Cortisol , V 10 Dansk 1 / 5 Elecsys 1010/2010 og MODULAR ANALYTICS E170. a) Tris(2,2 -bipyridyl)ruthenium(ii)-kompleks (Ru(bpy) 2+

Transkript

1 tests Dansk Anvendelse Immunoassay til in vitro kvantitativ bestemmelse af cortisol i humant serum, plasma, urin og spyt. bestemmelse bruges ved diagnosticering og behandling af dysfunktion i binyrerne. Elektrokemiluminescensimmunoassay ECLIA anvendes på Roche immunologiske analyseinstrumenter Elecsys 1010/2010 og MODULAR ANALYTICS E170 (Elecsys modul). Resumé (hydrocortison) er det vigtigste glukocorticosteroid, og det er essentielt for opretholdelsen af adskillige kropsfunktioner. Ligesom andre glukocorticosteroider syntetiseres cortisol fra det fælles forstadium kolesterol i zona fasciculata i binyrebarken. Ved transport af cortisol i blodet bindes 90% af cortisol til corticosteriodbindende globulin (CBG) samt til albumin. Kun en lille mængde cortisol cirkulerer ubundet i blodet og kan dermed frit reagere med receptorerne. 1 Den vigtigste fysiologiske effekt af cortisol er stigningen i blodets glukoseindhold (forstærkning af glukoneogenese, katabolisk virkning) samt dens antiinflammatoriske og immunosuppressive virkning. 1 Binyrernes syntese og udskillelse af cortisol kontrolleres af en negativ feedback-mekanisme i hypothalamus-hypofyse-binyrebarkaksen. Hvis cortisolniveauet er lavt, udskilles corticotropin releasing hormon (CRH) fra hypothalamus, hvilket får hypofysen til at frigive adrenocorticotropt hormon (ACTH). Dette stimulerer binyrens syntese og sekretion af cortisol. virker i sig selv ved en negativ feedback-mekanisme på hypofysen og hypothalamus. Derudover forårsager stress en øget cortisol-udskillelse. 1 Der er normalt en døgnvariation i serumkoncentrationen af cortisol. 1 Maximumkoncentrationer på 700 nmol/l eller 25,4 µg/dl ses normalt tidligt om morgenen, hvorefter koncentrationen falder i løbet af dagen, således at koncentrationen om aftenen er ca. det halve af koncentrationen om morgenen. Derfor er det vigtigt at vide prøvetagningstidspunktet, når man skal fortolke resultaterne. En patients cortisolstatus bruges til at diagnosticere binyrens, hypofysens og hypothalamus funktion. 2,3 Dermed kan koncentrationen af cortisol i serum bruges til at monitorere en række sygdomme, som skyldes henholdsvis overproduktion (f.eks. Cushings syndrom) 4,5 eller underproduktion (f.eks. Addisons sygdom) af cortisol samt til at monitorere adskillige behandlingsformer (f.eks. suppressionsterapi med dexametason ved Cushings syndrom og hormonel substitutionsbehandling ved Addisons sygdom). Bestemmelse af cortisol i døgnurin bør foretrækkes til påvisning af Cushings syndrom, da udskillelsen af cortisol i urin ikke er påvirket af cortisoludskillelsens døgnrytme. 6 Dette muliggør en mere nøjagtig differentiering mellem raske personer og patienter med Cushings syndrom., som udskilles i urinen uden ændring, kaldes "frit cortisol i urin" eller "urinary free cortisol (UFC)". I reglen er der en direkte proportional sammenhæng mellem frit cortisol iurinogubundetogdermedbiologiskaktivtcortisoliblodet. 1 Nylige studier har vist, at flere nat-cortisolmålinger på spyt er bedre end måling af frit cortisol i urin til diagnosticering af Cushings syndrom. 7,8,9,10 Bestemmelse af nat-cortisol i spyt er især anvendeligt på børn, psykiatriske patienter og personer, hvor en række stressfaktorer kan påvirke binyrebarken og derved give øgede koncentrationer af binyresteroider. 