Ordreinformation 04340892 190 (100 tests) System-ID 07 6822 7 20766305 122 20766399 122 20766364 122 Cyclosporine Calibrators 0 (1 2.5 ml) 50, 100, 200, 350, 500 (5 2.0 ml) Cyclosporine Calibrator 0 (3 2.5 ml) COBAS INTEGRA Cyclosporine Sample Pretreatment Reagent (4 40 ml) System-ID 07 6630 5 System-ID 07 6639 9 System-ID 07 6636 4 Analyseinstrument(er), hvor cobas c pack kan anvendes COBAS INTEGRA 400 plus COBAS INTEGRA 800 Dansk Systeminformation Test, test ID 0 007 Anvendelse In vitro-diagnostisk test til kvantitativ bestemmelse af cyclosporin A i humant fuldblod ved monitorering af cyclosporinterapi hos transplanterede patienter. Resumé Cyclosporin er et cyklisk undecapeptid, som stammer fra svampe, og som er et kraftigt immunosuppressivt stof. Siden introduktionen i 1983 har cyclosporin forbedret overlevelsesraten signifikant hos patienter efter hjerte-, nyre-, lever-, pancreas- eller lungetransplantationer og har reduceret hyppigheden af afstødning markant. Mange studier har dokumenteret effekten af cyclosporin i kampen mod organafstødning. Utilstrækkelige doser og koncentrationer kan føre til afstødning af det transplanterede organ. Toksiske koncentrationer af cyclosporin er forbundet med mange alvorlige bivirkninger, f.eks. nefrotoksicitet, hepatotoksicitet og en række andre komplikationer. Specielt de nefrotoksiske virkninger af lægemidlet bekymrer lægerne, da det er vanskeligt at skelne mellem organafstødning og cyclosporintoksicitet. 1,2 Den mest effektive måde at sikre tilstrækkelig immunosuppressiv behandling af patienter, der får transplanteret organer, er monitorering af cyclosporinkoncentrationen i fuldblod og sammenholde denne koncentration med andre laboratoriedata og kliniske betragtninger. Fuldblod bør foretrækkes frem for plasma til måling af cyclosporin, da lægemidlet hurtigt fordeles til erytrocytterne. Cyclosporinkoncentrationen bør måles med en metode, som er specifik for det oprindelige stof, da de over 30 cyclosporinmetabolitters rolle i forbindelse med immunosuppressionen og toksiciteten endnu ikke er afklaret. De klassiske metoder til monitorering af cyclosporinkon- centrationen i blod er bl.a. højtryksvæskekromatografi (HPLC), radioimmunoassay (RIA) og fluorescenspolari- seringsimmunoassays (FPIA). Analyseprincip Enzyme Multiplied Immunoassay Technique (EMIT) COBAS INTEGRA -analysen bygger på en homogen enzymimmunoassayteknik til analysering for cyclosporin i fuldblod. Analysen indeholder monoklonale antistoffer fra mus med høj specificitet for cyclosporin. COBAS INTEGRA -analysen er baseret på kompetitiv binding til cyclosporinantistoffernes bindingspladser. Cyclosporin i prøven konkurrerer med cyclosporin i enzymreagenset, som er mærket med enzymet glukose 6 fosfatdehydrogenase (G6PDH). Aktivt (ubundet) enzym omdanner oxideret nikotinamid-adenin-dinukleotid (NAD) i antistofreagenset til NADH, hvilket medfører en kinetisk absorbansændring, som kan måles spektrofotometrisk. Enzymaktiviteten reduceres ved binding til antistoffet, hvorefter cyclosporinkoncentrationen i prøven kan måles ved hjælp af enzymaktiviteten. Endogent serum-g6pdh interfererer ikke, da coenzymet NAD kun reagerer med det bakterielle (Leuconostoc mesenteroides) enzym, der anvendes i analysen. Før analysering med COBAS INTEGRA -analysen skal prøver, kalibratorer og kontroller forbehandles med COBAS INTEGRA Cyclosporine Sample Pretreatment Reagent. Reagenset lyserer cellerne, ekstraherer cyclosporinet og udfælder proteinerne i blodet. De forbehandlede prøver