Platelia Rubella IgM 1 plade KVALITATIV PÅVISNING AF IgM-ANTISTOFFER MOD RUBELLAVIRUS I HUMANT SERUM ELLER PLASMA VED ENZYMIMMUNANALYSE

Transkript

1 Platelia Rubella IgM 1 plade KVALITATIV PÅVISNING AF IgM-ANTISTOFFER MOD RUBELLAVIRUS I HUMANT SERUM ELLER PLASMA VED ENZYMIMMUNANALYSE /11 1. FORMÅL Platelia Rubella IgM er en immunanalyse, der anvender specifik antistofbinding til kvalitativ påvisning af IgM-antistoffer mod rubellavirus i humant serum eller plasma. 2. KLINISK VÆRDI Rubella er en virusinfektion, der forekommer i hele verden. Rubellainfektion er normalt en mild sygdom hos børn og voksne. Kliniske manifestationer omfatter lav feber, hovedpine, ondt i halsen og udbredt hududslæt. Rubellainfektion under graviditet er imidlertid mere alvorlig, med flere veldokumenterede kongenitale komplikationer, herunder døvhed, grå stær, psykisk udviklingshæmning og fosterdød. En udbredt vaccination af førskolebørn har reduceret forekomsten af rubellaepidemier kraftigt, men der er stadig et behov for en nøjagtig overvågning af immunstatus, især for kvinder i den fødedygtige alder. Påvisning af rubella IgG-antistof hos kvinder før en befrugtning giver sikkerhed for, at fosteret beskyttes mod en eventuel rubellavirusinfektion under graviditeten. Vaccinationens effektivitet kan også bestemmes ved konstatering af rubella IgG-antistof i serum efter en vaccination. Efter isolationen af rubellavirus i 1962 har konstateringen af specifikke rubella-antistoffer været genstand for stor interesse på grund af virusens teratogenetiske risici. Der er tidligere udviklet flere testmetoder, bl.a. serumneutralisation, komplementbinding og immunfluorescens. Disse analyser er enten svære at foretage med almindeligt laboratorieudstyr eller giver ustabile eller uregelmæssige resultater. Med hæmagglutinationshæmningsteknikker er det muligt at diagnosticere både den akutte infektionsstatus og patientens immunstatus. Engvall og Perlmann beskrev de første enzym-immunanalyseprocedurer i Udviklingen af enzym-immunanalyseproceduren har bidraget til en forbedret specificitet og sensitivitet med hensyn til konstateringen af en lang række antigener og antistoffer. Fortolkninger af flere på hinanden følgende test, som påviser forekomsten af IgM og viser en fremkomst eller en markant stigning i IgG-antistof-titeren (fordobling af titeren) i to serumprøver, der er taget med mindst tre ugers mellemrum, skal betragtes som bevis for eksponering for rubellavirus, selv om der ikke findes kliniske, patognomiske tegn på denne infektion. 3. PRINCIP Platelia Rubella IgM er en kvalitativ test til påvisning af IgM-antistoffer mod rubellavirus i humant serum eller plasma via enzymimmunanalyse med binding af IgM på den faste fase. Den faste fase (brønde i mikropladen) er belagt med anti-humane µ-kæde-antistoffer. En blanding af rubellaantigen og monoklonalt anti-rubella-antistof mærket med peroxydase anvendes som konjugat. Testen omfatter følgende trin: Trin 1 Patientprøver, kalibrator og kontroller fortyndes 1/21 og fordeles derpå i brøndene på mikropladen. Der inkuberes i 1 time ved 37 C, hvorunder IgM-antistofferne i prøven binder sig til belægningen med anti-µantistoffer i mikropladebrøndene. Efter inkubation fjernes IgG og andre serumproteiner ved vask. Trin 2 Konjugatet (blanding af rubella-antigen og anti-rubella-antistof mærket med peroxydase) tilføjes til mikropladebrøndene. Der inkuberes i 1 time ved 37 C, hvorunder konjugatet binder sig til de specifikke IgMantistoffer mod rubella, der er belagt på mikropladen. Efter endt inkubation fjernes det ubundne konjugat ved vask. 1

