Elecsys 2010 MODULAR ANALYTICS E170 cobas e 411 cobas e 601

Transkript

1 REF Dansk Bemærk venligst En patientprøves målte tpsa-værdi kan variere afhængig af den anvendte analyseprocedure. Laboratorieresultatet skal derfor altid indeholde en angivelse af den anvendte tpsa-analysemetode. Man kan ikke umiddelbart sammenligne tpsa-værdier fra forskellige analyser, og et forsøg på dette kan forårsage fejlagtige medicinske fortolkninger. Hvis tpsa-analyseproceduren ændres under terapeutisk monitorering, skal de opnåede tpsa-værdier ved skift til den nye procedure konfirmeres ved parallelle målinger med begge metoder. Anvendelse Denne analyse, en kvantitativ in vitro diagnostisk test til totalt (frit + kompleksbundet) prostataspecifikt antigen (tpsa) i humant serum og plasma, anvendes til måling af totalt PSA sammen med digital rektal eksploration (DRE) som en hjælp ved påvisning af prostatacancer hos mænd på 50 år eller ældre. En prostatabiopsi er nødvendig for at diagnosticere prostatacancer. Analysen anvendes derudover til seriel måling af tpsa til hjælp ved behandlingen af cancerpatienter. Elektrokemiluminescensimmunoassay ECLIA anvendes på de immunologiske Elecsys og cobas e. Resumé Prostataspecifikt antigen (PSA) er et glykoprotein (molekylvægt daltons) med tætte strukturelle relationer til glandulært kallikrein. Det har samme funktion som en serinproteinase. 1 PSAs proteolytiske aktivitet i blod hæmmes af den irreversible kompleksdannelse med proteinaseinhibitorer, f.eks. alfa 1 antichymotrypsin, alfa 2 makroglobulin og andre akutfaseproteiner. 2 Ud over at være bestanddel i disse komplekser, findes ca. 30 af PSA i blodet i fri form, men er proteolytisk inaktivt. 3,4,5 Forhøjede koncentrationer af PSA i serum indikerer generelt prostatas patologiske tilstand (prostatitis, benign hyperplasi eller karcinom). 6,7 Da PSA også forefindes i parauretrale kirtler og analkirtler samt i brystvæv eller ved brystcancer, kan lave koncentrationer af PSA ligeledes påvises i serum fra kvinder. Det er muligt at påvise PSA efter radikal prostatektomi. PSA-bestemmelserne anvendes hovedsageligt i forbindelse med monitorering af fremgang og effektivitet af behandlingen hos patienter med prostatakarcinom eller patienter, som modtager hormonel terapi. Hastigheden, hvormed PSA niveauet falder til et ikke længere påviseligt niveau efter radioterapi, hormonel terapi eller kirurgisk fjernelse af prostataen, informerer om, hvorvidt terapien lykkes. 8 Betændelse eller læsion på prostata (eksempelvis i tilfælde af urinretention eller efter rektalundersøgelse, cystoskopi, coloskopi, transuretral biopsi, laserbehandling eller ergometri) kan føre til stigninger i PSA af varierende varighed og størrelse. De to monoklonale antistoffer, som anvendes i Elecsys -analysen genkender PSA og PSA ACT på en ækvimolær basis i området frit PSA/totalt PSA, hvilket er de frie PSA ratioer, der ses i den kliniske praksis. 9 Analyseprincip Sandwichprincip. Analysens totale varighed: 18 minutter. 