BD Mueller Hinton II Agar BD Mueller Hinton II Agar 150 mm BD Mueller Hinton II Agar, Square

Transkript

1 BRUGSANVISNING PLADEMEDIER KLAR TIL BRUG PA Rev.: Februar 2017 BD Mueller Hinton II Agar BD Mueller Hinton II Agar 150 mm BD Mueller Hinton II Agar, Square TILSIGTET BRUG BD Mueller Hinton II Agar, som leveres i forskellige pladeformater og pakkestørrelser, bruges til den standardiserede diskdiffusionsprocedure til bestemmelse af hurtigt-voksende, aerobe organismers følsomhed for antimikrobielle stoffer, som det er standardiseret af Clinical and Laboratory Standards Institute og European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing (EUCAST) (den europæiske komité for antimikrobiel følsomhedstestning). 1,2 PROCEDURENS PRINCIPPER OG FORKLARING Mikrobiologisk metode. Da kliniske, mikrobiologiske laboratorier i starten af 1960'erne anvendte mange forskellige procedurer for at bestemme bakteriers følsomhed for antibiotiske og kemoterapeutiske stoffer, udviklede Bauer, Kirby og andre en standardiseret procedure, i hvilken Mueller Hinton II Agar, et medium der oprindeligt var tiltænkt til isolation af gonokokker, blev udvalgt som analysemedium. 1-5 En efterfølgende international samlet undersøgelse bekræftede værdien af Mueller Hinton Agar til dette formål pga. mediets relativt gode reproducerbarhed, dets simple formel samt det væld af eksperimentelle data, der eksisterede fra brug af dette medium. 6 CLSI og EUCAST har udstedt præstationsstandarder for Bauer-Kirby-proceduren, og disse dokumenter bør konsulteres for yderligere oplysninger. 7,8 Andre nationale standarder er udviklet for antimikrobiel følsomhedstestning ifølge Bauer-Kirby-proceduren. I de standarder kan inokulatets densitet, inokuleringsmetoden, zonestørrelserne og tolkningsmetoden afvige fra anbefalingerne fra CLSI og EUCAST. Bauer-Kirby proceduren er baseret på diffusion gennem en agargel af antimikrobielle substanser, som er imprægneret på papirdisks. 9 Til forskel fra tidligere metoder, som anvendte disks med høje og lave antimikrobielle koncentrationer, og som anvendte tilstedeværelsen eller fraværet af hæmningszoner til deres tolkning, benytter denne metode sig af disks med en enkelt koncentration antimikrobielt stof, og zonediametrene korreleres med et minimum af inhibitoriske koncentrationer (MIC). 1-3,7-9 I denne testprocedure udstryges en standardiseret suspension af organismen over hele overfladen på mediet. Papirdisks imprægneret med specificerede mængder antibiotiske eller andre antimikrobielle stoffer anbringes dernæst på mediets overflade, pladen inkuberes, og hæmningszonerne om hver disk måles. Bestemmelsen af, om organismen er følsom (susceptible (S)), intermediær (intermediate (I)) eller resistent (resistant (R)) over for et stof, afgøres ved at sammenligne zonestørrelserne med dem, der findes i tabellerne 2A og 2D i CLSI Document M100-S10 (M2). 10 Bestemmelsen af, om organismen er følsom (S) eller resistent (R) over for et stof, opnås ved at sammenligne zonestørrelserne med dem, der er anført i EUCAST's brydepunktstabeller 11 Forskellige faktorer er blevet identificeret, som kan påvirke følsomhedstestning med diskdiffusion. Disse inkluderer mediet, overskydende overfladefugt på mediet, agardybde, diskstyrke, inokulatkoncentration, ph og testorganismernes produktion af ß-lactamase. 6-9,12 PA Side 1 af 11

