DISKS TIL ANTIBIOTISK FØLSOMHEDSTEST KASSETTER MED 50 DISKS Undersøgelse af følsomhed over for antimikrobielle stoffer

Transkript

1 DISKS TIL ANTIBIOTISK FØLSOMHEDSTEST KASSETTER MED 50 DISKS Undersøgelse af følsomhed over for antimikrobielle stoffer 2016/11 1- KLINISK VÆRDI Disse disks anvendes til semikvantitativ evaluering af hurtigt voksende bakteriers og adskillige vanskelige arters in vitrofølsomhed over for antimikrobielle stoffer ved hjælp af agardiffusionsmetoden. Denne metode er baseret på en standardiseret procedure, der er offentliggjort af WHO (1) og accepteret som fælles standard af CLSI (2, 3), CA-SFM (4), EUCAST (5) (metoden revideres med jævne mellemrum). Se de nyeste dokumenter fra CLSI (2,3), CA-SFM (4), EUCAST (5) for retningslinjer for antibiotisk følsomhedstest og fortolkning af resultaterne. 2- PRINCIP Papirdiskene, der er imprægneret med en veldefineret mængde af en antimikrobiel stof, placeres på overfladen af et passende medium (A), der tidligere er inokuleret med en kalibreret inoculum (A) af ren og frisk kultur af den bakterielle stamme, der skal testes. Efter inkubationen (A), undersøges Petri-skålene og hæmningszonerne omkring diskene måles og sammenlignes med de kritiske værdier (A) for de forskellige testede antimikrobielle agenser. Målet er at bestemme den kliniske kategori for følsomheden (resistent, mellemfølsom, følsom). Hæmningszonens diameter er proportional med følsomheden af den testede bakteriestamme. (A) ifølge de gældende retningslinjer CLSI (2, 3) CA-SFM (4) EUCAST (5). 3- PRÆSENTATION Bio-Rad-disks er 6,5 mm disks, der er fremstillet af absorberende papir af meget høj kvalitet. Diskene er imprægneret med nøjagtige mængder af antimikrobielle agenser. Diskene er tydeligt idenficeret med en kode, der består af 1 3 bogstaver, der er trykt på begge sider af disken (se tabel 1). Bio-Rad-disks leveres i kassetter med 50 disks, der er pakket i vandtætte beholdere, som indeholder et tørremiddel. Tabel 1 : Bio-Rad-disks til test af antibiotisk følsomhed DISKENES PAKKE SYMBOL INDHOLD STØRRELSE ORDRENR. Amikacin AKN Amoxicillin 25 µg AMX Amoxicillin + Clavulanic Acid 2/1 µg 20/10 µg AUG3 AMC Ampicillin 2 µg 10 µg API2 AMP Ampicillin + Sulbactam 10/10 µg SAM Azithromycin 15 µg AZM Aztreonam ATM Bacitracin 10 IU (1) BCT Carbenicillin 100 µg CRB Cefaclor CEC

2 DISKENES PAKKE SYMBOL INDHOLD STØRRELSE ORDRENR. Cefalexin CXN Cefamandole FAM Cefazolin CZN Cefepime FEP Cefixime 5 µg 10 µg FIX5 CFM Cefoperazone 75 µg CFP75 CPZ Cefoperazone + Sulbactam 75/ SCF Cefotaxime 5 µg COX5 CTX Cefotetan CTT Cefoxitin FOX Cefpirome CPO Cefpodoxime 10 µg CPD Cefprozil CPR Cefsulodin CFS Ceftaroline 5 µg CPN Ceftazidime 10 µg CZD10 CAZ Ceftibuten CTB Ceftriaxone CRO Cefuroxime CXM Cephalothin CEF Chloramphenicol CHL Ciprofloxacin 5 µg CIP Clarithromycin 15 µg CLR Clindamycin 2 µg CMN Colistin 10 µg 50 µg COL10 CST Doripenem 10 µg DOR Doxycycline DOX Ertapenem 10 µg ETP Erythromycine 15 µg ERY Flumequine UBN Fosfomycin 50 µg 200 µg FSF50 FOS Fusidic Acid 10 µg FAD Gentamicin 10 µg 