstrækkeligt lyseret. 9

10 Resultater fra BD MAX Enteric Parasite Panel skal bruges som tillæg til kliniske observationer og andre oplysninger, som er til rådighed for lægen. Som med alle in vitro-diagnostiske tests er positive og negative værdier stærkt afhængige af prævalens. Funktionen for BD MAX Enteric Parasite Panel kan variere afhængigt af den testede prævalens og population. BD MAX-prøvebufferrør er ikke designet til at understøtte undersøgelse af organismers morfologi. Morfologiske undersøgelser og/eller farvning skal udføres fra det oprindelige præparat. Denne tests funktion er ikke klarlagt ved monitorering af antivirus-behandling af Giardia lamblia, Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium hominis og Entamoeba histolytica. BD MAX Enteric Parasite Panel er beregnet til påvisning af DNA fra C. hominis og C. parvum uden skelnen mellem disse to arter. Denne test er ikke beregnet til påvisning af DNA fra andre arter af Cryptosporidium. Denne test er en kvalitativ test og giver kvantitative værdier og indikerer ikke mængden af organismer, der er til stede. Funktionen for denne test er ikke evalueret for immunokompromitterede personer eller patienter uden symptomer på gastrointestinal infektion. Effekten af interfererende stoffer er kun evalueret for de stoffer, der er angivet i afsnittet Interfererende stoffer nedenfor. Potentiel interferens er ikke evalueret for andre stoffer end dem, der er beskrevet i afsnittet Interfererende stoffer nedenfor. Krydsreaktivitet med andre organismer end dem, der er angivet i afsnittet Analytisk specificitet nedenfor, er ikke evalueret. FUNKTIONSDATA Funktionsdataene for BD MAX Enteric Parasite Panel blev fastlagt i en multicenter-forskningsundersøgelse. Undersøgelsen omfattede i alt fem (5) kliniske steder, hvor præparaterne blev indsamlet som en del af den rutinemæssige patientbehandling, inkluderet i forsøget og testet på BD MAX Enteric Parasite Panel. Yderligere syv (7) indsamlingscentre inkluderede præparater, som blev evalueret på et centralt sted. Præparaterne blev indsamlet hos pædiatriske og voksne patienter med mistanke om akut gastroenteritis eller colitis, for hvem målparasitære diagnostiske test var ordineret af en læge. For prospektive præparater blev der anvendt en standardiseret referencemetode (DFA-mikroskopi og trichromfarvning) til identifikation af enteriske parasitiske patogener efterfulgt af en alternative PCR og dobbeltrettet sekvensering, som udgjorde den samlede referencemetoden. Da DFA identificerer Cryptosporidium til slægtsniveauet, blev DFA-positive præparater, der blev identificeret ved dobbeltrettet sekvensering som andet end C. hominis eller C. parvum anset som negative i forhold til referencemetoden. Referencemetodetestningen blev udført i overensstemmelse med indlægssedlen for det respektive produkt. For retrospektive præparater blev de historiske resultater registreret på indsamlingsstedet, og præparaterne blev ikke evalueret igen. De historiske resultater blev bekræftet vha. alternativ PCR og dobbeltrettet sekvensering som en del af den samlede referencemetode med henblik på at bekræfte tilstedeværelsen af mål-dna. I alt prospektive præparater ( % formalinfikserede, ukonserverede og 18 ikke-overensstemmende) og 411 retrospektive præparater ( % formalinfikserede, 251 ukonserverede og 12 ikke-overensstemmende) blev inkluderet i den kliniske evaluering. Tabel 3 beskriver antallet af overensstemmende præparater, der blev inkluderet, i forhold til patientalder og præparattype. I alt 128 retrospektive præparater blev ikke medtaget i