NEW LAV BLOT II 18 bestemmelser 72252

Transkript

1 NEW LAV BLOT II 18 bestemmelser KONTROLKIT TIL PÅVISNING AF ANTI-HIV2-ANTISTOFFER I SERUM/PLASMA VED IMMUNOBLOTTING IVD Kvalitetskontrol af producenten Alle producerede og kommercialiserede reagenser er underlagt et komplet kvalitetssystem lige fra modtagelsen af råmaterialet til den endelige kommercialisering af produktet. Hvert parti sendes til kvalitetskontrol og frigives kun på markedet, når det overholder kravene for godkendelse. Dokumentation vedrørende produktion og kontrol af hvert parti opbevares inden for virksomheden. 61

2 INDHOLD 1 - FORMÅL 2 - KLINISK VÆRDI 3 - ANALYSEPRINCIP 4 - INDHOLDET AF SÆTTET 5 - FORHOLDSREGLER 6 - HELBREDS- OG SIKKERHEDSMÆSSIGE FORHOLDSREGLER 7 - NØDVENDIGT, MEN IKKE LEVERET UDSTYR 8 - REKONSTITUERING OG OPBEVARING AF REAGENSER 9 - INDSAMLING OG HÅNDTERING AF PRØVER 10 - TESTPROCEDURE 11 - VALIDERING, AFLÆSNING OG FORTOLKNING AF RESULTATER 12 - YDEEVNE 13 - TESTENS BEGRÆNSNINGER 14 - REFERENCER 62

3 1 - FORMÅL NEW LAV-BLOT II-sættet er beregnet til påvisning af humane anti-hiv2-antistoffer i serum eller plasma ved immunblotting for at validere et positivt svar på en anti-hiv2-prøve og få en angivelse af den relaterede antigenetiske specificitet inden for rammerne af AIDS-diagnosticeringen. 2 - KLINISK VÆRDI AIDS (Acquired Immuno Deficiency Syndrome) blev beskrevet og anerkendt som en velkarakteriseret sygdom i Fra lymfocytterne fra patienter med AIDS eller forstadierne til AIDS blev der blev isoleret tre retrovira (LAV, HTLV III, ARV), fra lentivirusgruppen, der ikke kan adskilles med traditionelle serologiske test. Beslutningen om at samle disse tre vira under samme betegnelse (HIV) blev taget i I 1986 blev en ny retrovirus (LAV II/HIV2) isoleret fra vestafrikanske patienter, der led af AIDS. Denne virus er tydeligt relateret til HIV1 ved dens morfologi, tropisme og cytopatogene effekt på T4-lymfocytterne. Genetiske analyser viste, at denne virus var forskellig fra HIV1, især kappen, og var affinitiv for STLV III. På den anden side viser serologiske undersøgelser, at der i de fleste tilfælde er en samtidig genkendelse af kerneproteinerne for HIV1- og HIV2-virus af patientens antistoffer. Men nogle sera identificeres ikke som positive af HIV1- diagnosticeringssættet. Screening er baseret på påvisningen af antistoffer i serum- eller plasmaprøver ved hjælp af immunenzymatisk teknik. Kvaliteten af de antigener, der anvendes i disse test, gør ikke muligt at udelukke nogle ikke-specifikke svar. I lyset af diagnosens store betydning er det nødvendigt at be- eller afkræfte svaret på screeningtestene ved hjælp af en anden teknik. WHO-eksperter anbefaler brugen af immunblotting (Western Blot) i forbindelse med HIV1-virus. Denne teknik giver mulighed for karakteriseringen af antistoffer mod hvert enkelt virusprotein, og dermed validering af seropositivitet. I forbindelse med AIDS-diagnosticering bliver det nødvendigt for karakteriseringen af infektion med HIV1- eller HIV2-virus. 3 - ANALYSEPRINCIP Testen er baseret på indirekte ELISA-teknik på en nitrocellulosestrimmel med alle HIV2-proteinkomponenterne og en intern anti-igg-kontrol. Den streg, der svarer til den interne kontrol, er placeret for enden af strimlen uden angivelse af nummer, før p16-reaktionen, og den giver mulighed for at validere tilsætningen af prøven og reagenserne samt kontrollere en korrekt procedureudvikling. Inaktiverede HIV2-proteiner separeres ud fra deres molekylevægt med polyacrylamid-gel-elektroforese i e dissocierende og reducerende miljø og elektroblottes derefter til en nitrocellulosemembran. Proceduren omfatter følgende trin : 1. Rehydrering af teststrimmel. 