IgG produkter fra valle til forebyggelse/behandling

Appendix 1 IgG produkter fra valle til forebyggelse/behandling af kalvediarré Appendix 1 til slutrapport/dffe projekt: Nye produkter til passiv immunisering af spæd- og småkalve (j. nr. 3412-7-1938): Beskrivelse af kalveforsøg. Peter M. H. Heegaard, Chris Juul Hedegaard

IgG produkter fra valle til forebyggelse/behandling af kalvediarré Slutrapport/DFFE projekt Rapport 15-12-676 (F-676) 213 Af Peter M. H. Heegaard og Chris Juul Hedegaard Copyright: Forsidefoto: Udgivet af: Rekvireres: ISSN: ISBN: ISSN: ISBN: Hel eller delvis gengivelse af denne publikation er tilladt med kildeangivelse [Tekst] Veterinærinstituttet, Bülowsvej 27, 187 Frederiksberg C www.vet.dtu.dk [-] (elektronisk udgave) [----] (elektronisk udgave) [-] (trykt udgave) [----] (trykt udgave)

Forord Rapporten gennemgår resultaterne fra to forsøg med tildeling af bovint immunglobulin oprenset fra valle til kalve. Det første forsøg var et pilotstudie udført på DJF/Foulum på 2x4 kalve mhp. at undersøge overførsel af det oralt tildelte oprensede valle immmunglobulin fra tarm til blodcirkulationen og at afdække evt. sundhedsproblemer ved fodring udelukkende med dette immunglobulinprodukt i de første 24 timer efter fødsel. Det andet forsøg var et besætningsstudie udført i regi af Agrotech og sammenlignede serum immunglobulinniveauer samt tilvækst- og sygdomsdata hos 2*2 kalve der fik tilskud af oprenset immunglobulin såvel i de første 24 timer efter fødsel (kolostrumsupplement) som løbende i deres første 28 levedage (fodertilskud). Forsøget foregik i en besætning med persisterende problemer med kalvediarré. DTU Veterinærinstituttet, Marts, 213 Peter M. H. Heegaard Professor Chris Juul Hedegaard Post doc Projektdeltagere i øvrigt: Solvej Breum og Lars E Larsen, DTU Vet Marie Bendix Hansen og Allan Lihme, UpFront Chromatography A/S Kirsten Bisgaard-Frantzen, Multimerics ApS Ann Louise Christensen og Finn Strudsholm AgroTech A/S Steen Palle, NOVI A/S IgG produkter fra valle til forebyggelse/behandling af kalvediarré

Resumé Immunglobulin i forventet udbytte og renhed kunne fremstilles fra valle og der blev i projektet fremstillet ca. 17 kg immunglobulin ud fra 35. liter valle i form af opløsning med omkring 1 g/l immunglobulin. En del af dette immunglobulin blev endvidere multimeriseret (stabiliseret). I et pilotforsøg med 2x4 nyfødte kalve, hvor den ene gruppe (4 kalve) fik adgang til kolostrum fra koen og den anden ikke fik adgang men i stedet for immunglobulinproduktet var resultaterne som følger. - Tilvækst: Ingen signifikant forskel på de to grupper. Hver kalv følger sin egen kurve, med IgG kalvene mere ensartede end kolostrumkalvene (kalvene tog mellem 8 og 17 kg på i forsøgsperioden). - Bortset fra at én kalv fra IgG gruppen fik diarré og blev behandlet med Diakur i 3 dage og én kalv fra kolostrumgruppen var nedtrykt og blev behandlet 1 gang med Diakur sås ikke sygdom eller afvigende adflærd hos nogle af dyrene inden for de 28 dage. - Optagelse af immunglobulin/serumkoncentationer: I begge grupper nås det maksimale niveau på 24 timer og holder sig her i 28 dage. Kolostrumgruppen har et niveau omkring 2 mg/ml, mens immunglobulingruppens niveau er omkring 1 mg/ml. - Optagelse af immunglobulin/serum titer, rotavirus: Titeren stiger parallelt i de to grupper kalve og når maksimum 3 dage efter fødslen, hvorefter det begynder at falde svagt med IgG gruppen som den kraftigst faldende og med kolostrumgruppen stabiliseret fra omkring dag 7 (dog ikke statistisk forskel på de to grupper). I et besætningsforsøg med 2x2 kalve fra en problembesætning med høj kalvedødelighed (ofte med omkring 1% af kalvene døde i løbet af deres første 28 levedage) sås følgende i et forsøg hvor IgG gruppen fik kolostrum-erstatning samt IgG fodersupplement (multimeriseret immunglobulin) og i øvrigt fik lov at die hos moderen som normalt, mens kontrolgruppen ikke fik IgG produkter men lov at die hos moderen som normalt: - Tilvækst: IgG gruppen havde en højere daglig tilvækst efter 22 dage end kontrolgruppen og en lidt højere totaltilvækst fra fødsel til dag 28. - Dødelighed: Kun en kalv døde (i IgG gruppen) - Sygdom: Problem med data (se nedenfor) - Optagelse af IgG: Efter 23-28 dage har de IgG behandlede kalve et signifikant højere niveau af serum IgG end kontrolgruppen (17.6 mg/ml vs. 13.9 mg/ml) Der var nogle problemer associeret med dette forsøg: - dødeligheden i kontrolgruppen var lavere end normalt (ift. de seneste to år) 4 IgG produkter fra valle til forebyggelse/behandling af kalvediarré