1. inkubation: 20 µl prøve, et biotinyleret monoklonalt PSA specifikt antistof og et monoklonalt PSA specifikt antistof mærket med et rutheniumkompleks a) reagerer og danner et sandwichkompleks. SYSTEM Elecsys 2010 cobas e 411 cobas e inkubation: Efter tilsætning af streptavidin-coatede mikropartikler bliver komplekset bundet til solid phase via interaktion mellem biotin og streptavidin. Reaktionsblandingen opsuges i målecellen, hvor mikropartiklerne indfanges magnetisk på elektrodens overflade. Ubundne stoffer fjernes derefter med ProCell/ProCell M. Ved at sætte spænding til elektroden induceres derefter kemiluminiscensemission, som måles med en fotomultiplikator. Resultater bestemmes via en kalibreringskurve, som genereres instrumentspecifikt med 2 punktskalibrering, og en masterkurve, som aflæses via reagensbarkoden. a) Tris(2,2'-bipyridyl)ruthenium(II)-kompleks (Ru(bpy) ) Reagenser - arbejdsopløsninger Reagenspakningen er mærket TPSA. M R1 R2 Streptavidin-coatede mikropartikler (gennemsigtigt låg), 1 flaske, 6.5 ml: Streptavidin-coatede mikropartikler 0.72 mg/ml; konserveringsmiddel. Anti-PSA-Ab~biotin (gråt låg), 1 flaske, 10 ml: Biotinyleret monoklonalt anti PSA-antistof (mus) 1.5 mg/l; fosfatbuffer 100 mmol/l, ph 6.0; konserveringsmiddel. Anti-PSA-Ab~Ru(bpy) (sort låg), 1 flaske, 10 ml: Monoklonalt anti PSA-antistof (mus) mærket med et rutheniumkompleks 1.0 mg/l; fosfatbuffer 100 mmol/l, ph 6.0; konserveringsmiddel. Forholdsregler og advarsler Til in vitro-diagnostisk brug. Udvis de normale forholdsregler, der kræves ved håndtering af alle laboratoriereagenser. Bortskaffelse af alt affaldsmateriale skal ske i overensstemmelse med lokale retningslinjer. Sikkerhedsdatablad kan rekvireres. Undgå skumdannelse ved alle reagenser og prøvetyper (prøver, kalibratorer og kontroller). Reagenshåndtering Reagenserne i kittet er samlet i en brugsklar enhed, som ikke kan deles. Alle nødvendige oplysninger for korrekt funktion indlæses automatisk via reagensbarkoderne. Opbevaring og holdbarhed Opbevares ved 2 8 C. Må ikke fryses. Opbevar Elecsys reagenskittet lodret for at sikre mikropartiklernes fuldstændige homogenitet under den automatiske blanding før anvendelsen. Holdbarhed: uåbnet ved 2 8 C efter åbning ved 2 8 C på ne indtil den angivne udløbsdato 12 uger 8 uger Prøvetagning og -forberedelse Kun de nedennævnte prøvematerialer er testet og fundet acceptable. 1 / 5

2 Serum opsamlet ved hjælp af standard prøvetagningsrør eller rør indeholdende separationsgel. Lithiumheparin-, K 3 EDTA- og natriumcitratplasma. Hvis natriumcitrat anvendes, skal resultaterne korrigeres med Kriterium: Genfinding inden for af serumværdi eller slope intercept inden for < ± 2x analytisk sensitivitet (LDL) + korrelationskoefficient > Holdbar i 5 dage ved 2 8 C, 6 måneder ved 20 C. Må kun fryses én gang. De angivne prøvetyper blev testet med et udvalg af prøvetagningsrør, som var kommercielt tilgængelige på testtidspunktet, dvs. at ikke alle tilgængelige rør fra alle producenter blev testet. Prøvetagningssystemer fra forskellige producenter kan indeholde forskellige materialer, som kan påvirke testresultaterne i visse tilfælde. Hvis prøver analyseres i primærrør (prøvetagningssystemer), skal instruktionerne fra producenten af disse rør følges. Centrifugér prøver indeholdende udfældninger før udførelse af analysen. Benyt ikke varmeinaktiverede prøver. Anvend ikke prøver og kontroller stabiliseret med azid. Sørg for at patientprøverne, kalibratorerne og kontrollerne har nået C før målingen. På grund af mulig fordampningseffekt bør prøver, kalibratorer og kontroller på instrumentet analyseres/måles inden for 2 timer. Leverede materialer Se venligst afsnittet "Reagenser - arbejdsopløsninger" m.h.t. reagenser. Nødvendige (men ikke inkluderede) materialer REF , CalSet II, til 4 x 1 ml REF , PreciControl Tumor Marker, til 2 x 3 ml af hhv. PreciControl Tumor Marker 1 og 2 eller REF , PreciControl