Sample & Assay Technologies. artus C. trachomatis TM PCR Kit Håndbog. Januar Kvantitativ in vitro diagnostik
|
|
- Torben Eskildsen
- 8 år siden
- Visninger:
Transkript
1 Januar 2015 artus C. trachomatis TM PCR Kit Håndbog 24 (katalog nr ) 96 (katalog nr ) Kvantitativ in vitro diagnostik Til anvendelse med ABI PRISM 7000, 7700 og 7900HT Sequence Detection Systems Version , DA QIAGEN GmbH, QIAGEN Strasse 1, Hilden, TYSKLAND R DA Sample & Assay Technologies
2 QIAGEN prøve- og analyse-teknologier QIAGEN er den førende leverandør af innovative prøve- og analyseteknologier, der muliggør isolation og påvisning af indholdet i enhver biologisk prøve. Vore avancerede højkvalitetsprodukter og -service garanterer succes fra prøve til resultat. QIAGEN sætter standarder i: Oprensning af DNA, RNA og proteiner Nucleinsyre- og proteinanalyser microrna-undersøgelser og RNAi Automatisering af prøve- og analyse-teknologier Vor opgave er at bringe Dem i stand til at opnå enestående succes og gennembrud. For yderligere information, se
3 Indholdsfortegnelse 1. Indhold Opbevaring Nødvendige ekstra-materialer og instrumenter Almindelige sikkerhedsregler Information om smittefare Real-Time PCR princip Produktbeskrivelse Protokol Før analysen: Udtagning, opbevaring og transport af prøver DNA-isolering Intern Kontrol Kvantificering Forberedelse af PCR Programmering af ABI PRISM SDS Analyse Fejlkilder Specifikationer Analytisk sensitivitet Specificitet Præcision Robusthed Reproducerbarhed artus C. trachomatis TM PCR Kit 01/2015 3
4 11.6 Diagnostisk evaluering Særlige anvisninger til brug af produktet Sikkerhedsinformationer Kvalitetskontrol Litteratur Symbolforklaring artus C. trachomatis TM PCR Kit 01/2015
5 artus C. trachomatis TM PCR Kit Til anvendelse med ABI PRISM 7000, 7700 og 7900HT Sequence Detection Systems. Bemærk: artus C. trachomatis TM PCR Kit kan hverken bruges sammen med GeneAmp 5700 SDS eller med 384 er pladeformatet af ABI PRISM 7900HT SDS. 1. Indhold Påskrift og indhold Art. Nr reaktioner Art. Nr reaktioner Blå C. trachomatis TM Master 2 x 12 reaktioner 8 x 12 reaktioner Rød Rød Rød Rød C. trachomatis TM QS 1 1 x 10 4 cop/µl 1 x 200 µl 1 x 200 µl C. trachomatis TM QS 2 1 x 10 3 cop/µl 1 x 200 µl 1 x 200 µl C. trachomatis TM QS 3 1 x 10 2 cop/µl 1 x 200 µl 1 x 200 µl C. trachomatis TM QS 4 1 x 10 1 cop/µl 1 x 200 µl 1 x 200 µl Grøn C. trachomatis TM IC 1 x µl 2 x µl Hvid Water (PCR grade) 1 x µl 1 x µl QS = Kvantificeringsstandard IC = Intern Kontrol 2. Opbevaring artus C. trachomatis TM PCR Kit opbevares ved 30 til 15 C og er holdbart indtil datoen, der er angivet på etiketten. Gentagen optøning og nedfrysning (> 2 x) bør undgås, da sensitiviteten derved forringes. Ved uregelmæssig brug skal reagenserne derfor aliquoteres. Hvis det er nødvendigt at opbevare komponenterne ved +4 C, må dette tidsrum ikke vare længere end fem timer. artus C. trachomatis TM PCR Kit 01/2015 5
6 3. Nødvendige ekstra-materialer og instrumenter Pudderfri engangs laboratoriehandsker DNA-isoleringskit (se 8.2 DNA-isolering) Pipetter (justerbare) Sterile pipettespidser med filter Vortex-mixer Bordcentrifuge med rotor til 2 ml-reaktionsbeholdere Centrifuge med rotor til mikrotiterplader (valgfri) 96-brønds reaktionsplade/reaktionsbeholdere til optiske målinger med tilhørende optiske lukkematerialer * (se 8.5 Forberedelse af PCR) 96-brønds todelt opbevaringsrack til anvendelse med optiske reaktionsbeholdere (96-Well Tray/Retainer Set, kat.-nr , Applied Biosystems), se 8.5 Forberedelse af PCR Kompressionsmåtte til anvendelse med selvklæbende optiske folier (Optical Cover Compression Pads, kat.-nr , Applied Biosystems), se 8.5 Forberedelse af PCR Applikator til lukning af reaktionspladerne ved anvendelse med selvklæbende optiske folier (Adhesive Seal Applicator Kit, kat.-nr , Applied Biosystems) ABI PRISM 7000, 7700 eller 7900HT SDS Bemærk: Inden instrumentet sættes igang kræves der en korrekt kalibrering af farvestofferne (Pure Spectra Component File) og baggrunden (Background Component File). * Anvendelsen af reaktionsbeholdere til optiske målinger med hvælvede låg er kun tilladt til ABI PRISM 7700 SDS og kræver en omstilling af belysningstiden (se Programmering af ABI PRISM 7700 SDS, Vigtige ekstraindstillinger). 6 artus C. trachomatis TM PCR Kit 01/2015
7 4. Almindelige sikkerhedsregler Følgende anvisninger skal altid overholdes af brugeren: Brug sterile pipettespidser med filter. Positivt materiale (prøver, kontroller, amplifikater) skal opbevares, oprenses og tilsættes reaktionsblandingen i et separat rum, adskilt fra de øvrige reagenser. Optø alle komponenter ved stuetemperatur, inden testen startes. Bland komponenterne grundigt, og centrifugér kort. Der bør arbejdes hurtigt på is eller i køleblokken. 5. Information om smittefare Bakterier af slægten Chlamydia har verden over en stor epidemiologisk betydning. Chlamydia trachomatis (serovarer D - L) hører verden over til de hyppigste smitstoffer for seksuelt overførte sygdomme (STD - sexually transmitted diseases). De 16 serovarer af C. trachomatis udløser forskellige sygdomme: Serovarerne A, B, Ba og C forårsager trachoma, som er en i troperne udbredt kronisk recidiverende sygdom af bindehinden og hornhinden. Serovarerne D - K forårsager seksuelt overførbare urogenitale infektioner og øjeninfektioner, samt efter perinatal overførsel infektioner hos nyfødte. Serovarerne LGV I - III forårsager Lymphogranuloma venereum, en seksuelt overførbar sygdom, som overvejende forekommer i troperne. Trachoma optræder næsten udelukkende i tropiske lande under mangelfulde hygiejniske forhold. Trachoma er verden over den hyppigste øjnesygdom og er efter katarakt den næsthyppigste årsag til blindhed. Det antages, at cirka 150 millioner mennesker er inficerede. Hos cirka 6 millioner af dem har den medført blindhed. I industrilandene er chlamydia de hyppigste bakterielle smitstoffer af urogenitalinfektioner. I Tyskland skønnes antallet af genitale artus C. trachomatis TM PCR Kit 01/2015 7
8 nyinfektioner til at være cirka om året. Incidens for Lymphogranuloma venereum (Lymphogranuloma inguinale, Durand- Nicolas-Favre-sygdom) aftager verden over. Denne seksuelt overførbare sygdom forekommer dog stadig endemisk i Asien, Afrika, Sydamerika og dele af Caribien. 6. Real-Time PCR princip Ved patogen diagnostik ved hjælp af polymerase kædereaktion (eng. Polymerase Chain Reaction = PCR) bliver specifikke områder af smitstofgenomet amplificeret. Detektionen foregår via Real-Time PCR ved hjælp af fluorescensfarver. Disse er som regel koblet til oligonukleotid-prober, som binder sig specifikt til PCR-amplifikatet. Detektionen af fluorescensintensiteterne i løbet af Real-Time PCR-kørslen gør det muligt at påvise og kvantificere produkterne, uden at skulle åbne prøverørene igen efter PCR-kørslen. (Mackay, 2004) 7. Produktbeskrivelse artus C. trachomatis TM PCR Kit er et brugsklart system til påvisning af C. trachomatis-dna ved hjælp af polymerase kædereaktion (PCR) i ABI PRISM 7000, 7700 og 7900HT Sequence Detection System. C. trachomatis TM Master indeholder reagenser og enzymer til den specifikke amplifikation af en 100 bp lang sekvens af C. trachomatis-genomet. Detektionen af amplifikatet foregår ved måling af FAM-fluorescensen i ABI PRISM SDS. Derudover indeholder artus C. trachomatis TM PCR Kit et andet heterologt amplifikationssystem, som bruges til påvisning af en eventuel PCR-inhibition. Denne bliver påvist som Intern Kontrol (IC) via måling af VICfluorescensen. Detektionsgrænsen for den analytiske C. trachomatis-pcr (se 11.1 Analytisk sensitivitet) bliver derved ikke reduceret. Der vedlægges eksterne positive kontroller (C. trachomatis TM QS 1-4), som bruges til 8 artus C. trachomatis TM PCR Kit 01/2015
9 kvantificering af smitstoffet. Læs dertil afsnittet 8.4 Kvantificering. 8. Protokol 8.1 Før analysen: Udtagning, opbevaring og transport af prøver Bemærk: Alle prøver skal behandles som potentielt smittefarlige. Tilladt er kun følgende prøvematerialer, og hos dem skal de følgende regler og forskrifter til udtagning, opbevaring og transport i hvert tilfælde overholdes: 1. Urin (kvinder og mænd). 2. Øjen-, endocervikal- og uretral-podninger. 3. Sperma. For at sikre en høj prøvekvalitet skal prøvetransporten til undersøgelseslaboratoriet foregå så hurtig som mulig. Prøverne skal transporteres under de angivne temperaturbetingelser Udtagning af prøver 1. Urinprøver Patienten må ikke have urineret inden for de forudgående to timer ml morgenurin samles i en ren polypropylenbeholder uden konserveringsmiddel. Brug ikke urinprøver, som er samlet i beholdere med konserveringsmidler. Prøvebeholderne lukkes og skrives på. Følg forskrifterne til opbevaring og transport. 2. Podningsprøver Til udtagning af øjen-, endocervikal-, og uretral-podningsprøver anvendes følgende materialer: Brug kun podepinde med Dacron -, rayon- eller calciumalginat-spidser på skafter af kunststof. Brug ingen podepinde med træ- eller aluminiumskaft. artus C. trachomatis TM PCR Kit 01/2015 9
10 Øjen-, endocervikal- og uretralpodnings-prøver kan samles og transporteres i 1-3 ml af de følgende medier: AMPLICOR STM (Specimen Transportmedium, Roche, Inc.) Swab Specimen Collection Kit (Digene Corporation) Cervical Sampler (Digene Corporation) STD Swab Specimen Collection and Transport Kit (Roche, Inc.) Venturi Transystem (egnet til aerobe og anaerobe), sterile transportrør til podninger (SARSTEDT AG & Co.) SPG CTM (Chlamydia Transport Medium, MicroTest, Inc.) M4 CTM (MicroTest, Inc.) 2SP CTM (Bartels, Inc.) Bartels ClamTrans CTM (Bartels, Inc.) Chlamydia-vatpinde (MAST DIAGNOSTICA) IDEIA Chlamydia Specimen Collection Kit (DakoCytomation) Lad vatpinden blive i kulturtransportmediet. Luk prøvebeholderen, og skriv på den. Følg opbevarings- og transportforskrifterne *. Brug en anbefalet fremgangsmåde til udtagning af cylinder- og pladeepithelceller efter fjernelsen af cervikalslim. 3. Spermaprøver Prøveudtagningen skal først gennemføres to til fire dage efter den sidste ejakulation. Spermaprøven skal udtages den samme dag, den sendes til laboratoriet. Ved anvendelse af rutinemæssige laboratoriemetoder kan spermaprøven udtages på følgende måder: via masturbation direkte ind i en steril, ren og tør prøvebeholder. Sørg for, at hele prøven kommer direkte ind i beholderen. Skulle dele af prøven gå tabt, skal dette nævnes i prøveudtagnings-protokollen. * Biosafety in Microbiological Laboratories Richmond, J.Y. and McKinney, R.W. eds. 4th Edition. HHS Publication Number (CDC) Referencer: 1) Andrology Laboratory University of Utah School of Medicine ( 2) Andrology Institute of America ( 10 artus C. trachomatis TM PCR Kit 01/2015