2. Inkubering af de prøver, der skal valideres, eller af kontrolseraene. Hvis der er anti-hiv2-antistoffer til stede, binder de sig til de identificerede virusproteiner, der sidder på teststrimlen. 3. Efter vask inkuberes med alkalisk fosfatase-mærkede anti-humane IgG-antistoffer. Konjugatet binder sig til de anti-hiv2-antistoffer, der sidder på den faste fase. 4. Efter vask og fjernelse af det overskydende konjugat kan den enzymatiske aktivitet for de forbindelser, der er bundet til nitrocellulose, aflæses ved hjælp af farveudviklingsopløsningen. 5. Forekomsten af anti-hiv2-antistoffer i prøven kan påvises ved forekomsten af specifikt farvede streger. 63

4 4 - INDHOLDET AF SÆTTET Alle reagenserne er udelukkende beregnet til in vitro-diagnosticering. Hvert sæt indeholder tilstrækkeligt med reagenser til 18 bestemmelser. Bestemmelserne kan udføres ved flere uafhængige kørsler. ETIKET REAGENSSAMMENSÆTNING PRÆSENTATION R1 HIV2-nitrocellulosestrimmel 18 strimler i 3 bakker Aktiveres ved overførelse af HIV 2-virusproteiner og (6 celler i hver)) intern anti-igg-kontrol Teststrimlerne placeres i engangsbakker R2 Bufferopløsning/fortynder (X 5) koncentreret (X 5) 1 flaske 5x koncentreret. Indeholder 0,5% kloroform 100 ml R3 Negativ kontrol 1 flaske Humant serum negativt for HBsAg, anti-hiv1- og anti- 0.2 ml HIV2- samt anti-hcv-antistoffer Konserveringsmiddel : < 0,1 % natriumazid R4 Positiv kontrol for anti-hiv2 1 flaske Humant serum positivt for anti-hiv2-antistoffer, 0.2 ml negativt for anti-hcv-antistoffer og HBsAg, varmeinaktiveret Konserveringsmiddel : < 0,1 % natriumazid R5 Konjugat 1 flaske Alkalisk fosfatase-mærkede anti-humane IgG- antistoffer fra geder 40 ml Konserveringsmiddel : < 0,1 % natriumazid R6 Farveudviklingsopløsning (BCIP/NBT) 1 flaske 5 BCIP (Bromo-4 Chloro-3 Indolyl Phosphate) og NBT 40 ml (NitroBlue Tetrazolium) som udviklingsbuffer 5 - FORHOLDSREGLER Resultaternes pålidelighed afhænger af en korrekt overholdelse af følgende regler for god laboratoriepraksis: Undgå at anvende forældede reagenser. Undgå at blande reagenser fra forskellige partier inden for samme testkørsel. Bemærk! Der kan anvendes andre partier bufferopløsninger (etiketidentifikation : blå R2) og farveudviklingsopløsninger (R6) med den begrænsning, at det selv samme parti anvendes i den pågældende testkørsel. Vent 30 minutter, før reagenserne tages i brug, så de kan stabilisere sig ved stuetemperatur (18-30 C). Rekonstituer reagenserne forsigtigt for at undgå kontaminering. Benyt engangsmateriale, eller hvis dette ikke er muligt, udstyr af glas, som er rengjort grundigt og skyllet med destilleret vand. Brug en ny pipettespids til hver prøve. Brug aldrig den samme beholder til at fordele konjugat og farveudviklingsopløsning. Kontroller, at pipetterne er præcise og nøjagtige, og at de instrumenter, der anvendes, fungerer korrekt. Analyseproceduren må ikke ændres. Kontrolseraene bør testes sideløbende med patientprøverne for hver testkørsel. Strimlerne må ikke tørre i mere end 10 minutter under testen. Hvis der er opslæmmede partikler i udviklingsopløsningen, skal disse have lov til at bundfældes i flasken, før der pipetteres. (Disse partikler påvirker ikke testen). 