- forsøgsdesignet blev ikke opretholdt, så de to grupper er ikke stratificerede, dvs. fordeling af hver anden fødte kalv i perioden til den ene gruppe og de andre til den anden blev ikke opretholdt. Tværtimod allokeredes de først fødte 2 kalve til den ene gruppe og de næste 2 til den anden. Hermed er forsøget følsomt over for periodeeffekter, som f.eks. den lungebetændelse der ramte IgG gruppen, men ikke den anden gruppe. Det betyder også, at antal dage inde/ude er forskelligt for de to grupper. - registrering af sygdom (diarré) varierede i intensitet gennem forsøget, således at de første kalve, som alle tilhørte IgG gruppen, jvnf. periodeproblemet nævnt ovenfor, blev sygdomsregistreret i langt højere grad end den sidste gruppe kalve (kontrolgruppen). Konklusion af besætningsforsøget: Det foreliggende forsøg antyder positiv effekt af IgG tildeling. Der bør køres et opfølgende forsøg hurtigst muligt med 2x1 kalve i ikkeproblembesætning om med den ønskede stratificering af grupperne. Dette vil give mulighed for statistisk sikkert at påvise en forskel i daglig tilvækst på 1 g. IgG produkter fra valle til forebyggelse/behandling af kalvediarré 5

Pilotforsøg: Test af effekt af fodring udelukkende med ikke-multimeriseret IgG produkt i de første 24 timer efter fødsel i sammenligning med fuld adgang til kolostrum fra koen (2x4 kalve). DJF forsøg 15-12-676 (F-676) 1. Formalia Forsøgets afvikling: November 29 Januar 21 Forsøgsdyrsansvarlig: Mogens Vestergaard, HBS, Tlf.: 157 / 8999157 / 22212355, E-mail: mv@agrsci.dk Dyreforsøgstilladelse: 28/561-1493 C1 og C3 (Helle N. Lærke). Tilsynsførende dyrlæge: Birthe M. Damgaard, HBS, Tlf.: 1512 / 89991512 / 5151922, E-mail: BirtheM.Damgaard@agrsci.dk Ansvarlig for afvikling af forsøget, blodprøveudtagning mm.: Marie Engbæk, HBS, Marie.Engbaek@agrsci.dk Ansvarlig for projektet med kolostrum-produktet: Lars E. Larsen, DTU-VET, Tlf.: 35886274, 4998434, lael@vet.dtu.dk Forsøget udførtes på Institut for Husdyrbiologi og Sundhed (HBS), Det Jordbrugsvidenskabelige Fakultet (DJF) i Foulum. 2. Formål Formålet med forsøget var at afprøve, om IgG produktet (kolostrumerstatning) giver den ønskede optagelse af immunoglobulinerne, samt at undersøge om tilvæksten og sundheden den første måned er sammenlignelig med kalve, der modtager råmælk fra moderkoen. 3. Hypotese 1. Fodring udelukkende med IgG produktet (MMV) i de første 24 timer efter fødsel vil give IgG blodprofiler, der er sammenlignelige med tildeling af alm. råmælk (kolostrum) 2. Kalve fodret udelukkende med IgG produktet i de første 24 timer efter fødsel vil have samme sundhed og tilvækst som kalve, der har modtaget alm. råmælk. 6 IgG produkter fra valle til forebyggelse/behandling af kalvediarré

