1.0 Forhåndsvedtagelser til protokol for valideringen

Transkript

1 Dokumentbrugere: BIO-Alle Valideringsrapport P M-komponent, P-M-komponent identifikation og P-M-komponent kvantificering på Capillarys. DCQ-dokumentet som bilaget understøtter: Dokumentansvarlig: Version: Udarbejdet af: mijr Side: 1 af 7 Godkendt af: LBAT Dato: Valideringsrapport bestående af følgende tre delelementer Protokol (Afsnit 1 og 2) Rapport (Afsnit 3 og 4) Protokol 1.0 Forhåndsvedtagelser til protokol for valideringen 1.1 Analysens/metodens navn (System Komponent; kvantitetsart), enhed (hvis relevant) samt evt. IUPAC/ IFCC / DNK kode samt beskrivelse af metoden Navn: Plasma M-komponent;arbitrær koncentration(procedure) IUPAC: NPU17675 Kort navn: P-M-komponent; arb.k.(0 1) =? Navn: Plasma M-komponent;taxon(procedure) IUPAC: NPU02642 Kort navn: P-M-komponent; taxon =? Navn: P M-komponent(spec);masskonc=? g/l IUPAC: NPU19844 Kort navn: P-M-komponent, massekonc. Metode: Kapillærelektroforese med kontinuert detektion af proteinmængde. Der analyseres i otte parallelle kapillærer. Analyseresultatet fremkommer i form af en kurve. En evt. M-komponent vil ses som en ekstra top eller en forstørrelse af en top i forhold til kurven for et normalt serum (Figur 1). 1

2 Ved identifikation/typning af M-komponent behandles automatisk før elektroforese med antistoffer mod IgA, IgG, IgM, kappa- henholdsvis lambdakæder. Herved bindes antistof specifikt til immunglobulin i prøven. Ved den efterfølgende elektroforese vil antistofbundne immunglobuliner vandre anderledes de vil forsinkes i forhold til ubundet immunglobulin. En eventuel M- komponent vil kunne detekteres ved overlejring af hver af detektionskurverne med kurven fra ikke-forbehandlet prøve, idet M-komponent-toppen vil forsvinde, når prøven er forbehandlet med antistof mod M-komponentens tunge henh. lette kæder (Figur 2). Kurve(r) kan udprintes sammen med tolkning/analysekommentarer. 1.2 Apparatur/udstyr Capillarys 2 med tilhørende PC og software. Capillarys 2 og Software er produceret af Sebia (Frankrig). Leveret af ILS Laboratories Scandinavia, Gydevang 22A, 3450 Allerød. 1.3 Begrundelse for valg af analysemetode og opsætning af analysen Der er vedvarende ønske blandt de rekvirerende klinikere om, at der udføres P-M-komponent, massekonc. (M-komponent kvantificering). Denne analyse kan ikke udføres med tilstrækkelig analysekvalitet på det apparatur, hvorpå P-M-komponent; arb.k.(0 1) =? (M-komponent screening) og P-M-komponent; taxon =? (M-komponent identifikation) udføres pt. i KBA Sygehus Syd. Derfor ønskes det at sætte analysen op på Capillarys 2, herefter blot kaldt Capillarys. Dette udstyr har kapacitet til at analysere alle de prøver til serum M-komponent-screening og identifikation, som pt. analyseres i Slagelse og Nykøbing F. Da dette kan ske med en højere effektivitet end på de to nuværende udstyr ønskes det at samle alle serum M-komponentundersøgelser på Capillarys. 2

3 1.4 Evt. henvisning til tidligere validering Validering af analyserne M-komponent screening og M-komponent identifikation på Hydrasys i KBA Slagelse (4, 5) Validering af analyserne på Minicap i KBA Roskilde (6) 1.5 Miljøfaktorer Ingen 1.6 Prøvemateriale, kontrolmateriale Til afprøvningen er anvendt patientprøver (serum), som er indsamlet blandt rutineprøver i KBA Roskilde, KBA Nykøbing F og KBA Slagelse. Ved vurdering af præcision er anvendt kontrolmateriale fra Sebia: Normal Control Serum (katalognr.: PN 4785, lot nr.: 18028/01, exp.: 2012/02). Ved vurdering af akkuratesse er anvendt tidligere udsendelser af kontrolmateriale i programmet UKNEQAS 3286 UK Monoclonal Protein Identification (udsendelse nr. 741, 751, 761, 851 og 861). 