centrifugeres, og en afmålt mængde af supernatanten indeholdende cyclosporin analyseres derefter med COBAS INTEGRA -analysen. Reagenser - arbejdsopløsninger R1 SR Antistofreagens Monoklonale anti-cyclosporin antistoffer (mus), nikotinamid-adenindinukleotid, glukose 6 fosfat, natriumklorid, fyldstof, afspændingsmiddel og konserveringsmidler, bl.a. 0.1 natriumazid og 0.005 streptomycinsulfat. Enzymreagens Cyclosporin mærket med bakterielt (Leuconostoc mesenteroides) glukose 6 fosfatdehydrogenase, TRIS buffer, fyldstoffer, stabilisatorer og konserveringsmidler, bl.a. 0.1 natriumazid og 0.005 streptomycinsulfat. R1 er i position B, og SR er i position C. Forholdsregler og advarsler Vær opmærksom på alle advarsler og forholdsregler i kapitel 1, Indledning, i denne metodemanual. I USA: Kun til den foreskrevne brug. Reagenshåndtering Klar til brug Opbevaring og holdbarhed Holdbarhed ved 2 8 C COBAS INTEGRA 400 plus system I brug på instrumentet ved 10 15 C COBAS INTEGRA 800 system I brug på instrumentet ved 8 C Se udløbsdatoen på etiketten på cobas c pack 4 uger 4 uger Reagenserne må ikke fryses eller udsættes for temperaturer over 27 C. Cyclosporinkalibratorerne transporteres på tøris og skal opbevares i fryser. Før brug første gang skal kalibratorerne optøs ved stuetemperatur i mindst en time. Prøvetagning og -forberedelse Benyt kun egnede prøvetagningsrør til prøvetagning og -forberedelse. Kun de nedennævnte prøvematerialer er testet og fundet acceptable. Fuldblod Det eneste acceptable antikoagulerende middel er EDTA. Hæmatokritværdien i de prøver, der skal analyseres, bør ikke overstige 54. Det korrekte tidspunkt for prøvetagning efter sidste lægemiddeldosis påvirkes af farmakokinetiske faktorer. Disse faktorer er f.eks. dosering, indgiftsmetode, anden samtidig behandling samt biologiske variationer, der påvirker tilgængeligheden af lægemidlet. Til bestemmelse af cyclosporin anbefales en prøve med minimal koncentration. Hepariniserede prøver kan ikke anbefales, da de kan danne koageler ved opbevaring. Brug friske prøver. Hvis prøverne skal analyseres inden for 8 timer efter prøvetagning, kan de opbevares ved stuetemperatur (18 25 C). De kan opbevares ved 2 8 C i op til én uge. Hvis længere opbevaring er nødvendig, kan de fryses 1 / 5
ved 20 C. Cyclosporin er stabil i fuldblodsprøver i mindst 3 måneder ved opbevaring ved 20 C. 3,4 Frosne prøver skal optøs og blandes grundigt før analysering. Undgå gentagen nedfrysning og optøning. Uopløseligt materiale, som er dannet i de frosne prøver, skal undgås ved afpipettering. NØDVENDIG HANDLING Kalibratorer, kontroller og/eller prøver skal forbehandles med COBAS INTEGRA Cyclosporine Sample Pretreatment Reagent, kat.nr. 20766364122, system-id 07 6636 4, før analysering. Følg trinene i vejledningen til COBAS INTEGRA Cyclosporine Sample Pretreatment Reagent til forbehandling af kalibratorer, kontroller og/eller prøver. De tekniske anvisninger er en vigtig del af vejledningen og skal læses grundigt før hvert trin. Fortynding af prøver med høje koncentrationer Prøver med høje koncentrationer (> 500 ) skal fortyndes enten med nulkalibratoren eller med cyclosporinnegativt EDTA-fuldblod. 1. Vend eller vug blodprøven med høj koncentration og diluenten (nulkalibratoren eller cyclosporinnegativt EDTA-fuldblod) forsigtigt, men grundigt umiddelbart før brug. 2. Bland én del fuldblodsprøve med høj koncentration med to dele diluent. 3. Bland den fortyndede prøve forsigtigt, men grundigt ved at vende flere gange. 