11 Elecsys -analysen anvender et kompetitivt analyseprincip med et polyklonalt antistof, som er rettet specifikt mod cortisol. Endogent cortisol i prøven, som er frigivet fra bindingsproteinet ved hjælp af danazol, konkurrerer med eksogent cortisolderivat i analysen, som er mærket med et rutheniumkompleks a, om bindingspladserne på det biotinylerede antistof. Urin kan anvendes til analysen, hvis det ekstraheres med diklormetan (for at reducere interfererende substanser). Ubehandlet spyt anvendes direkte efter centrifugering. a) Tris(2,2 -bipyridyl)ruthenium(ii)-kompleks (Ru(bpy) 2+ 3 ) Analyseprincip Kompetitivt princip. Analysens totale varighed: 18 minutter. 1. inkubation: 20 µl prøve inkuberes med et cortisolspecifikt biotinyleret antistof samt et cortisolderivat mærket med et rutheniumkompleks. Afhængigt af analytkoncentrationen i prøven og den deraf følgende immunkompleksdannelse vil det mærkede antistofs bindingsplads være optaget dels af prøveanalyt og dels af ruthenyleret hapten. 2. inkubation: Efter tilsætning af streptavidin-coatede mikropartikler bliver komplekset bundet til solid phase via interaktion mellem biotin og streptavidin. Reaktionsblandingen opsuges i målecellen, hvor mikropartiklerne indfanges magnetisk på elektrodens overflade. Ubundne stoffer fjernes derefter med ProCell. Ved at sætte spænding til elektroden induceres derefter kemiluminiscensemission, som måles med en fotomultiplikator. Resultater bestemmes via en kalibreringskurve, som genereres instrumentspecifikt med 2-punktskalibrering, og en masterkurve, som aflæses via reagensbarkoden. Reagenser - arbejdsopløsninger Elecsys reagenskit, kat.nr tests M Streptavidin-coatede mikropartikler (gennemsigtigt låg), 1flaske,6,5ml: Streptavidin-coatede mikropartikler, 0,72 mg/ml, bindingskapacitet: 470 ng biotin/mg mikropartikler; konserveringsmiddel. R1 Anti-cortisol-Ab~biotin (gråt låg), 1 flaske, 9 ml: Biotinyleret polyklonalt anti-cortisol antistof (får) 90 ng/ml; MES b buffer 100 mmol/l, ph 6,0; konserveringsmiddel. R2 -peptid~ru(bpy) 2+ 3 (sort låg), 1 flaske, 9 ml: derivat (syntetisk) mærket med et rutheniumkompleks 25 ng/ml; danazol 20 µg/ml; MES buffer 100 mmol/l, ph 6,0; konserveringsmiddel. b) MES = 2-morpholin-ethansulfonsyre Forholdsregler og advarsler Til in vitro-diagnostisk brug. Udvis de normale forholdsregler, som kræves ved håndtering af alle laboratoriereagenser. Bortskaffelse af alt affaldsmateriale skal ske i overensstemmelse med lokale retningslinjer. Leverandørbrugsanvisning kan rekvireres. Undgå skumdannelse ved alle reagenser og prøvetyper (prøver, kalibratorer og kontroller). Reagenshåndtering Reagenserne i kittet er samlet i en brugsklar enhed, som ikke kan deles. Alle nødvendige oplysninger for korrekt funktion indlæses automatisk via reagensbarkoderne. Opbevaring og holdbarhed Opbevares ved 2-8 C. Opbevar Elecsys reagenskittet lodret for at sikre mikropartiklernes fuldstændige homogenitet under den automatiske blanding før anvendelsen. Holdbarhed: uåbnet ved 2-8 C: indtil den angivne udløbsdato efter åbning ved 2-8 C: 12 uger på E170/Elecsys 2010: 8uger på Elecsys 1010: 2 uger (opbevaret skiftevis i køleskab og på instrumentet - omgivende temperatur C; op til 20 timer i alt i åben tilstand) Prøvetagning og -forberedelse Kun de nedennævnte prøvematerialer er testet. Serum og plasma: Serum opsamlet ved hjælp af standard prøvetagningsrør eller rør indeholdende separationsgel. Li-, Na-, NH + 4-heparin, K 2 -, K 3 -, Na 2 -EDTA og natriumcitratplasma. Hvis natriumcitrat anvendes, skal resultaterne korrigeres med +10%. Kriterium: Genfinding inden for % af serumværdi eller slope 0,9-1,1 + intercept inden for <± 2 x analytisk sensitivitet (LDL) + korrelationskoefficient > 0, , V 10 Dansk 1 / 5 Elecsys 1010/2010 og MODULAR ANALYTICS E170