2 Trin 3 Tilstedeværelsen af immunkomplekser (anti-humane µ-kæder/igm anti-rubella/rubella-antigen/monoklonalt anti-rubella-antistof mærket med peroxydase) påvises ved tilsætning af et farveudviklende enzymsubstrat i hver brønd. Trin 4 Efter inkubation ved stuetemperatur ( C) standses enzymreaktionen ved tilsætning af 1Nsvovlsyreopløsning. Den aflæsning af optisk densitet, der opnås med et spektrofotometer indstillet til 450/620 nm, er proportional med mængden af IgM-antistoffer mod rubella i prøven. 4. PRODUKTOPLYSNINGER De leverede reagensmængder er afpasset, så de muliggør 96 test. Alle reagenser er udelukkende beregnet til in vitro-diagnosticering. Mærkning Reagenstype Præsentation R1 R2 R3 R4 R5 R6a R6b R7 R9 Microplate Concentrated Washing Solution (20x) Negative Control Calibrator Positive Control Antigen Conjugate (101x) Diluent Chromogen TMB Mikroplade (brugsklar) 12 strimler med 8 aftagelige brønde, som er belagt med anti-humane µ-kæder Koncentreret vaskeopløsning (20x) Tris-NaCl-buffer (ph 7,4), 2 % Tween 20 Konserveringsmiddel: 0,04% ProClin 300 Negativ kontrol Humant serum negativt for IgM-antistoffer mod rubella og negativt for HBs-antigen, anti-hiv1, anti-hiv2 og anti-hcv Konserveringsmiddel: 0,1% ProClin 300 Kalibrator Humant serum reaktivt for IgM-antistoffer mod rubella og negativt for HBs-antigen, anti-hiv1, anti-hiv2 og anti-hcv Konserveringsmiddel: 0,1% ProClin 300 Positiv kontrol Humant serum reaktivt for IgM-antistoffer mod rubella og negativt for HBs-antigen, anti-hiv1, anti-hiv2 og anti-hcv Konserveringsmiddel: 0,1% ProClin 300 Rubella-antigen Frysetørret rubella-antigen Konserveringsmiddel: 0,36% ProClin 300 Konjugat (101x) Murint monoklonalt anti-rubella-antistof mærket med peroxydase Konserveringsmiddel: 0,16% ProClin 300 Fortynder til prøver og konjugat (brugsklar) Tris-NaCl-buffer (ph 7,6), albumin fra kvægserum, 0,1% Tween 20, fenolrød Konserveringsmiddel: 0,15% ProClin 300 Kromogen (brugsklar) 3,3,5,5 tetramethylbenzidin (< 0,1%), H 2 O 2 (< 1%) 1 1 x 70 ml 1 x 0,75 ml 1 x 0,75 ml 1 x 0,75 ml 4 x q.s. 8,0 ml 1 x 0,4 ml 1 x 80 ml 1 x 28 ml R10 Stopping Solution Stopopløsning (brugsklar) 1N-svovlsyreopløsning 1 x 28 ml Opbevaringsbetingelser og udløbsdato fremgår af æsken. 2

3 5. ADVARSLER OG FORHOLDSREGLER Resultaternes pålidelighed afhænger af korrekt implementering af følgende regler for god laboratoriepraksis: Brug ikke reagenser efter udløbsdatoen. Undgå sammenblanding eller nogen form for forbindelse mellem reagenser fra forskellige partier i samme kørsel. BEMÆRK: Det gælder for vaskeopløsning (R2, etiketidentifikation: 20x, grøn), kromogen (R9, etiketidentifikation: TMB, turkisfarvet) og stopopløsning (R10, etiketidentifikation: 1N, rød), at det er muligt at anvende andre partier end de indeholdte i dette sæt under forudsætning af, at reagenserne er fuldstændig tilsvarende, og at samme parti anvendes i hele kørslen. BEMÆRK: Desuden kan vaskeopløsningen (R2 identificiret 20x med grøn skrift på etiketten) blandes med en af de to andre vaskeopløsninger indeholdt i de forskellige Bio-Rad reagenskit (R2 