6 - HELBREDS- OG SIKKERHEDSMÆSSIGE FORHOLDSREGLER Alle reagenserne i sættet er beregnet til "in vitro"-diagnosticering. Strimlerne må aldrig håndteres med bare hænder: Brug en plastikpincet. Brug engangshandsker, når du håndterer reagenser. Undgå at pipettere med munden. Humant kildemateriale, der er brugt i forberedelsen af den negative kontrol (R3), er testet og fundet ikkereaktivt for hepatitis B-overfladeantigenet (HBsAg) og anti-hiv1-, anti-hiv2- samt anti-hcv-antistoffer. Humant kildemateriale, der er brugt i forberedelsen af den positive kontrol (R4), er testet og fundet ikke- 64

5 reaktivt for hepatitis B-overfladeantigenet (HBsAg) og anti-hcv. Det er blevet varmeinaktiveret. Ingen kendt testmetode kan garantere fuld sikkerhed mod tilstedeværelse af smittefarligt kildemateriale. Derfor bør alle materialer af human oprindelse betragtes som potentiel smittekilde og håndteres efter samme forholdsregler som patientprøver. Alt udstyr, der er i direkte kontakt med prøver og reagenser af humant kildemateriale samt bufferopløsninger, skal betragtes som kontaminerede produkter og håndteres derefter. Undgå at spilde prøver eller opløsninger, der indeholder prøvemateriale. Kontaminerede overflader skal rengøres med natriumhypoclorit i en opløsning på 10%. Hvis den kontaminerende væske er en syre, skal de kontaminerede overflader først neutraliseres med natriumbikarbonat, derefter renses med natriumhypoclorit og tørres op med sugende papir. Det materiale, der anvendes til rengøringen, skal kasseres og placeres i en beholder til biologisk farligt affald. Prøver, reagenser af humant kildemateriale samt kontaminerede materialer og produkter skal kasseres efter desinficering: - enten ved nedsænkning i natriumhypoclorit med en slutkoncentration på 5% natriumhypochlorit (1 del natriumhypoclorit til 10 dele kontamineret væske eller vand) i 30 minutter - eller ved autoklavering ved 121 C i mindst 2 timer. - Autoklavering er den bedste metode til at inaktivere HIV og HBV. ADVARSEL! UNDGÅ AT PLACERE OPLØSNINGER, DER INDEHOLDER NATRIUMHYPOCHLORIT, I AUTOKLAVEN. Husk at neutralisere og/eller autoklavere affaldsopløsninger fra rengøringsprocessen eller enhver anden væske, der indeholder biologisk prøvemateriale, før du hælder dem i afløbet. Kemikalier skal håndteres og kasseres ifølge god laboratoriepraksis. Nogle reagenser indeholder natriumazid som konserveringsmiddel. Natriumazid kan danne kobberog blyazider i laboratoriets rørledninger. Disse azider er eksplosive. Undgå dannelse af azider ved at skylle rørene med store mængder vand, hvis opløsninger med azidindhold hældes i afløbet efter deaktivering. 7 - NØDVENDIGT, MEN IKKE LEVERET UDSTYR Destilleret eller demineraliseret vand. 100 ml, 250 ml og 500 ml graduerede cylinderglas. 2 ml graduerede pipetter. Automatiske eller halvautomatiske, justerbare eller forudindstillede pipetter til måling eller fordeling af 20 µl. Engangshandsker. Vandstrålepumpe med sikkerhedsflaske. Natriumhypochlorit (blegemiddel). Sugepapir. Pincet. 1-, 2- eller 3-dimensionelt rystebord (omrystning for at sikre et homogent miljø og fuldstændig nedsænkning af strimlerne under rysteprocedurerne). Beskyttet beholder til farligt biologisk affald. Beskyttelsesbriller. 8 - REKONSTITUERING OG OPBEVARING AF REAGENSER Hvert sæt indeholder tilstrækkeligt med reagenser til 18 bestemmelser. Bestemmelserne kan udføres ved flere uafhængige kørsler. Brugsklare reagenser R1 : HIV2-nitrocellulosestrimler R3 : Negativ kontrol R4 : Positiv kontrol for anti-hiv2 R5 : Konjugat R6 : Farveudviklingsopløsning (BCIP/NBT). Reagenser som skal rekonstitueres R2 : Bufferopløsning/fortynder (5X) 65