10 IU (15 µg) GMN10 GMI15 GME Gentamicin (high load) 120 µg 500 µg HLG120 GEN Imipenem 10 µg IPM Isepamicin ISP Kanamycin KMN Kanamycin (high load) 1 mg KAN Levofloxacin 5 µg LVX Lincomycin 15 µg LCN Linezolid 10 µg LIN Linezolid LZD Mecillinam 10 µg MEC Meropenem 10 µg MEM Metronidazole 4 µg MTR Mezlocillin 75 µg MZN Minocycline MNO Moxalactam MOX Moxifloxacin 5 µg MXF Mupirocin 5 µg MUP µg PUM Nalidixic Acid NAL Neomycin 30 IU NEO Netilmicin 10 µg NTM10 NET Nitrofurantoin 100 µg NFE Nitrofurantoin 300 µg FTN

3 DISKENES PAKKE SYMBOL INDHOLD STØRRELSE ORDRENR. Nitroxolin 20 µg NIT Norfloxacin 10 µg 5 µg NXN10 NOR Ofloxacin 5 µg OFX Oleandomycin 15 µg OLE Oxacillin 1 µg 5 µg OXC1 OXA Oxolinic Acid 10 µg OAD Pefloxacin 5 µg PEF Penicillin 1 IU 6 µg (10 IU) PNG1 PEN Pipemidic Acid 20 µg PIM Piperacillin 75 µg 100 µg PIL30 PIP75 PIR Piperacillin + Tazobactam 30/6 µg 75/10 µg 100/10 µg PTZ36 PPT85 TZP Polymixin 300 IU (50 µg) PXB Pristinamycin 15 µg PTN Quinupristin-Dalfopristin 15 µg QDF Rifampicin 5 µg RIF5 RAM Sparfloxacin 5 µg SPX Spectinomycin 100 µg SPT Spiramycin 100 µg SPN Streptomycin 10 µg SMN Streptomycin (high load) 300 µg 500 µg HLS300 STR Sulphonamides 300 µg 200 µg SSS300 SUL Teicoplanin TEC Telithromycin 15 µg TEL Temocillin TEM Tetracycline TET Ticarcillin 75 µg TIC Ticarcillin + Clavulanic Acid 75/10 µg TCC Tigecycline 15 µg TGC Tobramycin 10 µg TMN10 TOB Trimethoprim + Sulfamethoxazole 1.25/23.75 µg SXT Trimethoprim 5 µg TMP Vancomycin 5 µg VNC5 VAN OPBEVARING Udløbsdatoen gælder udelukkende for disks i ubrudte kassetter, som er opbevaret ifølge producentens anvisninger. Udløbsdatoen og partinummeret er angivet på hver kassette og beholder. Kassetterne skal opbevares i deres beholdere ved 2-8 C på et tørt sted. Lad beholderne stabilisere sig ved stuetemperatur ( C), før de åbnes. Ubrugte æsker skal opbevares ved +2-8 C. Benyt ikke diskene efter udløbsdatoen. Benyt ikke kassetter, der har stået ved stuetemperatur (18-30 C) i mere end otte timer, uden først at kontrollere, om kassetternes ydeevne er acceptabel (6). Hvis kassetten forbliver i dispenseren efter håndteringen, er det nødvendigt at opbevare dispenseren ved 2-8 C på et tørt sted (med tørremiddel). Holdbarheden af diskene i åben kassette, placeret hos distributør (opbevaret i henhold til anbefalinger med tørremiddel) blev valideret under rutineforhold over 6 uger, undtaget pladerne med antibiotika markeret med symbolet, hvor stabiliteten vises i uger inde i symbolet 5- NØDVENDIGT MATERIALE, DER IKKE MEDFØLGER Diskdispenser: 6-7 disks Ref. # disks Ref. # Medier (ifølge de gældende retningslinjer (CLSI (2,3), CA-SFM (4), EUCAST (5) ) 3