funktionsberegninger nedenfor, da de historiske resultater ikke blev bekræftet af alternativ PCR og dobbeltrettet sekvensering. Tabel 4 til 7 beskriver funktionsdataene for BD MAX Enteric Parasite Panel, som blev observeret under det kliniske forsøg. Tabel 3: Opsummering af overensstemmende inklusion i klinisk forsøg efter aldersgruppe og præparattype Aldersgruppe Præparattype Formalin 10 % Ukonserveret Kombineret 0 1 måned måned til 2 år år år år Over 21 år Ukendt I alt For den 10 % formalinfikserede præparattype identificerede BD MAX Enteric Parasite Panel 95,5 % og 99,7 % af henholdsvis Giardia lamblia-prospektive positive og negative præparater og henholdsvis 100 % og 100 % af de retrospektive positive og negative præparater. For den ukonserverede præparattype identificerede BD MAX Enteric Parasite Panel 94,4 % og 100 % af henholdsvis Giardia lamblia-prospektive positive og negative præparater og henholdsvis 98,6 % og 94,9 % af de retrospektive positive og negative præparater (tabel 4). 10

11 Præparattype 10 % formalinfikseret Ukonserveret Præparatoprindelse Prospektiv Retrospektiv Prospektiv Retrospektiv Tabel 4: Giardia lamblia klinisk funktion BD MAX Enteric Parasite Panel P RM P 21 3 b 24 N I alt N 1 a I alt SENSITIVITET (95 % CI): 95,5 % (78,2 %, 99,2 %) SPECIFICITET (95 % CI): 99,7 % (99,1 %, 99,9 %) P N I alt PPA (95 % CI): 100,0 % (93,5 %, 100,0 %) NPA (95 % CI): 100,0 % (94,9 %, 100,0 %) P N 1 c I alt SENSITIVITET (95 % CI): 94,4 % (74,2 %, 99,0 %) SPECIFICITET (95 % CI): 100,0% (99,4 %, 100,0 %) P 72 7 e,f 79 N 1 d I alt PPA (95 % CI): 98,6 % (92,6 %, 99,8 %) NPA (95 % CI): 94,9 % (89,8 %, 97,5 %) a Komponenten af alternativ PCR og dobbeltrettet sekvensering for referencemetoden var negativ for dette præparat. DFA-komponenten for referencemetoden var positiv. Afvigende gentagen testning med alternativ PCR og dobbeltrettet sekvensering blev udført og gav et negativt resultat. Afvigende gentagen testning med DFA blev udført og gav et negativt resultat. Afvigende gentagen testning med BD MAX Enteric Parasite Panel blev udført i tolv (12) replikater, og alle gav et negativt resultat (0/12). Præparatet blev også testet vha. et Giardia-antigen-EIA som afvigende testning og gav et negativt resultat. b Et (1) præparatet blev også testet vha. et Giardia-antigen, der påviser EIA, som afvigende testning og gav et negativt resultat. Afvigende gentagen testning med BD MAX Enteric Parasite Panel blev udført i seks (6) replikater af dette præparat og gav 1/6 positivt resultat. Der blev ikke udført afvigende testning for de to (2) andre præparater. c Komponenten af alternativ PCR og dobbeltrettet sekvensering for referencemetoden var negativ for dette præparat. DFA-segmentet for referencemetoden var positiv. Afvigende gentagen testning med alternativ PCR og dobbeltrettet sekvensering blev udført og gav et negativt resultat. Afvigende gentagen testning med DFA blev udført og gav et positivt resultat. Afvigende gentagen testning med BD MAX Enteric Parasite Panel blev udført i seks (6) replikater, og alle gav et negativt resultat (0/6). Dette præparatet blev også testet vha. et antigen, der påviser EIA, som afvigende testning og gav et negativt resultat. d Der blev ikke udført afvigende testning for dette præparat. e Et (1) præparatet blev også testet vha. et antigen, der påviser EIA, og en kommercielt tilgængelig analyse som afvigende testning og gav et positive resultat for begge. Afvigende gentagen testning med BD MAX Enteric Parasite Panel blev udført i seks (6) replikater af dette præparat og gav alle positive resultater (6/6). f Et (1) præparat blev testet med både en EIA og en kommercielt tilgængelig molekylæranalyse som afvigende testning. EIA gav et positivt resultat, og molekylæranalysen gab et negativt resultat. Afvigende gentagen testning med BD MAX Enteric Parasite Panel blev udført i elleve (11) replikater af dette præparat og gav 5 positive resultater (5/11). Der blev ikke udført afvigende testning for de fem (5) andre præparater. 11