Universal, til 2 x 3 ml af hhv. PreciControl Universal 1 og 2 REF , Diluent Universal, 2 x 16 ml prøvediluent eller REF , Diluent Universal, 2 x 36 ml prøvediluent Almindeligt laboratorieudstyr Elecsys 2010, eller cobas e analyseinstrument Tilbehør til Elecsys 2010 og cobas e 411 : REF , ProCell, 6 x 380 ml reaktionsopløsning REF , CleanCell, 6 x 380 ml målecellerens REF , Elecsys SysWash, 1 x 500 ml systemvask REF , adapter til SysClean REF , Elecsys 2010 AssayCup, 60 x 60 reaktionsrør REF , Elecsys 2010 AssayTip, 30 x 120 pipettespidser Tilbehør til og cobas e 601 : REF , ProCell M, 2 x 2 l systembuffer REF , CleanCell M, 2 x 2 l målecellerens REF , PC/CC Cups, 12 kopper til opvarmning af ProCell M og CleanCell M før brug REF , ProbeWash M, 12 x 70 ml rensevæske til klargøring af reagensnål og for at undgå kontaminering mellem reagenser REF , PreClean M, 5 x 600 ml detektionsrensemiddel REF , AssayTip/AssayCup Combimagazine M, 48 magasiner x 84 reaktionsrør eller pipettespidser, affaldsposer REF , WasteLiner, affaldsposer REF , SysClean Adapter M Tilbehør til alle instrumenter: REF , Elecsys SysClean, 5 x 100 ml målecellerens Analyse Hvis analysen skal udføres optimalt, skal anvisningerne for det aktuelle analyseinstrument følges. Se venligst den aktuelle brugermanual for instrumentspecifikke analyseinstruktioner. Rekonstitution af mikropartiklerne sker automatisk før brug. Indlæs de testspecifikke parametre ved hjælp af reagensets barkode. Hvis barkoden i sjældne tilfælde ikke kan læses, skal den 15 cifrede talsekvens indtastes. og cobas e 601 : PreClean M-opløsning er nødvendig. Temperér de afkølede reagenser til ca. 20 C, og anbring dem på instrumentets reagenskarrusel (20 C). Undgå skumdannelse. Systemet regulerer automatisk reagenstemperaturen og åbning/lukning af reagenskittene. Kalibrering Sporbarhed: Denne metode er standardiseret over for Stanford Reference Standard/WHO 96/670 (90 PSA ACT + 10 frit PSA). 10,11,12 Alle Elecsys reagenssæt er mærket med en barkode, som indeholder specifikke oplysninger til kalibrering af det pågældende reagenslotnr. Den prædefinerede masterkurve er tilpasset til instrumentet ved hjælp af det relevante CalSet. Kalibreringshyppighed: Kalibrering skal udføres én gang pr. reagenslot med brug af frisk reagens (dvs. højst 24 timer efter, at reagenspakken er registreret i instrumentet). Fornyet kalibrering anbefales på følgende måde: efter 1 måned (28 dage) ved brug af samme reagenslot efter 7 dage (ved brug af det samme reagenskit på instrumentet) efter behov: f.eks. kvalitetskontrolresultater uden for de definerede grænser Kvalitetskontrol Anvend PreciControl Tumor Marker eller PreciControl Universal til kvalitetskontrol. Derudover kan andre egnede kontrolmaterialer anvendes. Kontroller for de forskellige koncentrationsniveauer bør køres individuelt mindst én gang i døgnet, når testen er i brug, én gang pr. reagenskit og efter hver kalibrering. Kontrolintervallerne og -grænserne bør tilpasses det enkelte laboratoriums individuelle krav. De opnåede værdier skal ligge inden for de definerede grænser. Hvert laboratorium bør etablere egne korrektionsprocedurer, som skal anvendes, hvis en værdi falder uden for de definerede grænser. Følg de gældende offentlige regulativer og lokale retningslinjer for kvalitetskontrol. Beregning Analyseinstrumentet beregner automatisk analytkoncentrationen i hver prøve (enten i eller μg/l). Begrænsninger - interferens Analysen er upåvirket