2 BD Mueller Hinton II Agar fremstilles med lave niveauer af thymin og thymidin samt kontrollerede niveauer af kalcium og magnesium Thymin- og thymidin-niveauer i råmaterialer bestemmes med diskdiffusionsproceduren med trimethoprim-sulfamethoxazol (SXT) disks og Enterococcus faecalis ATCC TM 17 og/eller Kalcium- og magnesiumniveauerne kontrolleres ved at teste råmaterialerne og supplere med kalcium- og/eller magnesiumkilder efter behov for at producere korrekte zonediametre med aminoglycosid antibiotika og Pseudomonas aeruginosa ATCC Agardybden for hver BD Mueller Hinton II Agar-pladeformat blev justeret til at opfylde både anbefalingerne fra CLSI og EUCAST. 7,8 REAGENSER BD Mueller Hinton II Agar Formel* pr. liter renset vand Okseekstrakt 2,0 g Caseinsyrehydrolysat 17,5 Stivelse 1,5 Agar 17,0 ph 7,3 +/- 0,2 *Justeret og/eller suppleret efter behov for at opfylde funktionskriterierne. FORHOLDSREGLER. Kun til professionel brug. Pladerne må ikke anvendes, hvis de viser tegn på mikrobiel kontaminering, misfarvning, udtørring, brud eller andre tegn på nedbrydning. Overdreven skrumpning af dette medium på grund af udtørring kan føre til falske følsomhedstestresultater. Læs dokumentet GENEREL BRUGSANVISNING for procedurer om aseptisk håndtering, biologiske farer og bortskaffelse af brugte produkter. OPBEVARING OG HOLDBARHED Pladerne opbevares efter modtagelse i mørke ved 2 8 C i deres originale hylsterindpakning indtil umiddelbart inden ibrugtagning. Undgå nedfrysning og overophedning. Pladerne kan inokuleres indtil udløbsdatoen (se etiketten på pakken) og inkuberes i de anbefalede inkubationstider. Plader fra åbnede stabler med 10 plader kan bruges i en uge, når de opbevares i et rent område ved 2 8 C. BRUGERKVALITETSKONTROL Se CLSI 10 og EUCAST 18 eller, hvis det er relevant, nationale standarder for oplysninger om brugerkvalitetskontrol. Inokuler repræsentative prøver med de følgende stammer på hvert medium (se Præparattyper og Testprocedure< for flere oplysninger). Inkuber pladerne, helst i omvendt position, ifølge temperaturen, tidspunktet og de atmosfæriske forhold, der er angivet nedenfor. BD Mueller Hinton II Agar-plader og de antimikrobielle disks, der anvendes, skal testes mindst to gange om ugen for korrekt præstation. PA Side 2 af 11

3 Tabel 1: Forventede resultater for hæmningszonernes diameterområder i kvalitetskontrolstammer i henhold til CLSI 19 og EUCAST 20 Stamme Antimikrobielt stof Område (mm) Inkubation Escherichia coli Ampicillin (10 µg) CLSI: ATCC Imipenem (10 µg) Gentamicin (10 µg) Amikacin (30 µg) Ciprofloxacin (5 µg) Trimethoprim-sulfamethoxazol SXT (1,25 µg 23,75 µg) Escherichia coli ATCC Amoxycillin/clavulansyre CLSI: (30 µg) Ampicillin/sulbactam (30 µg) Enterococcus faecalis ATCC Trimethoprim-sulfamethoxazol CLSI: (1,25 µg 23,75 µg) Ciprofloxacin (5 µg) Staphylococcus aureus Tetracyclin (30 µg) CLSI: ATCC Gentamicin (10 µg) Erythromycin (15 µg) Clindamycin (2 µg) Staphylococcus aureus Tetracyclin (30 µg) CLSI: ATCC Gentamicin (10 µg) Erythromycin (15 µg) Clindamycin (2 µg) Pseudomonas aeruginosa ATCC Aztreonam (30 µg) Amikacin (30 µg) Gentamicin (10 µg) CLSI: Imipenem (10 µg) Ikke-inokuleret Farveløs til svagt ravgul 1 : Resultater for kvalitetskontrolstammer i henhold til CLSI og EUCAST 2 : Resultater for kvalitetskontrolstammer i henhold til EUCAST 3 : Resultater for kvalitetskontrolstammer i henhold til CLSI PROCEDURE Vedlagte materialer BD Mueller Hinton II Agar (leveres i forskellige pladeformater, se Emballering/ bestilling). Mikrobiologisk kontrolleret. PA Side 3 af 11