identificiret 10x med blå skrift eller 10x med orangefarvet skrift på etiketten), når de rekonstitueres korrekt og på betingelse af at der kun bruges én blanding til et bestemt testforløb. Vent 30 minutter før brug, så reagenserne kan stabilisere sig ved stuetemperatur ( C). Rekonstituér eller fortynd reagenserne forsigtigt for at undgå kontaminering. Undgå at udføre testen i nærheden af reaktive dampe (syre, alkaliske dampe og aldehyddampe) eller støv, der kan påvirke konjugatets enzymaktivitet. Benyt engangsmateriale, eller hvis dette ikke er muligt, udstyr af glas, som er vasket grundigt og skyllet med deioniseret vand. Grundig vask af mikropladen er et afgørende trin i proceduren: Udfør det anbefalede antal vaske, og sørg for, at alle brønde bliver helt fyldt og derefter helt tømt. Ukorrekt vask kan føre til unøjagtige resultater. Undgå, at mikropladen bliver tør mellem vaskene og fordelingen af reagenserne. Benyt aldrig den samme beholder til at fordele konjugatet og enzymsubstratet. Enzymreaktionen er meget følsom over for metaller eller metalioner. Undgå derfor, at metalelementer kommer i berøring med de forskellige opløsninger med konjugat eller kromogen. Kromogenopløsningen (R9) bør være farveløs. Hvis farven bliver blå, kan reagenset ikke anvendes og skal udskiftes. Anvend en ny pipettespids til hver prøve. Kontrollér, at pipetterne og andet udstyr er i orden og fungerer korrekt. Sundheds- og sikkerhedsmæssige forholdsregler Materiale af human oprindelse, der er brugt til forberedelse af reagenser, er blevet testet og fundet ikkereaktivt over for hepatitis B-overfladeantigen (HBsAg), antistoffer mod hepatitis C-virus (anti-hcv) samt antistoffer mod HIV 1 og HIV 2. Eftersom ingen metode kan give fuld garanti for fravær af smitsomme stoffer, skal reagenser af human oprindelse og patientprøver håndteres som potentielt smittefarlige. Alt materiale, herunder vaskeopløsninger, der kommer i direkte kontakt med prøver og reagenser, som indeholder materiale af human oprindelse, skal betragtes som potentielt smittefarligt. Brug engangshandsker ved håndtering af prøver og reagenser. Undlad at pipettere med munden. Undgå at spilde prøver eller opløsninger, der indeholder prøve. Spildte materialer skal skylles af med blegemiddel i en opløsning på 10%. Ved spild af syre skal syren først neutraliseres med natriumbikarbonat. Derefter skal der foretages rengøring med blegemiddel i en 10%-opløsning og aftørring med sugende papir. Det materiale, der anvendes til rengøringen, skal bortskaffes i en beholder til kontamineret affald. Patientprøver, reagenser med materiale af human oprindelse samt kontaminerede materialer og produkter skal dekontamineres før bortskaffelse: - enten ved nedsænkning i blegemiddel med en endelig koncentration på 5% natriumhypoklorit i 30 minutter - eller ved autoklavering ved 121 C i mindst to timer. ADVARSEL: Benyt ikke opløsninger, der indeholder natriumhypoklorit, i autoklaven. 3