4 Reagenser Bakteriestammer til kvalitetskontrol Kontrol af klarhed svarende til Mac Farland 0,5 standard Laboratorieudstyr, der kræves for at udføre en test af antibiotisk følsomhed ved hjælp af diffusionsmetoden. 6- FORHOLDSREGLER Følg instruktionerne i de gældende retningslinjer (CLSI (2,3), CA-SFM (4), EUCAST (5) ) Følg altid de gældende fremgangsmåder og forholdsregler til beskyttelse mod mikrobiologiske farer. Steriliser kulturerne og alt kontamineret materiale efter brug. 7- PROCEDURE Prøver: diskene må ikke anvendes til tests, der udføres direkte på biologiske prøver. Se i de gældende retningslinjer (CLSI (2,3), CA-SFM (4), EUCAST (5) ) der omhandler forberedelse af inoculum fra en ren, frisk kultur. Se i instruktioner, der anbefales af CLSI (2,3), CA-SFM (4), EUCAST (5) for at få oplysninger om hele fremgangsmåde for test af antibiotisk følsomhed og fortolkning af resultaterne: CLSI (2,3), CA-SFM (4), EUCAST (5) foreslår standardiserede teknikker til forberedelse af inoculum, inokulering af Petri-skål, valg og placering af testdisks, inkubationstemperaturen og inkubationstiden. Der skal til enhver tid anvendes god laboratoriepraksis. 8- FORTOLKNING AF RESULTATERNE Mål de observerede hæmningszoners diametre præcist, og kontroller de kritiske diametre, der er angivet i de gældende retningslinjer (CLSI (2,3), CA-SFM (4), EUCAST (5) ) En klinisk kategori (mellemresistent, følsom eller ikke følsom) angives for hver mikroorganisme som en funktion af den observerede diameter og de kritiske diametre for det testede antibiotikum. Disse kriterier for klinisk kategorisering, ved hjælp af kritiske diametre, revideres med jævne mellemrum af CLSI (2,3), CA- SFM (4), EUCAST (5) 9- YDEEVNE/KVALITETSKONTROL De antibiotiske disks ydeevne kontrolleres systematisk ved hjælp af følgende stammer: - Escherichia coli ATCC Staphylococcus aureus ATCC Pseudomonas aeruginosa ATCC Streptococcus pneumoniae ATCC Neisseria gonorrhoeae ATCC Haemophilus influenzae ATCC Enterococcus faecalis ATCC Clostridium perfringens ATCC Enterococcus faecalis ATCC Clostridium sporogenes ATCC Tabel 2 angiver de accepterede grænser for de hæmningsdiametre, der opnås ved diffusionsmetoden for referencestammerne nedenfor: Diskenes Standard Acceptabel zonediameter (mm) i følge kvalitetskontrols grænseværdier E. coli ATCC S. aureus ATCC P. aeruginosa ATCC S. pneumoniae ATCC H. influenzae ATCC Amikacin CLSI Amoxicillin 25 µg Intern Amoxicillin + Clavulanic Acid 20/10 µg CLSI Ampicillin 10 µg CLSI Ampicillin + Sulbactam 10/10 µg CLSI Azithromycin 15 µg CLSI Aztreonam CLSI Bacitracin 10 UI Intern Carbenicilin 100 µg CLSI Cefaclor CLSI Cefalexin Intern Cefamandole CLSI Cefazolin CLSI Cefepime CLSI Cefixime 10 µg Intern Cefixime 5 µg CLSI Cefoperazone Intern Cefoperazone 75 µg CLSI Cefoperazone + Sulbactam 75/ Intern Cefotaxime CLSI

5 Diskenes Standard Acceptabel zonediameter (mm) i følge kvalitetskontrols grænseværdier E. coli ATCC S. aureus ATCC P. aeruginosa ATCC S. pneumoniae ATCC H. influenzae ATCC Cefotetan CLSI Cefpirome Intern Cefpodoxime 10 µg CLSI Cefprozil CLSI Cefsulodin Intern Ceftazidime CLSI Ceftibuten CLSI Ceftriaxone CLSI Cefuroxime CLSI Cephalothin CLSI Chloramphenicol CLSI Ciprofloxacin 5 µg CLSI Clarithromycin 15 µg CLSI Clindamycin 2 µg CLSI Colistin 10 µg CLSI Colistin 50 µg CA-SFM Doxycycline CLSI Ertapenem 10 µg CLSI Erythromycine 15 µg CLSI Flumequine Intern Fosfomycin 50 µg CA-SFM Fosfomycin 200 µg CLSI