4 Materialer, der ikke er vedlagt 1. I henhold til CLSI>: Inokulumbouillon i rør såsom BD Trypticase TM Soy Broth (sojabouillon) (sojabønne-casein-fordøjelsesbuillon) eller Mueller Hinton II Broth (bouillon) (kationsjusteret) til klargøring af et standardinokulum, samt steril bouillon eller saltvand til fortynding af inokulum. 7 I henhold til 0,9 % saltopløsning (mængder a 5 ml) til klargøring af standardinokulum Bariumsulfat-sammenligningsstandard (0,5 ml af 0,048 M BaCl 2 [1,175 % w/v BaCl 2. 2H 2 O] til 99,5 ml af 0,18 M [0,36 N] H 2 SO 4 [1 % v/v]) eller 3. Et fotometrisk apparat til justering af klarheden af inokulumsuspensionen, så den svarer til McFarlands 0,5-standard. 4. Som alternativ til ovenstående materialer (1-3) kan BD Prompt TM Inoculation System (volumetrisk inokulum-klargøringsudstyr) anvendes. 7,8,25 5. Kontroldyrkninger i henhold til CLSI: Staphylococcus aureus ATCC 25923, Escherichia coli ATCC og ATCC 35218, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Enterococcus faecalis ATCC og Klebsiella pneumoniae ATCC Kontroldyrkninger i henhold til Staphylococcus aureus ATCC 29213, Escherichia coli ATCC og ATCC 35218, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Enterococcus faecalis ATCC og ATCC 51299, Klebsiella pneumoniae ATCC og Staphylococcus aureus NCTC Papirdisks imprægneret med specifikke mængder af antimikrobielle stoffer 7,8 såsom BD Sensi-Disc TM (disks) til følsomhedstest. 7. Dispenseringsudstyr såsom BD Sensi-Disc 6-, 8- eller 12-pladsdispenser. En passende dispenser kan også fås til Mueller Hinton II Agar Square plader. 8. Lineal eller andet udstyr til at måle zonestørrelse i millimeter. 9. Hjælpedyrkningsmedier, reagenser og laboratorieudstyr efter behov. Præparattyper Dette produkt anvendes kun til følsomhedstestning af rene kulturer, som har været isoleret fra kliniske præparater (se også FUNKTIONSDATA OG PROCEDURENS BEGRÆNSNINGER). Det er blevet foreslået, at direkte antimikrobiel følsomhedstestning kan udføres på blod- og urinkulturer. Disse analyser skal dog gentages og bekræftes med rene kulturer Testprocedure Denne metode er den direkte kolonisuspensionsmetode, der anbefales af CLSI 7 og EUCAST 8 : 1. Sørg for, at en ren, frisk (= natten over) kultur fra et ikke-selektivt medium, såsom blodagar, er tilgængelig. I henhold til CLSI: Til rutinemæssige følsomhedstest kan inokulum klargøres ved at lave en direkte saltopløsning eller bouillon af kolonier. I henhold til Til rutinemæssige følsomhedstest kan inokulum klargøres ved at lave en direkte saltopløsning af flere morfologisk ens kolonier. 2. Juster straks denne opløsning til samme klarhed som 0,5 McFarlandbariumsulfatstandarderne uden inkubation. Standardens og testinokulatets klarhed sammenlignes ved at holde begge rør op foran en hvid baggrund med tynde, sorte linjer, eller der kan benyttes et fotometrisk apparat. 3. Alternative metoder til klargøring af inokulatet anvender anordninger, der muliggør direkte standardisering af inokulatet uden justering af klarheden, såsom BD Prompt Inoculation System. Disse anordninger er fundet at være acceptable til rutinemæssige analyser Inokulum skal optimalt bruges inden for 15 min. Opløsningen skal altid anvendes inden for 60 minutter efter klargøring. Nedsænk en steril podepind i det korrekt fortyndede inokulum, og drej den med fast hånd flere gange mod rørets øvre indervæg for at fjerne overskydende væske og undgå overinokulation. 5. Stryg hele overfladen af agarpladen tre gange, idet pladen drejes 60 mellem strygninger for at opnå jævn inokulering. PA Side 4 af 11