12 For den 10 % formalinfikserede præparattype identificerede BD MAX Enteric Parasite Panel 90,3 % og 99,8 % af henholdsvis Cryptosporidium hominis-/parvum-prospektive positive og negative præparater og henholdsvis 93 % og 100 % af de retrospektive positive og negative præparater. For den ukonserverede præparattype identificerede BD MAX Enteric Parasite Panel 100 % og 99,5 % af henholdsvis Cryptosporidium hominis-/parvum-prospektive positive og negative præparater og henholdsvis 97,7 % og 98,4 % af de retrospektive positive og negative præparater (tabel 5). Præparattype 10 % formalinfikseret Ukonserveret Tabel 5: Cryptosporidium hominis/parvum klinisk funktion Præparatoprindelse Prospektiv Retrospektiv Prospektiv Retrospektiv BD MAX Enteric Parasite Panel P RM P 56 2 c 58 N I alt N 6 a,b 951 d 957 I alt SENSITIVITET: 90,3 % (80,5 %, 95,5 %) SPECIFICITET 99,8 % (99,2 %, 99,9 %) P N 3 e I alt PPA: 93 % (81,4 %, 97,6 %) NPA: 100 % (95,3 %, 100 %) P 35 3 f 38 N I alt SENSITIVITET: 100 % (90,1 %, 100 %) SPECIFICITET 99,5 % (98,6 %, 99,8 %) P 43 3 g 46 N I alt PPA: 97,7 % (88,2 %, 99,6 %) NPA: 98,4 % (95,3 %, 99,4 %) a Alle seks (6) præparater var positive ved DFA-komponenten for den samlede referencemetode. Et (1) præparat sekvenseret som C. parvum, tre (3) præparater var negative og to (2) var ikke rapporterbare ved komponenterne af alternativ PCR og dobbeltrettet sekvensering for den samlede referencemetode. b Afvigende gentagen testning med alternativ PCR og dobbeltrettet sekvensering blev udført på alle seks (6) præparater. Et (1) præparat sekvenseret som Cryptosporidium parvum, et (1) præparat sekvenseret som Cryptosporidium felis og de resterende fire (4) var PCR-negative ved afvigende gentagen testning. Afvigende testning blev også udført vha. et antigen, der påviser EIA, som ikke skelner mellem Cryptosporidium og Giardia. To præparater var EIA-negative, og fire præparater var EIA-negative, hvoraf to var positive for Giardia ved andre testmetoder. c Et DFA-positivt præparat blev klassificeret som referencemetode-negative på baggrund af resultater for alternativ PCR og dobbeltrettet sekvensering Cryptosporidium meleagridis. d Seks DFA-positive præparater blev klassificeret som referencemetode-negative på baggrund af resultater for alternativ PCR og dobbeltrettet sekvensering, som identificerede (4) Cryptosporidium canis, (1) C. meleagridis og (1) Cryptosporidium spp. (udefineret). e Afvigende gentagen testning blev udført med BD MAX Enteric Parasite Panel i tolv (12) replikater pr. præparat. Et præparat var positivt for fem (5) ud af tolv (12) replikater, og et præparat var positivt for to (2) ud af tolv (12) replikater. f Afvigende gentagen testning blev udført med BD MAX Enteric Parasite Panel i seks (6) replikater pr. præparat. Et præparat var positivt for fem (5) ud af seks (6) replikater, og et præparat var positivt for tre (3) ud af seks (6) replikater. Et tredje præparat var negativt i seks (6) ud af seks (6) replikater. g Afvigende gentagen testning blev udført med BD MAX Enteric Parasite Panel i seks (6) replikater pr. præparat. To præparater var negative for seks (6) ud af seks (6) replikater. 12