4. Materialer og Metoder Dyr og grupper Der indgik 2 x 4 drægtige køer (SDM) i forsøget. Kalvene fra køerne blev inddelt i 2 grupper med fire kalve i hver: Test gruppen vallegruppe : modtog IgG produkt ( MMV ) de første tre fodringer; ingen råmælk Kontrolgruppen: modtog råmælk fra moderkoen; intet IgG-produkt Produkter, behandlinger og dosis IgG (Valle, Multimerics valle immunoglobulin) IgG-produktet blev leveret i opløsning med 75 mg IgG/mL. Produktet blev blandet op i sødmælkserstatning (Friska Sød, DLG) til den ønskede koncentration og blev tilbut kalve med sutteflaske/via suttespand. Produktet blev opbevaret ved minus 2 grader indtil brug. Produktet blev anvendt samme dag efter optøning Fodring Køerne blev behandlet ens og efter de normale procedurer på Foulum indtil kælvning. Efter kælvningen blev alle 4 kalve i testgruppen udelukket fra at få kolostrum fra moderkoen og fik tildelt IgG-produkt (MMV) 3 gange efter følgende tidsplan: 1. fodring -6 timer efter kælvning 2. fodring 12 timer efter kælvning 3. fodring 24 timer efter kælvning Dosis: Kalve fra ko nummer 6554 og 6555: 1. behandling: 1 g IgG (1 1/4 liter MMV i 3/4 liter sødmælkserstatning) 2. behandling: 1 g IgG (1 1/4 liter MMV i 3/4 liter sødmælkserstatning) 3. behandling: 1 g IgG (1 1/4 liter MMV i 3/4 liter sødmælkserstatning) Kalve fra ko nummer 6557 og 6559: 1. behandling: 1 g IgG (1 1/4 liter MMV i 3/4 liter sødmælkserstatning) 2. behandling: 75 g IgG (1 liter MMV i 1 liter sødmælkserstatning) 3. behandling: 5 g IgG (1/2 liter MMV i 1 1/2 liter sødmælkserstatning) Kalve fra 4 køer blev benyttet som kontroller. Disse kalve blev tilladt at patte moderkoen og fik ikke IgG produkt på noget tidspunkt. Efter 24 timer blev alle 8 kalve fodret med sødmælkserstatning. Kraftfoder og hø blev tilbudt. Kalvene i forsøgsgruppen havde ikke lejlighed til at patte koen på noget tidspunkt i forsøget. Køernes yver blev dækket med net i perioder, hvor den ikke blev overvåget. IgG produkter fra valle til forebyggelse/behandling af kalvediarré 7