4. Forbehandl den fortyndede prøve ved at følge trinene i vejledningen til COBAS INTEGRA Cyclosporine Sample Pretreatment Reagent. 5. Analysér prøven, og multiplicér resultatet med 3 for at beregne cyclosporinkoncentrationen. Leverede materialer Se venligst afsnittet "Reagenser - arbejdsopløsninger" m.h.t. reagenser. Nødvendige (men ikke inkluderede) materialer Til forbehandling af kalibratorer, kontroller og/eller prøver anvendes COBAS INTEGRA Cyclosporine Sample Pretreatment Reagent, kat.nr. 20766364122, system-id 07 6636 4. Analyse Hvis analysen skal udføres optimalt, skal anvisningerne for det aktuelle analyseinstrument følges. Se venligst den aktuelle brugermanual for instrumentspecifikke analyseinstruktioner. Applikation til fuldblod COBAS INTEGRA 400 plus testdefinitioner Målemetode Abs. beregningsmetode Reaktionsmetode Reaktionsretning Bølgelængde A/B Absorbans Kinetisk R1-S-SR Stigende 340/378 nm Calc. first/last 50/102 Postdilution factor Enhed Nej Cyclosporin måles som en langtidsanalyse (varighed ca. 17 minutter). Afpipetteringsparametre Diluent (H 2 O) R1 65 µl 2 µl Prøve 9 µl 11 µl SR 26 µl 14 µl Totalvolumen 127 µl COBAS INTEGRA 800 testdefinitioner Målemetode Abs. beregningsmetode Absorbans Kinetisk Reaktionsmetode Reaktionsretning Bølgelængde A/B R1-S-SR Stigende 340/378 nm Calc. first/last 74/170 Postdilution factor Enhed Nej Cyclosporin måles som en langtidsanalyse (varighed ca. 17 minutter). Afpipetteringsparametre Diluent (H 2 O) R1 65 µl 2 µl Prøve 9 µl 11 µl SR 26 µl 14 µl Totalvolumen 127 µl Kalibrering Kalibrator Cyclosporin-konc. Kalibreringsmetode Logit/log 4 Kalibreringsbestemmelse Afvigelse lav/høj Kalibreringsinterval Cyclosporine Calibrators 0, 50, 100, 200, 350, 500 (0, 41.6, 83.3, 167, 291, 416 nmol/l) Dobbeltbestemmelse anbefales < 10 ved 50 ( 41.6 nmol/l) Hver cobas c pack eller som krævet ifølge kvalitetskontrolprocedurerne Der skal fremstilles en kalibreringskurve ved hjælp af Cyclosporine Calibrators. Kalibratorerne skal anbringes med den højeste koncentration (F) først og den laveste (A) sidst på CAL/QC-racket. Denne kurve gemmes i hukommelsen i COBAS INTEGRA systemerne og kan kaldes frem igen på et senere tidspunkt. Sporbarhed: Cyclosporine Calibrators er fremstillet til at indeholde kendte mængder af cyclosporin i normalt humant serum og er sporbare til USP referencestandarder. Kvalitetskontrol Kvalitetskontrol Kontrolinterval Kontrolrækkefølge Kontrol efter kalibrering BIO-RAD Lyphochek Whole Blood Immunosuppressant Controls Ved hver patientprøve Brugerdefineret Anbefales Kontrolintervallerne og -grænserne bør tilpasses det enkelte laboratoriums individuelle krav. De opnåede værdier skal ligge inden for de definerede grænser. Hvert laboratorium bør etablere egne korrektionsprocedurer, som skal anvendes, hvis en værdi falder uden for de definerede grænser. Følg de gældende offentlige regulativer og lokale retningslinjer for kvalitetskontrol. Beregning COBAS INTEGRA analyseinstrumenter beregner automatisk analytkoncentrationen i den enkelte prøve. For yderligere information, se venligst Dataanalyse på online-hjælp (COBAS INTEGRA 400 plus/800 instrumenter). Omregningsfaktor: 0.833 = nmol/l Begrænsninger - interferens Se afsnittet Testspecifikke performance-data i dette dokument vedrørende oplysninger om substanser, der er testet med denne analyse. Andre stoffer og/eller faktorer kan muligvis interferere med testen og give fejlagtige resultater (f.eks. tekniske eller proceduremæssige fejl). COBAS INTEGRA cobas c pack indeholder in vitrodiagnostiske reagenser til måling af cyclosporin i fuldblod. Analysen er ikke beregnet til måling af cyclosporin i serum eller plasma. Virkningen af carryover skal tages med i betragtning ved evaluering af en prøve med lav 2 / 5