11 via masturbation med anvendelse af et kondom. Fjern kondomet efter ejakulationen. Det er vigtigt, at kondomet lukkes med et gummibånd, for at holde på spermaprøven i kondomet. Læg derefter kondomet i en transportbeholder. Vigtigt: Benyt kun prøvebeholdere uden konserveringsmidler hhv. kondomer uden smøremiddel og uden kunstige ekstrastoffer (f.eks.: farvestoffer). Spermaprøven skal stilles et mørkt sted 30 til 45 minutter (f.eks. i en skuffe eller i et skab), indtil den er blevet flydende. Lige efter prøven er blevet flydende, skal den fryses ned i et kryorør ved -20 C eller koldere Opbevaring af prøver Testeffekten kan blive negativt påvirket af rutinemæssig nedfrysning eller længere opbevaring af prøverne. 1. Urinprøver Hvis testen af urinprøverne sker inden for 24 timer, kan prøverne lagres ved stuetemperatur (19-23 C). Ved en test inden for syv dage efter udtagningen skal prøverne opbevares i køleskabet ved 2-8 C. Urinprøver, som ikke forarbejdes inden for syv dage, kan opbevares op til 30 dage ved -20 C eller koldere. 2. Podningsprøver Prøverne opbevares ved 2-8 C. (Hvis podningsprøverne skal sendes til et undersøgelseslaboratorium, skal de forsendes så hurtigt som muligt i overensstemmelse med laboratorieforskrifterne vedrørende transport af chlamydiaprøver). Podningsprøver, som ikke testes lige efter indlevering til laboratoriet, skal opbevares ved 2-8 C og forarbejdes inden for syv dage. Podningsprøver, som ikke kan behandles inden for syv dage efter artus C. trachomatis TM PCR Kit 01/
12 udtagningen, skal opbevares ved -20 C eller koldere og testes inden for 30 dage efter udtagningsdatoen. 3. Spermaprøver Prøverne skal opbevares ved -20 C eller koldere. Spermaprøver som ikke testes direkte efter ankomsten i laboratoriet, skal opbevares ved -20 C eller koldere og testes inden for 30 dage efter udtagningsdatoen Transport af prøver 1. Urinprøver Urinprøver, der skal sendes, skal opbevares i køleskabet ved 2-8 C inden forsendelsen. Prøverne skal sendes efter de gældende lokale og statslige forskrifter for transport af sygdomsfremkaldende stoffer *. 2. Podningsprøver Podningsprøver skal transporteres kølet. Hvis podningsprøverne skal sendes til et laboratorium, skal de forsendes så hurtigt som muligt efter udtagningen i overensstemmelse med laboratorieforskrifterne vedrørende transport under køling. Prøverne skal forsendes efter de gældende lokale og statslige forskrifter for transport af sygdomsfremkaldende stoffer *. 3. Spermaprøver Hvis spermaprøverne skal sendes til et undersøgelseslaboratorium, skal de sendes den samme dag som de blev udtaget, i overenstemmelse med laboratorieforskrifterne for transporten af chlamydiaprøver. Derudover skal bemærkes, at spermaprøver skal forsendes i kølet tilstand. Prøverne skal forsendes efter de gældende lokale og statslige forskrifter for transport af sygdomsfremkaldende stoffer *. * International Air Transport Association. Dangerous Goods Regulations, 41st Edition, artus C. trachomatis TM PCR Kit 01/2015
13
14 8.2 DNA-isolering DNA-isoleringskits tilbydes af forskellige producenter. Prøvevoluminer til DNAisoleringsproceduren afhænger af den benyttede protokol. Tilsæt den anbefalede prøvemængde til oprensningen. Følgende isoleringskits anbefales: Prøvemateriale Urin, podninge r Sperma, podninge r Oprensningskit QIAamp Viral RNA Mini Kit QIAamp (50) DNA Mini Kit (50) Katalognummer Producent Carrier-RNA QIAGEN indeholdt QIAGEN ikke indeholdt Anvendelsen af carrier-rna er af afgørende betydning for oprensningens effektivitet og dermed for DNA-/RNA-udbyttet. Hvis det anvendte isoleringskit ikke indeholder carrier-rna, anbefales der ved oprensningen af nukleinsyrer af cellefri kropsvæsker eller materialer med ringe DNA- /RNA-indhold (f.eks. CSF), en tilsætning af carrier-rna (RNAhomopolymer Poly(A), Amersham Biosciences, kat.-nr ). Følg så venligst den følgende fremgangsmåde: a) Hertil resuspenderes den lyophiliserede carrier-rna i elueringsbufferen (ikke i lysisbuffer) af isoleringskittet (f.eks. AE-buffer fra QIAamp DNA Mini Kit) og fremstilles en fortynding med en koncentration på 1 µg/µl. Lav derefter af carrier-rna-løsningen et for Deres egne krav passende antal aliquoter, som skal opbevares ved -20 C. Undgå gentagen optøning (>2 x) af carrier-rna-aliquoten. b) Per oprensning skal der tilsættes 1 µg carrier-rna per 100 µl lysisbuffer. Bestemmer ekstraktionsprotokollen f.eks. 200 µl per oprenset prøve, så tilsæt 2 µl af carrier-rna (1 µg/µl) direkte til lysisbufferen. Før begyndelsen af oprensningen skal blandingen af lysisbuffer og carrier- RNA (og i givent tilfælde Intern Kontrol, se 20 artus C. trachomatis TM PCR Kit 01/2015
15 8.3 Intern Kontrol) fremstilles frisk efter det følgende pipetteringsskema. Antal prøver 1 12 Lysisbuffer Carrier-RNA (1 µg/µl) f.eks. 200 µl 2 µl f.eks µl 24 µl Samlet volumen 202 µl µl Volumen for oprensningen 200 µl for hver 200 µl c) Den frisk fremstillede lysisbuffer skal tilsættes oprensningen med det samme. Det er ikke muligt at opbevare blandingen. Anvendelsen af carrier-rna er af afgørende betydning for oprensningens effektivitet og dermed for DNA-/RNA-udbyttet. For at få en højere stabilitet hos den i QIAamp Viral RNA Mini Kit vedlagte carrier-rna, anbefaler vi følgende fremgangsmåde, som afviger fra angivelserne i håndbogen til isoleringskittet: a. Resuspender den lyophiliserede carrier-rna før den første brug af isoleringskittet i 310 µl af elueringsbufferen, som er indeholdt i kittet (slutkoncentration 1 µg/µl, anvend ikke lysisbuffer), og lav af carrier- RNA-løsningen et for Deres egne krav passende antal aliquoter, som skal opbevares ved -20 C. Undgå gentagen optøning (>2 x) af carrier-rna-aliquoten. b. Før begyndelsen af enhver oprensning skal blandingen af lysisbuffer og carrier-rna (og i givent tilfælde Intern Kontrol, se 8.3 Intern Kontrol) fremstilles frisk efter det følgende pipetteringsskema. Antal prøver 1 12 Lysisbuffer AVL Carrier-RNA (1 µg/µl) 560 µl 5,6 µl µl 67,2 µl Samlet volumen 565,6 µl 6.787,2 µl Volumen for oprensningen 560 µl for hver 560 µl c. Den frisk fremstillede lysisbuffer skal tilsættes til oprensningen med artus C. trachomatis TM PCR Kit 01/
16 det samme. Det er ikke muligt at opbevare blandingen. Der anbefales følgende system ud af området af den automatiserede oprensning: Prøvemateriale Urin, podninge r Oprensningssystem Oprensningskit Producent ABI PRISM 6100 Nucleic Acid PrepStation Ønskes der en liste over de brugte materialer og den validerede oprensningsprotokol, kontakt venligst vores teknisk service Applied Biosystems, Foster City, U.S.A. Bruger man en oprensningsprotokol med ethanolholdige vaskebuffere, anbefales det, at man udfører et ekstra centrifugeringstrin (tre minutter, rpm) før elueringen for at fjerne ethanolrester. Dette forhindrer eventuelle PCR-inhibitioner. artus C. trachomatis TM PCR Kit er ikke egnet til oprensningsmetoder, som arbejder på basis af phenol. Vigtigt: Den Interne Kontrol til artus C. trachomatis TM PCR Kit kan anvendes direkte i oprensningen (se 8.3 Intern Kontrol) Anbefalinger til oprensning af urin- og podningsprøver med QIAamp Viral RNA Mini Kit Den i QIAamp Viral RNA mini Kit indeholdte AVL-buffer blev specielt udviklet til inaktivering af de talrige inhibitorer, som forekommer i urin. Derfor anbefaler vi udtrykkeligt anvendelsen af QIAamp Viral RNA Mini Kit-protokollen til ekstraktionen af bakteriel eller viral DNA fra urin. Equilibrér prøverne ved stuetemperatur (19-23 C). Tit findes der kun få mængder bakterier i urinprøver. Derfor anbefaler vi en koncentrering af undersøgelsesmaterialet. Dette opnås, når urinprøverne, der skal undersøges (10-30 ml), bliver 22 artus C. trachomatis TM PCR Kit 01/2015
17 centrifugeret ved x g i minutter (alternativt: 30 minutter ved x g). Supernatanten hældes væk og pelletet bliver fuldstændig resuspenderet ved hjælp af interval-vortexen (15-30 sec.) i µl 1 x PBS. Resuspenderings-volumenet er afhængig af udgangs-prøvemængden. Ved brug af tørre vatpinde skal disse rystes i minimum to timer ved stuetemperatur i 500 µl 1 x PBS. Podningsprøver, som opbevares i et transportmedium, skal blandes grundigt via vortexen. Fjern forsigtigt prøverørenes låg og hold øje med, at handskerne ikke kontamineres. Kontaminerede handsker skal udskiftes med et nyt par, før der begyndes med arbejdet på den næste prøve. Tryk vatpinden mod beholderens væg for at presse væsken ud. Udtag med vatpinden eventuelle slimrester i prøven. Tryk den resterende væske i slimen ud af vatpinden på beholderens væg. Fjern og bortskaf vatpinden med de eventuelle slimrester. Til DNA-isoleringen skal der bruges 140 µl af den således forbehandlede prøve. Følg anvisningerne i QIAamp Viral RNA Mini Spin-protokollen (QIAamp Viral RNA Mini Kit Handbook, 01/99) fra trin 1. Sørg for, at det valgfrie trin for centrifugering 9a ( rpm, tre minutter) i protokollen, til fjernelsen af ethanolrester, gennemføres. Der anbefales 60 µl elueringsvolumen Anbefalinger til oprensningen af podnings-og spermaprøver med QIAamp DNA Mini Kit Equilibrér prøverne ved stuetemperatur (19-23 C). Podningsprøver, som opbevares i et transportmedium, skal blandes grundigt via vortexen. Fjern forsigtigt prøverørenes låg og hold øje med at handskerne ikke kontamineres. Kontaminerede handsker skal udskiftes med et artus C. trachomatis TM PCR Kit 01/
18 nyt par, før der begyndes med arbejdet på den næste prøve. Tryk vatpinden mod beholderens væg for at presse væsken ud. Udtag med vatpinden eventuelle slimrester i prøven. Tryk den resterende væske i slimen ud af vattotten på beholderens væg. Fjern og bortskaf podepinden med de eventuelle slimrester. Pelletér bakterierne via centrifugering i 10 minutter ved x g (7.500 rpm). Resuspender derefter bakteriepelletet i 180 µl ATL-buffer (QIAamp DNA Mini Kit). Podepindene overføres direkte i en 1,5 ml mikrocentrifuge-reaktionsbeholder og vortexes i 15 sekunder med 180 µl ATL-buffer. For DNA-ekstraktionen fra spermaprøver skal 60 µl af prøvematerialet fortyndes med 80 µl 1 x PBS i en 1,5 ml mikrocentrifuge-reaktionsbeholder. Pipettér, efter grundig vortexen 100 µl af det fortyndede prøvemateriale i 180 µl ATL-buffer. Bland derefter denne opsætning via interval-vortexen i sekunder. Tilsæt 20 µl proteinase K til prøven. Bland dette via kort vortexen og inkubér den ved 56 C i 1-12 timer. Vortex prøven af og til under inkubationen for at blande den godt, eller stil den i en termoshaker. Sørg for, at der anvendes proteinase K. QIAGEN proteinasen har en reduceret aktivitet ved tilstedeværelse af ATLbuffer. Sørg for, ved anvendelse af tørre podepinde, at trykke podepinden ud på beholderens væg for at fjerne væsken. Fjern og bortskaf podepinden derefter. Følg nøje Tissue Protocol (QIAamp DNA Mini Kit og QIAamp DNA Blood Mini Kit Handbook, 02/2003, fra side 34) fra trin 3. Sørg for, at det valgfrie centrifugeringstrin 7a ( rpm, tre minutter) i protokollen til fjernelse af ethanolrester gennemføres. Der anbefales 50 µl AE-buffer elueringsvolumen. 24 artus C. trachomatis TM PCR Kit 01/2015