2 Resultaterne for natriumfluorid/kaliumoxalatplasma er 27% lavere end resultaterne for serum. Bemærk venligst: Det er vigtigt at notere prøvetagningstidspunktet på grund af cortisolnivauets døgnrytme i serum og plasma. Holdbar i 5 dage ved 2-8 C, 3 måneder ved -20 C. Må kun fryses én gang. 12 Spyt: TagenspytprøvevedhjælpafenSalivette(Sarstedt). Fjern bomuldsrullen fra det indre rør, og tyg forsigtigt i ca. 2 minutter for at mætte bomuldsrullen med spyt. Anbring bomuldsrullen i det indre rør, og luk røret. Centrifugér Salivetten i 2 minutter ved 1000 g for at separere spyttet ud i det ydre rør. Anvend den klare supernatant til Elecsys -analysen. Anvend spytprøver på samme måde som serum- eller plasmaprøver. Den centrifugerede spytprøve er holdbar i 5 dage ved 2-8 C, 3 måneder ved -20 C. Må kun fryses én gang. 12,13 Urin: Opsaml døgnurinen i rene opsamlingsdunke uden konserveringsmiddel, og mål mængden (l/døgn). Centrifugér evt. udfældning før ekstraktion. Ekstraherede urinprøver anvendes på samme måde som serum- og plasmaprøver i analysen. Urinprøvernes holdbarhed: 7 dage ved 2-8 C, 3 måneder ved -20 C. Må kun fryses én gang. 12 Det rekonstituterede ekstrakts holdbarhed: 7 dage ved 2-8 C, 4 uger ved -20 C. Må kun fryses én gang. 12 Ved analysering af prøver i primærrør skal instruktionerne fra producenten af disse rør følges. Centrifugér prøver indeholdende udfældninger før udførelse af analysen. Anvend ikke varme-inaktiverede prøver. Anvend ikke prøver og kontroller stabiliseret med azid. Sørg for, at patientprøverne, kalibratorerne og kontrollerne har nået omgivende temperatur (20-25 C) før måling. På grund af mulig fordampningseffekt bør prøver, kalibratorer og kontroller på instrumentet måles inden for to timer. Leverede materialer Se venligst afsnittet "Reagenser - arbejdsopløsninger" m.h.t. reagenser. Nødvendige (men ikke inkluderede) materialer Kat.nr , Elecsys CalSet, til 4 x 1 ml Kat.nr , Elecsys PreciControl Universal, til 2 x 3 ml af henholdsvis PreciControl Universal 1 og 2 Kat.nr , Elecsys Diluent Universal, 2 x 18 ml prøvediluent eller Kat.nr , Elecsys Diluent Universal, 2 x 40 ml prøvediluent Almindeligt laboratorieudstyr Elecsys 1010/2010 eller MODULAR ANALYTICS E170 analyseinstrument Yderligere nødvendige materialer til bestemmelse af cortisol i urin: Diklormethan (methylklorid) Egnede reagensglas, pipetter, roterende shaker (f.eks. vortex), nitrogen og ekstraktionsskærm Kvalitetskontrol: f.eks. Lyphochek, Quantitative Urine Control Normal 1, fås hos Biorad, kat.nr. 376 Yderligere nødvendige materialer til bestemmelse af cortisol i spyt: Salivette, prøvetagningsrør (rør med bomuldsrulle uden forberedelse), Sarstedt, Nümbrecht, Tyskland, kat.nr Tilbehør til Elecsys 1010 og 2010 analyseinstrumenter: Kat.nr , Elecsys ProCell, 6 x 380 ml reaktionsopløsning Kat.nr , Elecsys CleanCell, 6 x 380 ml målecellerens Kat.nr , Elecsys SysWash, 1 x 500 ml systemvask Kat.nr , adapter til SysClean Kat.nr , Elecsys 1010 AssayCup, 12 x 32 reaktionsrør, eller Kat.nr , Elecsys 2010 AssayCup, 60 x 60 reaktionsrør Kat.nr , Elecsys 2010 AssayTip, 30 x 120 pipettespidser Tilbehør til MODULAR ANALYTICS E170 analyseinstrument: Kat.nr , ProCell M, 1 x 2 l reaktionsopløsning Kat.nr , CleanCell M, 1 x 2 l