4 Undgå, at reagenserne kommer i kontakt med huden eller slimhinderne. Dette gælder også for de reagenser, der anses for ufarlige. Kemiske og biologiske rester skal håndteres og bortskaffes i henhold til god laboratoriepraksis. Alle reagenser i sættet er udelukkende beregnet til in vitro-diagnosticering. Se piktogrammet(merne), som er angivet på mærkaterne, og informationerne sidst i brugsanvisningen i forbindelse med farer og forholdsregler for kemiske komponenter i dette testsæt. Sikkerhedsdatabladet kan findes på 6. PRØVETAGNING, FORBEREDELSE OG OPBEVARING 1. Serum og plasma (EDTA, heparin eller citrat) anbefales som prøvetyper. 2. Bemærk følgende anbefalinger for håndtering, behandling og opbevaring af blodprøver: Tag alle blodprøver under overholdelse af de generelle forholdsregler vedrørende venepunktur. Lad serumprøver koagulere fuldstændigt, før de centrifugeres. Sørg for, at glassene altid holdes lukkede. Adskil serummet eller plasmaet fra koaglet eller de røde blodlegemer i et tæt tillukket opbevaringsglas efter centrifugeringen. Prøverne kan opbevares ved +2-8 C, hvis testen udføres inden for 7 dage. Hvis testen ikke udføres inden for 7 dage, eller hvis prøverne skal transporteres, skal de nedfryses til mindst -20 C. Prøver, der har været optøet mere end fem gange, må ikke anvendes. Tidligere nedfrosne prøver bør omrøres grundigt (Vortex) efter optøning, før testen udføres. 3. Prøver, der indeholder op til 90 g/l albumin eller 100 mg/l ukonjugeret bilirubin, lipæmiske prøver, der indeholder, hvad der svarer til 36 g/l triolein (triglycerid), og hæmolyserede prøver, der indeholder op til 10 g/l hæmoglobin, påvirker ikke resultaterne. 4. Prøverne må ikke opvarmes. 7. ANALYSEPROCEDURE 7.1 Påkrævede materialer, der ikke medfølger Vortex-mixer. Mikropladelæser med filtre på 450 nm og 620 nm (*). Mikropladeinkubator, termostatindstillet til 37±1 C (*). Automatisk, halvautomatisk eller manuel mikropladevasker (*). Sterilt destilleret eller deioniseret vand. Engangshandsker. Beskyttelsesbriller. Sugende papir. Automatiske eller halvautomatiske, justerbare eller forudindstillede pipetter eller multipipetter til udmåling og dispensering af µl samt 1, 2 og 10 ml. Måleglas med en volumen på 25 ml, 50 ml, 100 ml og 1000 ml. Natriumhypoklorit (blegemiddel) og natriumbikarbonat. Beholder til biologisk farligt affald. Engangsreagensglas. (*) Kontakt vores tekniske afdeling for at få detaljerede oplysninger om det anbefalede udstyr. 7.2 Rekonstituering af reagenser R1: Lad mikropladen henstå ved stuetemperatur i 30 minutter ( C), før posen åbnes. Tag transportbakken ud, læg straks ubrugte teststrimler tilbage i posen, og kontrollér, at posen indeholder tørremiddel. Forsegl posen omhyggeligt, og opbevar den ved +2-8 C. R2: Fortynd vaskeopløsningen R2 i destilleret vand i forholdet 1:20, fx 50 ml R2 og 950 ml destilleret vand, for at få den brugsklare vaskeopløsning. Klargør 350 ml fortyndet vaskeopløsning til én plade med 12 strimler, hvis der foretages manuel vask. R3, R4, R5: Fortynd reagenserne i forholdet 1:21 med fortynderen R7 (fx 15 µl kalibrator eller kontrol µl R7). 4

5 R6a: Rubella-antigenet er frysetørret. Til kørsel af 3 teststrimler rekonstitueres 1 flaske frysetørret antigen ved at tilsætte 8 ml fortynder (R7). Bland grundigt. Antigenopløsningen (R6a+R7) skal være helt klar efter fortynding. R6 (R6a+R6b) Konjugat-arbejdsopløsning: Tilsæt 80 µl konjugat (R6b) til hver flaske med rekonstitueret rubella-antigen (fortyndet R6a). Bland grundigt. Konjugat-arbejdsopløsningen skal rekonstitueres mindst 1 time før brug. 7.3 Opbevaring og validitet af åbne og/eller rekonstituerede reagenser Sættet skal opbevares ved +2-8 C. Hvis opbevaring sker ved +2-8 C før åbning, kan