Analysevejledning 083-216 P(fPt) Glucose; stofk. (Diagn.)(mmol/l) DNK35842 Roche/Hitachi Modular P Initialer Navn Dato Udarbejdet af: KK, MSa Karin Knudsen, Michele Saldo 4. feb. 2003 Sidst revideret af: Gennemlæst af: Gennemlæst af: Gennemlæst af: Godkendt af: Revisionsskema Udgave Ikrafttrædelsesdato: Kapitel og afsnit: 1 25. jun. 2003 Distribution: (1) Vejledningsarkiv, (2) Analyseplads Side 1 af 9
INDHOLDSFORTEGNELSE 1 FORMÅL OG BAGGRUND... 3 2 ANALYSE- OG MÅLEMETODE... 4 2.1 Analyseprincip... 4 2.2 Måleprincip... 4 3 KEMIKALIER OG REAGENSER... 4 3.1 Kalibrator... 5 3.2 Kontroller... 5 4 UDSTYR... 6 5 PRØVEMATERIALE... 6 6 KALIBRERING OG KVALITETSKONTROL... 6 6.1 Kalibrering... 6 6.2 Kvalitetskontrol - (Produktionskontrol/procesovervågning)... 6 6.3 Analysespecifikationer... 7 6.4 Analysemåleområde... 7 7 FREMGANGSMÅDE... 7 7.1 Praktisk udførelse... 7 7.2 Beregningsmetode... 7 8 RESULTATVURDERING... 7 9 SVARAFGIVELSE... 7 10 MANGELLISTER...8 11 REFERENCEINTERVAL... 8 12 NØDPROCEDURE... 8 13 DIVERSE... 8 14 LITTERATUR... 8 15 BILAG... 8 16 ARBEJDSPLADSBRUGSANVISNINGER... 8 Side 2 af 9
1 FORMÅL OG BAGGRUND Glucose er cellernes primære energi-kilde. Kulhydrater indtaget med kosten nedbrydes til glucose, der transporteres ind i cellerne. Ved hjælp af forskellige reaktioner, som tilsammen kaldes Glycolyse og Krebs cyclus, frigøres nu glucosens energi. Glucose-overskuddet fra kosten omdannes til glycogen i et lager, som kan gemmes til senere nedbrydning til glucose imellem måltiderne. Dette har især betydning i musklerne, som lagrer glycogen til eget brug, og i leveren, som lagrer glycogen til brug for resten af kroppens organer, fx hjernen. Reaktionerne styres af forholdet mellem hormonerne insulin og glukagon. Hvis balancen hælder mod insulin (efter et måltid), sænkes blodsukkeret, idet det transporteres ind i cellerne mhp. oplagring. Hvis balancen hælder mod glukagon (mellem måltiderne og ved sult), dannes glucose af den oplagrede glycogen for at holde blodsukkeret oppe i normalområdet. Analysering for glucose kan opdeles således: 1. Måling af plasma-glucose til diagnostik af sukkersyge (diabetes mellitus). Denne vejledning. 2. Måling af glucose i blod eller urin ved kendt diabetes mellitus eller ved mistanke om hypo- eller hyperglykæmi. Se vejledning 012-215/ B,U-Glucose; stofk. 3. Måling af glucose i cerebrospinalvæske, ledvæske og peritonealvæske på mistanke om infektion. Se vejledning 021-215/ Csv,m.fl.-Glucose; stofk. Ad 1. Ved diabetes mellitus type 1 (sukkersyge) producerer bugspytkirtlen ikke længere insulin. Ved diabetes mellitus type 2 (tidligere kaldt gammelmands sukkersyge) reagerer cellerne ikke længere på den insulin, der dannes. Derfor vil man have et blodsukker, der er for højt, hvilket benyttes til at diagnosticere sukkersygen. Da det er naturligt at have et højt blodsukker lige efter et måltid, gælder referenceintervallet kun hvis patienten har fastet og afholdt sig fra tobak i minimum 8 timer. For at gøre resultatet helt præcist, tages prøven i NaF (Natrium-Flond)-glas og transporteres isafkølet til laboratoriet; skal centrifugeres med det samme. The American Diabetes Association (ADA) og WHO er fremkommet med nye rekommendationer for diagnostik af diabetes (Scand.J Clin Lab Invest 2001;61:169 204). Det anbefales at benytte faste plasmaglucose-koncentration, bestemt mindst 2 gange med dages mellemrum. Fastende patient veneplasma glucosekoncentration forkortes: (fpt)vpg Ad 2 og 3 se respektive vejledninger. Side 3 af 9