målecellerens Kat.nr , PC/CC-Cups, 50 kopper til opvarmning af ProCell M og Clean Cell M før brug Kat.nr , ProbeWash M, 12 x 70 ml rensevæske til klargøring af reagensnål og for at undgå kontaminering mellem reagenser Kat.nr , AssayTip/AssayCup Combimagazine M, 48 magasiner x 84 reaktionsrør eller pipettespidser, affaldsposer Kat.nr , WasteLiner, affaldsposer Kat.nr , SysClean Adapter M Tilbehør til alle instrumenter: Kat.nr , Elecsys SysClean, 5 x 100 ml målecellerens Fås kun i USA: Kat.nr , Elecsys CalCheck, 3 koncentrationsniveauer Analyse Ekstraktion og rekonstitution af urinprøverne 1. Bland 600 µl urin og 3,0 ml diklormethan grundigt i et glasrør i 7 minutter. 2. Centrifugér i 5 minutter ved 2500 g for at separere faserne. 3. Fjern og kassér den vandige fase samt eventuelle rester. 4. Afpipettér 1,5 ml af diklormethanfasen til et rent glasrør, og inddamp under en skærm indtil tør ved hjælp af en blid nitrogenstrøm. 5. Rekonstituér den tørre rest med 300 µl Elecsys Diluent Universal-reagens, og inkubér i 30 minutter ved C under jævnlig blanding. 4 gange i 1 minut på en roterende shaker. 6. Analysér den rekonstituerede prøve på samme måde som serum- og plasmaprøver. Hvis analysen skal udføres optimalt, skal anvisningerne for det aktuelle analyseinstrument følges. Se venligst den aktuelle brugermanual for instrumentspecifikke analyseinstruktioner. Rekonstitution af mikropartiklerne sker automatisk før brug. Indlæs de testspecifikke parametre ved hjælp af reagensets barkode. Hvis barkoden i sjældne tilfælde ikke kan læses, skal den 15-cifrede talsekvens indtastes. MODULAR ANALYTICS E170 og Elecsys 2010 analyseinstrument: Temperér de afkølede reagenser til ca. 20 C, og anbring dem på instrumentets reagenskarrusel (20 C). Undgå skumdannelse. Systemet regulerer automatisk reagenstemperaturen og åbning/lukning af flaskerne. Elecsys 1010 analyseinstrument: Temperér de afkølede reagenser til ca C, og anbring dem på instrumentets prøve/reagenskarrusel (omgivende temperatur C). Undgå skumdannelse. Åbn reagenserne manuelt før brug, og luk manuelt efter brug. Opbevares ved 2-8 C efter brug. Kalibrering Sporbarhed: Denne metode er standardiseret over for Enzymun-Test -reagenskit. Denne er igen standardiseret via ID-MS. 12,14 Elecsys -analysen viste genfindingsresultater fra % i IRMM (Institute for Reference Materials and Measurements, Geel, Belgien)/IFFC-451 Panel (ID/GC/MS), 14,15 som består af 34 prøver i koncentrationsområdet nmol/l. Alle Elecsys -reagenssæt er mærket med en barkode, som indeholder specifikke oplysninger til kalibrering af det pågældende reagenslotnr. Den prædefinerede masterkurve er tilpasset til instrumentet ved hjælp af Elecsys CalSet-reagenser. Kalibreringshyppighed: Kalibrering skal udføres én gang pr. reagenslot med brug af frisk reagens (dvs. højst 24 timer efter, at reagenskittet blev registreret på instrumentet). Fornyet kalibrering anbefales på følgende måde: MODULAR ANALYTICS E170 og Elecsys 2010 analyseinstrument: efter 1 måned (28 dage) ved brug af samme reagenslot efter 7 dage (ved brug af det samme reagenskit på instrumentet) Elecsys 1010 analyseinstrument: ved hvert reagenskit efter 7 dage (omgivende temperatur C) efter 3 dage (omgivende temperatur C) Ved alle instrumenter: efter behov: f.eks. kvalitetskontrolresultater uden for de specificerede grænser. Kalibreringsverifikation: Ikke nødvendig. Instrumentets software kontrollerer automatisk kurvens validitet og gør opmærksom på eventuelle afvigelser. Kvalitetskontrol Til kvalitetskontrol benyttes Elecsys PreciControl Universal-kit, urinkontrol, f.eks. Lyphochek, Quantitative Urine Control Normal 1. Derudover kan andre egnede kontrolmaterialer anvendes. Urinkontroller skal ekstraheres og analyseres på samme måde som urinprøver. Elecsys 1010/2010 og MODULAR ANALYTICS E170 2 / , V 10 Dansk