19 8.2.3 Anbefalinger til oprensningen af lyophiliserede eller frysetørrede prøver med QIAamp DNA Mini Kit Equilibrer prøverne ved stuetemperatur (19-23 C). Resuspender den lyophiliserede eller frysetørrede prøve grundigt i 500 µl 1 x PBS ved at svinge den forsigtigt med hånden. Ryst derefter prøven i minimum 30 minutter ved stuetemperatur for at opløse den fuldstændig. Pipettér 200 µl af den opløste prøve i 360 µl ATL-buffer ind i en 1,5 ml mikrocentrifuge-reaktionsbeholder og bland dette grundigt via vortexen. Tilsæt 20 µl proteinase K til prøven. Bland opløsningen via kort vortexen og inkuber den ved 56 C i 1-12 timer. Vortex prøven af og til under inkubationen for at blande den godt, eller stil den i en termoshaker. Sørg for, at der anvendes proteinase K. QIAGEN proteinasens aktivitet reduceres ved tilstedeværelse af ATL-buffer. 1,5 ml-reaktionsbeholderne skal centrifugeres kort for at forhindre krydskontaminationer, som sker i indersiden af låget ved sprøjtning med prøvevæsken, når beholderne åbnes. Tilsæt 400 µl AL-buffer til prøven, bland den grundig via vortexen i 15 sekunder og inkuber prøven i 10 minutter ved 70 C. Tilsæt 400 µl ethanol ( %) til prøven og bland dette igen via vortexen i 15 sekunder. Overfør denne blanding (inklusive præcipitat) forsigtigt - uden at fugte det øverste af randen til QIAamp søjlen. Luk låget og centrifuger i et minut ved x g (8.000 rpm). Stil derefter QIAamp søjlen ind i en ren 2 ml Collection Tube (indeholdt i kittet) og bortskaf den benyttede Collection Tube sammen med filtratet. Gentag dette trin idet De overfører resten af prøveblandingen til søjlen. Følg nøje Tissue Protocol (QIAamp DNA Mini Kit og QIAamp DNA Blood Mini Kit Handbook, 02/2003, side 35) fra trin 6. Sørg for, at det valgfrie centrifugeringstrin 7a ( rpm, 3 artus C. trachomatis TM PCR Kit 01/
20 minutter) i protokollen til fjernelse af ethanolrester gennemføres. Der anbefales 50 µl AE-buffer elueringsvolumen. 8.3 Intern Kontrol Der vedlægges en Intern Kontrol (C. trachomatis TM IC). Med denne har De muligheden, at kontrollere både oprensningen af DNA og en mulig inhibition af PCR (se Fig. 1). Til denne avendelse tilsættes den Interne Kontrol i et forhold, der svarer til 0,1 µl pr. 1 µl elueringsvolumen til oprensningen. Hvis De for eksempel anvender QIAamp DNA Mini Kit og eluerer DNA i 200 µl AE-buffer, skal der tilsættes 20 µl af den Interne Kontrol. Hvis De f.eks. eluerer i 100 µl, skal der tilsvarende tilsættes 10 µl. Mængden af den anvendte Interne Kontrol er kun afhængig af elueringsvolumenet. Den Interne Kontrol og carrier-rna (se 8.2 DNA-isolering) må kun tilsættes til blandingen af lysisbuffer og prøvemateriale eller direkte til lysisbufferen. Den Interne Kontrol må ikke direkte tilsættes prøvematerialet. Der skal sørges for, at blandingen af den Interne Kontrol og lysisbuffer/carrier-rna forberedes frisk og tilsættes med det samme (at opbevare blandingen ved stuetemperatur eller i køleskabet kan allerede efter få timer føre til fravær af den Interne Kontrol og til en reduceret oprensningseffektivitet). Pipettér den Interne Kontrol og carrier-rna ikke direkte i prøvematerialet. For at en oprensning kan vurderes som succes, skal Ct-værdien af den Interne Kontrol på ABI PRISM 7000, 7700 og 7900HT SDS ligge ved Ct = 22 ± 3 (threshold: 0,05). Spredningen på maximalt tre Ct-værdier betinges af en instrument- og oprensningsvarians. En højere afvigelse tyder på problemer med oprensningen. I dette tilfælde skal oprensningen kontrolleres og i givent tilfælde valideres igen. Hvis der yderligere skulle opstå spørgsmål eller problemer, bedes De at kontakte vores tekniske service. 26 artus C. trachomatis TM PCR Kit 01/2015
21 Alternativt kan den Interne Kontrol anvendes udelukkende til kontrol af en mulig PCR-inhibition (se Fig. 2). Til denne applikation tilsættes pr. testblanding 0,5 µl af den Interne Kontrol direkte til 15 µl C. trachomatis TM Master. Brug til hver PCR-reaktion 15 µl af den således fremstillede Master Mix *, og tilsæt derefter 10 µl af den oprensede prøve. Ved udførelsen af en kørsel med flere prøver er det nødvendigt at øge de krævede mængder af C. trachomatis TM Master og den Interne Kontrol svarende til prøvetallet (se 8.5 Forberedelse af PCR). * Volumenforhøjelsen, som opstår på grund af tilsætningen af den Interne Kontrol, er irrelevant. Sensitiviteten for detektionssystemet påvirkes ikke. artus C. trachomatis TM PCR Kit 01/
22 8.4 Kvantificering De vedlagte Kvantificeringsstandarder (C. trachomatis TM QS 1-4) behandles som en allerede oprenset prøve og anvendes i samme volumen (10 µl). For at udarbejde en standardkurve i ABI PRISM Sequence Detection System, tilsættes alle fire vedlagte Kvantificeringsstandarder og definér disse som standarder under angivelse af de tilsvarende koncentrationer (se 8.6 Programmering af ABI PRISM SDS). Importen af standardkurver fra tidligere kørsler er med ABI PRISM 7000, 7700 og 7900HT SDS software ikke muligt. Bemærk: Kvantificeringsstandarderne er defineret som kopier/µl. Til omregningen af værdierne, der blev udarbejdet på baggrund af standardkurven i kopier/ml prøvemateriale, skal følgende formel anvendes: Resultat (kopier/ml) = Resultat (kopier/µl) x Elueringsvolumen (µl) Prøvevolumen (ml) Bemærk, at der principielt skal tilsættes det oprindelige prøvevolumen i den ovennævnte formel. Dette skal tages i betragtning, hvis prøvevolumenet blev forandret før nukleinsyre-oprensningen (f.eks. at den blev indsnævret ved centrifugering, eller forhøjet ved at den blev fyldt op på det volumen, som kræves for oprensningen). Vigtigt: For simplificering af den kvantitative analyse med artus-systemer på ABI PRISM 7000 SDS instrumentet, findes under en vejledning (Technical Note for quantitation on the ABI PRISM 7000 SDS). 28 artus C. trachomatis TM PCR Kit 01/2015
23 8.5 Forberedelse af PCR Gør det nødvendige antal reaktionsbeholdere eller en 96-brønds reaktionsplade klar til de planlagte reaktioner. I den følgende tabel findes en liste over anbefalede materialer: Artikel 96-brønds optisk reaktionsplade Betegnelse 96-Well Optical Reaction Plate Katalognummer Producent Applied Biosystems Opbevarings -rack * Kompressi onsmåtte nej - Selvklæben de optiske folier Optiske reaktionsbeholdere Optiske reaktionsbeholdere Optiske låg (flade) Optical Adhesive Covers ABI PRISM Optica l Tubes, 8 MicroAmp Tubes/Strip Optical Tubes ABI PRISM Optica l Caps, 8 Caps/Strip N Applied Biosystems Applied Biosystems Applied Biosystems Applied Biosystems - ja ja - ja - - nej Bemærk: Anvendelsen af reaktionsbeholdere til optiske målinger med hvælvede låg er kun tilladt til ABI PRISM 7700 SDS Instrumentet og kræver en omstilling af belysningstiden (se Programmering af ABI PRISM 7700 SDS, Vigtige ekstraindstillinger). Bemærk ved opstillingen af PCR, at hver PCR-kørsel medfører mindst en Kvantificeringsstandard samt en negativ kontrol (Water, PCR grade). Anvend til udarbejdelse af en standardkurve pr. PCR-kørsel alle vedlagte Kvantificeringsstandarder (C. trachomatis TM QS 1-4). Alle reagenser skal, inden testen startes, optøs fuldstændigt ved stuetemperatur, blandes godt (gentagen pipettering eller kort vortexen) og centrifugeres derefter. * Det er nødvendigt at åbne reaktionsbeholderne når de sættes ind og tages ud af det todelte opbevaringsrack. Brug udelukkende den nederste del af rack et for at undgå kontaminationer i forbindelse med dette. artus C. trachomatis TM PCR Kit 01/
24 For tilfældet, at De både vil kontrollere oprensningen af DNA og en eventuel inhibition af PCR, skal den Interne Kontrol tilsættes oprensningen i forvejen (se 8.3 Intern Kontrol). Brug dertil følgende pipetteringsskema (se endvidere skematisk oversigt i Fig. 1): Antal prøver Opsætning af Master Mix C. trachomatis TM Master 15 µl 180 µl C. trachomatis TM IC 0 µl 0 µl Samlet volumen 15 µl 180 µl Master Mix 15 µl for hver 15 µl 2. Opsætning af Prøve 10 µl for hver 10 µl PCR-reaktion Samlet volumen 25 µl for hver 25 µl Hvis De udelukkende vil anvende den Interne Kontrol til kontrol af en PCRinhibition, skal den tilsættes direkte til C. trachomatis TM Master. Brug i dette tilfælde følgende pipetteringsskema (se endvidere skematisk oversigt i Fig. 2): Antal prøver Opsætning af Master Mix 2. Opsætning af PCR-reaktion C. trachomatis TM Master C. trachomatis TM IC 15 µl 0,5 µl 180 µl 6 µl Samlet volumen 15,5 µl * 186 µl * Master Mix 15 µl * for hver 15 µl * Prøve 10 µl for hver 10 µl Samlet volumen 25 µl for hver 25 µl Pipettér 15 µl af Master Mix i hver reaktionsbeholder hhv. i hver fordybning i 96-brønds-reaktionspladen. Derefter tilsættes 10 µl af eluatet fra DNAisoleringen. Sørg for, at begge opløsninger blandes godt igennem, ved at afpipettere og opsuge dem flere gange. Luk reaktionsbeholderne med de tilhørende låg, eller hvis der anvendes en 96-brønds-reaktionsplade ved hjælp af selvklæbende optiske folier (Optical Adhesive Covers). For at samle opsætningsvolumenet i rør- hhv. pladebunden, centrifugeres reaktionsbeholderne (i et til PCR-rør egnet opbevaringsrack) hhv. 96-brøndsreaktionspladen i en centrifuge med mikrotiterplade-rotor i cirka 30 sekunder * Volumenforhøjelsen, som opstår på grund af tilføjelsen af Intern Kontrol er irrelevant. Sensitiviteten for detektionssystemet påvirkes ikke. 30 artus C. trachomatis TM PCR Kit 01/2015