af icterus (bilirubin < 1112 µmol/l eller < 65 mg/dl), hæmolyse (Hb < 1.4 mmol/l eller < 2.2 g/dl), lipæmi (Intralipid < 1500 mg/dl) og biotin (< 246 nmol/l eller < 60 ). Kriterium: Genfinding inden for ± 10 af initial værdi. Der bør ikke tages prøver fra patienter, som modtager terapi med betydelige biotindoser (dvs. > 5 mg/dag), før mindst 8 timer efter seneste biotindosering. Der er ikke observeret interferens fra reumafaktorer op til en koncentration på 1500 IU/ml. Der er ingen high dose hook effekt ved tpsa-koncentrationer op til Der blev udført in vitro-tests på 28 almindeligt anvendte lægemidler. Der blev ikke fundet interferens med analysen. 2 / 5

3 I sjældne tilfælde kan interferens opstå på grund af ekstremt høje titre af antistof mod analytspecifikke antistoffer, streptavidin eller ruthenium. Analysens design gør, at disse virkninger er minimeret. Det er kendt, at PSA isoformer eksisterer i sjældne tilfælde. Disse kan måles forskelligt med forskellige PSA-analyser. Dette er lejlighedsvis blevet beskrevet for PSA-analyser fra forskellige producenter. 13,14,15 Til diagnostiske formål skal resultaterne altid sammenholdes med patientens anamnese, kliniske undersøgelser og andre resultater. Grænser og områder Måleområde (Elecsys 2010 og cobas e 411 ) eller ( og cobas e 601 ) (defineret ved den nedre detektionsgrænse og masterkurvens maksimum). Værdier under den nedre detektionsgrænse angives som < eller < Værdier over måleområdet angives som > 100 (eller op til 5000 for prøver, som er fortyndet 50 gange). Måleområdets nedre grænse Nedre detektionsgrænse (LDL (Lower Detection Limit)) Elecsys 2010 og cobas e 411 og cobas e 601 LDL Den nedre detektionsgrænse (LDL) beregnes som den koncentration, der ligger 2 signal standardafvigelser fra en analytfri prøve eller fra den laveste standard (repetérbarhed, n = 21). Blindværdigrænse (LoB (Limit of Blank)) og detektionsgrænse (LoD (Limit of Detection)) Elecsys 2010 og cobas e 411 og cobas e 601 LoB LoD Både blindværdigrænsen og detektionsgrænsen blev bestemt i overensstemmelse med CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute) EP17 A. Blindværdigrænsen er 95. percentil-værdien af n 60 målinger af analytfrie prøver i flere uafhængige serier. Blindværdigrænsen svarer til den koncentration, hvorunder analytfrie prøver findes med 95 procents sandsynlighed. Detektionsgrænsen bestemmes på basis af blindværdigrænsen og standardafvigelsen for prøver med en lav koncentration. Detektionsgrænsen svarer til den laveste analytkoncentration, der kan detekteres (værdi over blindværdigrænsen) med en sandsynlighed på 95. Fortynding Prøver med tpsa-koncentrationer over måleområdet kan fortyndes med Diluent Universal. Det anbefalede fortyndingsforhold er 1:50 (enten automatisk af, Elecsys 2010 eller cobas e- eller manuelt). Den fortyndede prøves koncentration skal være > 2. Efter manuel fortynding skal resultatet multipliceres med fortyndingsfaktoren. Ved fortynding af instrumentet tager softwaren på MODULAR ANALYTICS E170, Elecsys 2010 og cobas e automatisk højde for fortyndingen ved beregning af prøvekoncentrationen. Referenceintervaller Referenceintervaller for normale raske mænd 3 / 5 a) Studier på to kliniske centre i Holland og Tyskland med Elecsys total PSA-analysen på sera fra 244 raske mænd i forskellige aldersgrupper gav følgende resultater: tpsa () Alder (år) N Median 95. percentil < b) Fordelingen af tpsa-resultater er målt på en kohorte på 395 normale, raske