Fusidic acid 10 µg CA-SFM Gentamicin 10 µg CLSI Gentamicin 10 UI CA-SFM Imipenem 10 µg CLSI Isepamicin Intern Kanamycin CLSI Levofloxacin 5 µg CLSI Lincomycin 15 µg CA-SFM Linezolid CLSI Mecillinam 10 µg CLSI Meropenem 10 µg CLSI Mezlocillin 75 µg CLSI Minocycline CLSI Moxalactam CLSI Moxifloxacin 5 µg CLSI Mupirocin 5 µg Intern Mupirocin 200 µg CLSI Nalidixic Acid CLSI Neomycin 30 UI Intern Netilmicin CLSI Nitrofurantoin 300 µg CLSI Nitroxolin 20 µg Intern Norfloxacin 5 µg Intern Norfloxacin 10 µg CLSI Ofloxacin 5 µg Intern Oleandomycin 15 µg Intern Oxacillin 5 µg CA-SFM Oxacillin 1 µg CLSI Oxolinic Acid 10 µg Intern Pefloxacin 5 µg CA-SFM Penicillin 6 µg CLSI Pipemidic Acid 20 µg Intern Piperacillin 100 µg CLSI

6 Acceptabel zonediameter (mm) i følge kvalitetskontrols grænseværdier Diskenes Standard E. coli S. aureus P. aeruginosa S. pneumoniae H. influenzae ATCC ATCC ATCC ATCC ATCC Piperacillin 75 µg Intern Piperacillin + Tazobactam 75/10 µg Intern Piperacillin + Tazobactam 100/10 µg CLSI Polymixin 300 UI CLSI Pristinamycin 15 µg CA-SFM Quinupristin-Dalfopristin 15 µg CLSI Rifampicin 5 µg CLSI Rifampicin CA-SFM Sparfloxacin 5 µg CLSI Spectinomycin 100 µg Intern Spiramycin 100 µg Intern Streptomycin 10 µg CLSI Sulfonamides 300 µg CLSI Sulfonamides 200 µg Intern Teicoplanin CLSI Telithromycin 15 µg CLSI Temocillin Intern Tetracycline CLSI Ticarcillin 75 µg CLSI Ticarcillin + Clavulanic Acid 75/10 µg CLSI Tigecycline 15 µg CLSI Tobramycin 10 µg CLSI Trimethoprim 5 µg CLSI Trimethoprim + 1,25/23,75 Sulfamethoxazole µg CLSI Vancomycin CLSI Som kontrolgrænseværdier (intern standard, CLSI) : Gentamicin 120 µg : E. faecalis ATCC (16-23 mm) Streptomycin 300 µg : E. faecalis ATCC (14-20 mm) Gentamicin 500 µg : S. aureus ATCC (30-34 mm) ; E. faecalis ATCC ( mm) Kanamycin 1mg : S. aureus ATCC ( 14 mm) ; E. faecalis ATCC (> 14 mm). Streptomycin 500 µg : S. aureus ATCC (24-28 mm) ; E. faecalis ATCC (14-25 mm). Metronidazole 4µg : Clostridium perfringens ATCC 13124, Clostridium sporogenes ATCC mm Cefoperazone + Sulbactam 75 / : E. coli ATCC (24-30 mm) Mupirocin 200 µg : S. aureus ATCC BAA-1708 (6 mm) Temocillin : E. coli ATCC (22-28 mm) Haemophilus influenzae ATCC anbefales som en nyttig supplerende stamme til kvalitetskontrol, for at kontrollere HTMs vækstfremmende egenskaber. Uanset manglen på pålidelige diffusionsfortolkningskriterier for S. pneumonia med bestemte Beta-lactamer, er Streptococcus pneumonia ATCC den stamme, der er beregnet til kvalitetskontrol af alle diffusionstests med alle Streptococcus spp. Neisseria gonorrhoeae ATCC anbefales til test af spectinomycindisks med acceptable diametre på mm (CLSI). Nedbrydningen af 1 µg oxacillindiskens vurderes bedst ved hjælp Staphylococcus aureus ATCC som kvalitetskontrol stamme, med en acceptabel diameter på mm. Ifølge retningslinjerne fra EUCAST (version V3.1, 2013), kontrolleres de antibiotiske diskes ydelse systematisk ved brug af de følgendestammer: : - Escherichia coli ATCC Staphylococcus aureus ATCC Pseudomonas aeruginosa ATCC Streptococcus pneumoniae ATCC Enterococcus faecalis ATCC Haemophilus influenzae NCTC