koncentration, som kommer efter en prøve med en cyclosporinkoncentration på 500 eller højere. Omfanget af carry-over varierer fra instrument til instrument. For at minimere carry-over skal instrumentet og prøvehåndteringsudstyret vedligeholdes grundigt, og analyseprocedurerne skal følges omhyggeligt. Kriterium: Genfinding inden for ± 10 af initial værdi ved en cyclosporinkoncentration på 85 (70.8 nmol/l). Icterus: Ingen signifikant interferens op til en bilirubinkoncentration på 855 µmol/l eller 50 mg/dl. Hæmolyse: Ingen signifikant interferens over et hæmatokritområde fra 15 54. Lipæmi: Ingen signifikant interferens op til en triglyceridkoncentration på 1500 mg/dl. Urinsyre: Ingen signifikant interferens op til en Intralipid-koncentration på 20 mg/dl. Kolesterol: Ingen signifikant interferens op til en kolesterolkoncentration på 500 mg/dl. I meget sjældne tilfælde kan gammopati, især type IgM (Waldenströms makroglobulinæmi), give unøjagtige resultater. 5 Til diagnostiske formål skal resultaterne altid sammenholdes med patientens anamnese, kliniske undersøgelser og andre resultater. NØDVENDIG HANDLING Speciel vaskeprogrammering: Brugen af specielle vasketrin er obligatorisk, når visse testkombinationer udføres på COBAS INTEGRA analyseinstrumenter. For yderligere vejledning og for den seneste version af listen over ekstra vaskecykler henvises til metodebladet til CLEAN. Hvor det er nødvendigt, skal speciel programmering til vask/forhindring af carry-over udføres, før der rapporteres resultater med denne test. Grænser og områder Måleområde 15 500 (12.5 416 nmol/l) Måleområdets nedre grænse Testens nedre detektionsgrænse: 15 (12.5 nmol/l) Den nedre detektionsgrænse repræsenterer det lavest målbare niveau, som kan skelnes fra nulkalibratoren ved et konfidensniveau på 95. Den blev bestemt ved brug af nulkalibratoren. Resultatet blev opnået på alle COBAS INTEGRA analyseinstrumenter. Referenceintervaller Der findes intet fast terapeutisk område for cyclosporin i fuldblod. Ved fastlæggelse af den optimale koncentration af cyclosporin i blodet skal der tages højde for kompleksiteten af den kliniske tilstand, individuelle forskelle i sensitiviten over for cyclosporins immunosuppressive og nefrotoksiske virkninger, samtidig indgift af andre immunosuppressiva, transplantattypen, tidsrummet efter transplantationen og en række andre faktorer. Individuelle cyclosporinværdier kan ikke anvendes som den eneste indikator for en ændring af behandlingsregimen. Hver patient skal gennemgå en grundig klinisk undersøgelse, før behandlingen justeres, og hver bruger af analysen skal fastsætte sine egne områder baseret på de kliniske erfaringer. Disse områder vil variere afhængig af den anvendte in vitrodiagnostiske analyse. Områderne skal fastsættes for hver kommercielle analyse. Hvert laboratorium bør undersøge muligheden for at overføre referenceintervallerne til egne patientgrupper og om nødvendigt fastsætte egne referenceintervaller. Testspecifikke performance-data Repræsentative performance-data på COBAS INTEGRA analyseinstrumenter angives nedenfor. Resultaterne kan variere fra laboratorium til laboratorium. Præcision Præcisionen blev fastsat ved hjælp af Bio-Rad Lyphochek Whole Blood Controls ifølge CLSI-retningslinjerne EP05 A2 6 med repetérbarhed (n = 84) og