3 Kontroller for de forskellige koncentrationsniveauer bør køres som enkeltbestemmelse mindst én gang i døgnet, når testen er i brug, én gang pr. reagenskit og efter hver kalibrering. Kontrolintervallerne og -grænserne bør tilpasses det enkelte laboratoriums individuelle krav. De opnåede værdier skal ligge inden for de definerede grænser. Hvert laboratorium bør etablere egne korrektionsprocedurer, som skal anvendes, hvis en værdi ligger uden for grænserne. Beregning Analyseinstrumentet beregner automatisk analytkoncentrationen i hver prøve (enten i nmol/l, µg/dl eller µg/l). Omregningsfaktorer: nmol/l x 0,03625 = µg/dl nmol/l x 0,3625 = µg/l µg/dl x 27,586 = nmol/l µg/l x 2,7586 = nmol/l Manuel beregning af frit cortisol i urin: cortisoludskillelse i løbet af 24 timer (cortisolkoncentration/døgn): Multiplicér instrumentresultaterne med mængden af døgnurin (l/døgn) (hvis instrumentresultaterne er angivet i µg/dl, skal de multipliceres igen med 10 = µg/døgn). Det gennemsnitlige resultat af ekstraktionen (n = 25) blev bestemt til at være 94%. Begrænsninger - interferens 12 Når analysen udføres på serum og plasma, er den upåvirket af icterus (bilirubin < 1026 µmol/l eller < 60 mg/dl) og hæmolyse (Hb < 1,2 mmol/l eller < 1,9 g/dl), lipæmi (Intralipid < 2700 mg/dl) og biotin < 123 nmol/l eller < 30 ng/ml. Kriterium: Genfinding inden for ± 10% af initial værdi. Udført på urin er analysen upåvirket af 60 mg/dl protein, 750 mmol/l NaCl, 350 mmol/l carbamid, 5 mmol/l kreatinin, 2 mmol/l glukose. Kriterium: Genfinding inden for ± 15% af initial værdi. I forbindelse med patienter, som behandles med høje biotindoser (dvs. > 5 mg/dag), bør der ikke tages prøver før mindst 8 timer efter seneste biotindosering. Der er ikke observeret interferens fra reumafaktorer op til en koncentration på 1100 IU/ml. Der er udført in vitro tests på 17 almindeligt anvendte lægemidler. Der blev ikke fundet interferens med testen. Risikoen for interferens fra potentielle immunologiske reaktioner mellem analysekomponenter og sjældne sera er minimeret ved at tilsætte passende additiver. I sjældne tilfælde kan interferens opstå på grund af ekstremt høje titre af antistof mod streptavidin og ruthenium. Elecsys -analysen indeholder additiver, som minimerer denne virkning. Graviditet, kontraception og østrogenterapi giver forhøjede cortisolkoncentrationer. I prøver fra patienter, som er behandlet med prednisolon, methylprednisolon eller prednison, kan der bestemmes falsk forhøjede koncentrationer af cortisol. Ved metyraponanalyser er koncentrationen af 11-deoxycortisol forhøjet. På grund af krydsreaktioner bliver der muligvis detekteret falsk forhøjede cortisolværdier (se afsnittet om analytisk specificitet). Patienter, som lider af 21-hydroxylase defekt, har forhøjet koncentration af 21-deoxycortisol, og det kan give forhøjede koncentrationer af cortisol. På grund af cortisoludskillelsens døgnrytme skal der tages højde for prøvetagningstidspunktet ved fortolkning af resultaterne. Alvorlig stress kan også forårsage forhøjede koncentrationer af cortisol. Til diagnostiske formål skal resultaterne altid sammenholdes med patientens anamnese, kliniske