hver komponent anvendes frem til udløbsdatoen, der fremgår af yderetiketten på sættet. R1: Efter åbning er strimlerne stabile i op til 8 uger, hvis de opbevares ved +2-8 C i den samme omhyggeligt lukkede pose (kontrollér, at posen indeholder tørremiddel). R2: Efter fortynding kan vaskeopløsningen gemmes i 2 uger ved C. Når den koncentrerede vaskeopløsning opbevares ved C, er den stabil indtil udløbsdatoen på etiketten, forudsat der ikke forekommer kontamination. R3, R4, R5, R6b, R7: Efter åbning og uden kontamination er reagenserne stabile i op til 8 uger ved opbevaring ved +2-8 C. R6 (R6a+R6b): Efter rekonstituering er konjugat-arbejdsopløsningen stabil i 8 timer ved stuetemperatur ( C) eller i 2 uger ved +2-8 C. R9: Efter åbning og uden kontamination er reagenset stabilt i op til 8 uger ved opbevaring ved +2-8 C. R10: Efter åbning og uden kontamination er reagenset stabilt indtil den angivne udløbsdato på etiketten ved opbevaring ved +2-8 C. 7.4 Procedure Følg analyseproceduren og reglerne for god laboratoriepraksis nøje. Lad reagenserne stabilisere sig ved stuetemperatur ( C), før de anvendes. Anvendelse af aftagelige brønde kræver særlig opmærksomhed under håndtering. Benyt kalibrator og kontroller ved hver kørsel for at validere analyseresultaterne. 1. Opret en præcis fordelings- og identifikationsplan for kalibrator, kontroller og patientprøver. 2. Forbered den fortyndede vaskeopløsning (R2) (se afsnit 7.2). 3. Tag transportbakken og strimlerne (R1) ud af beskyttelsesposen (se afsnit 7.2). 4. Forbered konjugat-arbejdsopløsningen R6 (R6a+R6b) (se afsnit 7.2). 5. Fortynd kalibratoren og kontrollerne (R3, R4 og R5) og patientprøverne (S1, S2 ) i individuelt identificerede glas med fortynder (R7) i forholdet 1:21: 15 µl prøve og 300 µl fortynder. Bland de fortyndede prøver i Vortex-mixeren. 6. Følg den nedenfor angivne rækkefølge nøje, og tilfør hver brønd 200 µl fortyndet kalibrator, kontrol og patientprøve: A R3 S5 S13 B R4 S6 C R4 S7 D R5 S8 E S1 S9 F S2 S10 G S3 S11 H S4 S12 7. Dæk mikropladen med selvklæbende pladeforsegling, som presses fast ned mod pladen, så den slutter helt til overalt. Inkubér straks mikropladen i et termostatkontrolleret vandbad eller et varmeskab ved 37 1 C i 1 time 5 minutter. 8. Fjern den selvklæbende pladeforsegling efter første inkubationsperiode. Sug indholdet af alle brønde op i en beholder til biologisk farligt affald (en beholder med natriumhypoklorit). Vask mikropladen 4 gange med 350 µl vaskeopløsning (R2). Vend mikropladen på hovedet, og dup den forsigtigt mod sugepapiret for at fjerne resterende væske. 9. Fordel straks 200 μl konjugat-arbejdsopløsning (R6) i alle brøndene. Opløsningen skal rystes forsigtigt før brug. 5

6 10. Dæk mikropladen med selvklæbende pladeforsegling, som presses fast ned mod pladen, så den slutter helt til overalt. Inkubér straks mikropladen i et termostatkontrolleret vandbad eller et varmeskab ved 37 1 C i 1 time 5 minutter. 11. Fjern den selvklæbende pladeforsegling efter anden inkubationsperiode. Sug indholdet af alle brønde op i en beholder til biologisk farligt affald (en beholder med natriumhypoklorit). Vask mikropladen 4 gange med 350 µl vaskeopløsning (R2). Vend mikropladen på hovedet, og dup den forsigtigt mod sugepapiret for at fjerne resterende væske. 