intermediær præcision (2 afmålte mængder pr. kørsel, 2 kørsler pr. dag, 21 dage). Der blev opnået følgende resultater på et COBAS INTEGRA 400 analyseinstrument: Repetérbarhed Niveau 1 90.8 (75.5) 6.1 (5.1) 6.7 Niveau 2 185 (154) 8 (6.7) 4.6 Niveau 3 346 (288) 18 (15.0) 5.1 Intermediær præcision Niveau 1 90.8 (75.5) 9.0 (7.5) 9.9 Niveau 2 185 (154) 13 (10.8) 6.9 Niveau 3 346 (288) 24 (20.0) 6.9 Der blev opnået følgende resultater på COBAS INTEGRA 800 analyseinstrumentet: Repetérbarhed Niveau 1 92.8 (77.2) 6.9 (5.7) 7.5 Niveau 2 191 (159) 10 (8.3) 5.2 Niveau 3 358 (298) 19 (15.8) 5.2 Intermediær præcision Niveau 1 92.8 (77.2) 10 (8.3) 11.1 Niveau 2 191 (159) 14 (11.7) 7.5 Niveau 3 358 (298) 21 (17.5) 6.0 Metodesammenligning COBAS INTEGRA Cyclosporine-analysen og COBAS INTEGRA -analysen med COBAS INTEGRA Cyclosporine Pretreatment Reagent blev sammenlignet på COBAS MIRA med en kommerciel tilgængelig EMIT analyse, der både anvendte en methanol (MeOH)-ekstraktionsmetode og et kommercielt tilgængeligt reagens til prøveforbehandling til EMIT cyclosporinanalysen. Performance for COBAS INTEGRA Cyclosporine- og COBAS INTEGRA analyserne svarede til hinanden sammenlignet med EMIT cyclosporinanalysen. De nedenfor viste data er repræsentative for sammenligningerne. De 277 fuldblodprøver, der blev anvendt til metodesammenligning, blev taget fra transplanterede patienter efter transplantationen. I visse tilfælde blev der taget mere end én prøve fra den samme patient på forskellige tidspunkter efter transplantationen. Prøverne blev frosset ved 20 C og analyseret inden for en måned efter prøvetagning. Af disse 277 prøver indeholdt 14 prøver fra MeOHsammenligningen og 15 prøver fra den nye forbehandlingssammenligning cyclosporinkoncentrationer på < 40 (EMIT sensitivitet) eller > 500 (detektionsgrænse), hvorfor de blev udelukket fra den statistiske analyse. Den resterende prøvepopulation var sammensat af tre typer transplantater, 24 lever, 93 hjerte og 145 nyre (til COBAS INTEGRA 700 analyseinstrument cyclosporin sammenlignet med EMIT med forbehandlingsreagens) eller 146 nyre (til COBAS INTEGRA 700 analyseinstrument cyclosporin sammenlignet med EMIT med methanolekstraktion). Statistisk analyse ved hjælp af Deming regressionsmetode er angivet nedenfor. EMIT MeOH EMIT Sample Pretreatment Reagent Antal prøver 263 262 3 / 5
Værdiområde min. 41 43 maks. 489 485 Slope 0.937 0.939 95 konfidensinterval nedre grænse 0.915 0.917 øvre grænse 0.959 0.961 Intercept () 12.9 13.3 95 konfidensinterval nedre grænse 8.0 8.1 øvre grænse 17.8 18.6 Korrelationskoefficient 0.968 0.963 De samme datasæt er vist grafisk nedenfor i henhold til Bland-Altman metoden. COBAS INTEGRA 700 analyseinstrument cyclosporin sammenlignet med EMIT med methanolekstraktion N = 263 (Y-X) = -0.3 (Y-X) = 23.0 2 = 46.0 + 2 = 45.7-2 = -46.4 COBAS INTEGRA 700 analyseinstrument cyclosporin sammenlignet med EMIT med Pretreatment Reagent N = 262 (Y-X) = 0.4 (Y-X) = 24.3 2 = 48.5 + 2 = 48.9-2 = -48.1 Analytisk specificitet 3 Nedenstående metabolitter, krydsreagerende substanser og strukturelt beslægtede og/eller potentielt samtidigt administrerede forbindelser blev evalueret på COBAS INTEGRA systemerne med en pool af normalt humant EDTA-fuldblod beriget med cyclosporin i en mængde på 200 (166.5 nmol/l). I henhold til protokollen beskrevet af NCCLS blev hver substans analyseret i en koncentration, der svarede til 10 gange den højeste koncentration for det terapeutiske område eller normalområdet. 