6 FORBEREDELSE : Ryst flasken før udtagning. Fortynd bufferopløsningen/fortynderen i forholdet 1:5 med destilleret vand (for en hele bakke f.eks.: 30 ml bufferopløsninger ml destilleret vand). Homogeniser OPBEVARING : Ved opbevaring ved 2-8 C uden kontaminering er alle reagenser holdbare indtil den udløbsdato der er angivet på etiketten. Den fortyndede bufferopløsning/fortynder (R2) er holdbar i 1 måned ved opbevaring ved 2-8 C. 9 - INDSAMLING OG HÅNDTERING AF PRØVER TTag en blodprøve i overensstemmelse med gældende praksis. Testen skal udføres på ufortyndet serum- eller plasmaprøver (der er indsamlet med antikoagulerende stoffer som f.eks. EDTA, heparin eller citrat). Adskil serummet eller plasmaet fra de koagulerede eller røde celler, så snart det er muligt, for at undgå hæmolyse. Udtalt hæmolyse kan påvirke testresultatet. Prøver med aggregater skal renses ved centrifugering forud for testen. Opslæmmede fibrinpartikler eller -aggregater kan give fejlagtigt positive resultater. Prøverne kan opbevares ved 2-8 C, hvis testen udføres inden for 7 dage, eller dybfryses ved -20 C. Plasmaprøver skal tøs op ved få minutters opvarmning ved 40 C (for at undgå fibrinudfældning). Prøver, der har været nedfrosset og optøet mere end tre gange, bør ikke anvendes. Hvis prøverne skal sendes, skal de pakkes ifølge de gældende regulativer angående transport af ætiologiske agenser. UNDGÅ AT ANVENDE KONTAMINEREDE, HYPERLIPÆMISKE ELLER HYPERHÆMOLYSEREDE SERUM- ELLER PLASMAPRØVER. BEMÆRK! Prøver, der indeholder op til 90g/l albumin, 100 mg/l bilirubin, lipæmiske prøver, der indeholder mængder op til det, der svarer til 36 g/l triolein, og hæmolyserede prøver, der indeholder op til 10 g/l hæmoglobin, påvirker ikke testresultaterne TESTPROCEDURE 1. Vent 30 minutter, før reagenserne tages i brug, så de kan stabilisere sig ved stuetemperatur (18-30 C). Fjern det gennemsigtige låget af den bakke, der skal anvendes. Du skal sikre dig, at den side af strimmelen med referencemærket og -nummeret kan ses, så virusproteinerne på denne side dækkes af de forskellige reaktionsmedier under hele testen. Strimler skal håndteres forsigtigt med en plastikpincet. Strimlerne må ikke tørre i mere end 10 minutter under testen. De leverede kontroller bør testes sideløbende med patientprøverne for hver testkørsel. Den positive kontrol er nødvendig for at testen kan valideres, og stregerne kan tolkes korrekt. 2. Fordel 2 ml rekonstitueret bufferopløsning/fortynder til hver celle. Inkuberes i 5 ± 1 minutter ved stuetemperatur (18-30 C) under omrystning. 3. Fordel 20 µl af hver prøve- eller kontrolserum til den tilsvarende celle. Inkuberes i 2 timer ± 5 minutter ved stuetemperatur (18-30 C) under omrystning. 4. Tøm hver celle fuldstændig for indhold ved hjælp af en vakuumpumpe med en vandlås, der indeholder et desinfektionsmiddel (25% natriumhypoclorit). Du skal sikre dig, at strimlen ikke flytter sig under opsugningen. Brug den opsugningsbrønd, der er beregnet til dette formål. Skyl den opsugningsspids, der har været i kontakt med prøverne mellem hver opsugning, under hanen for at undgå krydskontaminering af prøverne. Vask hver strimmel med 2 ml rekonstitueret bufferopløsning/fortynder, og fjern det straks ved opsugning under overholdelse af samme forholdsregler. Vask hver strimmel to gange med 5 minutters kontakt, under omrystning, med 2 ml af den rekonstituerede bufferopløsning/fortynder (dvs. i alt 3 vask). Fjern den opløsning, der blev brugt til den forrige vask. 5. Fordel 2 ml konjugat til hver celle. Konjugatopløsningen skal stabiliseres ved stuetemperatur før anvendelse. Inkuberes i 1 time ± 5 minutter ved stuetemperatur (18-30 C) under omrystning. 