Analyser/metoder til undersøgelse af immundefekter Læge J. Magnus Bernth Jensen Klinisk Immunologisk afdeling
Hvilke analyser til hvilke patienter???
Hvilke patienter bør undersøges? Infektioner er almindelige Sekundære immundefekter er (nok) hyppigere årsager til øget infektionstendens end primære immundefekter
Infektioner er normale fænomener Og nogle er fysiologisk disponerede Spædbørn insufficient antistof-produktion Første par leveår: dårlig anti-polysakkarid antistof-dannelse Seniet: aftagende evne til anti-polysakkarid antistof-dannelse
i Danmark
Amerikanske guidelines (AAAAI, ACAAI og JCAAI) Bonilla FA et al, Ann Allergy Asthma Immunol. 2005
Pragmatisk tilgang 1. anamnese og fund foreneligt med primær immundefekt OG 1. 2. fravær af anden (overbevisende) forklaring
Anamnese og fund foreneligt med primær immundefekt Øget infektionstendens og/eller abnormt forløb I forhold til mikroorganismen Autoimmunitet (specielt cytopenier) Cancer Div sammen med en eller flere af ovenstående Fx allergi, gastrointestinale gener mv
Andre årsager (til øget infektionstendens) Patoanatomi (fx KOL, fistler) Metabolisk lidelse (fx diabetes mellitus) Neurologisk lidelse (fx nedsat lunge ventilation) Iatrogene (fx prednisolon, kemoterapi, biologisk beh.) Malignitet (specielt hæmatologisk) Infektion (fx hiv) Underernæring Avitaminose (fx D-vitamin) Intoksikation (fx D-vitamin) Proteintabende tilstande Og mange flere
Når der vurderes at være udredningsbehov
Udrednings udfordringer, fx Immunsystemet er: Diffust Redundant Komplekst Inkomplet forstået Defekter er: Heterogene Enkeltvis sjældne (betydende) Mange forskellige!! Mangel på relevante screenings US http://www.cellsignal.com/reference/pathway/images/b_cell_antigen.jp g
Tilpasset anamnesen og fund!
Fokuseret udredning Anamnesen Debut tidspunkt Art infektioner Verifikationsgrad Hyppighed Forløb Andre abnormiteter Ledsagende manifestationer Sekundær immundefekt Fund Køn Defekts hyppighed Udredning
Analyse allokering i DK Indledende analyser Klinisk vurdering (af en der ved hvad det drejer sig om) Almindelige tilgængelige analyser Screening (fokuseret) Klinisk Immunologisk Afdeling Videre/konfirmatoriske undersøgelser Klinisk Immunologisk Afdeling Samarbejdspartnere (anden region/udlandet)
Indledende analyser Diverse Screening for sekundære årsager til immundefekt Hiv-test, Diabetes mellitus, nyre/leversygdom, malignitet, avitaminose mv Hæmatologisk kvantiteter inkl Leu+diff Immunglobuliner IgG, IgA, IgM og IgE (og IgD?) IgG subtyper? Antigen bindende antistoffer IgG mod specifikke antigener Titrering af regulære blodtype antistoffer (?) IgG respons mod vaccine-komponenter (MBL, koncentration af CD4+ T-celler)
Immunoassays til kvantifikation af serum proteiner fx MBL http://www.epitomics.com/products/product_info/1202/histone--6110-1.html
antigen bindende IgG A: B:
Signal vs koncentration Signal Protein koncentration
Titrering af regulære blodtype antistoffer Raske har antistoffer (IgM) mod antigener de ikke selv udtrykker Fordele: Simpelt assay, kan fortolkes selvom patient er i IgG substitutionsbehandling Ulemper: Svært at standardisere, reproducerbarhed dårlig, IgG mere relevant
Vaccinationsforsøg
Serum koncentration af specifikt antistof Uger Koncentration i før- og efterprøve sammenlignes Anbefales både protein- og polysakkaridbaserede vacciner (Bonilla FA et al, Ann Allergy Asthma Immunol. 2005 )
TD vs. TI-2 antistof respons Pollard AJ et al, Nat Rev Immunol. 2009 Mar;9(3):213 20
Screening (fokuseret) Klinisk Immunologisk Afdeling
Screening (fokuseret) Defekt??? Antistoffer Fagocyt Diverse Symptomer & fund T-celler/ kombineret Komplement
Ofte Defekt??? Antistoffer Komplement Fagocyt Symptomer & fund
KIA, AUH
Flow cytometri
Flow cytometri Anvendelse: Subtypning af lymfocytter Funktionelle assays Antistof koncentrationsbestemmelse Og meget andet
Flow cytometri, princip Typisk: Fluorokrom koblede antistoffer mod humane antigener tilsættes prøve Styre hvilket slags fluorokrom, der er koblet til hvilket antistof
Flow cytometri, princip
Flow cytometri, princip
Gating
DHR-123 test for CGD ved flow cytometri Rothe G et al. Naturwissenschaften. 1988 Jul;75(7):354-5 Vowells SJ et al. J Immunol Methods. 1995 Jan 13;178(1):89-97 ROS (PMA induceret)
DHR-123 test for CGD ved flow cytometri 2 CGD-pt, ustim. KTRL, ustim. CGD-pt +PMA KTRL +PMA
Hvad betyder et abnormt fund? - passer det med klinikken?
Abnorme fund. Normalt (ekstrem)???? Der kan måles på mange parametre Innocent bystander??? Dækket af redundans Årsagssammenhæng???? Forklarende Delvist forklarende (disease-modifier) Afledt effekt??? Med betydning???
Formodet afledte effekter, eks 14-årig, kendt C2 defekt Udredes: Lav IgG2-4 Lav IgA Lymfocytproliferation Negativ for antigener Positiv for mitogener Normal B-celle koncentration
Formodet afledte effekter, eks C2 deficient patient: KTRL:
Videre/konfirmatoriske undersøgelser Mange! Funktionelle assays Mutations undersøgelse af DNA Kvantificering af specifik mrna Protein-ekspression/fosforylering