25 ved x g (4.000 rpm). Hvis De ikke har en sådan centrifuge, så sørg ved opsætningen af PCR-reaktionerne for at pipettere både Master Mix og prøvevolumenet på bunden af reaktionsbeholderne hhv. reaktionsenhederne (brønd). Opbevar reaktionsopsætningerne ved +4 C indtil ABI PRISM SDS instrumentet er programmeret (se 8.6 Programmering af ABI PRISM SDS) og overfør dem derefter til apparatet. Bemærk: Sæt ved brug af optiske reaktionsbeholdere sammen med optiske låg altid et opbevaringsrack ind (96-Well Tray/Retainer Set) i instrumentet (ABI PRISM 7000, 7700 og 7900HT SDS). Ved anvendelsen af det todelte opbevaringsrack er det nødvendigt at åbne reaktionsbeholderne ved indsætningen og udtagningen. Brug udelukkende den nederste del af rack et for at undgå kontaminationer i forbindelse med dette. Ved benyttelse af 96-brønds optiske reaktionsplader sammen med selvklæbende optiske folier er det nødvendigt, at der lægges en kompressionsmåtte på (Optical Cover Compression Pads). artus C. trachomatis TM PCR Kit 01/
26 Tilsætning af Intern Kontrol til oprensningen oprensning blanding af lysisbuffer/ prøvemateriale + 0,1 µl IC* pr. 1 µl elueringsvolumen 10 µl oprenset prøve* 15 µl artus Master* optisk reaktionsplade/ optiske reaktionsbeholdere ABI PRISM SDS Fig. 1: Skematisk arbejdsforløb til kontrol af oprensningen og PCRinhibition. *Det er yderst vigtigt at sørge for, at de anvendte opløsninger er fuldstændigt optøet, blandet godt og centrifugeret kort. 32 artus C. trachomatis TM PCR Kit 01/2015
27 Tilsætning af Intern Kontrol til artus Master 0,5 µl IC* 15 µl artus Master* oprensning 15,5 µl Master Mix* 10 µl oprenset prøve* 15 µl Master Mix* optisk reaktionsplade/ optiske reaktionsbeholdere ABI PRISM SDS Fig. 2: Skematisk arbejdsforløb til kontrol af PCR-inhibition. *Det er yderst vigtigt at sørge for, at de anvendte opløsninger er fuldstændigt optøet, blandet godt og centrifugeret kort. artus C. trachomatis TM PCR Kit 01/
28 8.6 Programmering af ABI PRISM SDS Softwaren til ABI PRISM 7000, 7700 og 7900HT Sequence Detection Systems (SDS) kræver nogle ekstrainformationer, inden PCR-kørslen kan startes. Fordi fremgangsmåden ved programmeringen af de enkelte instrumenter er meget forskellig, behandles de i separate kapitler Programmering af ABI PRISM 7000 SDS Udarbejd til detektion af C. trachomatis-dna en profil på Deres ABI PRISM 7000 SDS efter de følgende seks arbejdstrin ( ). Alle angivelser refererer til ABI PRISM 7000 SDS software version Detaljer vedrørende programmeringen af ABI PRISM 7000 SDS findes i ABI PRISM 7000 SDS User Guide. Af hensyn til overskueligheden er indstillingerne, der skal foretages, fremhævet med sorte rammer i figurerne Forindstillinger ved oprettelsen af en ny PCR-kørsel Vælg på ABI PRISM 7000 SDS menupunktet New, som befinder sig under File, og indstil for det nye dokument følgende grundindstillinger (se Fig. 3). Et i forvejen gemt template (SDS Template [*.sdt]) findes i Template-listen eller ved hjælp af Browse-funktionen (se Arkivering af PCR- kørslen). Bekræft indtastningerne (OK). Fig. 3: Forindstillinger ved oprettelsen af en ny PCR-kørsel (New Document). 34 artus C. trachomatis TM PCR Kit 01/2015
29 Oprettelse/valg af detektorer Ved hjælp af den separate menu Detector Manager, som findes under Tools, tildeles dokumentet de tilsvarende detektorfarvestoffer. Til påvisning af C. trachomatis-dna såvel som den Interne Kontrol ved hjælp af artus C. trachomatis TM PCR Kit skal reporterne/quencherne, der er angivet i den følgende tabel, defineres: Påvisning Reporter Quencher C. trachomatis-dna FAM TAMRA Intern Kontrol (C. trachomatis TM IC) VIC none Vælg til udarbejdelse af disse detektorer i Detector Manager den forneden til venstre lokaliserede option File og derefter optionen New. Fig. 4: Udarbejdelse af den C. trachomatis-specifikke detektor (Detector Manager). Fig. 5: Udarbejdelse af den Interne Kontrol-specifikke detektor (Detector Manager). I vinduet som nu kommer frem defineres reporter/quencher-kombinationen FAM/TAMRA (tilsvarende Fig. 4 og Fig. 5) for at påvise C. trachomatis-dna. Vælg til påvisning af den Interne Kontrol, kombinationen VIC/none. Ved bekræftelsen af indtastningerne (OK) vender De tilbage til Detector Manager. Markér de netop oprettede detektorer, og transferer hvert udvalg ved at klikke på optionen Add to Plate Document til Well Inspector (se Fig. 6). Luk vinduet (Done). artus C. trachomatis TM PCR Kit 01/
30 Fig. 6: Valg af detektorer (Detector Manager) Tildeling af de nødvendige informationer til pladepositionerne Åbn optionen Well Inspector, som befinder sig under View, for at genfinde de detektorer De allerede har valgt under (se Fig. 7). Fig. 7: Tildeling af de nødvendige informationer til pladepositionerne (Well Inspector). Markér de til detektion af C. trachomatis-dna belagte pladepositioner. Tildel de udvalgte detektorer til positionerne, og aktivér Use-optionen for begge detektorer. Der dukker et hak op. For at navngive de enkelte reaktionsopsætninger, vælg den tilhørende position på pladen og indtast navnet under Sample Name. Bemærk, at opsætninger med identisk Sample Name og identisk detektorvisning identificeres af softwaren som replikat og at der vedrørende deres kvantificerede smitstofbelastning beregnes en 36 artus C. trachomatis TM PCR Kit 01/2015
31
32 middelværdi. Vælg dernæst den tilsvarende funktion (Task) for hver prøvetype ifølge den nedenstående tabel: Prøvetype Funktion (Task) Koncentration (Quantity) Reporter Quencher Prøve Unknown - FAM TAMRA Negativ kontrol NTC - FAM TAMRA Standard Standard se 1. Indhold FAM TAMRA Til udarbejdelsen af en standardkurve anvendes alle vedlagte Kvantificeringsstandarder (C. trachomatis TM QS 1-4) pr. PCR-kørsel. Indtast de tilhørende koncentrationer (se 1. Indhold) for hver enkelt standard i feltet Quantity. Bemærk, at ROX til en PCR-kørsel med artus C. trachomatis TM PCR Kit skal indstilles som passiv reference (Passive Reference). En jævn fordeling af ROX-farvestoffet på alle PCR-opsætninger af et lot ved en blanding af C. trachomatis TM Master, sikrer genkendelsen og beregningen af tube-to-tube variationer (fluorescensforskelle mellem forskellige PCRopsætninger) via Sequence Detection Software (normalisering) Oprettelse af en temperaturprofil Skift i softwaren fra Setup-planen til Instrument-planen for at indtaste temperaturprofilen. Indtast nu, tilsvarende Fig. 8, den til detektion af C. trachomatis-dna gyldige temperaturprofil. For at fjerne det i forindstillingerne gemte 50 C-trin, markeres dette ved hjælp af venstre musetast mens Shift-tasten holdes nede, og slettes derefter med Backspacetasten. Kontrollér, at reaktionsvolumenet er indstillet til 25 µl. Optionen 9600 Emulation bør aktiveres. Forindstillingerne til Auto Increment forbliver uforandret (Auto Increment: 0.0 C, 0.0 Seconds). 30 artus C. trachomatis TM PCR Kit 01/2015
33 Fig. 8: Oprettelse af en temperaturprofil Arkivering af PCR-kørslen Gem de indtastede indstillinger (Setup) som maske, så de kan benyttes ved senere anvendelser i ændret eller uændret form. Ved at arkivere indstillingerne som SDS Template (*.sdt) i mappen Template Directory (Local Disk [C:]\Program Files\ABI PRISM 7000\Templates, oprettet af Applied Biosystems) kan denne fil vælges direkte ud fra Template drop-down-listen i New Document-vinduet. Kopier, som er gemt i andre mapper, skal åbnes via Browse. Sørg altid for at gemme den aktuelt programmerede PCR-kørsel en gang til som SDS Document (*.sds), inden testen startes. Dermed sikres arkiveringen af de data, der har samlet sig under PCR-kørslen. artus C. trachomatis TM PCR Kit 01/
34 Start af PCR-kørslen Start PCR-kørslen ved at vælge optionen Start under menupunktet Instrument eller feltet Start på Instrument-planen Programmering af ABI PRISM 7700 SDS Udarbejd til detektion af C. trachomatis-dna en profil på Deres ABI PRISM 7700 SDS efter de følgende syv arbejdstrin ( ). Alle angivelser refererer til ABI PRISM 7700 SDS software version Detaljer vedrørende programmering af ABI PRISM 7700 SDS findes i ABI PRISM 7700 SDS User's Manual. Af hensyn til overskueligheden er indstillingerne, der skal foretages, fremhævet med sorte rammer i figurerne Forindstillinger ved oprettelsen af en ny PCR-kørsel Vælg på ABI PRISM 7700 SDS menupunktet New Plate, som befinder sig under File, og indstil for det nye dokument følgende grundindstillinger (se Fig. 9). Bekræft indtastningerne (OK). Fig. 9: Forindstillinger ved oprettelsen af en ny PCR-kørsel (New Plate). 32 artus C. trachomatis TM PCR Kit 01/2015
35 Valg af fluorescensfarvestoffer og tildeling af prøvetypen Ved hjælp af Sample Type Setup (Setup-planen: Sample Type/Sample Type Setup) tildeler De dokumentet de tilsvarende detektorfarvestoffer og den tilsvarende prøvetype. Til detektion af C. trachomatis-dna såvel som den Interne Kontrol ved hjælp af artus C. trachomatis TM PCR Kit skal reporterne/quencherne, som er angivet i den følgende tabel, defineres: Påvisning Reporter Quencher C. trachomatis-dna FAM TAMRA Intern Kontrol (C. trachomatis TM IC) VIC TAMRA Til målingen af C. trachomatis-dna ved hjælp af artus C. trachomatis TM PCR Kit skal der tilsvarende til tabellen vælges reporterfarvestoffet FAM. Dette gælder både for standarder (STND), prøver (UNKN) og negativ- kontroller (UNKN). Til målingen af den Interne Kontrol (IPC+) defineres VIC som reporter. Indstil TAMRA som quencher. Tildelingen af farvestofferne og prøvetyperne er vist i vinduet Sample Type Setup i Fig. 10. Fig. 10: Udvalg af fluorescensfarvestoffer og tildeling af prøvetypen (Sample Type Setup). artus C. trachomatis TM PCR Kit 01/
36 Tildelingen af prøvetypen til en tilsvarende funktion (Acronym) foregår efter følgende tabel: Prøvetype Funktion Koncentration Reporter Quencher (Acronym) (Quantity) Prøve UNKN - FAM TAMRA Negativkontrol UNKN - FAM TAMRA Standard STND se 1. Indhold FAM TAMRA Tildeling af de nødvendige informationer til pladepositionerne Vælg de tilsvarende felter for tildelingen af detektorerne og prøvetyperne til de enkelte pladepositioner. Åbn derefter dialogvinduet Dye Layer på Setup- planen, og tildel den tilhørende reporter. Ved at aktivere pop-up-menuen Sample Type, genfinder De i den fremkommende liste de i Sample Type Setup til reporteren tildelte prøvetyper (se Fig. 11). Vælg den passende prøvetype (se tabellen under ) og bestem nu tildelingen af de øvrige pladepositioner ved hjælp af Dye Layers og Sample Type-menuen. I feltet Sample Name kan der tildeles navne til enhver prøve. Felter, som er defineret som Replicate (indtastning af navnet for referenceprøven i spalten Replicate), beregnes af softwaren vedrørende deres kvantificerede smitstofbelastning som middelværdi. Desuden beregnes standardafvigelsen. Fig. 11/12: Tildeling af de nødvendige informationer til pladepositionerne. 34 artus C. trachomatis TM PCR Kit 01/2015