6. Vask : Følg anvisningen under trin Fordel 2 ml farveudviklingsopløsning til hver celle. Hvis der er opslæmmede partikler i udviklingsopløsningen, skal disse have lov til at bundfældes i flasken, før der pipetteres. (Disse partikler påvirker ikke testen). 66

7 Inkuber under omrystning, og hold øje med farverne. Alle de streger, der svarer til virusproteinerne, skal observeres med det positive kontrolserum. (Udviklingstid: mindst 5 minutter). 8. Stop reaktionen ved at fjerne udviklingsopløsningen og vask strimlerne 3 gange med destilleret vand. 9. Tør strimlerne mellem 2 ark sugepapir ved stuetemperatur (18-30 C). Sorter strimlerne, og placer dem korrekt ud fra referencemærket. Valider, og fortolk derefter. ADVARSEL! Sæt ikke tape på den side af strimmelen med virusproteinerne VALIDERING, AFLÆSNING OG FORTOLKNING AF RESULTATER Validering Stregen for intern anti-igg-kontrol bør fremstå med tydelig farve. Dermed kan tilsætningen af prøver og reagenser samt en korrekt testprocedure valideres. Fraværet af eller en meget svag farvning af stregen for intern anti-igc-kontrol angiver enten at prøven eller reagenserne ikke er tilsat, eller at testproceduren ikke er overholdt. Positiv kontrol: forekomst af de streger, der svarer til virusproteinerne og kontrollen. Negativ kontrol: ingen virusproteiner bør være tilstede, kontrollen er der. Aflæsning Forekomsten af antistoffer, mod HIV2-proteinkomponenter i de undersøgte prøver, ses som en farvning af streger i specifikke farver (blå-lilla). Deres placering svarer til molekylemassen for de virusproteiner, der er angivet i nedenstående tabel. Brug den positive kontrol (se figur side 71) til at lokalisere og identificere de viste antistoffer, og kontroller, at stregen for den interne kontrol vises på alle teststrimlerne. Hver specifikke og læselige strimmel skal fortolkes. NAVN GENOMEN- KARAKTER WESTERN BLOT- ASPEKT GP 140 ENV Forstadium til GP 105 og GP 36 ± uskarp streg GP 105/GP 125 ENV Kappeglykoprotein Uskarp streg P68 POL Revers transkripase Tydelig streg P56 GAG Forstadium til kerneproteiner Tydelig streg GP36 ENV Transmembran glycoprotein Uskarp streg P34 POL Endonuklease Tydelig streg* P26 GAG Kerneprotein Tydelig streg P16 GAG Kerneprotein Tydelig streg *P34-stregen er en veldefineret streg med samme placering som den uskarpe GP 36-streg. Fortolkning FORTOLKNING Positiv Ubestemmelig Negativ PROFIL ENV + GAG + POL ENV + GAG ENV + POL GAG +POL GAG POL ENV Ikke-klassificerede streger Ingen streg BEMÆRK Positive eller ubestemmelige profiler kan være et resultat af kontaminering med et positivt serum. Det er også muligt at anvende andre fortolkningskriterier. Dette anbefales i Tyskland af den tyske sammenslutning til bekæmpelse af virussygdomme (DVV) [Positiv : Tilstedeværelse af mindst et Env-protein og et Gag- eller Polprotein Ubestemmelig : Svarer til alle de profiler, der ikke lever op til ovenstående kriterier Negativ : Når der ikke vises nogen streger. Ud fra dette betragtes gp105/125/140 som værende det samme protein]. 67