Forsøgsdesign: Kalv nr. CHR nr. CHR Ko Behandling. Dosis (g) -6 timer pp Dosis (g) 12 timer pp 1 6554 1586 IgG 1 1 1 2 6555 1994 IgG 1 1 1 3 6557 618 IgG 1 75 5 4 6559 6237 IgG 1 75 5 1 6556 193 CTRL 2 6495 2144 CTRL 3 656 171 CTRL 4 6496 5168 CTRL Dosis (g) 24 timer pp Prøveudtagning Der blev udtaget en 1 ml blodprøve (rød plain vacutainer) fra alle kalve: 1. Før første fodring 2. 2-6 timer efter kælvning (før 2. fodring) 3. 24 timer efter kælvning (før 3. fodring) 4. 3, 5, 7, 14, 21 og 28 dage efter kælvning Moderkøerne blev blodprøvet (1 Ml rød plain vacutainer) lige efter kælvning og fra de fire kontrolkøer blev der udtaget 1 Ml af råmælken ved kælvning og 6 samt 12 timer efter kælvning Blodprøven blev mærket med ko hhv. kalvenummer og dato og blev opbevaret i køleskab i maximalt et døgn, hvorefter serum blev separeret ved centrifugering (3 RPM; 1 min). Serummet og råkælken blev efterfølgende opbevaret ved -2 grader indtil test. Registreringer Kalvene blev vejet før første fodring og ugentligt herefter indtil dag 28. Kalvene blev observeret minimum 2 gange dagligt og fravigelser fra normal, herunder forekomst af diarre, navlebetændelse, hoste, næseflåd etc. blev noteret. Eventuelle kælvningskomplikationer og sygdomsbehandlinger blev ligeledes noteret. Laboratorieanalyser Serumprøverne blev analyseret for: Total protein Total Ig ved ELISA Rotavirusantistoffer ved ELISA Neutraliserende rotavirus antistoffer ved in vitro neutralisationstest. Statistik Tilvæksdata for de individuelle kalve blev sammenlignet ved 2 sidet ANOVA (PRISM software). Gennemsnittet af tilvæksten mellem de to grupper (valle/kontrol) blev sammenlignet ved anvendelse af Mann-Whitney test med Gaussian assumption. 8 IgG produkter fra valle til forebyggelse/behandling af kalvediarré

5. Resultater Fodringer Alle fodringer blev foretaget som planlagt. Kliniske symptomer Testkalv 3 (6557) fik diarre 5 dage efter fødsel og blev behandlet med væske (Diakur) i 3 dage. Kontrolkalv 3 (656) var nedtryk 4 dage efter fødsel og blev behandlet en gang med væske (Diakur). Ingen andre kliniske symptomer eller afvigelser fra normal adfærd blev observeres i forsøgsperioden. Tilvækst I figur 1a) ses tilvæksten af de enkelte kalve ved hver vejning. Tilvæksten for de fire valle behandlede kalve ligger mellem de fire kontrol kalve. Figur 1b viser tilvæksten som gennemsnittet af de to grupper. Igen ses der ingen væsentlig forskel mellem grupperne. Figur 1c viser tilvæksten i kg mellem de enkelte vejninger. Kalvene tog mellem 8 og 17 kg på i forsøgsperioden og generelt lå forsøgskalvene tættere i tilvækst end kontrol kalvene. Vægt - enkelte kalve FIGUR 1 a) Vægt (kg) 7 6 5 4 day day 7 day 14 day 21 day 28 Dage efter fødsel 1 valle 2 valle 3 valle 4 valle 1 kontrol 2 kontrol 3 kontrol 4 kontrol b) Vægt (kg) 7 6 5 4 3 2 Gennemsnit af grupperne (N=4) Valle Kontrol 1 day day 7 day 14 day 21 day 28 Dag c) 1 5-5 Tilvækst (kg) Tilvækst mellem vejningerne day day 7 day 14 day 21 day 28 Dag efter fødsel 1 valle 2 valle 3 valle 4 valle 1 kontrol 2 kontrol 3 kontrol 4 kontrol IgG produkter fra valle til forebyggelse/behandling af kalvediarré 9

Kolostrum IgG IgG koncentrationen i råmælken de første 6 timer efter fødslen ligger på gennemsnitlig 82 mg/ml, men falder efterfølgende til gennemsnitlig 31 mg/ml efter 24 timer, og falder yderligere til gennemsnitlig 3,5 mg/ml efter 72 timer (Figur 2a). Der er nogen spredning af IgG koncentrationerne i råmælken køerne imellem (Figur 2b). Råmælk IgG koncentrationer 2,6,24 og 72 timer post partum (8 køer, dobbelt bestemmelser) Figur 2 a) 15 IgG, mg/ml 1 5 2 6 24 72 Timer efter fødslen, timer Råmælk IgG koncentrationer 2,6,24 og 72 timer post partum b) 15 IgG, mg/ml 1 5 5158/6496 171/656 2144/6495 193/6556 6237/6559 618/6557 1994/6555 1586/6554 Ko/kalv, timer efter fødsel 1 IgG produkter fra valle til forebyggelse/behandling af kalvediarré