mænd i alderen år (resultater fra et amerikansk studie). Nedenstående tabel viser de tpsa-værdier, som er målt på det immunologiske analyseinstrument Elecsys tpsa () Alder (år) N Median 95. percentil tpsa-værdier ved påvisning af prostatacancer Et multicenterstudie blev udført for at vise effektiviteten af Elecsys total PSA-analysen anvendt sammen med digital rektal eksploration (DRE) som hjælp til påvisning af prostatacancer hos mænd i alderen 50 år eller ældre. I alt deltog 1121 serielt inddelte mænd i alderen 50 år eller ældre i studiet. Kohortens gennemsnitsalder var 66.4 år (95 konfidensinterval = 65.9 til 66.8 år). Fordeling af tpsa-værdier efter biopsiresultat og resultat af digital rektal eksploration Prostatabiopsiresultat: benign tpsa () DRE resultat N Median Minimum Maksimum Normal Patologisk Total Prostatabiopsiresultat: malign tpsa () DRE resultat N Median Minimum Maksimum Normal Patologisk Total tpsas anvendelse til påvisning af prostatacancer Som det ses i tabellen nedenfor, blev 391 (34.9 ) tilfælde af prostatacancer ud af denne kohorte på 1121 mænd opdaget ved biopsi. Abnorme resultater af digital rektal eksploration (DRE-resultater) blev rapporteret for 245 (62.7 ) af de 391 prostatacancertilfælde, mens tpsaresultater over 4 blev rapporteret for 336 (85.9 ) cancertilfælde med Elecsys 2010 analyseinstrumentet. Af de 391 mænd, som blev diagnostiseret med cancer, havde 379 (96.9 ) enten et abnormt DREresultat eller en tpsa-værdi over 4.0. Den positive prædiktive værdi for Elecsys -analysen på Elecsys 2010 var med anvendelse af 4.0 som cutoff (malign prostatabiopsi + tpsa > 4.0 : n = 336 / tpsa > 4.0 : n = 862).

4 Resultater for digital rektal eksploration og tpsa relateret til tilfælde af prostatacancer opdaget ved biopsi i en kohorte på: 1121 mænd i alderen 50 år eller ældre, som var henvist til en urolog for prostataundersøgelse. Total DRE+b) PSA+c) PSA+ eller DRE+ PSA+ og DRE+ PSA+ and DRE-d) PSA- og DRE+e) Totalt antal positive biopsier b) abnorm DRE c) tpsa-værdi > 4 d) normal DRE e) tpsa-værdi < 4 Analyse af tpsa-værdier blev udført med Elecsys Hvert laboratorium bør undersøge muligheden for at overføre referenceintervallerne til egne patientgrupper og om nødvendigt fastsætte egne referenceintervaller. Testspecifikke performance-data Repræsentative performance-data på instrumenterne angives nedenfor. Resultaterne kan variere fra laboratorium til laboratorium. Præcision Præcisionen blev bestemt ved hjælp af Elecsys reagenser, poolede humane sera og kontroller ifølge en modificeret protokol (EP5 A) fra CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute): 6 gange dagligt i 10 dage (n = 60); repetérbarhed på analyseinstrumentet (n = 21). Følgende resultater blev opnået: Prøve Elecsys 2010 og cobas e 411 Antal maligne prostatabiopsier Repetérbarhed Intermediær præcision Humant serum Humant serum Humant serum PreciControl TM f) PreciControl TM f) TM = Tumor Marker Prøve og cobas e 601 Repetérbarhed Intermediær præcision Humant serum Humant serum Humant serum PreciControl TM PreciControl TM Metodesammenligning En sammenligning af Elecsys -analysen (y) og Enzymun Test PSA-metoden (x) ved brug af kliniske prøver gav følgende korrelationer: Antal målte prøver: 95 Passing/Bablok 16 Lineær regression y = 1.03x y = 1.02x τ = r = Koncentrationen i prøverne lå mellem ca. 0.1 og 50. Funktionel sensitivitet 0.03 Den funktionelle sensitivitet er den laveste analytkoncentration, som kan