undersøgelser og andre resultater. Måleområde 12 0, nmol/l eller 0, µg/dl (defineret ved den nedre detektionsgrænse og masterkurvens maksimum). Værdier under detektionsgrænsen angives som < 0,5 nmol/l (< 0,018 µg/dl). Værdier over måleområdet angives som > 1750 nmol/l (> 63 µg/dl) (eller op til nmol/l eller 630 µg/dl for prøver, der er fortyndet 10 gange). Fortynding Serum- og plasmaprøver med cortisolkoncentrationer over måleområdet kan fortyndes med Elecsys Diluent Universal-reagens. Det anbefalede fortyndingsforhold er 1:10 (enten automatisk af MODULAR ANALYTICS E170 og Elecsys 1010/2010 eller manuelt). Den fortyndede prøves koncentration skal være > 50 nmol/l eller > 1,8 µg/dl. Efter manuel fortynding skal resultatet multipliceres med fortyndingsfaktoren. Ved fortynding af instrumentet tager softwarenpåmodularanalyticse170ogelecsys1010/2010automatisk højde for fortyndingen ved beregning af prøvekoncentrationen. Urinprøver med koncentrationer, der ligger ud over måleområdet, kan fortyndes før ekstraktion med urin med en lav analytkoncentration. Der bør tages højde for denne fortynding, når cortisolkoncentrationen i urinen beregnes. Referenceintervaller 12 i serum og plasma I studier af Elecsys -analysen blev følgende værdier bestemt, idet prøver fra raske personer (5-95. percentil) blev brugt: Om morgenen fra kl. 7-10: nmol/l (6,2-19,4 µg/dl) (n = 144) Om eftermiddagen kl : nmol/l (2,3-11,9 µg/dl) (n = 135) Fritcortisoliurin I studier af Elecsys -analysen blev følgende værdier bestemt, idet urinprøver fra 88 raske personer ( percentil) blev brugt: nmol/døgn ( µg/døgn) ispyt Følgende værdier blev bestemt på spytprøver fra 154 raske personer ( percentil) ved brug af Elecsys -analysen: Om morgenen fra kl. 8-10: 1,90-19,1 nmol/l (0,07-0,69 µg/dl) Om eftermiddagen kl : 2,05-11,9 nmol/l (0,07-0,43 µg/dl) Hvert laboratorium bør undersøge, om referenceintervallerne kan overføres til egne patientgrupper, og om nødvendigt fastsætte egne referenceintervaller. Testspecifikke performance data 12 Repræsentative performance data på instrumenterne angives nedenfor. Resultaterne kan variere fra laboratorium til laboratorium. Præcision Reproducerbarheden blev fastsat ved hjælp af Elecsys reagenser, poolede humane sera og kontroller ifølge en modificeret protokol (EP5-A) fra NCCLS (National Committee for Clinical Laboratory Standards): 6 gange dagligt i 10 dage (n = 60); intra-seriel præcision på MODULAR ANALYTICS E170 (n = 21). Følgende resultater blev opnået: Elecsys 2010 Intra-seriel præcision Total præcision Prøve Middel SD CV SD CV nmol/l µg/dl nmol/l µg/dl % nmol/l µg/dl % HS c ,53 2,76 0,10 1,3 3,29 0,12 1,6 HS ,3 7,40 0,23 1,3 8,36 0,30 1,5 HS ,0 14,0 0,52 1,1 19,9 0,72 1,6 PC U d ,2 5,08 0,18 1,4 5,67 0,21 1,6 PC U ,4 8,54 0,31 1,0 12,5 0,45 1,4 c) HS = humant serum d) PC U = PreciControl Universal Elecsys 1010 Intra-seriel præcision Total præcision Prøve Middel SD CV SD CV nmol/l µg/dl nmol/l µg/dl % nmol/l µg/dl % HS ,31 6,43 0,23 3,2 8,40 0,30 4,2 HS ,7 11,7 0,42 3,1 18,7 0,68 5,0 HS ,8 12,3 0,45 2,2 20,7 0,75 3,8 PC U ,0 9,97 0,36 2,6 21,5 0,78 5,6 PC U ,4 19,0 0,69 2,1 49,6 1,80 5, , V 10 Dansk 3 / 5 Elecsys 1010/2010 og MODULAR ANALYTICS E170