Serum IgG Serumkoncentrationen af IgG blev målt hos kalvene før første fodring og derefter periodisk. Der, ses en stigning i serum IgG niveauet efter 6 timer efter fødslen (Figur 3) i 28 dage frem (672 timer). Hos de kalve der modtog råmælk forsatte IgG koncentrationen med at stige i løbet af kalvens første 3 døgn (72 timer), efterfulgt af et mindre fald (5 dage), hvorefter IgG niveauet stabiliseredes. IgG koncentrationen i serum hos de kalve der havde modtaget IgG produkt stabiliseredes efter 24 timer igennem hele måleperioden, og IgG niveauet forblev signifikant laveres for disse kalve i sammenligning med kalvene der havde modtaget råmælk. 4+4 kalve, råmælk- og valle-igg sammenlignet Figur 3 IgG, mg/ml 4 3 2 1 1 1 1 1 Timer efter fødslen 6237/6559 618/6557 1994/6555 1586/6554 CTRL.1 (5168/6496) CTRL 2 (171/656) CTRL 3 (193/6556) CTRL 4 (2144/6495) IgG, mg/ml 4 3 2 1 1 1 1 1 Timer efter fødslen 6237/6559 618/6557 1994/6555 1586/6554 CTRL.1 (5168/6496) CTRL 2 (171/656) CTRL 3 (193/6556) CTRL 4 (2144/6495) Gennemsnit, behandlet (valle-igg) Gennemsnit, kontrolkalve (råmælk) 4 IgG, mg/ml 3 2 1 *** *** ** ** ** ** * 1 1 1 1 Timer efter fødslen Gennemsnit, behandlet (valle-igg) Gennemsnit, kontrolkalve (råmælk) n=8 (dobbelt bestemmelser, 4 kalve) IgG produkter fra valle til forebyggelse/behandling af kalvediarré 11

Anti-rotavirus aktivitet af serum IgG hos kalve Der blev observeret anti-rotavirus IgG i råmælken, men niveauet reduceredes igennem de første 72 timer (Figur 4a). Niveauet for IgG antistoffer rettet imod rotavirus i kalvenes sera var helt ens for de to grupper indtil dag 7. Niveauet af anti-rotavirus antistoffer nåede det højeste niveau efter 24 timer og forblev på dette niveau op til 3 dage efter fødslen. Efter 3 dage var niveauet af anti-rotavirus IgG reduceret og faldt forsat i de næste dage. Efter 7 dage stabiliseredes niveauet hos gruppen af de 4 kalve der havde modtaget råmælk, hvorimod niveauet af anti-rotavirus IgG reduceres gennem de næste 21 dage for gruppen af kalve der havde modtaget IgG produkt. Forskelle af anti-rotavirus IgG-niveauet imellem de to grupper var dog på intet tidspunkt signifikant forskellige. a) Rotavirus antistoffer målt i serum og råmælk ved ELISA Figur 4 1.5 Normaliserede OD værdier (ved 1:32 fortynding) 1..5. -.5 1 1 Timer efter fødslen 1 1 Behandlet (valle-igg) serum, gennemsnit Kontrol (råmælk) serum, gennemsnit Råmælk fra moderkøerne b) Normaliserede OD værdier (ved 1:32 fortynding) 1.5 1..5. Rotavirus antistoffer målt i serum ved ELISA -.5 1 1 1 1 Timer efter fødslen Behandlet (1586/6554) Behandlet (1994/6555) Behandlet (618/6557) Behandlet (6237/6559) Kontrol (193/6556) Kontrol (2144/6495) Kontrol (171/656) Kontrol (5168/6496) 12 IgG produkter fra valle til forebyggelse/behandling af kalvediarré