8 12 - YDEEVNE Specificiteten for New Lav Blot II-testen (NLBII) blev undersøgt med prøver fra bloddonorer (196) og hospitalspatienter (201). Specificiteten blev også undersøgt med patientprøver, der var ikke-reaktive for HIVantistoffer (EIA-test), men med andre lidelser som rubella, toxoplasmose, pneumoni, hepatitis A, B og C, prøver fra gravide kvinder, prøver der var reaktive for rheumatoide faktorer, og 39 prøver der er falsk positive med en EIA-test. Dermed blev 119 vanskelige prøver testet. Alle resultater er fortolket ved hjælp af de kriterier, som er angivet i fortolkningstabellen i pakkens indlægsseddel. Generelt blev ingen af de 516 prøve fundet positive med NLBII-analysen. Af 204 prøver, der er reaktive for HIV-antistoffer med EIA og er karakteriseret som HIV2 med HIV1/2- differentieringstest (EIA, Immunoblot), blev 202 valideret som NLB II-positive, og 2 har udvist en ubestemmelig profil. 41 prøver, der var reaktive for HIV1- og HIV2-antistoffer, er valideret som positive med NLB II. Med et panel bestående af 131 prøver anti-hiv1-positive var 110 prøver ubestemmelige, og 21 var positive med New Lav Blot II. Reproducerbarhedstest, i samme analyseserie og mellem analyseserierne, viste ikke forskel på resultaterne TESTENS BEGRÆNSNINGER Proceduren skal følges for at sikre optimale resultater. Den positive kontrol bør testes sideløbende med patientprøverne for hver testkørsel. Den sideløbende kontrol er nødvendig for at testen kan valideres, og stregerne kan tolkes korrekt. Der kan forekomme en positiv screeningtest i forbindelse med en negativ valideringstest under første fase af infektionen. Et negativt resultat angiver derfor, at den undersøgte prøve ikke indeholder anti-hiv-antistoffer, der kan påvises med New Lav Blot II. Et sådant resultat udelukker imidlertid ikke muligheden af en HIV1/HIV2-infektion. Det anbefales at indsamle en ny prøve på et senere tidspunkt. På grund af variationen af HIV1 og HIV2 kan muligheden for falskt negative reaktioner ikke udelukkes. Ingen kendt testmetode kan give fuld sikkerhed for, at HIV-virusen ikke forefindes. Anvendelsen af mindre restriktive fortolkningskriterier kan føre til en anden klassifikation af prøverne. Nogle af de prøver, der klassificeres som ubestemmelige ifølge den fortolkning, der fremgår af pakkens indlægsseddel, bør reelt angives som reaktive ifølge disse kriterier. En "ubestemmelig" profil bør ikke udelukke én af følgende situationer: serokonvertering, HIV1 eller krydsreaktion forårsaget af andre retrovira. 68

9 14 - REFERENCER 1. CLAVEL F., BRUN-VEZINET F., GUETARD D. et al : LAV II : un second retrovirus associé au SIDA en Afrique de l Ouest C.R. Acad. Sc. Paris, 1986, 13, CLAVEL F., GUETARD D., BRUN-VEZINET F. et al : Isolation of a new human retrovirus from West African patients with AIDS. Science, 1986, 233, CLAVEL F., GUYADER M., GUETARD D. et al : Molecular cloning and polymorphism of the human immune deficiency virus type 2. Nature, 1986, 324, NEWMARK P.: AIDS in an African context. Nature, 1986, 324, BARRE-SINOUSSI F., CHERMANN J.C., REY F. et al : Isolation of a T-lymphotropic retrovirus from a patient at risk for acquired immunodeficiency syndrome (AIDS).Science, 1983, 220, POPOVIC M., SARNGADHARAN MG., READ E., GALLO RC. : Detection, isolation and continuous production of cytopathic retroviruses (HTLV II) from patients with AIDS and pre-aids, Science, 1984, 224, LEVY JA, HOFFMAN AD, KRAMER SM et al : Isolation of lymphocytopathic