37 Til udarbejdelse af en standardkurve anvendes alle vedlagte Kvantificeringsstandarder (C. trachomatis TM QS 1-4) pr. PCR-kørsel. Indtast de tilhørende koncentrationer (se 1. Indhold) for hver enkelt standard (Quantity, se Fig. 12). Dette er dog kun muligt, hvis de med standarder belagte positioner i forvejen bliver defineret som standarder ved hjælp af menuen Sample Type Oprettelse af en temperaturprofil Skift, for at indtaste temperaturprofilen, til Thermal Cycler Conditions-menuen på Setup-planen. Indtast nu, tilsvarende Fig. 13, den til detektion af C. trachomatis-dna gyldige temperaturprofil. Kontrollér, at reaktionsvolumenet er indstillet til 25 µl. Forindstillingerne for Ramp-tiderne og Auto Increment forbliver uforandret (Ramp Time: 0:00, Auto Increment: 0.0 C, 0.0 Seconds). Fig. 13: Oprettelse af en temperaturprofil. Endvidere befinder sig i Thermal Cycler Conditions-menuen optionen Show Data Collection. Ved valg af denne option kommer De til det i Fig. 14 viste artus C. trachomatis TM PCR Kit 01/
38 vindue. Hver Ramp- og hver Plateau-temperatur er forsynet med et symbol for datasamling (Data Collection Icon). Dette anskueliggør samlingen af data på det nuværende tidspunkt i kørslen. Fjern alle symboler ved at klikke på dem, undtagen det til tidspunktet for Annealing-Extension-trinnet (Stage2/Step2) for at undgå unødvendige fluorescensmålinger. På denne måde holdes den samlede kørselstid og datamængde så lav som mulig. Fig. 14: Datasamling (Data Collection) Vigtige ekstraindstillinger Til indstillingen af belysningstiden (aktivering af fluorescensfarvestofferne) såvel som til udvalget af Pure Spectra/Background-filerne, skiftes fra Setupplanen til Analysis-planen. Vælg i menuen Instrument under Diagnostics det nu aktiverede underpunkt Advanced Options. Foretag indstillingerne tilsvarende til Fig. 15. Ved inaktivering af valgfunktionen Spectra Components (Analysis) benyttes ved en gentagen vurdering af allerede analyserede kørsler automatisk de på tidspunktet for genereringen (opsamlingen) af data i Spectra Components-mappen gemte aktuelle kalibreringsdata. For at få en analyse af gamle kørsler under anvendelse af ny indtastede Spectra Components, er det 36 artus C. trachomatis TM PCR Kit 01/2015
39 nødvendigt at aktivere disse to felter. Læg mærke til, at ROX for en PCRkørsel med artus C. trachomatis TM PCR Kit skal indstilles som passiv reference (Reference). En jævn fordeling af ROX-farvestoffet på alle PCRopsætninger i et lot ved en blanding af C. trachomatis TM Master sikrer genkendelsen og beregningen af tube-to-tube variationer (fluorescensforskelle mellem forskellige PCR-opsætninger) via Sequence Detection Software (normalisering). Bemærk: Ved anvendelsen af 96-brønds reaktionsplader til optiske målinger i forbindelse med selvklæbende optiske folier (Optical Adhesive Covers) eller optiske reaktionsbeholdere med flade låg, skal belysningstiden (Exposure Time) vare ti millisekunder. Hvis De anvender optiske reaktionsbeholdere med hvælvede låg, skal tidsangivelsen indstilles til 25 millisekunder. Fig. 15: Vigtige ekstraindstillinger (Advanced Options). artus C. trachomatis TM PCR Kit 01/
40 Arkivering af PCR-kørslen Her kan De gemme de indtastede indstillinger (Setup) som maske, så de kan benyttes i senere anvendelser i ændret eller uændret form. Hertil skal De gemme filen i Stationary File Format. Inden De starter den aktuelt programmerede PCR-kørsel er det nødvendigt at gemme den en gang til i Normal File Format. Dermed sikres arkiveringen af de data, der har samlet sig under PCR-kørslen Start af PCR-kørslen Start PCR-kørslen ved at vælge optionen Run under menupunktet Instrument eller feltet Run på Analysis-planen Programmering af ABI PRISM 7900HT SDS Udarbejd til detektionen af C. trachomatis-dna en profil på Deres ABI PRISM 7900HT SDS efter de følgende seks arbejdstrin ( ). Alle angivelser refererer til ABI PRISM 7900HT SDS software version 2.1. Detaljer vedrørende programmeringen af ABI PRISM 7900HT SDS findes i ABI PRISM 7900HT SDS User Guide. Af hensyn til overskueligheden er indstillingerne, der skal foretages, fremhævet med sorte rammer i figurerne Forindstillinger ved oprettelsen af en ny PCR-kørsel Vælg på ABI PRISM 7900HT SDS menupunktet New, som befinder sig under File, og foretag for det nye dokument følgende grundindstillinger (se Fig. 16). Et i forvejen gemt template (ABI PRISM SDS Template Document [*.sdt]) findes i Template-listen eller ved hjælp af Browse-funktionen (se Arkivering af PCR-kørslen). Bekræft indtastningerne (OK). Bemærk: artus C. trachomatis TM PCR Kit kan ikke anvendes i forbindelse med 384 er pladeformatet af ABI PRISM 7900HT SDS. 38 artus C. trachomatis TM PCR Kit 01/2015
41 Fig. 16: Forindstillinger ved oprettelsen af en ny PCR-kørsel (New Document). artus C. trachomatis TM PCR Kit 01/
42 Oprettelse/valg af detektorer Ved hjælp af den separate menu Detector Manager, som befinder sig under Tools (alternativt: Vælg Setup-planen/Add Detector-funktion) tildeles dokumentet de tilsvarende detektorfarvestoffer. Til detektion af C. trachomatis-dna såvel som den Interne Kontrol ved hjælp af artus C. trachomatis TM PCR Kit skal reporterne/quencherne, der er angivet i den følgende tabel, defineres: Påvisning Reporter Quencher C. trachomatis-dna FAM TAMRA Intern Kontrol (C. trachomatis TM IC) VIC Non Flourescent Til oprettelse af disse detektorer vælger De i Detector Manager den forneden til venstre lokaliserede option New. Fig. 17: Udarbejdelse af den C. trachomatis -specifikke detektor (Detector Manager). Fig. 18: Udarbejdelse af den Intern Kontrol-specifikke detektor (Detector Manager). 40 artus C. trachomatis TM PCR Kit 01/2015
43 Definér i vinduet, som nu kommer frem, reporter/quencher-kombinationen FAM/TAMRA (tilsvarende Fig. 17 og Fig. 18) til detektion af C. trachomatis- DNA. Vælg til detektion af den Interne Kontrol kombinationen VIC/Non Fluorescent. Ved bekræftelse af indtastningerne (OK) vender De tilbage til Detector Manager. Markér de lige oprettede detektorer, og transferer hvert udvalg ved at klikke på optionen Copy to Plate Document til Setup-planen (se Fig. 19). Luk vinduet (Done). Fig. 19: Valg af detektorer (Detector Manager) Tildeling af de nødvendige informationer til pladepositionerne Efter at de har lukket Detector Manager (Done) findes detektorerne, som De selv har udvalgt under opstillet i tabelform (se Fig. 20) på Setup- planen (Well Inspector). Fig. 20: Tildeling af de nødvendige informationer til pladepositionerne. artus C. trachomatis TM PCR Kit 01/
44 Markér de til detektion af C. trachomatis-dna belagte pladepositioner. Tildel de udvalgte detektorer til positionerne idet De aktiverer Use-optionen for begge detektorer ved at klikke på dem. Der dukker et kryds op. For at navngive de enkelte reaktionsopsætninger, vælger De den tilhørende position på pladen og indtaster navnet under Sample Name. Bemærk, at opsætninger med identisk Sample Name og identisk detektorvisning identificeres af softwaren som replikat, og at der vedrørende deres kvantificerede smitstofbelastning beregnes en middelværdi. Dernæst vælger De den tilsvarende funktion (Task) for hver prøvetype ifølge den nedenstående tabel: Prøvetype Funktion Koncentration (Task) (Quantity) Reporter Quencher Prøve Unknown - FAM TAMRA Negativ kontrol NTC - FAM TAMRA Standard Standard se 1. Indhold FAM TAMRA Til udarbejdelsen af en standardkurve anvendes alle vedlagte Kvantificeringsstandarder (C. trachomatis TM QS 1-4) pr. PCR-kørsel. Indtast de tilhørende koncentrationer (se 1. Indhold) for hver enkelt standard i feltet Quantity. Bemærk, at ROX for PCR-kørsler med artus C. trachomatis TM PCR Kit skal indstilles som passiv reference (Passive Reference). En jævn fordeling af ROX-farvestoffet på alle PCR-opsætninger af et lot ved en blanding af C. trachomatis TM Master sikrer genkendelsen og beregningen af tube-to-tube variationer (fluorescensforskelle mellem forskellige PCR-opsætninger) via Sequence Detection Software (normalisering) Oprettelse af en temperaturprofil Skift, for at indtaste temperaturprofilen, i softwaren fra Setup-planen til Instrument-planen. Indtast, tilsvarende Fig. 21, den til detektion af C. trachomatis-dna gyldige temperaturprofil. Kontrollér, at reaktionsvolumenet er indstillet til 25 µl. Optionen 9600 Emulation skal aktiveres. Forindstillingerne for Ramp-tiden og Auto Increment forbliver 42 artus C. trachomatis TM PCR Kit 01/2015
artus HSV-1/2 LC PCR Kit Håndbog
Februar 2015 artus HSV-1/2 LC PCR Kit Håndbog 24 (catalog no. 4500063) 96 (catalog no. 4500065) Kvantitativ in vitro diagnostik For use with the LightCycler Instrument Version 1 4500063, 4500065 1046888DA
Læs mereartus C. trachomatis Plus RG PCR Kit håndbog
Januar 2015 artus C. trachomatis Plus RG PCR Kit håndbog 24 (katalognr. 4559263) Version 1 96 (katalognr. 4559265) Kvalitativ in vitro-diagnostik Til anvendelse med Rotor-Gene Q-instrumenter 4559263, 4559265
Læs mereartus Borrelia LC PCR Kit Håndbog
artus Borrelia LC PCR Kit Håndbog 24 (katalog nr. 4551063) 96 (katalog nr. 4551065) Kvantitativ in vitro diagnostik Til anvendelse med LightCycler 1.1/1.2/1.5 og LightCycler 2.0 instrument Marts 2015 version
Læs mereTissue_LC_200_V7_DSP og Tissue_HC_200_V7_DSP
August 2015 QIAsymphony SPprotokolark Tissue_LC_200_V7_DSP og Tissue_HC_200_V7_DSP Dette dokument er Tissue_LC_200_V7_DSP og Tissue_HC_200_V7_DSP QIAsymphony SPprotokolark, R2, til kitversion 1. QIAsymphony
Læs mereHåndbog til artus CMV TM PCR-kit
Håndbog til artus CMV TM PCR-kit 24 (katalognr. 4503163) 96 (katalognr. 4503165) Kvantitativ in vitro-diagnostik Til anvendelse med ABI PRISM 7000, 7700 og 7900HT Sequence Detection Systems December 2014
Læs mereStatusrapport for projektet: Afprøvning af den nye PCR teknik til test for virus i kartoffelknolde til erstatning for den gamle ELISA-teknik
Bilag 2 Statusrapport for projektet: Afprøvning af den nye PCR teknik til test for virus i kartoffelknolde til erstatning for den gamle ELISA-teknik ved forsker Mogens Nicolaisen, Danmarks JordbrugsForskning,
Læs mereQIAsymphony RGQ-protokolark
QIAsymphony RGQ-protokolark Indstillinger til kørsel af artus CT/NG QS- RGQ-kittet (Rotor-Gene Q-software.) Kontroller, om der er nye reviderede udgaver af elektronisk mærkning på www.qiagen.com/products/artusctngqsrgqkitce.aspx,
Læs mereHåndbog til artus HSV 1/2 QS- RGQ-kit
Oktober 2014 Håndbog til artus HSV 1/2 QS- RGQ-kit Version 1 24 Kvalitativ in vitro-diagnostik Til brug sammen med QIAsymphony SP/AS- og Rotor-Gene Q-instrumenter 4500363 1062626DA QIAGEN GmbH, QIAGEN
Læs mereCOBAS AMPLICOR TIL IN VITRO-DIAGNOSTIK.