Besætningsforsøg: Test af effekt af fodring med ikke-multimeriseret IgG produkt i de første 24 timer efter fødsel (kolostrumadgang ikke udelukket) samt dagligt tilskud med multimeriseret IgG produkt i de første 28 levedage, sammenlignet med gængs kolostrumadgang og fodring i problembesætning (2x2 kalve). DJF forsøg 15-12-676 (F-676) 1. Formalia Forsøgets afvikling: 18. august 212 16. oktober 212 Tilsynsførende dyrlæge og ansvarlig for blodprøveudtagning: Besætningsdyrlæge: Henrik Larsen, LVK. Tlf. 2171 5283 Innovationskonsulent Ann Louise Christensen, AgroTech A/S Ansvarlig for afvikling af forsøget mm.: Innovationskonsulent Ann Louise Christensen, AgroTech A/S Ansvarlig for IgG-produktet: UpFront Chromatography A/S, v. Marie Bendix Hansen. Lars E. Larsen, DTU-VET, Tlf.: 35886274, 4998434, lael@vet.dtu.dk Besætningen: Over Tolstrupgaard I/S, v/ Jens Anton Jensen og Anders Hedegård Jensen Silkeborgvej 63, 88 Viborg CHR: 39883 (kvier 61644), ca. 4 årskøer, overvejende af Dansk Holstein 2. Formål Afprøvning af bovint IgG-produkt med meget høj koncentration af antistoffer, samt et multimeriseret (stabiliseret) IgG-produkt med henblik på om IgG-produktet (ikke multimeriseret) givet som kolostrumtilskud i de første 24 timer efter fødsel samt som fodertilskud (multimeriseret) dagligt dag 2-28 påvirker tilvækst og sundhed positivt i kalvenes første levemåned sammenlignet med kalve, der ikke modtager IgG-tilskud, men har adgang til kolostrum hos moderkoen og i øvrigt fodres normalt. Den deltagende problembesætning havde en tilbagevendende kalvedødelighed på op til 1 %. IgG produkter fra valle til forebyggelse/behandling af kalvediarré 13

3. Hypotese Kalve der tildeles IgG-produkterne som fodertilskud vil have mindre dødelighed, lavere sygdomsfrekvens, mindre alvorlig diarré samt større tilvækst end kontrolgruppen. 4. Materialer og Metoder Dyr og grupper Antal kalve: 2 x 2. Alle kalve fulgte den normale praksis og mælkefodring i besætningen, men herudover blev de opdelt i de to grupper beskrevet nedenfor. Produkter, behandlinger og dosis Hold A (2 kalve). Tildeltes ekstra IgG i råmælken og i mælken frem til dag 28, jf. nedenstående dosering. Hold B (2 kalve). Kontrol. Tildeltes ikke ekstra IgG og fulgte den normale fodringspraksis. Kalve skulle indsættes skiftevis på kontrol- og IgG-holdet. Indsættelse af den første kalv på hold skulle ske efter lodtrækning. NB: dette kom til at foregå anderledes, se nedenfor. IgG dosering: (Hold A) Ved første fodring med råmælk tilsættes 2 g (ca. 1.1 liter) ikke-multimeriseret IgG produkt til 2.9 liter råmælk og gives til kalven. Ved de resterende fodringer, indtil kalven er 28 dage, tilsættes 4 g (svarer til ca. 22 ml) af multimeriseret IgG produkt til mælken sammen med hver af de to daglige fodringer. Prøveudtagning Det var ikke planlagt fra starten, men blev besluttet i løbet af afprøvningen at udtage 1 ml blodprøver (rød plain vacutainer) fra alle kalve gennem de 28 dage i forsøg. Da dette først blev besluttet ca. 14 dage efter at de første kalve var gået i forsøg findes der ikke blodprøver fra startperioden for alle kalve. Endvidere gik der et antal blodprøver tabt i forsendelsen undervejs. Dette betyder, at der kun haves blodprøvedata (IgG serumkoncentrationer) for 9 IgG-kalve og 16 kontrolkalve fra slutningen af forsøget. (heerudover er der data for en del af kontrolkalvene tidligere i perioden). Vejninger Ved fødsel og derefter to gange per uge. Vejning sker på et veldefineret tidspunkt i forhold til morgenfodringen. Registrering af gødningsscore Alle kalve kontrolleres for gødningsscore to gange per uge. Registrering sker efter 4-punkts skala ( (normal), 1 (grød), 2(vælling, 3 (vandig)). Kalvene kontrolleres desuden for klinisk diarre (tilsmudsning af bagpart). Sygdomsregistreringer og klinisk diarré Tilfælde af diarré med behandling samt øvrige sygdomsbehandlinger registreres. 14 IgG produkter fra valle til forebyggelse/behandling af kalvediarré