2 ANALYSE- OG MÅLEMETODE 2.1 Analyseprincip Glucose analyseres vha. en koblet enzymreaktions metode. Enzymet hexokinase katalyserer phosphoryleringen af glucose til glucose-6-phosphat under tilstedeværelse af co-enzymet ATP: HK Glucose + ATP Glucose-6-phosphat + ADP. Det dannede Glucose-6-phosphat oxideres til Gluconat-6-phosphat vha. enzymet G-6-PDH under tilstedeværelse af co-enzymet NADP +, som herved reduceres til NADPH: G-6-PDH Glucose-6-phosphat + NADP + Gluconat-6-phosphat + NADPH + H + Reaktionen er specifik for glucose. Mg 2+ er tilsat reagenset som vigtig co-faktor for ATP/ADP-reaktionen. Enzymer og co-enzymer: HK = (EC 2.7.1.1) Hexokinase. G6-PDH = (EC 1.1.1.49) Glucose-6-phosphatdehydrogenase. ATP = Adenosin-trifosfat, NADP = Niacin-Adenin-dinucleotidfosfat. 2.2 Måleprincip NADPH (reduceret co-enzym) absorberer lys ved 340 nm, hvorimod NADP + (oxideret coenzym) ikke absorberer lys ved denne bølgelængde. NADP s omdannelse til NADPH er direkte proportional med Glucose koncentrationen, hvorved der registreres en absorbansstigning. Der måles vha. en 2-punkts endepunkt metode, målt over 10 min. Endepunkt måles ved den 34. fotometerpassage, og der korrigeres for prøveblind ved den 10. fotometerpassage. Der benyttes bichromatisk fotometerprincip med hovedbølgelængde på 340 nm. og bibølgelængde på 700nm. 3 KEMIKALIER OG REAGENSER Der anvendes reagenser fra Roche, GLU, Gluco-quant Glucose/HK katalog nr. 1 876 899 Applikation barkode ACN 312 OPBEVARING: ved 4 C. HOLDBARHED: se udløbsdato. Side 4 af 9
Reagens 1 (R1) Buffer/co-enzymer, flaske á 66 ml. indeholder: TRIS buffer, ph 7,8; 100 mmol/l Mg ++ 4 mmol/l ATP 1,7 mmol/l NADP Konserveringsmiddel Reagenset er klar til brug. Påfør dato og initialer ved isætning på maskinen i reagensbakkens ydre ring. OBS: Læs bilag for manuel registrering før påsætning af reagens. HOLDBARHED: 28 dage på apparatet. 1,0 mmol/l Reagens 2 (R3) Buffer/enzymer, flaske á 16 ml. indeholder: HEPES buffer, ph 7.0 30 mmol/l Mg ++ 4 mmol/l Hexokinase 8,3 U/ml Glucose-6-phosphatdehydrogenase 15 U/ml Konserveringsmiddel Reagenset er klar til brug. Påfør dato og initialer ved isætning på maskinen i reagensbakkens indre ring. OBS: Læs bilag for manuel registrering før påsætning af reagens. HOLDBARHED: 28 dage på apparatet. NaCl (0,9%) 100 ml fra H:S apotek 154 mmol/l OPBEVARING: rumtemperatur HOLDBARHED: se udløbsdato. Efter anbrud 1 uge. 3.1 Kalibrator C.f.a.s. (Calibrator for automated system) fra Roche Katalog nr. 759 350 Koncentrationen er lot-specifik. Se C.f.a.s. value sheet for værdier. Fremstilling: se noten Fremstilling af kalibratorer og kontroller OPBEVARING: ved 4 C HOLDBARHED: uåbnet: se udløbsdato rekonstitueret: 1 uge ved 4 C 1 måned ved - 20 C 3.2 Kontroller Precinorm U (PN), katalog nr. 171743 Precipath U (PP), katalog nr. 171778 Koncentrationen er lot-specifik, se value sheet for værdier. Fremstilling: se noten fremstilling af kalibratorer og kontroller OPBEVARING: ved 4 C HOLDBARHED: uåbnet: se udløbsdato rekonstitueret: 1 uge ved 4 C 1 måned ved - 20 C Side 5 af 9