4 MODULAR ANALYTICS E170 Intra-seriel præcision Total præcision HS ,69 2,25 0,08 1, ,51 2,79 0,10 2,2 HS ,8 5,19 0,19 1, ,4 9,72 0,35 2,8 HS ,0 12,5 0,45 1, ,1 12,4 0,45 1,8 PC U ,1 4,59 0,17 1, ,8 6,76 0,25 1,7 PC U ,4 8,90 0,32 1, ,7 11,5 0,42 1,4 For at finde effekten af ekstraktion og rekonstitution på præcisionen kan følgende tabel sammenlignes med den relevante tabel ovenfor med serumprøver. Reproducerbarhed af cortisolbestemmelsen i urin blev bestemt ved hjælp af Elecsys reagenser, urinprøver og en urinkontrol ved at ekstrahere 25 gange i én serie (intra-seriel præcision n = 25) og ved at måle 10 enkelte urinekstrakter i enkeltbestemmelser i 10 serier (inter-seriel præcision n = 10): Elecsys Intra-seriel præcision inklusive Inter-seriel præcision inklusive 2010 ekstrakt. ekstrakt. Urin ,3 13,3 0,48 2, ,2 15,9 0,58 2,5 Urin ,2 21,2 0,77 2, ,4 29,4 1,07 3,2 Urin ,9 33,2 1,20 2, ,1 28,7 1,04 2,5 Urin ,0 39,1 1,42 2, ,9 30,0 1,09 1,8 Urinkontrol ,8 2,82 3,66 0,13 4,7 Reproducerbarheden af cortisol-bestemmelsen i spyt blev bestemt ved brug af Elecsys-reagenser, spytprøver og berigede spytprøver i én kørsel (intra-seriel præcision, n = 21) og i en enkeltbestemmelse i 10 kørsler (inter-seriel præcision, n = 10). Forskellige spytprøver blev anvendt til bestemmelse af den intra-serielle og den inter-serielle præcision: Elecsys 2010 Intra-seriel præcision Inter-seriel præcision Spyt 1 4,68 0,170 0,287 0,010 6,1 0,93 0,034 0,345 0,013 37,1 Spyt 2 11,5 0,417 0,309 0,011 2,7 7,72 0,280 0,557 0,020 7,2 Spyt 3 15,1 0,547 0,611 0,022 4,0 16,9 0,613 1,05 0,038 6,2 Spyt 4 15,9 0,576 0,245 0,009 1,5 34,6 1,25 1,69 0,061 4,9 Spyt 5 19,8 0,718 0,611 0,022 2,8 42,5 1,54 1,76 0,064 4,1 Analytisk sensitivitet (nedre detektionsgrænse) < 0,500 nmol/l (< 0,018 µg/dl) Detektionsgrænsen repræsenterer det lavest målbare niveau, som kan skelnes fra nul. Den beregnes som den værdi, der ligger to standardafvigelser over den laveste standard (masterkalibrator, standard SD, intra-seriel præcision, n = 21). Metodesammenligninger 12 Serum: En sammenligning af Elecsys -analysen (y) med Enzymun -reagenskittet (x) på 95 kliniske serumprøver gav følgende korrelationer (nmol/l): Lineær regression y=1,11x-25,3 y=1,08x-22,2 τ = 0,885 r = 0,985 SD (md68) = 20,9 Sy.x = 27,3 Koncentrationen i prøverne var mellem ca. 100 og 1240 nmol/l eller ca. 3,6 og 45 µg/l. Urin: En sammenligning af Elecsys -analysen (y) med en kommercielt tilgængelig cortisolanalyse (x) på 127 ekstraherede urinprøver gav følgende korrelationer (nmol/l): Slope: 1,32 (95% konfidensområde: 1,26-1,44) Intercept: 2,32 (95% konfidensområde: -7,82-7,18) SD (md68) = 19,9 Lineær regression: Slope: 1,23 (95% konfidensområde: 1,20-1,26) Intercept: 15,3 (95% konfidensområde: 9,89-20,70) r = 0,990 Sy.x = 27,9 Koncentrationen i prøverne var mellem 5,52 og 1402 nmol/l eller 0,20 og 50,82 µg/dl for den kommercielt tilgængelige cortisolanalyse. Spyt: En sammenligning af Elecsys -analysen (y) med en kommercielt tilgængelig cortisolanalyse udviklet specielt til bestemmelse af cortisol i spyt (x) på 326 spytprøver gav følgende korrelationer (nmol/l): Slope: 1,12 (95% konfidensområde: 1,03-1,22) Intercept: 0,52 (95% konfidensområde: -0,06-0,83) τ =0,531 SD (md68) = 1,74 Lineær regression: Slope: 0,90 (95% konfidensområde: 0,87-0,94) Intercept: 1,71 (95% konfidensområde: 1,47-1,96) r = 0,942 Sy.x = 1,96 Koncentrationen i prøverne var mellem 1,29 og 50,4 nmol/l eller 0,05 og 1,83 µg/dl for den kommercielt tilgængelige cortisolanalyse. Analytisk specificitet Følgende krydsreaktiviteter (%) blev fundet for det anvendte antistofderivat: a) substans tilsat pr. 10 µg/ml: corticosteron 5,8 cortisol-21-sulfat 0,04 cortison 0,30 11-deoxycorticosteron 0,69 11-deoxycortisol 4,1 dexamethason 0,08 17-α-hydroxyprogesteron 1,50 prednison 0,28 progesteron 0,35 b) substans tilsat pr. 1 µg/ml: 21-deoxycortisol 45,4 6-β-hydroxycortisol 158 c) substans tilsat pr. 0,1 µg/ml: allotetrahydrocortisol 165 prednisolon α-methylprednisolon 389 Funktionel sensitivitet < 2,0 nmol/l (< 0,07 µg/dl) Den funktionelle sensitivitet er den laveste analytkoncentration, som kan måles reproducerbart med en inter-seriel variationskoefficient på 20%. Den er bestemt med spytprøver med lav koncentration. Elecsys 1010/2010 og MODULAR ANALYTICS E170 4 / , V 10 Dansk