7 Tabel 3 angiver de accepterede grænser for de hæmningsdiametre, der opnås ved diffusionsmetoden for referencestammerne nedenfor: Diskenes E. coli ATCC Acceptabel zonediameter (mm) i følge kvalitetskontrols grænseværdier S. aureus ATCC P. aeruginosa ATCC S. pneumoniae ATCC H. influenzae NCTC 8468 E. faecalis ATCC Amoxicillin + Clavulanic Acid 2/1 µg Ampicillin 2 µg Cefotaxime 5 µg Cefoxitin Ceftaroline 5 µg Ceftazidime 10 µg Doripenem 10 µg Gentamicin Linezolid 10 µg Netilmicin 10 µg Nitrofurantoin 100 µg Penicillin 1 IU Piperacillin Piperacillin + Tazobactam 30/6 µg Tobramycin Vancomycin 5 µg PRODUCENTENS KVALITETSKONTROL Alle producerede og kommercialiserede reagenser er underlagt et komplet kvalitetssystem lige fra modtagelsen af råmaterialet til den endelige kommercialisering af produktet. Hvert parti sendes til kvalitetskontrol og frigives kun på markedet, når det overholder kravene for godkendelse. Dokumentation vedrørende produktion og kontrol af hvert parti opbevares inden for virksomheden. 11- TESTENS BEGRÆNSNINGER Kliniske kategoriseringer (resistent, mellemresistent, følsom) varierer kun med en millimeter, hvilket svarer til den almindeligt forekommende fejlmargin på laboratoriet. Der kan anvendes andre antimikrobielle agenser end dem, der er nævnt i tabel 2. Følsomhedstests, der anvender disse agenser, skal fortolkes på baggrund af forekomsten eller manglen på en tydelig hæmningszone og må kun betragtes som kvalitativ, indtil der er opnået viden om zonediameterens kvantitativte fortolkning. Alle zonediametre skal registreres. Testens ydeevne afhænger ikke kun af aktiviteten på diskene, men også af faktorer som f.eks. brugen af den rette inoculum og egnede kontrolstammer, korrekt og tidligere testede kulturmedier og en korrekt opbevaring. Den endelige fortolkning kan som alle andre laboratoriefortolkninger ikke baseres på resultaterne af en enkelt test, men på en samlet oversigt over de kliniske data og de biokemiske-, cytologiske og immunologiske resultater. 12- REFERENCER 1. World Heath Organization Expert Committee on Biological Standardization Technical report series 822. W.H.O., Geneva. 2. CLSI: Clinical and Laboratory Standards Institute Approved standard M2-A11. Performance standards for antimicrobial susceptibility tests, 10th ed. CLSI, Wayne, Pa. 3. CLSI: Clinical and Laboratory Standards Institute CLSI document M100-S23. Performance standards for antimicrobial susceptibility testing, 21th informational supplement, Wayne, Pa. 4. CA-SFM: Comité de l antibiogramme French Society of Microbiology. 5. EUCAST: European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing. EUCAST QC Tables V V. Loncle-Provot, E. Keller, M.O. Gourdin, M.L. Garrigues. Etude de la stabilité des disks antibiotiques dans les conditions d'utilisation en routine, 18th inter disciplinary meeting on anti-infectious chemotherapy, Paris, Dec.3/ Bio-Rad 3, boulevard Raymond Poincaré Marnes-la-Coquette France Tel. : +33 (0) Fax : +33 (0) /11 7