COBAS AMPLICOR Chlamydia trachomatis Test CT TIL IN VITRO-DIAGNOSTIK. Bestillingsoplysninger AMPLICOR CT/NG CT/NG PREP 100 Tests P/N: 20759414 122 Specimen Preparation Kit ART: 07 5941 4 US: 83315 AMPLICOR
Læs mereartus EBV LC PCR Kit Håndbog
Marts 2015 artus EBV LC PCR Kit Håndbog 24 (katalog nr. 4501063) 96 (katalog nr. 4501065) Kvantitativ in vitro diagnostik Til anvendelse med LightCycler Instrument version 1 4501063, 4501065 1046892DA
Læs mereUndersøgelse af forskellige probiotiske stammer
Undersøgelse af forskellige probiotiske stammer Formål Formålet med denne øvelse er: 1. At undersøge om varer med probiotika indeholder et tilstrækkeligt antal probiotiske bakterier, dvs. om antallet svarer
Læs mereDette er en kladde til et genoptryk af Eksperimentel Genteknologi fra 1991. Ideer, rettelser og forslag modtages gerne. Kh Claudia.
Transformation af E.coli K 12 Version 3. marts 2009 (C) Claudia Girnth-Diamba og Bjørn Fahnøe Dette er en kladde til et genoptryk af Eksperimentel Genteknologi fra 1991. Ideer, rettelser og forslag modtages
Læs mereSmartAir TS1000. Daglig brug
SmartAir TS1000 Daglig brug Indhold Brugere... 4 Opret brugere... 4 Brugerliste vinduet... 5 Knapper... 5 Grupper... 6 Søg bruger... 7 Rapport vinduet (brugere)... 7 Døre... 8 Opret døre... 8 Dørliste
Læs mereB ProbeTec ET Chlamydia trachomatis Amplified DNA Assay
B ProbeTec ET Chlamydia trachomatis Amplified DNA Assay TILSIGTET BRUG BD ProbeTec ET Chlamydia trachomatis (CT) amplificeret DNA-analyse anvender, når det testes med BD ProbeTec ET systemet, Strand Displacement
Læs mereB ProbeTec ET Chlamydia trachomatis and Neisseria gonorrhoeae Amplified DNA Assays
B ProbeTec ET Chlamydia trachomatis and Neisseria gonorrhoeae Amplified DNA Assays TILSIGTET BRUG 3300754JAA(01) 2013-11 U 0344 Dansk BD ProbeTec ET Chlamydia trachomatis (CT) and Neisseria gonorrhoeae
Læs mereLaboratorieprotokol for manuel isolering af DNA fra 0,5 ml prøve
Laboratorieprotokol for manuel isolering af DNA fra 0,5 ml prøve Til isolering af genomisk DNA fra indsamlingssætserierne Oragene - og ORAcollect. Du kan finde flere sprog og protokoller på vores webside
Læs mereAnalyse af benzoxazinoider i brød
Analyse af benzoxazinoider i brød Øvelsesvejledning til kemi-delen af øvelsen. Af Stine Krogh Steffensen, Institut for Agroøkologi, AU Eleven har forberedt før øvelsen: 1. Eleven har udfyldt skemaet herunder
Læs mereStuderendes video- optagelser til prøver
Studerendes video- optagelser til prøver Resume Video til brug ved prøver kan optages i flere forskellige formater og lagres på forskellige medier. Hvis video optages på dvd (f.eks. 80 mm skive, der sættes
Læs mereartus CMV QS-RGQ Kit-håndbog
December 2010 artus CMV QS-RGQ Kit-håndbog Version 1 24 Kvantitativ in vitro-diagnostik Til brug sammen med QIAsymphony SP/AS og Rotor-Gene Q-instrumenter 4503363 1060926DA QIAGEN GmbH, QIAGEN Strasse
Læs mereIT Support Guide. Installation af netværksprinter (direkte IP print)
IT Support Guide Denne guide er hentet på www.spelling.dk Program: Microsoft Windows Vista Program sprog version: ENG (US) Guide emne: Installation af netværksprinter (direkte IP print) Publikationsnr.:
Læs mereASB E-mailsignatur. ASB E-mailsignatur. Vejledning til opsætning af e-mailsignatur IKT - Februar 2008
ASB E-mailsignatur I det følgende forklares, hvordan du opretter ASBs e-mailsignatur for medarbejdere. Det skal her noteres at e-mail signaturen ikke kan opsættes i webmail (webmail.asb.dk), men skal opsættes
Læs mereFormler og diagrammer i Excel 2000/2003 XP
Formler i Excel Regneudtryk Sådan skal det skrives i Excel Facit 34 23 =34*23 782 47 23 =47/23 2,043478261 27³ =27^3 19683 456 =KVROD(456) 21,3541565 7 145558 =145558^(1/7) 5,464829073 2 3 =2*PI()*3 18,84955592
Læs mereMini brugermanual CMD 5.1
Mini brugermanual CMD 5.1 Kom i gang For at tilgå CMD skal du åbne en web browser og indtaste URL en på dit CMD website i adressefeltet, hvorefter dialogboksen til log in vises. 1. Indtast dit brugernavn
Læs mereProtokol for genetisk bestemmelse af ABO blodtyper
Page1 Udarbejdet i samarbejde mellem: Kåre Lehmann, Annabeth Høgh Petersen, Anne Rusborg Nygaard og Jørn M. Clausen Page2 VIGTIGT: SKIFT PIPETTE SPIDSER/TIPS EFTER HVER GANG!! Så undgår du at forurene
Læs mereQuickguide til BeerSmith - udstyrsindstillinger
Opsætning af Equipment (Udstyr) i BeerSmith En af de vigtigste trin i opsætningen af BeerSmith er, at oprette din egen Equipment profile (udstyrsprofil), baseret på en af de eksisterende profiler. Udstyrsindstillingerne
Læs mereBestillingsoplysninger AMPLICOR CT/NG CT/NG PREP 100 Tests P/N: 20759414 122 Specimen Preparation Kit ART: 07 5941 4 US: 83315
COBAS AMPLICOR Neisseria gonorrhoeaetest NG TIL IN VITRO-DIAGNOSTIK. Bestillingsoplysninger AMPLICOR CT/NG CT/NG PREP 100 Tests P/N: 20759414 122 Specimen Preparation Kit ART: 07 5941 4 US: 83315 AMPLICOR
Læs mereAptima Multitest Swab Specimen Collection Kit
Multitest Swab Specimen Collection Kit Aptima Tilsigtet anvendelse Aptima Multitest Swab Specimen Collection Kit (Aptima Multitest prøvetagningskit til podning) er til brug med Aptima assays. Aptima Multitest
Læs mereartus EBV QS-RGQ-kit Ydelsesegenskaber Maj 2012 Sample & Assay Technologies Analysefølsomhed plasma artus EBV QS-RGQ-kit, Version 1,
artus EBV QS-RGQ-kit Ydelsesegenskaber artus EBV QS-RGQ-kit, Version 1, 4501363 Kontroller, om der er nye revisioner med elektronisk mærkning på www.qiagen.com/products/artusebvpcrkitce.aspx inden udførelse
Læs mereDynamicweb Exchange Opsætning
Brugervejledning Dynamicweb Exchange Opsætning OUTLOOK 2003 Document ID: UG-4008 Version: 1.30 2006.07.04 Dansk UG-4008 - Dynamicweb Exchange Opsætning, Outlook 2003 JURIDISK MEDDELELSE Copyright 2005-2006
Læs mereBrugervejledning til diverse i OS X
Brugervejledning til diverse i OS X Gert Søndergaard 19. august 2003 Indholdsfortegnelse Indholdsfortegnelse...2 Introduktion til Mac OS X...3 Flere brugere på samme maskine...3 Dock - den gamle kvikstart...4
Læs mereB ProbeTec Chlamydia trachomatis (CT) Q x Amplified DNA Assay
B ProbeTec Chlamydia trachomatis (CT) Q x Amplified DNA Assay 8081408(05) 0086 2015-08 Dansk TILSIGTET BRUG BD ProbeTec Chlamydia trachomatis Q x Amplified DNA Assay (amplificeret DNA-analyse), når den
Læs mereScanGel Monoclonal ABO/RH1/K 86495 48 kort 86485 288 kort
ScanGel Monoclonal ABO/RH1/K 86495 48 kort 86485 288 kort GELER INDEHOLDENDE MONOKLONALE REAGENSER AF MURIN ELLER HUMAN OPRINDELSE ABO1, ABO2, RH1, KEL1 Ag BESTEMMELSE IVD Alle de af Bio-Rad producerede
Læs mereScanGel ReverScan A1, B 86790 2 x 5 ml ReverScan A1, A2, B, O 86795 4 x 5 ml
ScanGel ReverScan A1, B 86790 2 x 5 ml ReverScan A1, A2, B, O 86795 4 x 5 ml HUMANE TESTERYTHROCYTER TIL ABO-SERUMKONTROL IVD Alle de af Bio-Rad producerede og markedsførte produkter gennemgår fra modtagelse
Læs mereQIAsymphony SP Protokolside
QIAsymphony SP Protokolside Cellfree500_V3_DSP protokol Generel information Til in vitro-diagnostisk brug. Kit Prøvemateriale Protokolnavn QIAsymphony DSP Virus/Pathogen Midi-kit Plasma, serum og CSF Cellfree500_V3_DSP
Læs mereNetkatalog upload. Forord: Formål:
Netkatalog upload Forord: De data, I indsender som e-katalog, genbruges af SKI s kunder i de ordre, der sendes tilbage til Jer. Det er derfor vigtigt, både for kundes efterfølgende fakturakontrol; men
Læs mereFormler og diagrammer i OpenOffice Calc
Formler i Calc Regneudtryk Sådan skal det skrives i Excel Facit 34 23 =34*23 782 47 23 =47/23 2,043478261 27³ =27^3 19683 456 =KVROD(456) 21,3541565 7 145558 =145558^(1/7) 5,464829073 2 3 =2*PI()*3 18,84955592
Læs mereBesvarelse af spørgsmål til udbudsmateriale om levering af screeningsudstyr til detektering af alkohol i udåndingsluft
Aftalebilag 5 og svar Besvarelse af spørgsmål til udbudsmateriale om levering af screeningsudstyr til detektering af alkohol i udåndingsluft til "Udbudsbetingelser screeningsalkometer" Spg. 1 15. juli
Læs mereDansk version. Introduktion. Windows Vista og XP-installation. LW056V2 Sweex Wireless LAN Cardbus Adapter 54 Mbps
LW056V2 Sweex Wireless LAN Cardbus Adapter 54 Mbps Introduktion Udsæt ikke Sweex Wireless LAN Cardbus Adapter 54 Mbps for ekstreme temperaturer. Anbring ikke enheden i direkte sollys eller tæt ved varmekilder.