1.7 Kalibrator, reagens Analysen kalibreres ikke. 1.8 Kvalitetsmål Der er intet LabQuality-krav til analyserne eller andre officielle kvalitetsmål. 1.9 Acceptkriterier for analysemetoden Vort krav må være, at analyserne kan genfinde de kvalitative analyseresultater fundet i KBA Roskilde. Idet analyseprincipperne på Capillarys er forskellig fra analysemetoderne i Nykøbing F og på Hydrasys, kan ikke forventes fuldstændig overensstemmelse mellem kvalitative resultater herfra. Desuden skal metoden kunne genfinde kvalitative konsensusresultater for eksterne kontroller. Kvantitative bestemmelser af M-komponent skal være i rimelig overensstemmelse med Roskildes resultater og for eksterne kontrollers vedkommende med konsensusværdierne for metoden Acceptgrænser for den maksimalt tilladelige kombinerede standardmåleusikkerhed, jvf. måleusikkerhedsbudget. Ved afprøvning i KBA Roskilde er der fundet en interseriel præcision i forbindelse med analyse af en human serum kontrol og anvendelse af automatisk fastsættelse af grænser for fraktionerne på 3,0-9,7 % (CV%) (6). Det forventes at en tilsvarende præcision kan opnås på Capillarys Kravspecifikationer fra rekvirenterne. Afdelingen er ikke bekendt med krav fra rekvirenterne Biologisk referenceinterval Ingen M-komponent Reagenser, sikkerhed og miljø Capillarys Protein(e) 6 kit, katalognr. PN 2003, Capillarys Immunotyping, katalognr. PN 2100 Capiclean, katalognr. katalog nr. PN2051 Capillarys Wash Solution, katalognr. PN2052 Reagenserne er alle fra Sebia og leveres af ILS (se afsnit. 1.2). Capillarys Wash Solution er ætsende og på denne skal der laves en arbejdspladsbrugsanvisning. 3

4 2.0 Metodeegenskaber for målingens kvalitet 2.1 Metrologisk sporbarhed, kalibrator. Ingen kalibrering 2.2 Korrekthed (Akkuratesse) og metodesammenligning For P-M-komponent; arb.k.(0 1) =? og P-M-komponent; taxon =? udføres metodesammenligning med gl. metode i Slagelse, Nykøbing F og Roskilde. Flg. prøver anvendes: Prøver fra Nykøbing F: 50 prøver. Ved analyse i Nykøbing F er 6 heraf fundet positive og 44 er fundet negative. Analyseres på Capillarys over mindst 5 dage. Prøver fra Slagelse: 98 prøver. Ved analyse i Slagelse er 65 heraf fundet positive og 33 er fundet negative. Analyseres på Capillarys over mindst 5 dage. Prøver fra Roskilde: 39 prøver. Ved analyse i Roskilde er 19 heraf fundet positive og 20 er fundet negative. Analyseres på Capillarys over mindst 5 dage. For P-M-komponent, massekonc. sammenlignes med analysen på Minicap i KBA Roskilde. 19 prøver analyseres på Capillarys over mindst 5 dage. Hvis en prøve ikke kvalitativt giver samme resultat ved en af rutine-metoderne og såfremt der er nok prøvemateriale tilbage, reanalyseres den med en eller flere af de tre rutinemetoder i regionen. Der vurderes akkuratesse ved måling på fem eksterne kontroller fra UKNEQAS. 2.3 Måleinterval 0,25-??? g/l 2.4 Detektionsgrænse For P-M-komponent; arb.k.(0 1) =?: 0,27 g/l angives af producenten. For P-M-komponent; taxon =?: 0,25 g/l angives af producenten. Producentens angivelser accepteres uden afprøvning. 2.5 Analytisk specificitet Producenten angiver at triglycerid og ikteri ikke interfererer. Leverandøren angiver desuden, at hæmolyse ikke påvirker analyseresultatet mht. M-komponenten, men vil give en splittet top i alfa-2 fraktionen. Producentens angivelser accepteres uden afprøvning. 