Laboratorieanalyser Serumprøverne blev analyseret for:total IgG koncentration ved ELISA. 5. Resultater Der henvises til Bilag for en detaljeret gennemgang af resultaterne. Note 1: Forsøget blev ikke gennemført som planlagt, idet de 2 først fødte kalve alle blev inkluderet i gruppe A (IgG tilskud) og de næstfølgende 2 alle i gruppe B (kontroller). Dette betyder at de to grupper af kalve har været i forsøg i to forskellige perioder, hvilket havde stor praktisk betydning for kalvenes sundhedstilstand og tilvækst, da der 1) florerede lungebetændelse* i den første men ikke i den anden periode, dvs. påvirkning af gruppe A men ikke gruppe B, og da der 2) var forskel på hvor meget kalvene gik henholdsvis inde og ude i de to perioder, hvilket har stor betydning, da det er velkendt, at kalve der går ude har generelt bedre sundhed og tilvækst end kalve der går inde. Data er således under indflydelse af en periodeeffekt, hvis størrelse er ukendt. *for ni af de tyve kalve i gruppe A er der registreret lungebetændelse eller mistanke om lungebetændelse. Dette er ikke registreret for nogen af kalvene i gruppe B. Note 2: De daglige sygdomsregistreringer foretaget i besætningen, er registreret med forskellig omhu, med en væsentlig større registreringsgrad ved forsøgets start, hvilket også bidrager til periodeeffekten med negativ effekt for gruppe A. Således er det kun muligt at konkludere på sygdomsregistreringer fra de to ugentlige registreringer foretaget af den eksterne forsøgsansvarlige. Herved vil der dog igen være usikkerhed forårsaget af periodeeffekter. Note 3: Af ukendte grunde var kalvedødeligheden under dette forsøg (1 ud af 4 kalve (2.5%)) langt mindre end den normale for denne besætning (1% for kalve dag -28). Kalvedødeligheden var endvidere i 212 højere end de to foregående år, men under selve forsøget var dødeligheden lavere end normalen ( de to foregående år). Det er dog normalt, at den øgede fokus i forbindelse med forsøg, resulterer i bedre management. Data viser, at IgG-behandlede kalve (gruppe A) havde en større daglig tilvækst efter 22 dage end de ubehandlede kalve. Denne positive tendens for gruppe A blev også observeret ved den såkaldte gødningsscore, men periodeeffekten gør det umuligt at vurdere hvad denne tendens skyldes. Serum IgG koncentrationer omkring levedag 28 kunne sammenlignes mellem 9 kalve fra gruppe A (IgG) og 16 kalve fra gruppe B (kontrol) (Figur 5). Data viser, at efter 23 dage har de IgGbehandlede kalve et signifikant højere serum IgG niveau end de ubehandlede kalve (17,6 mg/ml imod 13,9 mg/ml (figur 5a)). For at tage højde for normalfordelingen blev data transformeret (Figur 5c), men dette ændrede ikke på det signifikante højere serum IgG koncentration hos de behandlede kalve. IgG produkter fra valle til forebyggelse/behandling af kalvediarré 15