4 UDSTYR Roche/Hitachi Modular modul P. Netværks PC med fejlseddelprinter. Hitachi-kopper med låg. Betjeningsvejledning til Roche/Hitachi Modular analytics. 5 PRØVEMATERIALE Blodprøvetagning preanalytisk (notat N2001_05_RFS.doc): - Minimum 8 timers faste og ingen tobaksrygning - Ingen hård fysisk aktivitet indenfor 2 timer før blodprøvetagning - Siddende, hvilende position minimum 15 min. inden blodprøvetagning Blodprøven tages i KLM-140 rør eller KLM-141 rør (med natriumfluorid) Efter blodprøvetagning skal prøven straks anbringes i isvand eller isboks (0 C) og centrifugeres inden 60 min. (standardcentrifugering) HOLDBARHED: max 1 time ved 4 C plasma afpipetteret til andet prøverør 48 timer ved 4 C 6 KALIBRERING OG KVALITETSKONTROL Metoden er standardiseret overfor Isotop-massespektrometri metoden, og kalibreret med primært reference materiale. 6.1 Kalibrering Der foretages reagensblindbestemmelse ved skift af reagens med samme lot.nr.: St.1 NaCl 154 mmol/l anbringes i et sort kalibratorrack i følge load-list. Se- og følg betjeningsvejledning afsn. 2.1. Der foretages 2 punkt lineær kalibrering ved skift af reagens lot. nr., samt evt. ved udredning af analyseproblemer: St. 1 NaCl 154 mmol/l og St. 2, C.f.a.s. anbringes i et sort kalibratorrack i følge load-list. Se- følg betjeningsvejledning afsn. 2.2. Kalibreringsdata gemmes i mappen Kalibreringer og Kontroller under dags-dato i 2 måneder. Samles derefter i kasser og gemmes på depot i 5 år. 6.2 Kvalitetskontrol - (Produktionskontrol/procesovervågning) Til kontrol af analysen benyttes Precinorm U og Precipath U. Disse anbringes i hvid kontrolrack i følge load-list. Se betjeningsvejledning afsn. 2.1. Kontrol analyseres ifølge betjeningsvejledning, afsn. 2. Kontrolregler- og afvigelse: Se betjeningsvejledning afsn. 2.4, 2.4.1 og 2.4.2, samt skema kontrolgrænser på analysepladsen. Kontrolresultater lagres i Modular s hukommelse dags-dato. Kontroludskrifter arkiveres i mappen Kalibreringer og Kontroller under dags-dato i 2 måneder. Samles derefter i kasser og gemmes på depot i 5 år. Deltager i ekstern kvalitetskontrol Side 6 af 9
6.3 Analysespecifikationer Impræcision: Maksimal tilladelig dag til dag variation CV% (KB fastlagt): 4% Detectionsgrænse (Roche): 0,11 mmol/l Specificitet: Ikke angivet. Interferens (Roche): Icterus: Der er ingen signifikant interferens op til et indeks på 60 for konjugeret- og ukonjugeret bilirubin, hvilket ca. svarer til total bilirubin koncentration på 1026 µmol/l. Hæmolyse: Der er ingen signifikant interferens op til et indeks på 1000, hvilket ca. svarer til en hæmoglobin koncentration i plasma på 621 µmol/l Lipæmi (Intralipid). Der er ingen signifikant interferens op til et indeks på 1000, hvilket ca. svarer til en triglycerid koncentration på 22,6 mmol/l. Der er dårlig korrelation mellem turbiditeten og triglycerid koncentrationen. Akkuratesse: Ikke angivet. 6.4 Analysemåleområde Analysen er lineær i området (standard): 0,11 41,6 mmol/l Udvidet måleområde (maskinel fortynding): 0,11 91,5 mmol/l Manuel fortynding: Nej 7 FREMGANGSMÅDE 7.1 Praktisk udførelse Prøver til Diag. glucose sorteres til grå rack med blå farvemarkering. Prøverne skal manuelt indtastes til modular, hvorpå racks ne anbringes i sample loader. Se betjeningsvejledning afsn. 3.3.1. 7.2 Beregningsmetode Udføres af modular 8 RESULTATVURDERING Analyseresultaterne kan godkendes hvis kontrolværdierne ligger inden for de fastlagte grænser og resultaterne er uden bemærkninger og flag. Prøver med koncentration > 41,6 mmol/l bliver automatisk analyseret om i decrease funktionen. Prøver med koncentrationer < 0,11 mmol/l omanalyseres i increase funktionen. 9 SVARAFGIVELSE Apparatet er tilsluttet laboratoriets informationssystem. Resultaterne tastes manuelt hertil i enheden mmol/l og med 1 decimal. Hvis analyseresultatet er <2,0 mmol/l eller > 20,0 mmol/l, skal svar straks ringes til rekvirerende afdeling. Side 7 af 9