retroviruses from San Francisco patients with AIDS. Science, 1984, 225, KANKI P.J., ALROY J., ESSEX M. et al : Isolation of T-lymphotropic retrovirus related to HTLV III-LAV from wild caught African green monkeys. Science, 1985, 228, KANKI P.J., BARIN F., M BOUP S. et al : New human T-lymphotropic retrovirus related to Simian T-lymphotropic virus type III (STLV III Agm). Science, 1986, 232, BRUN-VEZINET F., REY M.A., KATLAMA et al.: HIV/LAV2 in AIDS and ARC patients : Clinical and virological studies. Lancet 11. JREY F., SALAUN D., LESBORDES J.L. et al : Evidence for HIV1 and HIV2 double infection in Central African Republic. Lancet, II, 1986, MOLBAK K., LAURITZEN E., FERNANDES D. et al.: Antibodies to HTLV IV associated with chronic, fatal illness ressembling slim disease. Lancet, II, 1986, BIBERFELD G., BOTTIGER B., BREDBERG-RADEN U. et al : Findings in fowe HTLV-IV seropositive women from West Africa. Lancet, II, 1986, ESTEBAN J.I., CHANG-CHIN T., KAY J.W.D. et al : Importance of Western Blot analysis in predicting infectivity of anti HTLV III/LAV positive blood. Lancet, II, 1985, LAURITZEN E., LINDHARDT BO.: Antibodies against human immunodeficiency (HIV) detected by immunoblotting. In Bjerrum OJ. Heegaard NHH. eds Handbock of immunoblotting of proteins-crc Press 16. TOWBIN H., STAEHLIN T., GORDON J.: Electrophoretic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets : procedure and some applications. Proc. Nat. Acad. Sci., USA, 1979, 76, SOUTHERN E.M. et al.: Detection of specific sequences among DNS fragments separated gel electrophoresis. J. Mol. Biol. 1975, 98, ARNHEIM N., SOUTHERN E.M. et al : Heterogeneity of the ribosonal genes in mice and men. Cell 1977, 11, KHYSE-ANDERSEN J. : Electroblotting of multiple gels : a simple apparatus without buffer-tank for rapid transfer of proteins. J. Biochem. Biophys. Meth., 1984, 10, JOHNSON D.A., GAUTSCH J.W., SPORTMAN J.R., ELDER J.H.T. : Improved technic utilizing non fat dry milk for analysis of proteins and nucleic acids transfer to nitrocellulose. Gene. Annals Techn., 1984, 1, 3-8

10 CAUTION : precise bands may differ in reality. Don t use this picture for final interpretation. Use the positive control strip to identify the patient antibodies and check that the internal control band is present on each strip. Positive Control R4 ATTENTION : les bandes obtenues en réalité peuvent être différentes de celles figurant sur cette image. Ne pas utiliser cette image pour l interprétation finale. L interprétation finale doit être effectuée avec l aide de la bandelette du contrôle positif pour identifier les anticorps du patient. La bande du contrôle interne doit être présente sur chaque bandelette. ATENCIÓN : las bandas obtenidas realmente pueden ser diferentes de las que figuran en este imagen. No utilice esta imagen para la interpretación final. Utilice las tiras de control positivo para identificar los anticuerpos del paciente. La banda de control interno debe estar presente en cada tira. ACHTUNG : Die Banden können sich in Wirklichkeit von denjenigen auf dem oben stehenden Bild unterscheiden: Das Bild sollte nicht für die Schlussauswertung verwendet werden. Die Schlussauswertung muss anhand des positiven Kontrollstreifens erfolgen um die Antikörper des Patienten identifizieren zu können. Die interne Kontrollbande muss auf jedem Streifen sichtbar sein. ATTENZIONE : in realtà le strisce ottenute possono essere diverse da quelle rappresentate sulla