2.6 Linearitet Ingen oplysninger fra producenten. Afprøves ikke. 2.7 Intermediær præcision Præcisionen afprøves ved analyse af internt kontrol materiale i hver af de 8 kapillærer 1 gang dagligt i 12 dage. De 6 proteinfraktioner (albumin, alfa-1, alfa-2, beta-1, beta-2 og gamma) bestemmes ved automatiseret afgrænsning af fraktioner ( apparatur CV% ). Desuden bestemmes beta-1 toppen for kontrolmaterialet 2 gange dagligt i 10 dage ved manuel fastsættelse af grænser for toppen ( Kombineret CV% ). Præcisionen skal efterfølgende bestemmes over 30 dage, såfremt analyserne sættes i rutinedrift på Capillarys. 2.8 Robusthed Ingen oplysninger fra producenten. Afprøves ikke. 2.9 Afsmitning Ingen oplysninger fra producenten. Afprøves ved analyse af en prøve med meget høj gammafraktion efterfulgt af 2 prøver med NaCl. 4

5 2.10 Præanalytiske forhold Producenten angiver, at materialet ikke kan opbevares ved stuetemperatur, efter hvilken man vil kunne se en stærkt reduceret beta-2 fraktion og en øget beta-1 fraktion. Denne opbevaring påvirker ifølge leverandøren dog ikke muligheden for detektion af en M-komponent indenfor 1 døgn. Producenten angiver desuden holdbarhed ved 4 C til 10 dage og ved -20 C til 1 måned. Holdbarheden for analysen er i Præanalytisk vejledning angivet til 1 døgn v. 20 C, 1 uge ved 2-8 C og 1 år ved -20 C. Denne vejledning bibeholdes. Holdbarheden ved stuetemperatur og på køl bør afprøves ved en senere lejlighed for om muligt at lette arbejdsgange omkring forsendelse og analyse af prøver Måleusikkerhedsbudget 1) Usikkerhedskomponenter ved præanalytiske forhold. 2) Usikkerheden på bestemmelse (tilskrivelse) af kalibratorens værdi. 3) Usikkerhed på bias-korrektioner. 4) Usikkerheden på selve målingen (sædvanligvis den intermediære præsicion). Ang. definitioner og metoder se RL 6.(1) Kun usikkerheder vedr. analysen P-M-komponent, massekonc. er relevante. Ad 1) Præanalytiske forhold er ikke beskrevet som kritiske specielt for denne analyse, men generelt iflg. Laurell (7) kan patientens lejring give op til 3 % variation. Ad 2) Ikke relevant, da analysen ikke kalibreres. Ad 3) Der er ingen bias-korrektioner. Ad 4) 9,7 % (3 2 +9,7 2 ) 0,5 % = 10,2 % 3.0 Data: Se data og kommentarer til disse i regnearkene i filen Data afprøvning af Capillarys 2009 (2)(1).xls 3.1 Diskussion M-komponent-screening og M-komponent-identifikation Metodesammenligning: Ved sammenligning af resultater fra Capillarys med resultater fra de tre nuværende rutinemetoder i Region Sjælland (kapillærelektroforese på Minicap i Roskilde og agarose gel-elektroforese på i Nykøbing F og på Hydrasys i Slagelse) blev resultatet negativ/ingen M-komponent genfundet i 123 ud af 129 prøver. Af de sidste 6 prøver 1. var der i 1 tilfælde tilsyneladende sket en forbytning og ved re-analyse i oprindeligt lab (Nykøbing) blev en M-komponent fundet og identificeret i overensstemmelse med resultatet fra Capillarys, Hydrasys og Minicap I Roskilde. 2. stammede de to fra samme patient, hvor en M-komponent blev overset af rutinemetoden i Nykøbing F, fordi den ved elektroforese faldt sammen med et normalt bånd i beta-2 fraktionen. Rutinemetoderne i Slagelse og Roskilde verificerede Capillarys resultat. 3. fandt Capillarys metoden svag oligokloni i serum i to prøver, hvor rutinemetoderne alle fandt prøverne negative. 4. blev der i én prøve fundet en mulig svag M-komponent på Capillarys. På Hydrasys blev en meget svag M-komponent fundet, men denne kunne ikke genfindes med rutinemetoderne i Nykøbing F eller Roskilde. Det er nok ikke klinisk væsentligt, at alle laboratorier ikke finder denne svage M-komponent. Prøver med usikkert svar fra Capillarys vil fortsat blive immunofixeret på Hydrasys. En M-komponent blev genfundet og ensartet identificeret i 39 ud af 58 prøver. Resultaterne for de øvrige 19 prøver diskuteres kort nedenfor: 1. I 1 tilfælde var der igen tilsyneladende sket en forbytning og ved re-analyse i oprindeligt lab (Nykøbing) blev en M-komponent fundet og identificeret i overensstemmelse med Capillarys og Hydrasys. 2.a:For 8 prøver blev der fundet oligokloni i serum på Hydrasys, medens Capillarys metoden in- 5