Læs mereKvalitetskontrol i molekylærbiologisk rutinediagnostik
i molekylærbiologisk rutinediagnostik Respirationsvejsvirus som model Mette Høgh, cand. scient, ph.d. Klinisk Mikrobiologisk Afdeling, Hvidovre Hospital Mette.hoegh@hvh.regionh.dk Oversigt Introduktion
Læs mereDMX styring med USB-interface
DMX styring med USB-interface Introduktion...2 DMX bibliotek...3 Programmering af kanaler...7 Sådan skabes et show/en lyssekvens...11 Introduktion DMX LightPlayer er en avanceret men meget brugervenlig
Læs mereIFC Egenskaber. Mohammad Hussain Parsianfar s102951 BYG DTU
Mohammad Hussain Parsianfar s102951 Indholdsfortegnelse 1 Introduktion... 3 1.1 Hvorfor er det interessant... 3 1.2 Formål... 4 2 Simplebim... 5 2.1 Præsentation af softwaren... 5 2.1.1 Brugergrænseflade...
Læs mereQuick-guide til harddiskoptager
Quick-guide til harddiskoptager Beckersberg DVR400, Beckersberg DVR800 og Beckersberg DVR1600 Læs venligst quick-guiden grundigt, før du tager din Beckersberg harddiskoptager i brug. 1 Indholdsfortegnelse
Læs mereHuskesedler. Anvendelse af regneark til statistik
Huskesedler Anvendelse af regneark til statistik August 2013 2 Indholdsfortegnelse Aktivere Analysis Toolpak... 4 Dataudtræk fra Danmarks Statistik... 4 Kopiering af formler... 4 Målsøgning... 5 Normalfordeling...
Læs mereVejledning: Anvendelse af kuber på SLS-data fra LDV i Excel 2007. Målgruppe: Slutbruger
Vejledning: Anvendelse af kuber på SLS-data fra LDV i Excel 2007. Målgruppe: Slutbruger April 2015 Indholdsfortegnelse Indholdsfortegnelse... 2 1 Indledning... 3 1.1 Metode til anvendelse af kuber med
Læs mereBrugervejledning NIV. Indberetning af fremadrettede ventetider. Version 1.3
Brugervejledning NIV Indberetning af fremadrettede ventetider Version 1.3 Kolofon Brugervejledning NIV Udgiver: Sundhedsdatastyrelsen Ansvarlig institution: Sundhedsdatastyrelsen Design: Sundhedsdatastyrelsen
Læs mereManual og Hjælp Skoletasken 2
Manual og Hjælp Skoletasken 2 I Skoletasken 2 - Hjælp Indhold I Introduktion 1 Velkomst 2... 2 2 Systemkrav... 2 3 Installation... 3 4 Skoletasken... 8 II Opsætning 10 1 Systemopsætning... 10 2 Bogopsætning...
Læs mereLinket viser jer frem til billedet nedenfor, her skal du blot skrive jeres brugernavn og adgangskode. Indtast din adgangskode her:
Brugervejledning til håndtering af respondenter til MUS i SurveyXact Indledning Denne manual beskriver, hvordan SurveyXact kan anvendes til forberedelse af MUS. Der tages udgangspunkt i handlinger, den
Læs mereIndholdsfortegnelse. 1. Installation af LØN... 1. 2. Introduktion til LØN... 2. 3. Indtastning af lønseddel... 7. 4. Udskrifter...
Løn til Windows Indholdsfortegnelse 1. Installation af LØN... 1 2. Introduktion til LØN... 2 2.1. Første start af LØN...2 2.1.1. Ét eller flere distrikter...2 2.1.2. Lønperioder...3 2.1.3. Kartoteker...4
Læs mereFSFI s guide til DFR s elektronisk bevissystem
FSFI s guide til DFR s elektronisk bevissystem Dette er en kort guide i anvendelsen af Dansk Førstehjælpsråd elektroniske bevissystem. Guiden viser og forklarer, hvordan du som instruktør og medlem af
Læs mereBiotechnology Explorer
Biotechnology Explorer Oprensning af genomisk DNA fra plantemateriale Manual Katalog nr. 166-5005EDU explorer.bio-rad.com Oversat og bearbejdet af Birgit Sandermann Justesen, Nærum Gymnasium, februar 2009
Læs mereSådan får du Salmebogen på CD-ROM til at fungere i Internet Explorer 7 både under Windows XP og Windows Vista
Sådan får du Salmebogen på CD-ROM til at fungere i Internet Explorer 7 både under Windows XP og Windows Vista Beskrivelse af fejlen Salmebogen på CD-ROM har visse problemer med at fungere i Internet Explorer
Læs mereartus VZV RG PCR Kit håndbog
September 2009 artus VZV RG PCR Kit håndbog Version 1 24 (katalognr. 4502263) 96 (katalognr. 4502265) Kvantitativ in vitro-diagnostik Til anvendelse med Rotor-Gene Q-instrumenter 4502263, 4502265 1056824DA
Læs mereSymantec Enterprise Vault
Symantec Enterprise Vault Vejledning til brugere af Microsoft Outlook 2003/2007 10.0 Begrænset tilføjelsesprogram til Outlook Symantec Enterprise Vault: Vejledning til brugere af Microsoft Outlook 2003/2007
Læs mereOpgradering til version 4 af Netaflæsningsmodulet
Opgradering til version 4 af Netaflæsningsmodulet Den nye version af netaflæsningsmodulet adskiller sig væsentligt fra den gamle version, ved at forbrugeren slår direkte op i værkets data, i stedet for
Læs mereFRA KAMERA TIL COMPUTER
FRA KAMERA TIL COMPUTER FRA CANON FS200 TIL LIQUID 6.0 (INDSKOLING) Anders Møller-Nielsen Center for Journalistik Syddansk Universitet Version: 22.04.10 AMN F10 Side 1 Før optagelserne kan redigeres, skal
Læs mereMycXtra Fungal DNA ekstraktionssæt
Til in-vitro-diagnostisk brug: MycXtra Tilsigtet anvendelse MycXtra Fungal DNA ekstraktionssæt REF 080-005 MycXtra Fungal DNA ekstraktionssættet er beregnet til isolering rensning af fungal DNA tilstedeværende
Læs mereOpret og godkend betalinger i mapper
Kort beskrivelse Opret betaling i mappe Formålet med dette dokument er at beskrive, hvordan du opretter og godkender betalinger i mapper - inklusive: Opret mappe Gem én eller flere betalinger i mapper
Læs mereOversigtsvejledning til
Oversigtsvejledning til MATCH IT! antistofsoftware Til anvendelse med IMMUCOR LIFECODES antistofanalyser Til in vitro-diagnostisk brug 1 LC1456DA.1 (09/15) Denne manual er fremstillet til anvendelse med
Læs mereSide 1 af 17. Læs hele vejledningen / manualen igennem inden du installere og bruger programmet
Side 1 af 17 Indledning Læs hele vejledningen / manualen igennem inden du installere og bruger programmet og Velkommen til denne vejledning i brug af CCleaners grundlæggende funktioner. Ved almindelig
Læs mereDE DANSKE BREVDUEFORENINGER. De danske Brevdueforeninger. DdB Compakt Manual. TauRIS software Opdatering af Terminal
2012 DE DANSKE BREVDUEFORENINGER De danske Brevdueforeninger DdB Compakt Manual TauRIS software Opdatering af Terminal 2 TauRIS Compact XL i DdB version Betjeningsvejledning til klubben. Ver. 2.2 april
Læs mereBRUGERMANUAL. Ruteplanlægning i RUT. Røde Korsindsamlingen 8. MARTS 2012. RødeKors.dk
BRUGERMANUAL 8. MARTS 2012 Ruteplanlægning i RUT Røde Korsindsamlingen RødeKors.dk INDHOLD 1 Introduktion til RUT... 3 2 Sådan finder du og logger på RUT... 4 3 Et par tips... 4 4 Planlægning af ruter...
Læs mereKonkurrence mellem to bakteriearter
1 Biologi-forsøg: Populationsbiologi/evolution Konkurrence mellem to bakteriearter Forsøget undersøger, hvordan en ydre miljøfaktor (temperatur) påvirker konkurrencen mellem to forskellige arter. I dette
Læs mereIndholdsfortegnelse resultat- & kritikprogrammet.