12. Fordel hurtigt og i mørke 200 µl kromogenopløsning (R9) i hver brønd. Lad reaktionen foregå i mørke i 30 ± 5 minutter ved stuetemperatur ( C). Benyt ikke selvklæbende pladeforsegling til denne inkubation. 13. Stands enzymreaktionen ved at tilsætte 100 µl stopopløsning (R10) i hver brønd. Benyt samme rækkefølge og fordelingshastighed som for enzymsubstratet. 14. Tør undersiden af pladen omhyggeligt af. Aflæs den optiske densitet ved 450/620 nm ved hjælp af en mikropladelæser inden for 30 minutter efter standsning af reaktionen. Strimlerne skal opbevares i mørke før aflæsning. 15. Kontrollér, at der er overensstemmelse mellem aflæsningen og fordelingsplanen for pladen og prøverne, før resultaterne rapporteres. 8 BEREGNING OG FORTOLKNING AF RESULTATER 8.1 Beregning af cut-off-værdi (CO) Cut-off-værdien (CO) svarer til middelværdien af de optiske densiteter (OD) for cut-off-kontrolduplikaterne (R4): CO = gennemsnit af OD for R Beregning af prøveforhold Prøveresultatet udtrykkes i forhold ved brug af følgende formel: Prøveforhold = Prøvens OD/CO 8.3 Kvalitetskontrol Medtag kalibratoren og kontrollerne for hver mikroplade og for hver kørsel, og analysér de opnåede resultater. Nedenstående kriterier skal opfyldes ved validering af analysen: Værdier for optisk densitet: - CO 0,300-0,80 x CO < OD R4 gent. 1 < 1,20 x CO - 0,80 x CO < OD R4 gent. 2 < 1,20 x CO (Den enkelte OD for hver gentagelse af cut-off-kontrollen (R4) må ikke afvige mere end 20% fra ODværdien). Optisk densitetsforhold: - Forhold R3 (OD R3 / CO) 0,30 - Forhold R5 (OD R5 / CO) 1,50 Hvis kriterierne for kvalitetskontrollen ikke er opfyldt, skal testkørslen gentages. 6

7 8.4 Fortolkning af resultater Prøveforhold Resultat Fortolkning Forhold < 0,80 Negativ 0,80 forhold < 1,00 Tvivlsom Forhold 1,00 Positiv Prøven betragtes som ikke-reaktiv for tilstedeværelse af IgM-antistoffer mod rubella. Prøven betragtes som tvivlsom for tilstedeværelse af IgM-antistoffer mod rubella. Resultatet skal bekræftes ved ny test af en anden prøve udtaget mindst 3 uger efter den første. Prøven betragtes som positiv for tilstedeværelse af IgM-antistoffer mod rubella. 8.5 Hjælp til fejlfinding Reaktioner, der ikke kan valideres eller gentages, skyldes ofte: Utilstrækkelig vask af mikroplader. Kontamination af negative prøver med serum eller plasma med en høj antistoftiter. Kontamination af enzymsubstratet med kemiske oxidationsmidler (blegemiddel, metalioner osv.) Kontamination af stopopløsning. 9 YDEEVNE 9.1 Prævalens Prævalensen af IgM-antistoffer mod rubella ved brug af Platelia Rubella IgM blev anslået ud fra et panel bestående af 347 prøver fra gravide kvinder. 2 prøver var positive, hvad angår IgM-antistoffer mod rubella. Prævalensen målt med Platelia Rubella IgM-analysen er derfor fastlagt til 0,6% (2/347). Platelia Rubella IgM-testens ydeevne blev evalueret på 2 undersøgelsessteder med i alt 809 prøver fra gravide kvinder og bloddonorer. På et undersøgelsessted blev der foretaget en komparativ analyse mod Platelia Rubella IgM TMB (72922); på et andet undersøgelsessted blev ydeevnen for Platelia Rubella IgM sammenholdt med kommercielt tilgængelig EIA-analyse. 