10 MANGELLISTER Tages ud i henhold til listen Mangelliste til Modular. 11 REFERENCEINTERVAL P(fPt)-Glucose; stofk. (Diagn)(mmol/l): 4,5 6,4 mmol/l 12 NØDPROCEDURE Kan opsættes på andet P - modul 13 DIVERSE P(fPt)-Glucose; stofk. (Diagn)(mmol/l) er benævnt D-GLU på Modular og analyseres på P modulet. Application code: ACN 312 14 LITTERATUR Burtis CA, Ashwood ER et al: Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3. ed., 1999, kap. 24 Devlin TM: Textbook of Biochemistry With Clinical Correlations, 5. ed., 2002, kap. 13-15 Application sheet, Roche. 2000-09-1934635001 01 06 Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 2.ed. side 958-960. Notat: Fastende P-glucose, diagnostisk. N2001_05_RFS.doc Scand.J Clin Lab Invest 2001;61:169 204 15 BILAG Bilag 1: Manuel registrering af reagenser påsat Modular. 16 ARBEJDSPLADSBRUGSANVISNINGER Se Betjeningsvejledning til Roche/Hitachi Modular analytics. Side 8 af 9
Bilag 1: Manuel registrering af reagenser til modular (D-GLU) Manuel registrering af reagenser til modular (D-GLU) Efter blanding af reagenser påsættes ny stregkode-etikette oven på den eksisterende. Disse benyttes til manuel registrering. Påfør dato og ID på etikketten. Etiketten er en mærkat med en stregkode til identificering af reagens i en åben kanal. Der benyttes etikette til både reagens 1 og reagens 2. Det er samme etikette uanset flaskestørrelse. Etiketterne er placeret på hylden i køleskabet sammen med glucose reagenset, der er pakket i en brun kuvert og kaldes: Open channel Label 20 ml. 129950. Fremgangsmåde: Kontrolér på hvilket P-modul, analysen er opsat. Låget til reagenstallerkenen åbnes, og der observeres en ledig plads. Låget lukkes uden at påsætte reagenser. Registrering: Markér hovedmenuen Reagent vælg Manuel Registration. På oversigten klikkes på det anvendte modul. Nyt billede, P- Manuel Registration P module, fremkommer. Ved: Disk number Vælg 1(for reagens 1) Position Indtast nr. for den observerede ledige plads Markér Test Klik med musen Vælg Reagenstype (for reagens 1) ved Vælg Bottle Size (f.eks. 70 ml. flaskestørrelse) Tryk OK (lyser gult) Gentag denne procedure, men vælg 2 (for reagens 2 -timingen), eller 3 (for reagens 3 timingen). Sæt derefter reagensflaskerne i den valgte position. Side 9 af 9
Analyselogbog for 083-215 P(fPt) Glucose; stofk. (Diagn.)(mmol/l) Prøvetagningsrør Dato Init. Prøvetagningsrør Bemærkninger Feb. 2003 KK KLM-140 rør eller KLM- Skal straks anbringes i isvand/isboks 141 Metode og reagens Dato Init. Metode Reagens Bemærkninger Feb. 2003 KK Hexokinase metode Roche Reagens som til øvrige glucose analyser
Analyselogbog for 083-215 P(fPt) Glucose; stofk. (Diagn.)(mmol/l) Referenceinterval og enhed Dato Init. Referenceinterval Enhed Bemærkninger Feb. 2003 KK P(fPt)-Glucose; stofk. (Diagn) (mmol/l): 4,5-6,4 mmol/l D-GLU
Analyselogbog for 083-215 P(fPt) Glucose; stofk. (Diagn.)(mmol/l) Kalibrator Dato Init. Kalibrator Bemærkninger Feb. 2003 KK Calibrator for automated systems (C.f.a.s.) Roche
Analyselogbog for 083-215 P(fPt) Glucose; stofk. (Diagn.)(mmol/l) Revideret / ændret / gennemset Udgave/dato Init. Årsag til revision 1/Jun. 2003 KK Ny komponentbestemmelse. Ny vejledning.