5 6. I henhold til CLSI: Låget må stå på klem i 3-5 min, men højst i 15 min, så en eventuel overfladefugt kan absorberes, inden diskene imprægneret med antimikrobielle stoffer påføres. Anvend diskene ved hjælp af en antimikrobiel diskdispenser og aseptiske forholdsregler. Anbring diskene, så deres centre er mindst 24 mm fra hinanden. I henhold til Anvend diskene fra den tørrede plade inden for 15 minutter efter inokulering brug af aseptiske forholdsregler. Anbring maksimalt seks disks på pladen. 7. Efter placering af diskene på agaren trykkes de ned med en steril nål eller tang, så de kommer i fuldstændig kontakt med medieoverfladen. Dette trin er ikke nødvendigt, hvis diskene er påsat med en BD Sensi-Disc selvopfyldende dispenser. 8. Højst 15 minutter efter at diskene er påført, inverteres pladerne og placeres i inkubatoren. Pladerne må ikke inkuberes under forøget koncentration af kuldioxid. Der henvises til CLSI og EUCAST vedr. anbefalede inkubationsbetingelser. 7,8,10,11 Aflæsning af resultater 1. Efter inkubation bør konfluent plæne -vækst være synlig. Hvis kun isolerede kolonier vokser, er inokulum for let, og testen bør gentages. 2. I henhold til CLSI: Mål zonediametrene for fuldstændig hæmning (som vurderet med det blotte øje), inklusive diameteren på diskene, til nærmeste hele millimeter vha. en passer, en lineal eller skabelon forberedt til dette formål. Måleanordningen holdes mod bunden af den inverterede plade over en sort, ikke-reflekterende baggrund, og belyses ovenfra. 7 I henhold til Mål zonediametrene for fuldstændig hæmning (som vurderet med det blotte øje), inklusive diameteren på diskene, til nærmeste hele millimeter vha. en passer eller en lineal. Måleanordningen holdes mod bunden af den inverterede plade over en sort baggrund, der belyses med reflekteret lys. Pladen holdes ca. 30 cm fra øjet Endepunktet bør være det område, hvor der ikke findes vækst, der kan ses med det blotte øje. Der ses bort fra svag vækst med meget små kolonier, som knapt kan ses, nær kanten af hæmningszonen. 4. I henhold til CLSI: Staphylococcus aureus er en undtagelse, når den testes med oxacillindisks, og det samme er enterokokker, når de testes med vancomycin. I disse tilfælde skal transmitteret lys anvendes for at påvise en tåge af vækst om disken, hvilket vises af okkultresistente MRSA-stammer eller vancomycin-resistente enterokokker. 7,26 Med Proteus-arter ses der bort fra enhver form for sværm inden for zonen, hvis hæmningszonen er tydelig nok til at kunne måles. Med trimethoprim og sulfonamider, kan antagonisterne i mediet tillade let vækst. Derfor ses bort fra let vækst (20 % eller mindre af vækst- plænen ), og den mere synlige margin måles for at bestemme zonediameteren. I henhold til I tilfælde af dobbeltzoner skal den inderste zone måles, medmindre andet specifikt er angivet. 8 Beregning og tolkning af resultater I henhold til CLSI: Zonediametre målt rundt om diskene skal sammenlignes med dem, der findes i tabellerne 2A til 2D i CLSI Document M100 (M2). 10 Resultaterne fra de specifikke organismer kan så rapporteres som resistente, intermediære eller følsomme. I henhold til Fortolk zonediametre ved reference til brydepunkttabeller. 