5 Referencer 1. Aron DC, Tyrell JB. Glucocorticoids & Adrenal Androgens. In: Greensoan FS, Baxter JD (eds), Basic & Clinical Endocrinology, 4th edition Appleton & Lange, USA 1994; Hasinski S. Assessment of adrenal glucocortoid function. Postgrad Med 1998;104(1): Rosalki SB. Biochemical Testing of adrenocortical function. Int J Clin Pract 1998;52(3) Newell-Price J, Trainer P, Besser M, Grossman A. The Diagnosis and Differential Diagnosis of Cushing s Syndrome and Pseudo-Cushing s States. Endocr Rev 1998;19(5): Ross RJM, Trainer PJ. Endocrine investigation: Cushing s syndrome. Clin Endocrol 1998;49: Miyachi Y. Pathophysiology and diagnosis of Cushing syndrome. Biomed Pharmacother 2000;54: van Aken, Romijn JA, Miltenburg JA, Lentjes GWM. Automated Measurement of Salivary. Clin Chem 2003;49(8): Raff H, Findling JW. A Physilogic Approach to Diagnosis of the Cushing Syndrome. Ann Intern Med 2003;138(12): Raff H, Homar PJ, Skoner DP. New Enzyme Immunoassay for Salivary. Clin Chem 2003;49(1): Gröschl M, Rauh M, Dörr HG. Circadian Rhythm of Salivary, 17α-Hydroxyprogesterone, and Progesterone in Healthy Children. Clin Chem 2003;49(10): Chiu SK, Collier CP, Clark AF, Wynn-Edwards KE. Salivary cortisol on Roche Elecsys immunoassay system: pilot biological variations studies. Clin Biochem 2003;36: Data forefindes hos Roche Diagnostics. 13. Aardal E, Holm AC. in Saliva - Reference Ranges and Relation to in Serum. Eur J Clin Chem Clin Biochem 1995;33: Siekmann L, Breuer H. Determination of in Human Plasma by Isotope Dilution Mass Spectrometry. J Clin Chem Clin Biochem 1982;20: Thienpont LM, De Brabandere VI, Stöckl D, De Leenheer AP. Candidate Reference Method for Determining Serum Based on Isotope Dilution-Gas Chromatography/Mass Spectrometry Using Heptafluorobutyrilatio as Derivatization Method. Anal Biochem 1996;234: Bablok W, et al. A General Regression Procedure for Method Transformation. J Clin Chem Clin Biochem 1988;26: OPLYSNING TIL BRUGEREN: LIMITED LICENSE Køb af dette produkt giver kun brugeren tilladelse til at anvende produktet til påvisning ved hjælp af ECL teknologi til human in vitro diagnostisk brug. Der gives ikke generelt patent eller tilladelse af nogen art bortset fra denne specifikke brugsret foranlediget af købet. Dette produkt må ikke anvendes af brugeren til forskning og/eller udvikling inden for life science, patient-selvanalysering, opdagelse/udvikling af lægemidler eller til analysering eller brug inden for veterinærmedicin, næringsmidler, vand eller miljø. For yderligere oplysninger henvises til brugermanualen til det pågældende analyseapparat, de aktuelle applikationsark, produktinformationen og pakningsindlæggene til alle nødvendige komponenter. Væsentlige tilføjelser eller ændringer er vist ved et skiftetegn i margenen. Ændringer til analyseparametre på reagensbarkoder, som allerede er indlæst, skal redigeres manuelt Roche Diagnostics Roche Diagnostics GmbH, D Mannheim , V 10 Dansk 5 / 5 Elecsys 1010/2010 og MODULAR ANALYTICS E170