Figur 5 a) Dag 23-28 3 p<.4 b) Alle dage 3 p<.8 mg/ml IgG 2 1 mg/ml IgG 2 1 Behandlet (n=9) Kontrol (n=16) Behandlet (n=9) Kontrol (n=49) c) Transformeret, Dag 23-28 d) Transformeret, Alle dage 1.6 P<.5 2. P<.2 1.4 1.5 1.2 1. 1..8.5.6 Behandlet (n=9) Kontrol (n=16). Behandlet (n=9) Kontrol (n=49) 6. Diskussion Det initielle 4x4 kalve pilotforsøg viste, at der ikke var forskel i kliniske symptomer og tilvækst mellem 2 grupper af kalve fodret hhv. med råmælk fra moderkoen og IgG-produktet. Derved ser det ud til at fodring udelukkende med IgG ikke har nogen negativ effekt på kalvenes trivsel. Signifikante forskelle i IgG koncentrationerne målt i serum imellem de to grupper af kalve kan skyldes, at råmælken beskytter IgG antistofferne i kalvenes fordøjelsessystem, hvorimod der ingen beskyttelse er i de rene tilsatte IgG molekyler fra IgG-produktet. Det kan også skyldes at optagelsen af det rene IgG produkt er mindre effektiv end optagelsen af IgG fra naturligt kolostrum. Imidlertid er en niveau på omkring 1 mg/ml tæt på det der normalt ses hos kalve (jvnf. også besætningsforsøget (nedenfor), hvor kontrolgruppen ligger på 13.9 mg/ml). Umiddelbart betød det lavere niveau af optagelsen af IgG hos de kalve der havde modtaget valleproduktet ikke noget for optagelsen af IgG antistoffer imod rotavirus, da der blev observeret et ens respons imod rotavirus de to grupper imellem. Hvis man fjerner kontrol 6495 i figur 4b vil man observere at den gennemsnitlige titer af anti-igg rotavirus antisotffer hos gruppen der modtog råmælk ville blive mindre end gruppen der modtog valleproduktet (forskellen er dog ikke signifikant). Dette er vigtigt, da det viser at det rene IgG har bevaret sin aktivitet og også optages fra tarmen under bevarelse af sin aktivitet. I besætningsforsøget blev det overraskende observeret, at tildeling af IgG tilskud i form af umodificeret IgG lige efter fødslen og derefter i form af multimeriseret IgG ved de 2 gange daglige 16 IgG produkter fra valle til forebyggelse/behandling af kalvediarré

fodringer resulterede i et højere målbart niveau af serum IgG i slutningen af forsøgsperioden for den enkelte kalv i forhold til kontrolgruppen. Dette må fortolkes som at en enkelt tildeling af umodificeret IgG produkt lige efter fødslen har en blivende effekt på serum immunglobulin niveauet i op til 28 dage efter fødslen, idet det ikke antages at IgG, og slet ikke multimeriseret IgG kan optages fra tarmen i større udstrækning efter de første 24 timer. Som nævnt ovenfor (note 1-3) blev besætningsforsøget ikke gennemført som planlagt, idet der bl.a. ikke blev stratificeret i forhold til periodeeffekter, hvilket gør det svært at fortolke effekt på sundhed og tilvækst af IgG tilskuddet. Man kan dog konkludere vedr. tilvækst, at forskellen mod slutningen af forsøget (se figur på side 9 i Bilag A) hvor gruppe A mere end indhenter gruppe B på trods af lungebetændelse (kompensatorisk vækst) er interessant. Normalt ligger kalve ramt af lungebetændelse lavere i tilvækst end ikke-syge kalve i en lang periode, og det er derfor interessant, at gruppe A indhenter hold B allerede i 4. leveuge. Den store forskel i tilvækst hos gruppe A lige efter fødslen er svær at fortolke. Den lille forskel i tilvækst mellem hold A og B i perioden -28 dage er ikke signifikant. Tilvæksten har været lav på begge hold i projektet. Et typisk niveau for mælkeperioden med det praktiserede mælkeniveau vil ligge på 5 gram daglig tilvækst. Det anbefales at køre et opfølgende besætningsforsøg. Med erfaringerne fra første besætningsforsøg foreslås det opfølgende forsøg udført i en besætning, som ikke har problemer i forvejen, da det vil forenkle datamaterialet. Desuden skal der køres skiftevis med forsøgskalv og kontrolkalv, så periodeproblemer undgås. Endelig skal sygdomsregistreringer forgå ens og stringent gennem hele forsøget og endelig foreslås opsamlet blodprøver fra kalvene v. fødsel, v. 24 timer og derefter 1 gang om ugen til bestemmelse af serum IgG koncentrationer. Under antagelse af en normal spredning på 5 gram i daglig tilvækst bør forsøgets størrelse være 2*1 kalve for at kunne vise en forskel på 1 gram daglig tilvækst mellem grupperne som statistisk sikker. IgG produkter fra valle til forebyggelse/behandling af kalvediarré 17