6 gen M-komponent fandt. 2.b:For 3 prøver blev der på Hydrasys fundet 2 M-komponenter, hvoraf den ene var meget svag. I de 3 prøver kunne den svage M-komponent ikke ses ved screening på Hydrasys men blev alene opdaget, fordi den kraftigere M-komponent blev set ved screening og foranledigede en immunofixation, som så afslørede den svage M-komponent. På Capillarys blev den svage M-komponent ikke opdaget. 2.a og b: Det er kendt, at svage M-komponenter eller andre svage mønstre, som kan ses ved anvendelse af en følsom gelbaseret metode som den, der anvendes Hydrasys, evt. overses ved kapillærelektroforese. Da der imidlertid er tale om netop svagt forstærkede immunglobuliner vil dette dog ikke kunne forventes at have betydning i forbindelse med diagnosticering af nye patienter. 3.a:Hydrasys fandt for 1 prøve 2 bånd, som evt. kunne være M-komponenter, på en kraftig oligoklonal baggrund, hvor Capillarys kun fandt den ene af de evt. M-komponenter og den oligoklonale baggrund. 3.b:Capillarys fandt for 1 prøve oligokloni i serum, medens Hydrasys metoden fandt en M- komponent. 3.a og b: svagere M-komponenter kan tilsyneladende på Capillarys forsvinde i en oligoklonal baggrund. Når der findes et oligoklonalt mønster meddeles dette i svaret. Således får rekvirenten besked om, at der findes forstærkede immunglobuliner i prøven og kan vurdere, om der skal følges op på dette resultat. 4. I 2 tilfælde blev der fundet et uklart mønster på Capillarys: det var ikke mulig at afgøre, hvorvidt der var en M-komponent uden tunge kæder eller denne var af IgG klasse. I disse tvivlstilfælde vil man være nødt til at identificere M-komponenten ved Immunofixation på Hydrasys. Man kunne i denne forbindelse vælge at analysere for tunge kæder af IgD og IgE klasse også og således undersøge, hvorvidt der findes om en M-komponent uden tunge kæder eller om der er tale om en af de meget sjældne M-komponenter af IgD- eller IgE-klasse. Nuværende svares disse M-komponenter uden tung kæde af IgA, IgG eller IgM klasse: Der ses en M-komponent af typen lambda (henhv. kappa) lette kæder. Der ses ikke tilhørende tunge kæder af klasse IgA, IgG eller IgM. Kontakt KBA, hvis IgD eller IgE mistænkes. M-komponent screening og identifikation kan således udføres på Capillarys i Slagelse uden at analyseresultaterne ændres væsentligt i forhold til dem der er frembragt på Hydrasys i Slagelse og I Nykøbing F. Rekvirenter, der også tidligere har benyttet KBA Slagelse til analysen, vil nok opleve sjældnere at få svaret oligokloni i serum. Akkuratesse: Kvalitative konsensusresultater genfindes 100 % på Capillarys. Dog findes resultatet lambda lette kæder ved en prøve, hvor konsensus resultatet er IgD lambda. Dette er imidlertid fuldt acceptabelt, da der i KBA ikke undersøges rutinemæssigt for tunge Immunglobulinkæder af klasse IgD og IgE. I stedet afgives det ovenfor angivne svar. M-komponent-kvant Metodesammenligning: Ved sammenligning med analyseresultater fra Minicap i Roskilde blev det fundet, at kvant. M-komponent > 1 g/l blev bestemt gennemsnitligt 