måles reproducerbart med en variationskoefficient for den intermediære præcision på 20. Analytisk specificitet Krydsreaktivitet med følgende stoffer blev undersøgt for de anvendte monoklonale antistoffer: PAP og ACT: ingen; PSA og PSA ACT genkendes på en ækvimolær basis. Referencer 1 Henttu P, Vihko P. Prostate-specific Antigen and Human Glandular Kallikrein: Two Kallikreins of the Human Prostate. Ann Med 1994;26: Tewari PC, Bluestein BI. Multiple forms of prostate specific antigen and the influences of immunoassay design on their measurement in patient serum. J Clin Ligand Assay, ;3: Zhang WM, Leinonen J, Kalkkinen N, et al. Purification and Characterization of Different Molecular Forms of Prostate-Specific Antigen in Human Seminal Fluid. Clin Chem 1995;41/11: Prestigiacomo AF, Stamey TA. Clinical usefulness of free and complexed PSA. Clin Lab Invest Suppl 1995;221: Partin AW, Carter HB, Chan DW, et al. Prostate specific antigen in the staging of localized prostate cancer: influence of tumor differentiation, tumor volume and benign hyperplasia. J Urol 1990;143: Scher HI, Kelly WK. Flutamide withdrawal syndrome: its impact on clinical trials in hormone-refractory prostate cancer. J Clin Oncol 1993;11: Semjonow A, Brandt B, Oberpenning F, et al. Discrepancies in assays impair the interpretation of prostate-specific antigen. Urology 1995;34: Partin AW, Pound CR, Clemens JQ, et al. Serum PSA after anatomical radical prostectomy. The Hopkins experience after 10 years. Urol Clin North Am 1993;20: Roddam AW, Rimmer J, Nickerson C, et al. Prostate-specific antigen: bias and molarity of commercial assays for PSA in use in England. Ann Clin Biochem 2006;43: Stamey TA. Second Stanford conference on international standardization of prostate-specific antigen immunoassays: September 1 and 2, Urology 1995;45: Stamey TA, Chen Z, Prestigiacomo AF. Reference Material for PSA: The IFCC Standardization Study. Clin Biochem 1998;31: WHO Technical Report Series, No. 904, Van Duijnhoven HLP, Perqueriauz N, van Zon JPHM, et al. Large discrepancy between prostate specific antigen results from different assays during longitudinal follow-up of a prostate cancer patient. Clin Chem 1996;42: Wians FH. The Correct PSA Concentration. Clin Chem 1996;42: / 5

5 15 Cohen RJ, Haffejee Z, Steele GS, et al. Advanced Prostate Cancer With Normal Serum Prostate-Specific Antigen Values. Arch Pathol Lab Med 1994;118: Bablok W, Passing H, Bender R, et al. A general regression procedure for method transformation. Application of linear regression procedures for method comparison studies in clinical chemistry, Part III. J Clin Chem Clin Biochem 1988 Nov;26(11): For yderligere oplysninger henvises til brugermanualen til det pågældende analyseinstrument, de aktuelle applikationsark, produktinformationen og metodebladene til alle nødvendige komponenter (hvis de er tilgængelige i dit land). I dette metodeblad anvendes altid punktum som skilletegn for at markere grænsen mellem hele tal og decimaler i et decimaltal. Skilletegn for tusinder anvendes ikke. Symboler Roche Diagnostics anvender nedenstående tegn og symboler ud over dem, der er angivet i ISO standarden. CONTENT SYSTEM Indhold i pakning Instrumenter, hvor reagenserne kan anvendes Reagens Kalibrator Mængde efter rekonstituering eller blanding Væsentlige tilføjelser eller ændringer er vist ved en streg i margenen. 2013, Roche Diagnostics Roche Diagnostics GmbH, Sandhofer Strasse 116, D Mannheim 5 / 5