Indholdsfortegnelse resultat- & kritikprogrammet. Ringsekretærers indtastning af resultater og kritikker... 2 Kom i gang Opstart af programmet... 2 En anden bruger er i gang med ringen... 3 Dommer ændringer
Læs mereBrug Photo Story 3 en let introduktion
Brug Photo Story 3 en let introduktion Denne vejledning forudsætter at programmet Photo Story 3 er installeret på din computer. Se andetsteds for vejledning i at installere programmet, der kan findes gratis
Læs mereVelkommen. Test dit eget DNA med PCR. Undervisningsdag på DTU Systembiologi. Undervisere: Sebastian, Louise og Ana
Velkommen Test dit eget DNA med PCR Undervisningsdag på DTU Systembiologi Undervisere: Sebastian, Louise og Ana Hvem er I? 2 DTU Systembiologi, Danmarks Tekniske Universitet Dagens program 9:00 10:00 Introduktion
Læs mereUdskrivning og sletning af tilbageholdte job Genkendelse af formateringsfejl Kontrol af udskriftsjob Reservation af udskriftsjob
Når du sender et job til printeren, kan du angive i driveren, at printeren skal tilbageholde jobbet i hukommelsen. Når du er klar til at udskrive jobbet, skal du gå til printeren og bruge kontrolpanelets
Læs mereTest dit eget DNA med PCR
Test dit eget DNA med PCR Navn: Forsøgsvejledning Formål med forsøget Formålet med dette forsøg er at undersøge jeres arvemateriale (DNA) for et transposon kaldet Alu. Et transposon er en DNA sekvens,
Læs mereSide 1 af 13 NETLYDBOG.DK. - Sådan downlåner du - Sådan overfører du til en MP3-afspiller
Side 1 af 13 NETLYDBOG.DK - Sådan downlåner du - Sådan overfører du til en MP3-afspiller Side 2 af 13 Indholdsfortegnelse Vær opmærksom på:... 2 1. Sådan downlåner du en netlydbog fra netlydbog.dk... 3
Læs mereInstruktion. Total genstart af HTC TC II
Instruktion Total genstart af HTC TC II Total genstart indebærer, at Handi startes fra bunden på samme måde, som første gang den blev startet. Det er aktuelt, hvis Handi skal overtages af en ny bruger,
Læs mereViewDEX Guide. Helle Precht University College Lillebælt
ViewDEX Guide Helle Precht University College Lillebælt Indhold Intro... 1 Imagedb billeder til brug i billedanalysen... 2 Ressources programmering af billedanalysen... 3 Opsætning af billeder til billedanalysen...
Læs mereFind enzymer til miljøvenligt vaskepulver
Find enzymer til miljøvenligt vaskepulver Enzymer, der er aktive under kolde forhold, har adskillige bioteknologiske anvendelsesmuligheder. Nye smarte og bæredygtige produkter kan nemlig blive udviklet
Læs mereSporbarhed: Alle sterile poser er mærket med lot. nummer, så sterilcertifikater kan bestilles.
Laboratorieudstyr -fordi det er enkelt! Messeavis Scanlab 28-30 sept. 2010 Besøg vores stand på scanlab messen stand nr C3-165 og se alle de spændende nyheder! Optimale vækstbetingelser FLERBRØNDSPLADER
Læs mereManual til overføring af fotografier fra kamera til harddisk.
Manual til overføring af fotografier fra kamera til harddisk. Det første man skal gøre sig klart er, hvor man som udgangspunkt vil lægge sine fotografier. Især når man er mange, der bruger den samme computer,
Læs mereNovotek Planning Systems A/S 2013 Version 1.0 Jan 2013 ROB-EX 4.2
Version 1.0 Jan 2013 ROB-EX 4.2 Indhold Hovedskærmens opbygning... 2 Tastaturgenveje... 3 Hovedskærmbilleder... 4 Stamdata generelt... 5 Kalender... 6 Opret/rediger kalender... 7 Specifik kalender pr.
Læs mereInstallation af Elektronisk APV på flere PC er
Installation af Elektronisk APV på flere PC er Vejledning til installation af Elektronisk APV, når programmet skal installeres på flere PC er, der kobler sig op på en fælles server. 1 Installation af Elektronisk
Læs mereVelkommen til ABC Analyzer! Grundkursusmanual 2 vil introducere dig til ABC Analyzers mere avancerede funktioner, bl.a.:
Velkommen til ABC Analyzer! Grundkursusmanual 2 vil introducere dig til ABC Analyzers mere avancerede funktioner, bl.a.: Kategoriseringer uden ABC-kategorier Krydstabel (trebenede) Beregnede og avancerede
Læs mereIntroduktion. Unifaun Online 29-04-2014
Introduktion Unifaun Online 29-04-2014 2 Indhold 1 Introduktion til Unifaun Online... 3 1.1 Grundlæggende navigering... 3 1.2 Søgning af information... 3 1.3 Indtastning af faste oplysninger... 4 1.4 Din
Læs mereQuickguide Tele- og webkonference via UC
Quickguide Tele- og webkonference via UC Du kan oprette en tele- og webkonference via din UC-klients hjemmeside. En telekonference giver dig mulighed for at tale i telefon med flere personer på én gang.
Læs mereMANUAL AGROSOFT POCKETPIGS. Ver. 02 03-10-2013 SKIOLD GØR EN FORSKEL!
MANUAL SKIOLD GØR EN FORSKEL! AGROSOFT POCKETPIGS 981 002 640 Ver. 02 03-10-2013 2 981 002 640 INDHOLDSFORTEGNELSE 1. Generelt om brugen af Pocket... 4 1.1 Svinedata... 4 1.2 Opbygning... 5 1.3 Brugen
Læs mereProduktion af biodiesel fra rapsolie ved en enzymatisk reaktion
Produktion af biodiesel fra rapsolie ved en enzymatisk reaktion produceres fra rapsolie som består af 95% triglycerider (TG), samt diglycerider (DG), monoglycerider (MG) og frie fedtsyrer (FA). Under reaktionen
Læs mereLeucosep rør LTK.615 INDLÆGSSEDDEL. Til diagnostisk anvendelse in vitro PI-LT.615-DK-V3
Leucosep rør LTK.615 INDLÆGSSEDDEL Til diagnostisk anvendelse in vitro PI-LT.615-DK-V3 Vejledende information Tilsigtet anvendelse Leucosep rørene er beregnet til anvendelse i forbindelse med indsamling
Læs mereProgrammering af CS1700-Proxlæser
Comfort CSx75 Programmering af CS1700-Proxlæser Introduktion CS1700 er en proxlæser og der kan tilsluttes op til 15 læser til CSx75-centralen. Du kan programmere CS1700 til passagekontrol i et eller flere
Læs mereGuide - Secvest IP FUAA10011
Guide - Secvest IP FUAA10011 1 Indhold SECVEST IP - KOMPONENTER... 3 TILSLUTNING AF BATTERI OG STRØMFORSYNING... 4 PLACERING AF NØGLEKOMPONENTER... 5 INDKODNING AF DE TRÅDLØSE KOMPONENTER... 6 MENU 1 INDKODNING
Læs mereTastevejledning Windows XP
Tastevejledning Windows XP Tastevejledningen dækker den danske udgave af Windows XP. Der er taget udgangspunkt i en standard installation, hvor der ikke er foretaget tilpasninger i skærmopsætning, valg
Læs mereVejledning til Blackboards portfolio værktøj
Vejledning til Blackboards portfolio værktøj Brug denne vejledning, når du skal udarbejde din undervisningsportfolio i Blackboards portfolio værktøj. Ved at følge alle trinene nedenfor får du udarbejdet
Læs mereBrug af Archive-funktion i SportIdent (baseret på version 10.3 af SI-programmerne)
Brug af Archive-funktion i SportIdent (baseret på version 10.3 af SI-programmerne) Formål: Ved at anvende arkiv-funktionen kan arrangørerne ved et træningsløb uden tilmeldinger eller ved åbne baner hurtigt
Læs mereAthena DIMENSION Varmeanlæg 4, Eksempel
Athena DIMENSION Varmeanlæg 4, Eksempel Marts 2002 Indhold 1 Introduktion.................................. 2 2 Oprettelse af ny sag............................. 3 3 Tilretning af kataloger............................
Læs mereIndberetning til venteinfo Brugervejledning. Version 1.0. August 2011
Indberetning til venteinfo Brugervejledning 2011 Version 1.0. August 2011 Brugervejledning - indberetning af fremadrettede ventetider Dokumentation af Specialiseret Sundhedsvæsen Sundhedsstyrelsen Islands
Læs mereLynstartvejledning PERSONAL NAVIGATOR
Lynstartvejledning foretrex 301 og 401 PERSONAL NAVIGATOR Se guiden Vigtige oplysninger om sikkerhed og produkter i æsken med produktet for at se produktadvarsler og andre vigtige oplysninger. Brug af
Læs mereHOUNÖ TOUCH. Advanced Racktimer Brugermanual
HOUNÖ TOUCH Advanced Racktimer Brugermanual DK INTRODUKTION TIL Advanced RACKTIMER INDHOLD INTRODUKTION TIL AVANCERET RACKTIMER 3 RACKTIMER AKTIVERING 4 GRUPPEOPSÆTNING 5 OPSKRIFTOPSÆTNING 6 TILBEREDNINGSFUNKTIONER
Læs mereAnvendelse af Enzymer i Fødevarer
SRP-øvelse ved Det Natur- og Biovidenskabelige Fakultet, Københavns Universitet Anvendelse af Enzymer i Fødevarer Øvelsesvejledning 2013 Henriette Erichsen, Anni Bygvrå Hougaard, Karsten Olsen og Jeanette
Læs mereLectio. Overgang til Lectio Eksamensmodul. MaCom A/S Vesterbrogade 48, 1. 1620 København V Telefon: 33 79 79 00
Lectio Overgang til Lectio Eksamensmodul 1992-2008 MaCom A/S MaCom A/S Vesterbrogade 48, 1. 1620 København V Telefon: 33 79 79 00 Telefax: 33 79 79 84 E-mail: mail@macom.dk Internet: www.macom.dk Forord
Læs mereProtokol for genetisk bestemmelse af ABO blodtyper
Page1 Udarbejdet i samarbejde mellem: Kåre Lehmann, Annabeth Høgh Petersen, Anne Rusborg Nygaard og Jørn M. Clausen Page2 VIGTIGT: SKIFT PIPETTE SPIDSER/TIPS EFTER HVER GANG!! Så undgår du at forurene
Læs merePAXgene. Blood RNA Kit-håndbog. Juni 2015. Version 2. 50 (katalog nr. 762174) 1051083DA
Juni 2015 PAXgene Blood RNA Kit-håndbog 50 (katalog nr. 762174) Version 2 762174 R2 1051083DA PreAnalytiX GmbH, Feldbachstrasse, CH-8634 Hombrechtikon Produceret af QIAGEN GmbH for PreAnalytiX Varemærker:
Læs mereKoblede differentialligninger.
2. 3. 4. Koblede differentialligninger. En udvidelse af Newtons afkølingslov løst numerisk ved hjælp af integralkurver. Sidste gang så vi på, hvordan vi kunne opstille og løse en model for afkølingen af
Læs mereGuide til Web-direct. Indholdsfortegnelse
Indholdsfortegnelse 1. Sådan åbner du WEB-direct...2 2. Firmaopslag...3 3. Markedsudvalg...4 4. Udskrift af liste...14 5. Eksport af data...15 6. Fletning i Word...18 7. Brevfletning til ansøgninger...27
Læs mereKom godt igang med Inventar registrering
Kom godt igang med Inventar registrering (InventoryDB) (Med stregkodesupport) programmet fra PetriSoft Introduktion... 1 Inventar registrering... 2 Værktøjsudleje... 3 Service database til reperationer
Læs mereSoftwareopdateringer Brugervejledning
Softwareopdateringer Brugervejledning Copyright 2009 Hewlett-Packard Development Company, L.P. Windows er et amerikansk-registreret varemærke tilhørende Microsoft Corporation. Produktbemærkning Denne brugervejledning
Læs mereHarddiskdrev (med monteringsbeslag) Instruktionsmanual
Harddiskdrev (med monteringsbeslag) Instruktionsmanual CECH-ZHD1 7020228 Kompatibel hardware PlayStation 3-system (CECH-400x-serien) Forholdsregler Mhp. sikker brug af dette produkt bør du læse denne instruktionsvejledning
Læs mereFYSISKE MÅLINGER PÅ MÆLK
FYSISKE MÅLINGER PÅ MÆLK Fysiske målinger på mælk - Hvordan måler man, om koen er syg? 1 Introduktion til forsøget Yverbetændelse, også kaldet mastitis, er en ofte forekommende produktionssygdom hos malkekøer
Læs mere