figura. Non utilizzare questa figura per l interpetazione finale. L interpetazione finale deve effettuarsi tramite la striscetta di controllo positivo per identificare gli anticorpi del paziente. La striscia di controllo negativo deve essere presente su ogni striscetta. ATENÇÃO : as bandas reais podem ser diferentes das ilustradas. Não se baseie nesta imagem para uma interpretação final. Utilize a tira do controlo positivo para identificar os anticorpos do doente e verificar se a banda do controlo interno está presente em cada tira. OBSERVERA : de band som erhålls i verkligheten kan skilja sig från dem som visas på bilden ovan. Använd inte denna bild för den slutliga tolkningen. Använd den positiva kontrollremsan för att identifiera patientens antikroppar och kontrollera att det inre kontrollbandet finns med på varje remsa. VIGTIGT : De bånd man opnår i virkeligheden kan være anderledes end dem på billedet ovenfor. Brug ikke dette billede til endelig tolkning. Brug den positive kontrolstrimmel til at identificere patientens antistoffer og kontroller, at det interne kontrolbånd er tilstede på hver strimmel. P68 P56 P34 P26 P16 GP140 GP105 GP36 Internal Control 69

11 CE marking (European directive 98/79/CE on in vitro diagnostic medical devices) 0 Marquage CE (Directive européenne 98/79/CE relative aux dispositifs médicaux de diagnostic in vitro) Marcodo CE (Directiva europea 98/79/CE sobre productos sanitarios para diagnóstico in vitro) EG Markierung (Europäische Richtlinie 98/79/EG über In vitro-diagnostika) Marchiatura CE (Direttiva europea 98/79/CE relativa ai dispositivi medico-diagnostici in vitro) Marcação CE (Directiva europeia 98/79/CE relativa aos dispositivos médicos de diagnóstico in vitro) CE-märkning (Europa direktiv 98/79/EG om medicintekniska produkter lör in vitro-diagnostik) CE-mærkningen (Europa direktiv 98/79/EF om medicinsk udstyr til in vitro-diagnostik) IVD For in vitro diagnostic use Pour diagnostic in vitro Para diagnóstico in vitro In vitro-diagnostikum Per uso diagnostico in vitro Para uso em diagnóstico in vitro In vitro diagnostik In vitro diagnose Manufacturer Fabricant Fabricante Hersteller Produttore Fabricante Tillverkad av Fremstillet af REF Catalogue number Référence catalogue Número de catálogo Bestellnummer Numero di catalogo Número de catálogo Katalognummer Katalognummer EC REP Authorised Representative Représentant agréé Representante autorizado Bevollmächtigter Distributore autorizzato Representante Autorizado Auktoriserad representant Autoriseret repræsentant LOT Batch code Code du lot Código de lote Chargen-Bezeichnung Codice del lotto C6digo do Iote Batch nr. Batchkoden Storage temperature limitation Limites de températures de stockage Temperatura limite Lagerungstemperatur Limiti di temperatura di conservazione Limites de temperatura de armazenamento Temperaturbegränsning Temperaturbegrænsning i Expiry date YYYY/MM/DD Date de péremption AAAA/MM/JJ Estable hasta AAAA/MM/DD Vervvendbar bis JJJJ/MM/TT Da utilizzare prima del AAAA/MM/GG Data de expiração AAAA/MM/DD Utgångsdatum År/Månad/Dag Anvendes før ÅÅÅÅ/MM/DD Consult Instruction for use Consulter Ie mode d'emploi Consulte Ia instrucción para el uso Siehe Gebruchsanweisung Consultare Ie istruzioni per uso Consulte o folheto Informativo Se instruktionsanvisning vid användning Se instruktion før brug 72 BIO-RAD 3, Bd Raymond Poincaré MARNES LA COQUETTE - France Tél. : 33 (0) /2007 Fax.: 33 (0) code :