9.2 Sammenlignende undersøgelse (undersøgelsessted 1) Platelia Rubella IgM-testens ydeevne blev evalueret på panel bestående af 399 prøver fordelt på: 172 sera fra bloddonorer 151 sera fra gravide kvinder 76 sera fra kommercielle paneler Platelia Rubella IgM TMB (72922) Platelia Rubella IgM (72851) Negativ Tvivlsom Positiv I alt Negativ Tvivlsom Positiv I alt Global konkordans 396 / ,25% [KI 95% = 97,82% - 99,84%] Relativ specificitet 319 / ,38%* [KI 95% = 97,77% - 99,92%] Relativ sensitivitet 77 / 78 98,72% [KI 95% = 93,06% - 99,97%]. *Tvivlsomme resultater blev betragtet som positive [KI 95 %] = 95 % konfidensinterval Derudover blev 60 sera fra 7 vaccinationsefterundersøgelser (udført med to typer vaccine) evalueret med de to kit: forekomsten af IgM anti-rubella følger samme skema for de 2 kit. 7

8 9.3 Ydeevne (undersøgelsessted 2) Platelia Rubella IgM-testens ydeevne blev evalueret på panel bestående af 350 prøver 47 børn op til 15 år (27 piger og 20 drenge) 299 voksne (298 kvinder gravide eller som netop har født - og 1 mand) 1 serum fra den franske nationale kvalitetskontrolundersøgelse Resultaterne blev sammenlignet med resultaterne fra en komercielt tilgængelig EIA test brugt som reference. Anden EIA-analyse Platelia Rubella IgM (72851) Negativ Tvivlsom Positiv I alt Negativ Tvivlsom Positiv I alt Relativ specificitet 344 / ,38%* [KI95% = 97,77% - 99,92%] *Tvivlsomme resultater blev betragtet som positive [KI 95 %] = 95 % konfidensinterval Blandt de 5 positive sera: de 4 overensstemmende positive prøver blev taget på den samme person på forskellige tidspunkter, det positive diskordantserum blev bekræftet positivt med en tredje kommercielt tilgængelig EIAanalyse og sammenlignet med en prøve taget 4 måneder efter vaccinationen. 9.4 Krydsreaktivitet Et panel bestående af 212 prøver, herunder 164 positive prøver for T. gondii, CMV, EBV, HSV, VZV, fåresyge, mæslinger og HIV samt 48 positive prøver for reumatoid faktor, autoantistoffer og heterofile antistoffer og myelomaprøver, blev testet med Platelia Rubella IgM og en kommercielt tilgængelig EIAanalyse til screening for IgM-antistoffer mod rubella. Blandt disse prøver blev 1 CMV IgM-prøve fundet positiv diskordant, og 4 prøver fra reumatoid faktor blev fundet positive eller tvivlsom med begge analyser. Fire af disse prøver blev bekræftet positive med en anden kommmerciel EIA test. 9.5 Præcision Præcision inden for kørsel (repetérbarhed): Med henblik på at evaluere repetérbarheden inden for analysen blev tre positive prøver og en negativ prøve testet 30 gange i løbet af den samme kørsel. Forholdet (prøvens OD/CO) blev bestemt for hver prøve. Middelforholdet, standardafvigelsen (SD) og variationskoefficienten (%CV) for hver af de fire prøver er vist i tabellen nedenfor: Præcision inden for kørsel (repetérbarhed) N=30 Negativ prøve Lav positiv prøve Positiv prøve Høj positiv prøve Forhold (prøvens OD/cut-off-værdi) Middel 0,07 1,73 2,51 4,06 SD 0,002 0,03 0,06 0,11 %CV 2,7% 1,8% 2,5% 2,7% Præcision mellem kørsler (reproducérbarhed): Med henblik på at evaluere reproducérbarheden mellem kørsler blev hver af de fire prøver (en negativ og tre positive prøver) testet i dobbelttest i to kørsler om dagen over en periode på 20 dage. Forholdet (prøvens OD/CO) blev bestemt for hver prøve. Middelforholdet, standardafvigelsen (SD) og variationskoefficienten (%CV) for hver af de fire prøver er vist i tabellen nedenfor: 8