11 Resultater, der er opnået med en specifik organisme, kan rapporteres som resistente eller følsomme. For yderligere oplysninger om specifikke vækstkarakteristika, fortolkning og andre vejledende dokumenter henvises der til EUCAST. FUNKTIONSDATA OG PROCEDURENS BEGRÆNSNINGER Mueller Hinton Agar er det standardmedium, der anvendes til følsomhedstestning af hurtigtvoksende aerobe eller fakultativt anaerobt bakterielle bakterier såsom stafylokokker, enterokokker, medlemmer af Enterobacteriaceae samt aerobe gramnegative stave (f.eks. Pseudomonas-arter). Vejledningsdokumenter til fortolkning af følsomhed opdateres årligt, og den seneste version bør anvendes til korrekt tolkning af de opnåede resultater. 10,11 Forskellige procedurer samt andre medier og tilstande er udviklet til analyse af kræsne arter, dvs. Haemophilus-arter., Neisseria-arter og Streptococcus pneumoniae og streptococci. PA Side 5 af 11

6 Den CLSI- og EUCAST-standardiserede procedure anvendes ikke til analyse af obligat anaerobe organismer, organismer, der udviser dårlig eller langsom vækst på Mueller Hinton Agar, eller organismer, der udviser markeret stamme-til-stamme variation mht. vækstrate. 7,8 Kræsne organismer (f.eks. Haemophilus influenzae) skal testes i henhold til anbefalingerne fra CLSI og EUCAST. 7,8 Intern funktionsevaluering Funktionen for BD Mueller Hinton Fastidious Agar (alle pladeformater) blev kontrolleret internt ved hjælp af de anbefalede kvalitetskontrolstammer, herunder dem med karakteriserede resistensmekanismer (Escherichia coli ATCC 35218, Klebsiella pneumoniae ATCC , Enterococcus faecalis ATCC 51299, Staphylococcus aureus NCTC 12493, Staphylococcus aureus ATCC med amoxicillin/clavulansyre AMC-3). 19,20,34 Tabel 2 opsumerer de validerede antimikrobielle stoffer til kvalitetskontrolstammer og stammer med karakteriserede resistensmekanismer. Medmindre andet er angivet, lå størrelserne for de fastlagte hæmningszoner for validerede antimikrobielle stoffer inden for de angivne diameterintervaller for hæmningszoner fra CLSI- og EUCAST. 19,20 Yderligere funktionsstudier ved brug af kliniske MRSA-isolater, der bærer meccresistanstypeb, indikerede, at BD Mueller Hinton II Agar nøjagtigt påviser mecc-positive MRSA-stammer. 34,35 PA Side 6 af 11

7 E. coli ATCC ,18 P. aeruginosa ATCC ,18 E. faecalis ATCC ,18 S. aureus ATCC E. coli ATCC ,18 S. aureus NCTC K. pneumoniae ATCC ,18 E. faecalis ATCC Tabel 2: Oversigt over valideret antimikrobielle stof og kvalitetskontrolstammer. Medmindre andet er angivet, lå hæmningszonerne inden for de respektive CLSI-/EUCAST-områder. 19,20 Antimikrobielt stof Diskindhold (µg) Amikacin AN-30 Amoxicillin/clavulansyre AMC-3 5 AMC-30 Ampicillin 3 AM-2 AM-10 Ampicillin-sulbactam SAM-20 Aztreonam ATM-30 Benzylpenicillin P-1 Cefadroxil CFR-30 1 Cefalexin CN-30 1 Cefepim FEP-30 Cefexim CFM-5 Cefotaxim CTX Cefoxitin FOX-30 Cefpodoxim CPD-10 Ceftarolin CPT-5 2 Ceftazidim CAZ Ceftibuten CFT-30 Ceftriaxon CRO-30 Cefuroxim CXM-30 Chloramphenicol C-30 Ciprofloxacin CIP-5 Clindamycin CC-2 Doripenem DOR-10 Ertapenem ETP-10 Erythromycin E-15 Fusidinsyre FA-10 Gentamicin GM-10 GM-30 Imipenem IPM-10 Levofloxacin LVX-5 Linezolid LZD-10 Mecillinam MEC-10 Meropenem MEM-10 Minocyclin MI-30 Moxifloxacin MXF-5 Mupirocin MUP-200 Nalidixinsyre NA-30 PA Side 7 af 11