1,4 % højere i Slagelse end i Roskilde med en maksimal afvigelse på 18,2 % mellem de to metoder (lineær korrelation: y = 1,1x - 0,7). For helt små M-komponenter betyder usikkerhed på fastsættelsen af toppenes grænser, at afvigelsen bliver noget større (op til 71,4 %). Akkuratesse: Der blev bestemt kvant. M-komponent på 4 eksterne kontroller og blev herved fundet at Capillarys i Slagelse gennemsnitlig lå 4,1 % under konsensusværdien (afvigelse fra - 18,8 til +6,9 %). Dermed anses analysens niveau for at være tilfredsstillende. Afsmitning: Der ses ingen afsmitning. Præcision: Ved softwarets automatiske fastsættelse af grænser mellem de 6 proteinfraktioner blev fundet en impræcision (apparaturets CV%) på 0,9-3,8 %. Dermed er analysens præcision bedre end den, der er fundet under afprøvning af Minicap i Roskilde, og apparaturet lever således op til det stillede krav. Ved manuel aflæsning af beta-2 toppen blev fundet en impræcision (kombineret CV%) på 3,9 %, hvad der er absolut tilfredsstillende. 6

7 4.0 Konklusion: Analyserne P M-komponent, P-M-komponent identifikation og P-M-komponent kvantificering er valideret på Capillarys 2. Idet alle stillede krav er opfyldt, kan apparaturet anbefales til rutinebrug. Anbefalinger: Rekvisitionsproceduren fra gl. Vest bibeholdes. Dvs. at rekvirenterne (evt. med undtagelse af speciallæger) kun kan bestille analysen P-M-komponent. Ved fund af en evt. M-komponent bestilles automatisk analysen P-M-komponent identifikation og analysen P-M-komponent fjernes fra svaret. Herefter udføres immuntypning på Capillarys og evt. immunofixation på Hydrasys. Herved vil tilstedeværelsen af en M-komponent enten blive af- eller bekræftet, alternativt vil et oligoklonalt mønster blive fundet. En evt. M-komponent vil blive identificeret og kvantificeret. Ved svarafgivelse vil kvantiteten af en M-komponent bedst kunne afgives i Labka/B-data i tilknytning til det tekstsvar, hvoraf identiteten kan læses. På sigt bør svarafgivelsen ensrettes i Regionen. B-data tilrettes således at rekvisition og svarafgivelse kan ske. Der skal ikke umiddelbart ske ændringer i Præanalytisk Vejledning, men man bør undersøge prøveholdbarhed ved stuetemperatur og på køl. Ingen ændringer i analyseregistret (Gl. Vest) I kvantitetsregistre (Gl. Syd) skal rettes således at det fremgår, at prøver til analysen sendes til Slagelse. Lokale tilpasninger foretages mht. forsendelse og opbevaring af prøver frem til afsendelse til Slagelse, således at de præanalytiske krav overholdes. Ændringer i STAMCOM (Gl. Syd) og LMV (Gl. Vest): ingen ændringer. Ny vejledning i regionens fælles netbog. Intern kontrol: Normal Control Serum fra Sebia analyseres én gang ugentligt i alle 8 kapillærer. Almindelige regler for kontrolgodkendelse udenfor Labka anvendes. Ekstern kontrol: UKNEQAS 3286 UK Monoclonal Protein Identification anvendes. Laboratoriets regler for anvendelsen af Logbog følges. Protokol udarbejdet af: Mikala Klok Jørgensen, januar 2009 Rapport udarbejdet af: Dorit Borgstrup, Annette Busch Andersen, Christina Svane og Mikala Klok Jørgensen, marts 2009 Valideret (dato) af: Henvisninger: (1) Validering af måleprocedurer (metodevalidering) i klinisk biokemiske laboratorier Nr.: RL 6 Dato: (2) DS/EN ISO 15189: 2003: Medicinske laboratorier Særlige krav til kvalitet og kompetence. (3) Bekendtgørelse om medicinsk udstyr til in vitro-diagnostik. BEK nr af 17/12/2002 (4) Intern rapport afprøvning af HYDRASYS,ILS.doc (5) Immunofixation.doc (6) Validering af Minicap i Roskilde.pdf (7) Laurells Klinisk Kemi 7. udgave ISBN