7 Der blev taget højde for analysens impræcision ved bestemmelse af krydsreaktiviteten. en er angivet som ikke påviselig" (IP), hvis den opnåede værdi lå under analysens sensitivitet. () = 100 (analytisk resultat - analytkoncentration) koncentration af interfererende stof (AM9) M1 667 13 (AM19) M8 500 3.2 (AM1) M17 500 IP (AM4N) M21 500 5.1 IP = ikke påviselig Acetaminophen 200 IP Albuterol 0.18 IP Allopurinol 600 IP Alprazolam 0.37 IP Amphoteracin B 20 IP Atenolol 40 IP Azathiopoprin 10 IP Captopril 50 IP Carbamazepin 120 IP Ceflacor 230 IP Chloramphenicol 250 IP Cimetidin 100 IP Cyclophosphamid 250 IP Digoxin 0.02 IP Dipyridamol 25 IP Disopyramidin 30 IP Erythromycin 200 IP Furosemid 20 IP Gancyclovir 400 IP Gentamicin 120 IP Heparin 800 U/l IP Hydralazin 32 IP Hydrochlorthiazid 40 IP Isoniazid 70 IP Isoproterenolhydroklorid 0.06 IP Lidocain 600 IP Methylprednisolon 12 IP Metoclopramid 4 IP Mycophenolsyre 100 IP Naproxen 1000 1.5 4 / 5
Phenobarbital 150 IP Phenytoin 100 11.8 Piperacillin 8 IP Prazosin 3 IP Prednisolon 12 IP Prednison 12 IP Promethazin 10 IP Salicylsyre 500 IP Sulfamethoxazol 400 IP Theophyllin 250 IP Triamteren 2.8 IP Trimethoprim 20 IP Vancomycin 630 IP IP = ikke påviselig Linearitet For at bestemme analysens linearitet blev der fremstillet en fortyndingsserie med 7 koncentrationer ved anvendelse af en fuldblodsprøve fortyndet med negativt humant fuldblod. Fuldblodprøven stammede fra en patient, der havde fået cyclosporin. Resulterne blev evalueret ved Passing/Bablok regression. 8 GTIN Mængde efter rekonstituering eller blanding Global Trade Item Number Tilføjelser, sletninger eller ændringer er vist ved en streg i margenen. 2015, Roche Diagnostics Roche Diagnostics GmbH, Sandhofer Strasse 116, D-68305 Mannheim www.roche.com Distribution i USA af: Roche Diagnostics, Indianpolis, IN US Customer Technical Support 1-800-428-2336 y = 0.998x + 1.07 r = 1.0 Slope 95 CI (0.971, 1.02) Intercept 95 CI (-0.610, 11.1) Områdets nedre grænse = 28.1 Eventuelle modifikationer af instrumentet beskrevet heri skal valideres af laboratoriet. Referencer 1 McMillan MA. Clinical pharmacokinetics of cyclosporine. Pharmac Ther 1989;42:135-156. 2 Kahan BD. Cyclosporine. N Engl J Med 1989;321:1725-1738. 3 Schran HF, Rosano TG, Hassell AE, et al. Determination of cyclosporine concentrations with monoclonal antibodies. Clin Chem 1987;33:2225-2229. 4 Wong PY, Mee AV, Glenn J, et al. Quality assessment of cyclosporine monitoring Canadian validations. Transplant Proc 1990;22:1216-1217. 5 Bakker AJ, Mücke M. Gammopathy interference in clinical chemistry assays: mechanisms, detection and prevention. Clin Chem Lab Med 2007;45(9):1240-1243. 6 Clinical and Laboratory Standards Institute. Evaluation of Precision of Quantitative Measurement Methods:Approved Guideline, EP05 A2 2004. 7 National Committee for Clinical Laboratory Standards. Interference Testing in Clinical Chemistry; Proposed Guideline. Villanova, PA.: NCCLS; 1986;6(13). NCCLS Publication EP7-P. 8 Bablok W, Passing H, Bender R, et al. A general regression procedure for method transformation. Application of linear regression procedures for method comparison studies in clinical chemistry, Part III. J Clin Chem Clin Biochem 1988 Nov;26(11):783-790. I dette metodeblad anvendes altid punktum som skilletegn for at markere grænsen mellem hele tal og decimaler i et decimaltal. Skilletegn for tusinder anvendes ikke. Symboler Roche Diagnostics anvender nedenstående tegn og symboler ud over dem, der er angivet i ISO 15223 1 standarden. Indhold i pakning 5 / 5