8 E. coli ATCC ,18 P. aeruginosa ATCC ,18 E. faecalis ATCC ,18 S. aureus ATCC E. coli ATCC ,18 S. aureus NCTC K. pneumoniae ATCC ,18 E. faecalis ATCC Tabel 2: Fortsat Antimikrobielt stof Diskindhold (µg) Netilmicin NET Nitrofurantoin FM Norfloxacin NOR-10 Ofloxacin OFX-5 Pefloxacin PEF-5 Piperacillin PIP-30 2 Piperacillin-tazobactam PIP-30/TAZ Quinupristin-dalfopristin SYN-15 Rifampicin RA-5 Streptomycin S Teicoplanin TEC-30 Tetracyclin TE-30 Ticarcillin TIC-75 Ticarcillin-clavulansyre TIM-85 Tigecyclin TGC-15 Tobramycin NN-10 Trimethoprim TMP-5 4 Trimethoprimsulfamethoxazol 23,75 SXT1,25- Vancomycin VA-5, De indikerede hæmningszoner ligger inden for EUCAST- og CLSI-området. 1 CLSI anbefaler ikke test af det antimikrobielle stof. 2 CLSI og EUCAST anbefaler forskellige koncentration for det antimikrobielle stof. EUCAST-anbefalingerne blev fulgt. 3 Hæmningszonen for det antimikrobielle stof ligger ikke inden for det anbefalede EUCAST-område (Mueller Hinton II Agar, 150 mm og firkantede). 4 Hæmningszonen for det antimikrobielle stof ligger ikke inden for det anbefalede EUCAST-område (Mueller Hinton II Agar, 90 mm). 5 Hæmningszonen for det antimikrobielle stof ligger ikke inden for det anbefalede EUCAST- og CLSI-område (Mueller Hinton II Agar, 90 mm). 6 Hæmningszonen for det antimikrobielle stof ligger ikke inden for det anbefalede CLSI-område (Mueller Hinton II Agar, 90 og 150 mm), men inden for det anbefalede EUCAST-område. Procedurens begrænsninger Følsomhedstesten med diskdiffusion er designet til brug med rene kulturer alene. En Gramfarvning og en formodet identifikation af isolatet anbefales, inden følsomhedstesten klargøres. Med visse kombinationer af organismer og antimikrobielle stoffer har hæmningszonen måske ikke en skarpt afgrænset kant, hvilket kan føre til forkert tolkning. Forskellige faktorer er blevet identificeret, som kan påvirke følsomhedstestning med diskdiffusion. Disse omfatter medium, agardybde, diskstyrke, inokulatkoncentration, inokulatets alder og ph. 31 PA Side 8 af 11

9 Ukorrekt inokulatkoncentration kan medføre ukorrekte resultater. Hæmningszoner kan være for små, hvis inokulum er for tungt, og de kan være for store og svære at måle, hvis inokulum er for let. Det anbefales derfor på det kraftigste at følge CLSI- og EUCAST-anbefalingerne for håndtering af inokulum og de inokulerede plader for at minimere den potentielle risiko for ukorrekte resultater, som skyldes forkert håndtering. Fejlagtig opbevaring af antimikrobielle disks kan forårsage tab af styrke og et falskt følsomt resultat. Overdreven skrumpning af mediet pga. ukorrekt opbevaring kan føre til falskt følsomme resultater. En organismes in vitro-følsomhed over for et specifikt antimikrobielt stof betyder ikke nødvendigvis, at stoffet vil være effektivt in vivo. Der henvises til relevant litteratur for vejledning til tolkningen af resultater. 10,11,32,33 Bakterier, der kræver thymin eller thymidin, kan forekomme. 27,28 Disse organismer vokser måske ikke tilfredsstillende på Mueller Hinton Agar, der indeholder lave niveauer af thymin eller thymidin. Nye procedurer er blevet udviklet med brug af disks med højt indhold af gentamicin (120 mg) og streptomycin (300 mg) til screening for resistens på højt niveau mod aminoglycosider som indikation for, at et enterokok-isolat ikke påvirkes synergistisk ved en kombination af et penicillin eller glycopeptid plus et aminoglycosid. 7,28,29 Der henvises til CLSI-dokumenterne M2 og M7 og EUCAST for en fuldstændig diskussion af påvisning af MRSA, resistente enterokokker, ß-lactamase-producerende, gramnegative baciller med udvidet spektrum og andre testbegrænsninger. 7,8,10,11,30 Mueller Hinton II Agar er blevet påvist som værende pålideligt til påvisning af MRSA, som producerer en tåget hæmningszone om oxacillin-disks. 26 I tvivlstilfælde skal en ekstra metode såsom BD Oxacillin Screen Agar, anvendes. Inokulationsmetoden, tolkning, anbefalinger samt zonestørrelsernes grænser, der findes i dette dokument og anbefales i CLSI- og EUCAST-standarden, kan afvige fra nationale standarder. 