9 Præcision mellem kørsler (reproducérbarhed) N=80 Negativ prøve Lav positiv prøve Positiv prøve Høj positiv prøve Forhold (prøvens OD/cut-off-værdi) Middel 0,04 1,19 2,24 3,60 SD 0,005 0,03 0,06 0,10 %CV 12,7% 2,8% 2,6% 2,8% 10 PROCEDURENS BEGRÆNSNINGER Diagnosen rubellavirusinfektion kan kun fastlægges på baggrund af en kombination af kliniske og biologiske data. Resultatet af en enkelt titreringstest af IgM-antistoffer mod rubella er ikke tilstrækkeligt bevis for diagnosen nylig infektion med rubellavirus. Diagnosticering af nylig infektion kan kun foretages ud fra komplette patientoplysninger, herunder kliniske og biologiske data (markant stigning i IgG-antistoffer mod rubella i 2 patientserumprøver taget med 3 ugers mellemrum og testet i samme kørsel, tilstedeværelse af anti-rubella IgM på et betydeligt niveau, påvisning af lav IgG-aviditet). Tilstedeværelse af IgM-antistoffer mod rubella er ikke tilstrækkeligt bevis for nylig infektion, da IgM kan forekomme i adskillige måneder eller endda år efter infektion. Hvis der påvises IgM, bør der udføres en kvantitativ påvisning af IgG-antistoffer mod rubella samt foretages en opfølgning på udviklingen i antirubella-antistoffer i mindst én serumprøve mere 3 uger senere. Hvis en prøve testes for tidligt under en nylig primær infektion, er IgM-antistofferne mod rubella muligvis endnu ikke til stede. Hvis der er mistanke om infektion, bør der udtages endnu en prøve ca. 3 uger senere, som derefter testes for IgM. Prøver, der er positive for tilstedeværelse af reumatoid faktor, kan give falske positive resultater. 11 PRODUCENTENS KVALITETSKONTROL Alle producerede reagenser fremstilles i henhold til vores kvalitetssikringssystem, lige fra modtagelsen af råmaterialer til markedsføringen af slutproduktet. Hvert parti gennemgår kvalitetskontrol og frigives kun til salg, hvis det opfylder de foruddefinerede kvalitetskriterier. Dokumentation vedrørende produktion og kontrol af hvert parti opbevares hos Bio-Rad. 12 REFERENCER 1. COOPER, L.Z., BUIMOVICI-KLEIN, E : Rubella. In Virology: Edited by Fields, B.N., et al. New York, New York: Raven Press. 2. DORSETT, P.H., MILLER, D.C., GREEN, K., BYRD, F : Structure and function of the Rubella virus proteins. Reviews of Infect. Dis., 7 (Suppl. 1): S 150-S FORSGREN, M : Standardization of techniques and reagents for the study of Rubella antibody. Rev. Infect. Dis., 7 (Suppl. 1): S 129-S KALKKINEN, N., OKER-BLOM, C., AND PETTERSSON, R.F : Three genes code for Rubella virus structural proteins El. E2a, E2b, and C. J. Gen. Virol, 65: LUCAS, G., et al. April 17-20, : Serological diagnosis of IgG immunoglobulins ant-rubella by immunoenzymatic assay in a commercially available kit. Nice: 4th European Congress of Clinical Microbiology. 308/PP MAURIN, J : Le virus de la rubéole. Bulletin de l Institut Pasteur 1969, 67, Virologie médicale, chap. 34, Flammarion Médecine Sciences. 7. NCCLS Document I/LA6-T Tentative Guideline December 1992 : Evaluation and Performance Criteria for Multiple Component Test and Product intended for the Detection and Quantitation of Rubella IgG Test Products. 8. PETTERSSON, R., et al : Molecular and antigenic characteristics and synthesis of Rubella virus structural proteins. Reviews of Infect. Dis., 7 (Suppl. 1): S 140-S WOLINSKY J.S. : Rubella. In Virology, 1990, 2nd Ed Edited by Fields, B.N., and al. New York: Raven Press, Ltd. 9

10 10

11 11

12 Bio-Rad 3, boulevard Raymond Poincare Marnes-la-Coquette - France Tel. : +33 (0) /11 Fax : +33 (0)