7,8,31 LITTERATUR 1. Bauer, A.W., W.M.M. Kirby, J.C. Sherris, and M. Turck Antibiotic susceptibility testing by a standardized single disk method. Am. J. Clin. Pathol. 45: Matuschek, E., D.F. Brown, and G. Kahlmeter. Development of the EUCAST disk diffusion antimicrobial susceptibility testing method and its implementation in routine microbiology laboratories. Clin. Microbiol. Infect. 2014; 20 (4): Ryan, K.J., F.D. Schoenknecht, and W.M.M. Kirby Disc sensitivity testing. Hospital Practice 5: Barry, A.L., F. Garcia, and L.D. Thrupp An improved single-disk method for testing the antibiotic susceptibility of rapidly-growing pathogens. Am. J. Clin. Pathol. 53: Mueller, J.H., and J. Hinton A protein-free medium for primary isolation of the gonococcus and meningococcus. Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 48: Ericsson, H.M., and J.C. Sherris Antibiotic sensitivity testing. Report of an international collaborative study. Acta Pathol. Microbiol. Scand. Sec. B, Suppl CLSI. Approved standard: M02-A12 - Performance standards for antimicrobial disk susceptibility tests. CLSI, Wayne, PA, USA. Search for latest version at 8. EUCAST Disk Diffusion Method for Antimicrobial Susceptibility Testing. Search for latest version at 9. Woods, G.L., and J.A. Washington Antibacterial susceptibility tests: dilution and disk diffusion methods, p In P.R. Murray, E.J. Baron, M.A. Pfaller, F.C. Tenover, and R.C. Yolken (ed.), Manual of clinical microbiology, 6th ed. American Society for Microbiology, Washington, DC. 10. CLSI - Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility. CLSI supplement M100S. Wayne, PA: Clinical and Laboratory Standards Institute. Search for latest version at The European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing. Breakpoint tables for interpretation of MICs and zone diameters. Search for latest version at PA Side 9 af 11

10 12. Thornsberry, C., T.L. Gavan, and E.H. Gerlach Cumitech 6, New developments in antimicrobial agent susceptibility testing. Coordinating ed., J.C. Sherris. American Society of Microbiology, Washington, DC. 13. Koch, A.E., and J.J. Burchall Reversal of the antimicrobial activity of trimethoprim by thymidine in commercially prepared media. Appl. Microbiol. 22: Ferone, R., S.R.M. Bushby, J.J. Burchall, W.D. Moore, and D. Smith Identification of Harper-Cawston factor as thymidine phosphorylase and removal from media of substances interfering with susceptibility testing to sulfonamides and diaminopyrimidines. Antimicrob. Agents Chemother. 7: Reller, L.G., F.D. Schoenknecht, M.A. Kenny, and J.C. Sherris Antibiotic susceptibility testing of Pseudomonas aeruginosa: selection of a control strain and criteria for magnesium and calcium content in media. J. Infect. Dis. 130: Pollock, H.M., B.H. Minshew, M.A. Kenny, and F.D. Schoenknecht Effect of different lots of Mueller-Hinton Agar on the interpretation of the gentamicin susceptibility of Pseudomonas aeruginosa. Antimicrob. Agents Chemother. 14: D'Amato, R.F., and C. Thornsberry Calcium and magnesium in Mueller-Hinton agar and their influence on disk diffusion susceptibility results. Current Microbiol. 2: The European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing. Routine and extended internal quality control for MIC determination and disk diffusion as recommended by EUCAST. Search for latest version at The European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing. Routine and extended internal quality control for MIC determination and disk diffusion as recommended by EUCAST. Version 6.0, CLSI. Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing. 26 th ed. CLSI supplement M100S. Wayne, PA: Clinical and Laboratory Standards Institute; Wegner, D.L., C.R. Mathis, and T.R. Neblett Direct method to determine the antibiotic susceptibility of rapidly growing blood pathogens. Antimicrob. Agents Chemother. 9: Johnson, J.E., and J.A. Washington II Comparison of direct and standardized antimicrobial susceptibility testing of positive blood cultures. Antimicrob. Agents Chemother. 10: Waterworth, P.M., and M. Del Piano Dependability of sensitivity tests in primary culture. J. Clin. Pathol. 29: Hollick, G.E., and J.A. Washington II Comparison of direct and standardized disk diffusion susceptibility testing of urine cultures. Antimicrob. Agents Chemother. 9: Baker, C.N., C. Thornsberry, and R.W. Hawkinson Inoculum standardization in antimicrobial susceptibility testing: evaluation of overnight agar cultures and the rapid inoculum standardization system. J. Clin. Microbiol. 17: Hindler, J.A., and C.B. Anderbied Effect of the source of Mueller-Hinton agar and resistance frequency on the detection of methicillin-resistant Staphylococcus aureus. J. Clin. Microbiol. 21: Maskell, R., O.A. Okubadejo, R.H. Payne, and L. Pead Human infections with thymine-requiring bacteria. J. Med. Microbiol, 11: Haltiner, R.C., P.C. Migneault, and R.G. Robertson Incidence of thymidinedependent enterococci detected on Mueller-Hinton agar with low thymidine content. Antimicrob. Agents Chemother. 18: Murray, B.E The life and times of the Enterococcus. Clin. Microbiol. Rev. 3: CLSI. Approved standard: M7. Methods for dilution antimicrobial susceptibility tests for bacteria that grow aerobically. CLSI, Wayne, PA, USA.Search for latest version at Jorgensen, J.H., and J.D. Turnidge Susceptibility test methods: dilution and disk diffusion methods. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. PA Side 10 af 11

11 32. Washington, J.A., and G.L. Woods Antimicrobial susceptibility tests: dilution and disk diffusion methods. P In Muarry, P.R., Baron, E.J., Pfaller, M.A., Tenover, F:C:, and Yolken, R:H. (ed.), Manual of clinical microbiology, 6 th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C Neumann, M.A., D.F. Sahm, C. Thornsberry, J.E. McGowan, Jr. Cumitech 6A, New developments in antimicrobial agent susceptibility testing: a practical guide. Coordinating ed., J.E. McGowan, Jr. American Society of Microbiology, Washington, D.C Data on file. Becton Dickinson. 35. Skov, R., A.R. Larsen, A. Kearns, M. Holmes, C. Teale, G. Edwards, and R. Hill. Phenotypic detection of mecc-mrsa: cefoxitin is more reliable than oxacillin J. Antimicrob. Chemother. 69: EMBALLERING/BESTILLING BD Mueller Hinton II Agar (Stacker 90 mm-plader; [standardstørrelse]) Katalognummer Plademedier klar til brug, 20 plader Katalognummer Plademedier klar til brug, 120 plader BD Mueller Hinton II Agar (150 mm) Katalognummer Plademedier klar til brug, 20 plader BD Mueller Hinton II Agar, Square (120 x 120 mm) Katalognummer Plademedier klar til brug, 20 plader YDERLIGERE OPLYSNINGER Kontakt den lokale BD-repræsentant angående yderligere oplysninger. Becton Dickinson GmbH Tullastrasse Heidelberg/Tyskland Telefon: Fax: Reception_Germany@europe.bd.com Varemærker tilhører deres respektive ejere BD. BD, BD-logoet og alle andre varemærker tilhører Becton, Dickinson and Company. PA Side 11 af 11